白介素-18对肝癌裸鼠皮下移植瘤浸润的CD4+T细胞子集的影响

目的探讨白介素-18(IL-18)影响肝癌裸鼠皮下移植瘤浸润的T细胞子集变化的机制。方法以HepG2细胞在裸鼠皮下接种,形成人肝癌皮下移植瘤的同时,以不同剂量IL-18分为4组治疗,4组分别腹腔注射IL-18 0.75,1.00,1.25,0(模型组)μg(0.1 mL)/只,治疗4周,另设正常对照组。观察肿瘤的生长速度和瘤体大小的变化。4周后处死取肿瘤组织和脾组织,免疫磁珠阴选组织中CD4+T细胞,流式细胞术检测各组肿瘤组织及脾组织中IL-17+/IFN-γ-CD4+T(Th17细胞)、IL-17-/IFN-γ+CD4+T(Th1)和IL-17+/IFN-γ+CD4+T细胞的变化。结果 HepG2细胞株建立了裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,IL-18抑制人肝癌皮下移植瘤的形成及转移,治疗时间越长剂量越大,抑制效果越明显;与正常对照组比较,肿瘤组织中Th17和IL-17+/IFN-γ+CD4+T细胞浸润数目增加,Th1细胞降低,与脾组织中一致,与正常对照组比较有显著差异(P<0.05)。给IL-18后,随着剂量的增加,Th1细胞增加,IL-17+/IFN-γ+CD4+T细胞和Th17细胞浸润数目降低,给药组与模型组比较有显著差异(P<0.05或0.01)。结论 IL-17+/IFN-γ+CD4+T细胞数目在裸鼠移植瘤及其脾组织中增加,可能是在肿瘤环境中,促进其向Th17细胞分化;IL-18通过诱导IFN-γ的生成促进Th1细胞的生成,呈正反馈效应抑制肿瘤的增殖和转移。     

腺病毒介导的IL-28B联合3-溴丙酮酸对小鼠宫颈癌皮下移植瘤的影响

目的 腺病毒介导的IL-28B(Ad-mIL-28B)联合3-溴丙酮酸对小鼠宫颈癌皮下移植瘤的影响.方法 观察Ad-mIL-28B及Ad-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(对照)在HEK293细胞中细胞病变效应以测定其滴度.应用宫颈癌U14细胞悬液构建小鼠宫颈癌皮下移植瘤模型后,分别向瘤内注射 Ad-mIL-28B 100 μL(A 组)、3-溴丙酮酸 100 μL(B组)、Ad-mIL-28B 100 μL 联合3-溴丙酮酸100μL(C组)、Ad-EGFP 100μL(D组)或PBS 100 μL(E组),观察肿瘤生长情况.流式细胞术检测五组小鼠脾脏组织CD4+CD25+FoxP3+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)比例.结果 Ad-mIL-28B、Ad-EGFP滴度均为108 PFU/100 μL.A、B、C组宫颈癌皮下移植瘤体积均小于D组和E组,肿瘤抑制率均高于D组和E组(P＜0.05或P＜0.01);C组宫颈癌皮下移植瘤体积小于A组和B组,肿瘤抑制率高于A组和B组(P＜0.05).A、B、C、D组小鼠脾脏组织中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞占比均低于E组(P＜0.05).结论 Ad-mIL-28B联合3-溴丙酮酸对小鼠宫颈癌皮下移植瘤有协同抑制作用.     

耐药乳腺癌免疫治疗的实验研究

目的:探讨耐药乳腺癌抗原负载的树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合培养后对同种乳腺癌荷瘤小鼠的可能治疗机制.方法:分离健康人外周血获得单个核细胞,分别诱导为DC和CIK细胞,将人类乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR细胞的冻融物抗原冲击DC(AP-DC),分别将DC与CIK细胞共培养(AP-DC+CIK组、DC+CIK组),将细胞经尾静脉注入裸鼠体内,观察不同组荷瘤标本中MDR1的表达、肿瘤细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达.结果:AP-DC+CIK组、DC+CIK组、CIK组及生理盐水组MDR1/β-actin比值分别为0.14、0.57、0.81及0.98.生理盐水组、CIK组、DC+CIK组和AP-DC+CIK组平均凋亡指数差异有统计学意义(P＜0.001).各组Bcl-2及Bax蛋白表达的OD值差异有统计学意义(P＜0.01),Bcl-2/Bax值AP-DC+CIK组＜DC+CIK组＜CIK组＜生理盐水组.结论:经耐药乳腺癌抗原负载的DC与CIK共同作用后,诱导同种乳腺癌细胞凋亡强于单纯DC与CIK共同作用后及单独CIK的治疗效果.     

