松花粉硫酸酯化多糖调控小鼠T细胞[Ca~(2+)]_i的研究

目的探讨马尾松花粉硫酸酯化多糖组分(SPPM60-D)对小鼠脾脏T淋巴细胞内[Ca2+]i的调控机制。方法水煮醇沉法提取马尾松花粉粗多糖,60%乙醇分级,Sephacryl S-400HR纯化得PPM60-D,氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化得SPPM60-D。尼龙毛柱法分离纯化小鼠脾脏T淋巴细胞,用SPPM60-D处理,测定T淋巴细胞内[Ca2+]i,ELISA试剂盒检测细胞上清中IL-2和IL-4水平。结果 ConA与SPPM60-D均能升高T细胞内[Ca2+]i,与对照组相比,升高率分别为211.5%、201.8%(P<0.01)。2-APB、LY294002、U73122、维拉帕米均可以抑制[Ca2+]i的升高,而TAK-242对其没有明显作用;SPPM60-D使细胞上清中IL-2和IL-4水平上升了6.94倍和5.95倍(P<0.01),2-APB可以明显抑制上述细胞因子水平,而TAK242没有明显作用。结论推测SPPM60-D的作用机制是经TCR/CD3受体,通过TCR/CD3-PI3K-PLC-IP3R-Ca2+信号通路,促进小鼠T淋巴细胞[Ca2+]i的升高,从而提高T淋巴细胞IL-2和IL-4的水平。     

异丙酚对PC12细胞膜流动性及[Ca~(2+)]_i的影响

目的　研究异丙酚对PC12细胞膜流动性及 [Ca2 + ]i的影响。方法　以PC12细胞作为神经细胞模型 ,加入不同浓度的异丙酚 ,用荧光偏振法测定细胞膜微粘度 η的动态变化 ,用激光扫描共聚焦显微镜检测 [Ca2 + ]i 随时间变化曲线。结果　①异丙酚各剂量组的 η值均降低 ,并呈现剂量依赖性 ;② 30、10 0mg·L-1的异丙酚在加药后 2 0～ 30s使[Ca2 + ]i 短暂升高 ,[Ca2 + ]i的峰值分别比加药前增加了119%和 14 0 % ,但在 5 0s内均恢复到加药前水平。结论　异丙酚的全麻作用机制可能与细胞膜流动性增高有关     

马尾松花粉硫酸酯化多糖对大鼠主动脉平滑肌细胞[Ca2＋]i调控及增殖的影响

目的研究马尾松花粉多糖PPM60．A及其硫酸酯化物SPPM60-A对大鼠动脉平滑肌细胞[Ca2＋]i调控及增殖的影响。方法常规水提醇沉法制备马尾松花粉多糖,SephacrylS-400HR色谱分离得PPM60-A,氯磺酸一吡啶法得硫酸酯化物SPPM60-A,酯化度为1．28。酶解法分离制备大鼠动脉平滑肌细胞,测定酯化前后多糖对其胞内[Ca2＋]i和细胞增殖的影响。结果PPM60．A和SPPM60-A均可以降低[Ca2＋]i,抑制高K＋和去甲肾上腺素（NE）诱导的钙离子升高,降低高K＋引起的钙离子水平上升,对NE诱导的血管主动脉平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用。PPM60．A作用效果好于SPPM60-A。结论PPM60．A及SPPM60．A均能抑制细胞外Ca2＋内流,抑制血管平滑肌细胞增殖。     

马尾松花粉硫酸酯化多糖对大鼠主动脉平滑肌细胞 [Ca2+]i调控及增殖的影响

目的 研究马尾松花粉多糖PPM60-A及其硫酸酯化物SPPM60-A对大鼠动脉平滑肌细胞 [Ca²⁺]_i调控及增殖的影响。方法 常规水提醇沉法制备马尾松花粉多糖,Sephacryl S-400HR色谱分离得PPM60-A,氯磺酸-吡啶法得硫酸酯化物SPPM60-A,酯化度为1.28。酶解法分离制备大鼠动脉平滑肌细胞,测定酯化前后多糖对其胞内 [Ca²⁺]_i和细胞增殖的影响。结果 PPM60-A和SPPM60-A均可以降低 [Ca²⁺]_i,抑制高K⁺和去甲肾上腺素（NE）诱导的钙离子升高,降低高K⁺引起的钙离子水平上升,对NE诱导的血管主动脉平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用。PPM60-A作用效果好于SPPM60-A。结论 PPM60-A及SPPM60-A均能抑制细胞外Ca²⁺内流,抑制血管平滑肌细胞增殖。     

