硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡

目的：研究维生素E琥珀酸酯(Vitamin E succinate，VES）对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方珐：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry，FCM）检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas，Bcl-2、P53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖；光镜下可见K562／ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变；DNA凝胶电沫显示典型的凋亡DNA梯形条带，FCM细胞周期分析显示G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高；Fas蛋白表达明显上调，Bcl-2蛋白表达下调，p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562／ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

MEK抑制剂联合三氧化二砷对髓系白血病细胞凋亡的研究

目的:研究MEK抑制剂PD98059联合三氧化二砷(As2O3)对髓系白血病细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:将PD98059、As2O3单独或联合作用于髓系白血病细胞系HL-60、K562细胞,用AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡,用流式细胞术检测Bcl-2、Caspapse-3表达。结果:联合组与单用组相比,细胞凋亡率明显增高。Bcl-2在HL-60、K562细胞均高水平表达。As2O3明显抑制HL-60细胞Bcl-2表达,对K562细胞Bcl-2无明显抑制作用。单用PD98059、As2O3及两药合用在诱导HL-60、K562细胞凋亡过程中,活化caspapse-3均明显上升,两药合用较单用PD98059或As2O3活化caspapse-3明显升高。结论:PD98059联合As2O3同时抑制ERK/MAPK和Bcl-2,激活Caspase酶,对HL-60细胞有协同促凋亡效应。两药联合同时靶向作用ERK/MAPK和BCR/ABL,活化Caspase酶,协同诱导K562细胞凋亡。PD98059可增强As2O3对髓系白血病细胞的凋亡诱导作用。     

环氧合酶-2抑制剂对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的:体外观察非甾体药物选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡影响。方法:采用噻唑蓝法观察NS-398对K562细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,DNA梯状电泳检测凋亡的发生。Western印迹法检测K562细胞半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶Caspa-se-3和COX-2的表达。结果:NS-398呈剂量依赖性的方式抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡。并呈浓度依赖性改变细胞周期的分布,一方面增高Go/G1期细胞比例,另一方面降低S期和G2/M期细胞比例,与对照组相比差异具显著性(P<0.05)。NS-398干预的K562细胞Caspase-3的蛋白表达均显著升高,而COX-2的蛋白表达降低,并呈浓度依赖性。结论:体外NS-398能有效的发挥抗K562细胞白血病效应,对白血病细胞增殖有抑制作用并诱导其凋亡,这可能与抑制COX-2表达及上调Caspase有关。     

DuP-697对K562白血病细胞凋亡诱导作用观察及机制研究

目的：观察选择性COX-2抑制剂DuP697对慢粒白血病K562细胞的凋亡诱导效应,并探讨其作用机制。方法：细胞培养加入DuP-697作用后,透射电镜观察细胞凋亡的形态,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western印迹检测K562细胞Caspase-8蛋白表达;用Z—IETD—FMK阻断Caspase8活性,以证实Caspase-8蛋白表达和细胞凋亡的关系。结果：DuP-697能诱导K562细胞凋亡,其作用呈浓度依赖性,这-效应与Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活有关;用Z-IETD—FMK阻断Caspase-8的活性,细胞凋亡明显受抑。结论：DuP-697能诱导K562细胞凋亡,其机制涉及Caspase-8活化的信号转导途径。     

地塞米松衍生物对K562细胞增殖的抑制作用及机制

目的：研究地塞米松衍生物对K562细胞的增殖抑制作用，并对其作用机制进行初步的探讨。方法：以地塞米松为原料合成并纯化得到新的衍生物。用不同浓度的地塞米松衍生物对K562细胞进行处理，通过MTT比色法检测细胞增殖抑制率，电镜法观察细胞凋亡的形态学变化，免疫细胞化学法测定细胞Bcl-2，Fas表达，比色法检测Caspase-3的活性变化。结果：地基米松衍生物能抑制K562细胞的增殖，使Bcl-2表达降低，Fas表达上调，Caspase-3活性增强，诱导K562细胞凋亡。结论：地塞米松衍生物可能通过诱导K562细胞凋亡而抑制细胞增殖。其诱导细胞凋亡的机制可能与抑制Bcl-2蛋白的表达，上调Fas受体，进而激活细胞内的Caspase-3有关。     