CIK免疫治疗对肿瘤患者生活质量影响的观察

目的评价CIK过继免疫治疗后患者生活质量。方法按常规方法采集细胞,分离培养,10～15 d收获,对50例患者采用CIK细胞静脉输注治疗。结果 50例患者通过CIK细胞治疗后生活质量有不同程度的改善;培养后CIK细胞表型检测可见CD3+,CD3+CD56+细胞较培养前显著增加(P0.01)。结论 CIK细胞治疗肿瘤是一种安全有效的方法,能有效地改善病人的免疫力及生活质量,可成为继手术,放疗,化疗后的肿瘤治疗的重要辅助手段。     

护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制

目的 研究护肝布祖热方联合奥沙利铂对肝细胞癌荷瘤裸鼠的减毒增效作用及机制。方法 从40只裸鼠中选取8只作为空白组（生理盐水）,其余32只裸鼠皮下接种人肝癌Huh7细胞构建荷瘤裸鼠模型。将造模成功的32只裸鼠随机分为模型组（生理盐水,灌胃）、奥沙利铂组（10 mg/kg,腹腔注射）、护肝布祖热方组（0.69 g/kg,灌胃）和联合用药组（腹腔注射10 mg/kg奥沙利铂+灌胃0.69 g/kg护肝布祖热方浸膏）,每组8只。每天灌胃给药/生理盐水1次,连续32 d;每7天腹腔注射给药1次,共5次。实验期间,观察各组裸鼠一般情况,每4 d测量1次肿瘤体积;给药第30天,检测裸鼠热刺激缩足潜伏期;给药结束后,检测各组裸鼠的抑瘤率、脾脏系数、血常规指标以及血清中天冬氨酸转氨酶（AST）和肌酐水平,观察裸鼠肿瘤组织病理形态变化,检测肿瘤组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬接头蛋白p62、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶3(Caspase-3)的表达。结果 与模型组比较,奥沙利铂组裸鼠肿瘤体积、瘤重以及全血中白细胞、红细胞数量和脾脏系数均显著减小/...     

表没食子儿茶素没食子酸酯联合多柔比星对肺癌A549细胞增殖与荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)联合多柔比星对肺癌A549细胞增殖与对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。方法:将A549细胞随机均分成模型(等容生理盐水)组、EGCG(50μmol/L)组、多柔比星(10μmol/L)组、联合用药(EGCG 50μmol/L+多柔比星10μmol/L)组。给药24、48 h后采用MTT法检测细胞活力并计算细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状态并计算细胞凋亡率。皮下接种A549细胞于裸鼠背部以复制荷瘤裸鼠模型。24只模型小鼠随机均分为模型(等容生理盐水)组、EGCG(30 mg/kg)组、多柔比星(10 mg/kg)组、联合用药(EGCG 30 mg/kg+多柔比星10 mg/kg)组,复制模型成功后第3、6、9、12天时ip给药。称定小鼠肿瘤质量并计算抑瘤率;HE染色以进行肿瘤组织学观察。结果:与模型组比较,给药24、48 h后,EGCG组、多柔比星组、联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高;与EGCG或多柔比星组比较,联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,EGCG组、多柔比星组、联合用药组小鼠肿瘤质量减少,抑瘤率升高,癌细胞胞核大而不规则、核质比例变小等状况有一定改善;与EGCG组或多柔比星组比较,联合用药组小鼠肿瘤质量减少,抑瘤率升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:EGCG联合多柔比星能够有效抑制A549细胞的增殖和荷瘤裸鼠肿瘤的生长,其效果好于单用药。     

裸鼠人肝癌移植瘤耐药模型的建立

目的 建立裸鼠人肝癌(HCC)移植瘤多药耐药(MDR)模型.方法 体外培养肝癌细胞系HepG2,建立裸鼠的皮下肿瘤.诱导组(12只)用阿霉素(ADM)间歇腹腔注射,诱导建立裸鼠肝癌耐药模型;对照组(4只)腹腔注射等容积的生理盐水.MTT比色法检测耐药细胞的MDR,RT-PCR和流式细胞术检测肿瘤耐药基因MDR1-mRNA和P-糖蛋白(P-gp)的表达,罗丹明试验观察该蛋白功能.结果 移植瘤组织形态及生物学方面符合人肝癌特征.诱导组肝癌细胞MDR1-mRNA和P-gp蛋白的表达均明显高于对照组.诱导组HepGZ对ADM的耐药指数增加了15.6倍.耐药细胞有较强的药物外排功能.结论 成功地建立了与临床肝癌相似的裸鼠肝癌耐药模型.     