马尾松花粉多糖硫酸酯化前后对小鼠脾细胞钙离子浓度的影响

研究马尾松花粉多糖硫酸酯化前后对小鼠脾细胞内游离钙离子的影响及作用机理。应用氯磺酸-吡啶法将马尾松花粉多糖进行硫酸化修饰,采用钙离子荧光探针Fura 2-am测定修饰前后的两种多糖对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度。马尾松花粉多糖经硫酸酯化后可显著提高脾细胞内钙离子浓度,而酯化前作用不明显。特异性L型钙通道阻滞剂维拉帕米可部分抑制酯化多糖促钙离子浓度升高的作用。在外钙为零时,酯化多糖仍可小幅度提高脾细胞钙离子浓度。马尾松花粉多糖经硫酸化修饰后可通过引发外钙内流和内钙释放两条通路提高脾细胞钙离子浓度。     

马尾松花粉多糖硫酸酯化前后生物活性的比较研究

目的对马尾松花粉多糖(PPM)进行硫酸酯化,得硫酸酯化多糖(S-PPM),比较酯化前后抗肿瘤活性、免疫调节活性和清除自由基能力的变化。方法PPM采用氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化。结果S-PPM取代度为1.47,S-PPM对体内外肿瘤细胞的抑制作用、对促进T、B细胞增殖作用均高于PPM;对促进巨噬细胞的吞噬作用变化不大;S-PPM清除超氧阴离子自由基的作用明显强于PPM,清除羟自由基的作用小于PPM。结论S-PPM能促进特异性免疫抑制肿瘤细胞的增殖;硫酸酯化也能改善对多糖清除自由基的作用。     

白鲜皮多糖硫酸酯化修饰及抗银屑病作用研究

目的:对白鲜皮精制多糖(DDP-Ⅲ)进行硫酸酯化修饰,并比较其酯化修饰前后的结构特征及抗银屑病作用。方法:采用DEAE-52阴离子交换纤维素柱、Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱等对白鲜皮多糖(DDP)进行分离纯化,得DDP-Ⅲ;用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化后,采用高效液相色谱法测定其单糖组成。用酯化试剂(无水吡啶+氯磺酸)对DDP-Ⅲ进行硫酸酯化修饰,得SDDP-Ⅲ;采用氯化钡-明胶浊度法测定其硫酸根取代度,并通过红外光谱、拉曼光谱、扫描电镜比较修饰前后的结构特征。将雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(雷公藤多苷,20 mg/kg)和DDP-Ⅲ/SDDP-Ⅲ低、中、高剂量组(均分别为56、112、224mg/kg)。除正常组小鼠外敷凡士林外,其余各组小鼠均外敷咪喹莫特乳膏复制银屑病模型。各给药组小鼠灌胃相应药物溶液0.4mL,正常组与模型组小鼠灌胃等体积水,每天1次,连续14 d。末次给药2 h后,采用酶联免疫吸附测定法检测各组小鼠血清白细胞介素17(IL-17)、IL-23含量,采用苏木精-伊红染色法观察其近尾部皮肤鳞片,并记录有颗粒层鳞片数。结果:DDP-Ⅲ由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖组成。SDDP-Ⅲ的硫酸根取代度为0.65。红外光谱、拉曼光谱分析结果显示,除与DDP-Ⅲ有相同的特征吸收峰外,SDDP-Ⅲ分别在1 255、823 cm~(-1)和1 240、815 cm~(-1)处有硫酸根基团的特征吸收峰。扫描电镜分析结果显示,DDP-Ⅲ呈片状,表面光滑、平整,排列紧密;SDDP-Ⅲ呈块状或颗粒状,有孔洞结构,排列疏松。动物实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠皮损表皮明显增厚,颗粒层明显减少,其血清IL-17、IL-23含量均显著升高,有颗粒层鳞片数显著减少(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各给药组小鼠上述症状均有不同程度的改善,阳性组、DDP-Ⅲ高剂量组以及SDDP-Ⅲ中、高剂量组小鼠血清IL-17、IL-23含量均显著下降,有颗粒层鳞片数均显著升高,且SDDP-Ⅲ中、高剂量组上述指标均显著优于DDP-Ⅲ同剂量组(P<0.05或P<0.01)。结论:DDP-Ⅲ含有甘露糖等5种单糖成分。DDP-Ⅲ、SDDP-Ⅲ均具有一定的抗银屑病作用,且经硫酸酯化修饰的SDDP-Ⅲ的作用更强;这种作用可能与抑制IL-23/IL-17信号通路有关。     

硫酸酯化天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

摘 要 目的：研究硫酸酯化天麻多糖（GEPS）对皮质酮（CORT）诱导损伤的保护作用。方法: 采用氨基磺酸 甲酰胺法经透析冷冻干燥等处理制得GEPS。在GEPS各剂量（0,250,500,1 000 μg·mL^-1）与PC12细胞孵育30 min之后,换用CORT作用48 h。采用CCK 8法判断细胞损伤程度;采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞凋亡率;采用DAPI染色法观察细胞凋亡形态。结果: GEPS各剂量组的PC12细胞存活率较模型组显著上升（P<0.05）,且呈浓度依赖性。经GEPS作用后能有效缓解LDH的释放,与CORT损伤模型组相比,差异有统计学意义（P<0.05）,且随着GEPS浓度的上升,LDH的释放率逐渐下降。倒置显微镜下可见CORT损伤模型组PC12细胞折光度下降,突触收缩,细胞聚集,贴壁不良,有许多呈悬浮状,但经过GEPS预处理的PC12细胞随着GEPS浓度的上升,生存状态明显好转。与CORT致损伤组相比,GEPS各浓度组凋亡的细胞核形态学改变有所改善,凋亡细胞明显减少。结论:GEPS对CORT诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,但与天麻多糖（GEP）相比提高不大,其他方面的生物学活性有待进一步研究。     

牛磺酸对H-2O_2引起的大鼠血管平滑肌细胞核[Ca~(2+)]及胞浆[Ca~(2+)]变化的影响

目的　毒性剂量H2 O2 可引起细胞坏死或凋亡 ,此过程是否与H2 O2 引起的核 [Ca2 +]([Ca2 +]n)变化有关未见报导。本文研究牛磺酸对H2 O2 引起的血管平滑肌细胞(VSMC) [Ca2 +]n 与胞浆 [Ca2 +]([Ca2 +]c)的变化影响。方法　应用激光共聚焦显微镜对负载Fluo 3的培养大鼠VSMC的 [Ca2 +]n 及 [Ca2 +]c 变化进行研究。结果　在0 5 %H2 O2 作用下 ,[Ca2 +]n 与 [Ca2 +]c 持续升高 ,用抗氧化细胞保护剂 牛磺酸 2 0mmol·L-1预处理细胞 ,可降低H2 O2 引起的 [Ca2 +]n升幅 (P <0 0 5 ) ,但不影响 [Ca2 +]c 升幅 (P >0 0 5 ) ,表明 [Ca2 +]n 变化与 [Ca2 +]c 变化对牛磺酸反应性存在差异。结论　VSMC的核Ca2 +调控与胞浆Ca2 +调控各自具有一定的独立性。牛磺酸对H2 O2 引起的大鼠VSMC核Ca2 +的变化具有保护作用     