负载MAGE-A3抗原的树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响

目的:探究负载黑色素瘤相关抗原基因A3(MAGE-A3)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响。方法:采集人外周血分离单个核细胞，利用细胞因子分别诱导生成DC和CIK;MAGE-A3孵育DC后与CIK共培养，流式细胞仪检测DC-CIK、MAGE-A3-DC-CIK的表型；流式细胞仪分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa的CD133⁺干细胞，以子宫内膜癌干细胞作为靶细胞，分别以CIK、DC-CIK及MAGE-A3-DC-CIK作为效应细胞，MTT法检测效靶比为10∶1、20∶1、40∶1的细胞杀伤活性，ELISA法检测联合培养细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-17水平，Annexin V-FITC/PI双染法检测子宫内膜癌干细胞凋亡；建立子宫内膜癌干细胞移植瘤裸鼠模型，尾静脉注射DC-CIK或MAGE-A3-DC-CIK,观察裸鼠肿瘤生长情况，每隔2 d测量瘤体大小，21 d后取肿瘤组织，电子天平称重，HE染色观察肿瘤组织病理形态学变化，免疫组织化学染色检测肿瘤组织内Ki-67表达。结果:分离获得细...     

DC-CIK生物疗法联合索拉非尼对原发性肝癌患者疗效及免疫功能的影响

目的 探讨DC-CIK生物疗法联合索拉非尼对原发性肝癌患者的治疗效果及免疫功能的影响.方法 选取2015年3月至2016年4月肿瘤科就诊的原发性肝癌患者78例,随机分为对照组和观察组,每组39例.对照组患者采用索拉非尼(0.4 g/次,2次/d),连续治疗3个疗程,观察组患者采用DC-CIK生物疗法联合索拉非尼,连续治疗3个疗程.观察并比较2组治疗效果及外周血中T淋巴细胞亚群、不良反应.结果 (1)DC-CIK细胞1~3 d增殖较慢,4~6 d增殖较快,且比单纯CIK细胞的增殖速度更快.(2)治疗后观察组患者肿瘤总缓解率(48.71%)显著高于对照组(23.08%)(P<0.05).(3)治疗后观察组患者外周血中CD+3、CD+4、CD+8、CD+4/CD+8、CD+16、CD+56细胞的比例显著高于对照组(P<0.05).(4)2组患者均出现发热、皮疹、恶心呕吐等不良反应,差异无统计学意义(P>0.05).结论 采用DC-CIK生物疗法联合索拉非尼治疗原发性肝癌患者,能提高患者的免疫功能,且疗效显著,值得临床推广应用.     

自体与异体CIK细胞抗肿瘤效应的对照研究

目的比较自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与异体CIK细胞的抗肿瘤效应。方法外周血单个核细胞诱导CIK细胞,以自体细胞单独培养为对照。用MTT法测定杀伤活性,流式细胞术分析免疫表型,ELISA法测定干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-12(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果异体CIK细胞增殖能力明显高于自体CIK细胞(P<0.01),CD3+CD8+、CD3+CD56+细胞比率较相同条件下自体CIK细胞组显著增多(P<0.05),培养7 d,上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α水平均比自体CIK细胞培养的水平高(P<0.05),对白血病细胞与淋巴瘤细胞的杀伤率显著高于自体CIK细胞(P<0.01)。结论异体CIK细胞比自体CIK细胞有更强的抗肿瘤效应。     

Anti-tumor activity of ex vivo expanded cytokine-induced killer cells against human hepatocellular carcinoma

Cytokine-induced killer (CIK) cells are ex vivo expanded T cells with natural killer cell phenotypes and functions. In this study, the anti-tumor activity of CIK cells against hepatocellular carcinoma was evaluated in vitro and in vivo. In the presence of anti-CD3 antibody and IL-2 for 14 days, human peripheral blood mononuclear cell population changed to heterogeneous CIK cell population, which comprised 96% CD3(+), 3% CD3( inverted exclamation mark(c))CD56(+), 32% CD3(+)CD56(+), 11% CD4(+), 75% CD8(+), and 30% CD8(+)CD56(+). CIK cells produced significant amounts of IFN-gamma and TNF-alpha; however, produced only slight amounts of IL-2, IL-4, and IL-5. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 33% of SNU-354 human hepatocellular carcinoma cells, which was determined by the (51)Cr-release assay. In addition, a dose of 1x10(6) CIK cells per mouse inhibited 60% of SNU-354 tumor growth in irradiated nude mice. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with hepatocellular carcinoma.     