硫酸酯化天麻多糖抗脑胶质瘤活性的研究

摘要：目的:研究硫酸酯化天麻多糖（sulfated gastrodia elata polysaccharides,GEPs）抗脑胶质瘤的活性。方法:将大鼠脑胶质瘤细胞（C6）实验分为空白对照组和GEPs各剂量组(0. 10,0. 25,0. 50,1. 00,1. 50 mg·ml-1),采用CCK-8法检测细胞存活率,并观察细胞形态变化;采用DAPI荧光染色法观察细胞凋亡形态;采用划痕实验检测不同浓度GEPs对细胞迁移能力的影响。结果:GEPs各剂量组作用于C6胶质瘤细胞24 h和48 h时可显著降低细胞生存率（P<0. 05）,并呈浓度依赖性（P<0. 01）。倒置显微镜下可见,随着GEPs浓度的上升,C6细胞体积变小,细胞间隙变大,失去原有的细胞形态,并且贴壁不良,产生大量漂浮物。DAPI染色观察到C6细胞数量明显锐减,细胞核缩小,凋亡的细胞明显增多。细胞划痕实验表明,GEPs各剂量组作用于C6细胞24 h后,愈合率逐渐下降,并呈浓度依赖性（P <0. 05）。结论:硫酸酯化天麻多糖能显著抑制神经胶质瘤细胞生长的活性,并可有效抑制神经胶质瘤细胞的迁移。     

硫酸酯化虎奶多糖的制备及其抗氧化作用研究

目的对虎奶多糖进行硫酸酯化修饰 ,并研究其抗氧化活性。方法用氯磺酸 吡啶法对虎奶多糖进行硫酸酯化修饰得到硫酸酯化虎奶多糖 (S HNP) ;以Fe2 + Vc为氧自由基生成系统 ,体外观察S HNP对·OH引起的大鼠肝线粒体脂质过氧化损伤的保护作用 ;用化学发光法研究化学模拟体系CuSO4 Phen Vc H2 O2 DNA中S HNP对DNA损伤的保护作用 ;连苯三酚自氧化法观察S HNP对O·- 2 的清除作用。结果S HNP能显著抑制·OH引起的线粒体脂质过氧化产物TBARS的生成、线粒体的肿胀及膜流动性的降低 ;对·OH导致的DNA损伤有一定保护作用 ;对O·-2 有直接清除作用。结论S HNP具有较强的抗氧化活性。     

螺旋藻多糖硫酸酯化修饰前后抗肿瘤及免疫活性的研究

比较螺旋藻多糖硫酸酯化修饰前后体内外抗肿瘤及免疫活性.采用MTT比色法研究药物在体外对人肿瘤细胞株的抑制作用,促进正常小鼠脾淋巴细胞的增殖活性以及对荷瘤小鼠NK和CTL细胞活性的影响.采用移植性肿瘤实验方法考察了药物对小鼠S180肉瘤的抑制作用.结果显示,螺旋藻多糖（NPSP）对肿瘤细胞株几乎无细胞毒作用,硫酸酯化螺旋藻多糖（SNPSP）对肿瘤细胞株具有显著的细胞毒作用,其中对SMMC-7721人肝癌细胞株抑制率最高达50%.NPSP50 mg/kg对小鼠S180肉瘤无抑制,相同剂量的SNPSP对小鼠S180肉瘤的抑制率达35.42%.NPSP具有促进脾淋巴细胞增殖作用,但对ConA和LPS诱导的脾淋巴细胞增殖反应无促进作用,SNPSP促进脾淋巴细胞增殖作用较NPSP增强,同时对ConA和LPS诱导的脾淋巴细胞增殖反应也具有明显的促进作用.NPSP和SNPSP均能促进荷瘤小鼠NK细胞和CTL细胞活性,其中SNPSP促进CTL细胞活性较NPSP增强.     

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca~(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响

目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 ,而改善VD临床症状     

孔石莼多糖及其硫酸酯化衍生物降血脂机制的体外研究

目的 通过研究不同浓度孔石莼多糖(U)及硫酸酯化孔石莼多糖(HU)对人肝癌细胞HepG2中内源性低密度脂蛋白受体(LDLR)表达和LDLR mRNA转录的影响,探讨U和HU在受体及基因水平上的调脂作用机制。方法 利用Western-Blotting技术测定U和HU对HepG2细胞LDLR表达量的影响,采用荧光定量PCR技术分析不同浓度的U和HU对人肝癌细胞HepG2 LDLR mRNA表达的影响。结果HepG2细胞经不同浓度的U和HU作用后,U和HU用药组的LDLR表达量显著高于空白对照组(P<0.05),证明从海藻孔石莼中提取的U和HU可显著提高人肝癌细胞HepG2中LDLR的表达水平。同时,HU药物组的LDLR表达量明显高于U药物组(P<0.05)。U和HU用药组其LDLR mRNA的含量与空白对照组相比均明显升高(P＜0.05)。其中U药物组(0.1 mg/mL)对HepG2细胞中LDLR mRNA的升高作用最明显,与空白对照组相比提高了约7.72倍。HU药物组(0.1 mg/mL)对HepG2细胞中LDLR mRNA的升高作用弱于U药物组(0.1 mg/mL),与空白对照组相比提高了约3.89倍。结论 U和HU可能通过促进HepG2细胞中LDLR mRNA,增加肝细胞LDLR蛋白表达量,从而降低LDL浓度。     

PGF_(2α)对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的影响

目的探讨PGF2α对葡萄糖刺激性胰岛素分泌和[Ca2+]i变化的影响。方法运用放免方法检测不同浓度的PGF2α在不同情况下对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化,并以F luo-3AM为探针,利用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的改变。结果在16.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,0.1、1、5μmol.L-1的PGF2α剂量依赖性的促进了NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌,其中5μmol.L-1时作用最强(P<0.01),而在10μmol.L-1时,PGF2α却抑制了葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05);预先加入0.5 mmol.L-1EGTA后,5μmol.L-1的PGF2α不能促进胰岛素分泌,同样在预先加入n ifed ip ine或EGTA+n ifed ip ine后,PGF2α也无促进胰岛素分泌(P>0.05)。在0、5.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,5μmol.L-1的PGF2α无促进胰岛素分泌作用(P>0.05)。另外,应用5μmol.L-1的PGF2α能够引起β细胞内钙升高(P<0.01),在无钙环境下,PGF2α只引起缓慢的幅度较小的细胞内钙升高,恢复细胞外钙浓度时,β细胞内钙升高(P<0.01)。结论在NIT-1β细胞,一定范围浓度的PGF2α能够促进高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌,可能与PGF2α增加细胞外钙内流有关。     

人参皂苷Rgl对慢性吗啡作用及纳洛酮催促戒断SK-N-SH细胞的影响及机制研究

目的探讨人参皂苷Rgl对吗啡慢性作用及纳洛酮催促戒断SK-N-SH细胞的影响及其机制。方法采用不同浓度人参皂苷Rgl1、2、4、8、16、32μmol·L-1对SK-N-SH细胞预处理24h后,用吗啡(100μmol·L-1培养基)孵育24h,采用MTT法研究人参皂苷Rgl对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖的影响;用相同浓度的吗啡作用于SK-N-SH细胞后,10μmol·L-1纳洛酮催促戒断前24h,加入1、2、4μmol·L-1的Rg1作用24h,采用荧光分光光度法、RT-PCR及Western blot技术分别检测人参皂苷Rgl对吗啡慢性作用纳洛酮催促戒断SK-N-SH细胞内[Ca2+]i、CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达的影响。结果①与对照组相比,吗啡慢性作用48h可抑制SK-N-SH细胞的增殖;细胞内[Ca2+]i增高(P<0.01);细胞CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达明显升高;②加入10μmol·L-1纳洛酮作用30min后,细胞内[Ca2+]i急剧降低(P<0.05);CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达进一步升高(P<0.05);③2μmol·L-1人参皂苷Rg1对细胞进行预处理能缓解吗啡对细胞的增殖活性的抑制作用(P<0.01)。④慢性吗啡作用SK-N-SH细胞,在纳洛酮急性戒断前,加入不同浓度的Rg1可缓解细胞内钙离子浓度的降低;同时可降低CaMKⅡβ mRNA和蛋白表达的进一步升高。结论人参皂苷Rgl可缓解吗啡对SK-N-SH细胞的抑制作用,通过调控细胞内[Ca2+]i以及CaMKⅡβ mRNA和蛋白表达,从而缓解吗啡成瘾及戒断症状的产生。     

15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的　通过阻断细胞外钙离子 (Ca2+ )内流,观察 15 羟化二十烷四烯酸 ( 15 HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2+ ]i)的影响,探讨缺氧时 15 HETE引起细胞钙动员的机制。方法　采用组织浴槽血管环方法观察L 型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15 HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定 15 HETE对细胞内 [Ca2+ ]i的作用。结果　在正常组和缺氧组, 10μmol·L-1硝苯地平和无钙液对 1μmol·L-1 15 HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的 15 HETE组细胞 (正常培养的细胞暴露于 1 μmol·L-1 15 HETE下继续孵育 8min)与正常对照组相比,细胞内 [Ca2+ ]i明显增加 (P<0 05)。结论　15 HETE可引起肺动脉平滑肌细胞 [Ca2+ ]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放。     