Inhibition of human ovarian tumor growth by cytokine-induced killer cells

Despite the recent improvement in the treatment of ovarian cancer, this disease is still leading cause of cancer death in women. In this study, the anti-tumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human ovarian cancer was evaluated in vitro and in vivo. Although CD3+CD56+ cells were rare in fresh human peripheral blood mononuclear cells, they could expand more than 1,000-fold on day 14 in the presence of anti-CD3 antibody plus IL-2. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 45% of SK-OV-3 human ovarian cancer cells, which was determined by the 51Cr-release assay. In addition, CIK cells at a dose of 23 million cells per mouse inhibited 73% of SK-OV-3 tumor growth in nude mouse xenograft assay. This study suggests that CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with ovarian cancer.     

Antitumor activity of cytokine-induced killer cells against human lung cancer

Lung cancer is the leading cause of cancer-related death among men and women in the world. Despite the aggressive treatment with surgery, radiation and chemotherapy, the long term survival for lung cancer patients remains low. In this study, the anti-tumor activity of cytokine-induced killer (CIK) cells against human lung cancer was evaluated in vitro and in vivo. Although CD3(+)CD56(+) CIK cells were rare in fresh human peripheral blood mononuclear cells, they could expand more than 1000-fold on day 14 in the presence of anti-CD3 antibody plus IL-2. At an effector-target cell ratio of 30:1, CIK cells destroyed 98% of NCI-H460 human lung cancer cells, which was determined by the (51)Cr-release assay. In addition, CIK cells at doses of 3 and 30 million cells per mouse inhibited 57% and 77% of NCI-H460 tumor growth in nude mouse xenograft assay, respectively. This study suggests that CD3(+)CD56(+) CIK cells may be used as an adoptive immunotherapy for patients with lung cancer.     

雄黄注射液体内外抗肿瘤作用研究

目的:初步探讨雄黄注射液的体内外抗肿瘤作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)方法观察雄黄注射液对培养的人白血病细胞株K562,人肝癌细胞株HepG-2,人胃癌细胞株MGC-803,和小鼠Lewis肺癌细胞的增殖抑制作用;建立小鼠S180腹水型肉瘤模型,采用1、2、3mg/kg剂量雄黄注射液作用于小鼠模型,观察雄黄注射液体内抗肿瘤作用。结果:MTT法显示雄黄注射液对人白血病细胞株K562,人肝癌细胞株HepG-2,人胃癌细胞株MGC-803,和小鼠Lewis肺癌细胞增殖有一定的抑制作用;灌胃给予雄黄注射液对小鼠S180腹水型肉瘤生长有一定抑制作用。结论:雄黄注射液能够抑制培养的肿瘤细胞生长,灌胃给药对S180腹水型肉瘤细胞移植的模型小鼠肿瘤增殖有明显的抑制作用。     

Pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin injection treated cytokine-induced killer cells combined with chemotherapy in the treatment of malignancies

Pseudomonas aeruginosa-mannose sensitive hemagglutinin (PA-MSHA) injection serves as immunological adjuvant in clinical treatment of cancer patients. In present study, we investigated whether PA-MSHA injection enhanced the anti-tumor efficacy of CIK cells. Twenty patients with malignancies were enrolled in this retrospective clinical trial. They were divided into two groups: 10 patients received PA-MSHA treated CIK cells transfusion combined with chemotherapy, and other patients accepted CIK cells and chemotherapy. The efficacy of PA-MSHA treated CIK cells was also observed in vitro and in vivo. With PA-MSHA treatment CIK cells exhibited enhanced proliferation but decreased expression of inhibitory cell surface markers such as Tim-3 and PD-1. Particularly in CIK cells, PA-MSHA promoted the extrusion of pro-inflammatory cytokines like IFN-γ. Of 10 patients with PA-MSHA treated CIK cells and chemotherapy, two patients reached partial remissions, 7 patients had stable disease and the other one had progressive disease. Some of these patients experienced fever after cell infusion. 8 patients with CIK cells showed stable disease and 2 patients had progressive disease. Moreover, the side effects were small in patients with CIK treatment. Our data indicated that PA-MSHA improves the functions of CIK cells and shed new light on developing more potent therapeutic approaches for malignancies.     