在LPS致大鼠发热过程中下丘脑TRPV4对体温及cAMP含量、[Ca~(2+)]i浓度的影响

目的探讨TRPV4在发热时是否参与体温调节过程。方法用脂多糖复制大鼠发热模型,结合应用钌红抑制TR-PV4的活性,观察发热时的下丘脑组织中TRPV4含量、钙离子浓度变化与cAMP含量的关系。结果单独给予钌红组体温降低;钌红+LPS组与LPS组相比,△T、cAMP与[Ca2+]i增高幅度均降低;钌红组与钌红+LPS组TRPV4表达明显低于对照组。结论①TRPV4通道可能参与正常体温的维持;②通过激活TRPV4通道,使钙离子内流增多,进而中枢发热介质cAMP表达增多,这可能是LPS致大鼠发热的重要途径。     

云芝多糖对小鼠脾细胞的免疫增强作用研究

目的研究云芝多糖对小鼠脾细胞的免疫增强作用。方法水提醇沉法制备云芝粗多糖,采用不同浓度的乙醇对所得云芝粗多糖进行梯度醇沉,并计算各级产物的总多糖含量及收率。将小鼠脾细胞分别与云芝粗多糖及分级醇沉各级样品共同孵育,采用CCK-8法检测各样品对脾细胞增殖、对Con A或LPS诱导的脾细胞增殖的影响,采用酶联免疫法检测各级产物对NO释放的影响。结果分级醇沉各级产物多糖含量差异较小,但收率差别较大,其中30%浓度醇沉多糖收率最高,40%浓度醇沉多糖收率最低。云芝多糖分级醇沉各级样本对小鼠脾细胞增殖均有一定的促进作用,综合评价,优选出70%、80%醇沉样本较好,且作用效果明显优于粗多糖。总多糖及70%、80%醇沉多糖样品分别在0.50~1.25、0.50~0.75、0.50~1.00 mg·m L-1内药理活性与剂量呈正相关,且对Con A或LPS诱导的脾细胞增殖及NO释放有明显的协同作用(P<0.05)。结论云芝粗多糖及分级醇沉各级产物对体外小鼠脾细胞具有免疫增强作用,本研究为云芝多糖的开发、利用研究提供了一定理论依据。     

羊栖菜硫酸多糖通过PI3K/AKT通路抑制H2O2诱导的MRC-5细胞氧化损伤

目的 为阐明羊栖菜硫酸多糖(SFPS Ⅲ)对过氧化氢(H2O2)诱导的正常人胚肺细胞(MRC-5)氧化应激损伤的保护作用及潜在分子机制。方法 试验通过噻唑蓝(MTT)法检测MRC-5细胞暴露于H2O2或SFPS Ⅲ后的活力,Hoechst染色法检测细胞凋亡形态,流式细胞仪测定细胞凋亡率,酶联免疫吸附试验测定超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性、一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量。通过免疫印迹Western blot检测相关蛋白水平。结果 H2O2处理使MRC-5细胞活力显著降低(P < 0.05),而SFPS Ⅲ(200～600 μg.mL-1)干预可明显增强MRC-5细胞活力。酶联免疫法结果表明,SFPS Ⅲ干预抑制H2O2诱导的细胞内NO和MDA的过度分泌,并增加了H2O2诱导的细胞内SOD和GSH-Px的活性。免疫印迹结果表明,120 μmol.L-1 H2O2处理的细胞中p-AKT和p-mTOR相对蛋白表达水平下调,而p-AKT和p-mTOR相对蛋白表达水平在SFPS Ⅲ处理的MRC-5细胞中被逆转。结论 SFPS Ⅲ对H2O2诱导的MRC-5细胞氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能是激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥其抗凋亡作用。研究结果为羊栖菜高附加值产品开发及天然、安全抗氧化功能因子的筛选提供了一定的理论依据。