脐血来源树突状细胞增强CIK细胞对肺癌细胞株的杀伤作用

目的探讨肺癌细胞株A549肿瘤冻融抗原负荷脐血来源树突状细胞(DCs)与CIK细胞混合培养后对A549细胞杀伤活性的影响作用。方法取对数生长期的A549细胞制备肿瘤抗原(Ag),用脐血单个核细胞(CBMC)分别制备DCs和CIK细胞;用负荷Ag的DCs和CIK细胞共培养,诱导Ag-DC-CIK细胞。用流式细胞术检测DC免疫表型,MTT法检测CBMC、CIK、Ag-CIK和Ag-DC-CIK对A549肿瘤细胞株的杀伤活性。结果脐血DCs高表达CD86、CD40,中度表达CD83和CD80,低表达CD11c。实验组细胞(Ag-DC-CIK)对A549细胞的杀伤能力(62%)明显高于对照组(P<0.01),结论肿瘤抗原负荷的DCs能增强CIK细胞对靶细胞的杀伤活性,为DCs的免疫治疗提供了新的思路。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对肿瘤病人体内淋巴细胞活化的影响

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)临床应用的安全性和CIK细胞对肿瘤病人体内淋巴细胞活化的影响。方法:进行CIK细胞抗肿瘤Ⅰ期临床试验,21例恶性肿瘤病人采集外周血单个核细胞诱导CIK细胞,按CIK细胞静脉滴注(静滴)剂量分为4个治疗组观察不良反应,并测定静滴前后病人外周血淋巴细胞活化相关表面标志。结果:21例恶性肿瘤病人中未出现导致研究中断的严重不良反应,CIK细胞最大耐受剂量20.1×10~9个,观察到WHO 2级发热5例,一过性白细胞减少2例,均能迅速恢复正常;CIK细胞静滴后,病人外周血淋巴细胞表面CD25、CD38、CD69表达均有明显上调,P<0.01。结论:Ⅰ期临床试验表明CIK细胞临床应用不良反应轻微,除了直接杀伤作用外还可能活化体内T淋巴细胞从而增强抗肿瘤活性。     

土贝母皂苷-Ⅱ对人肝癌细胞HepG2增殖及细胞周期的影响

目的探讨土贝母皂苷-Ⅱ对人肝癌细胞HepG2增殖、细胞周期的影响及其抗肿瘤效应。方法用不同浓度土贝母皂苷-Ⅱ0、2、4、6、8、10、12μg/ml处理HepG2细胞后,MTT法检测细胞生长的抑制率,荧光染色和流式细胞术分别观察凋亡细胞形态和细胞周期的变化。同时,以H22肝癌小鼠模型初步探讨土贝母皂苷-Ⅱ的抗肿瘤作用。结果土贝母皂苷-Ⅱ能剂量依赖性地抑制HepG2细胞生长,24-h半数抑制剂量(IC50)为4.05μg/ml。HepG2细胞经土贝母皂苷-Ⅱ处理后,呈现典型的凋亡细胞形态,G2/M期细胞数量增加,而G0/G1期细胞数明显减少。体内抗肿瘤实验结果证明,土贝母皂苷-Ⅱ对肿瘤的生长有显著的抑制作用。结论土贝母皂苷-Ⅱ可能是通过使肿瘤细胞滞留于G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

保尔康颗粒剂对抗肿瘤药物增效减毒作用的研究

目的观察保尔康颗粒剂对抗肿瘤药物的增效和减毒作用。方法保尔康颗粒剂合并丝裂霉素C(MMC)对荷瘤小鼠的生命延长率的影响;保尔康颗粒剂合并环磷酰胺(CTX)对荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数及血常规的影响。结果保尔康颗粒剂与大剂量化疗药物MMC合用,可延长荷瘤小鼠的生命,比单纯对照组生命延长104%,比MMC组延长26%;该药与CTX合用可使荷瘤小鼠的胸腺指数明显增加(P<0.01),有提高白细胞的作用(P<0.05)。结论保尔康颗粒剂具有增加大剂量抗肿瘤药物疗效的作用,并能减轻抗肿瘤药物所致的白细胞下降、免疫功能降低等毒副作用。