中华眼镜蛇毒组分CⅡ抗耐药K562/A02细胞作用机制的研究

目的:研究中华眼镜蛇毒组分CⅡ(FCⅡNNAV)对多药耐药白血病细胞K562/A02的抑制作用及机制。方法:应用MTT法观察FCⅡNNAV体外对K562和K562/A02的毒性作用,流式细胞仪法观察FCⅡNNAV体外对K562/A02细胞Pgp,Bcl2蛋白表达的影响,比色法检测Caspase3活性变化。结果:FCⅡNNAV对耐药K562/A02及敏感K562细胞均有抑制作用,IC50分别为0.75±0.01μg·ml-1和0.67±0.11μg·ml-1。流式细胞仪检测发现FCⅡNNAV能使K562/A02细胞的Pgp,Bcl2蛋白表达明显下调;Caspase3活性明显增强。结论:FCⅡNNAV对细胞K562/A02及细胞K562均有较强的抑制作用,且抑制作用与剂量呈正相关,FCⅡNNAV可能通过抑制K562/A02细胞Pgp,Bcl2蛋白表达,激活Caspase3活性而诱导K562/A02细胞凋亡。     

艰难梭菌毒素A对白血病细胞株K562增殖、凋亡及相关基因调控的研究

目的探讨艰难梭菌毒素A（TcdA）对白血病细胞株K562增殖、凋亡的作用及其机制。方法采用四唑蓝比色试验（MTT）检测TcdA对K562细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测TcdA作用后细胞Bcl-2/Bax,Egr-1mRNA表达的变化。结果 TcdA能抑制K562细胞的增殖,作用48h后的抑制率（IR）为47.67%,流式细胞仪分析出现典型的亚二倍体峰（凋亡峰）。TcdA作用后K562细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达上调,而Egr-1基因表达上调,并呈量效关系。结论艰难梭菌毒素A可诱导K562细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2,上调Bax,上调Egr-1基因表达水平有关。     

锰超氧化物歧化酶模拟化合物通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡

目的：探讨锰超氧化物歧化酶模拟化合物（mi mics of manganese superoxide dismutase,MnSODm）对人白血病K562细胞的凋亡诱导效应及作用机制。方法：应用MTT比色法、An-nexin V/PI双标记和细胞形态学法观察细胞凋亡;流式细胞术（FCM）测定Fas蛋白表达水平;RT-PCR检测Caspase-3mRNA的表达水平,比色法测定Caspase-3活性变化。结果：MnSODm作用后K562细胞的增殖受到抑制,Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变。同时,Fas蛋白表达水平显著增高,Caspase-3mRNA表达水平明显升高,活性显著增强。结论：MnSODm可能通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡。     

一种海洋来源的ETP类化合物HDN-1诱导K562细胞凋亡作用及机制初探

目的 探讨南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1对人慢性粒细胞白血病K562细胞的增殖抑制,诱导凋亡作用及其机制。方法 采用MTT法检测HDN-1对K562细胞的增殖抑制作用;DNA结合染料Hoechst 33342染色,Western Blotting以及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白的变化。结果 HDN-1能显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性;HDN-1作用后,细胞核形态发生明显变化并且出现了基因组DNA的梯状剪切条带;Caspase-9、8、3逐渐被激活,Caspase3的作用底物PARP被活化裂解出现89KD的剪切条带,并且Caspase蛋白的激活可被特异性抑制剂所阻断;抑凋亡蛋白Bcl-2,Mcl-1的表达降低,促凋亡蛋白Bax的表达量增高。另外,融合蛋白Bcr-Abl的表达被HDN-1抑制并呈剂量依赖性。结论 来源于南极土壤来源真菌的次级代谢产物HDN-1可能是通过抑制Bcr-Abl融合蛋白的表达进而诱导K562细胞凋亡,并且凋亡是通过Caspase依赖的线粒体途径和死亡受体途径共同介导发生的。     

三氧化二砷诱导K562/ADM细胞凋亡的作用机制研究

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对K5 6 2 ADM细胞的诱导凋亡效应 ,探讨其作用机制。方法 :应用噻唑蓝 (MTT)比色法、Wright Giemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术 (FCM)观察K5 6 2 ADM细胞凋亡 ;FCM测定K5 6 2 ADM细胞Fas、Bcl 2、P5 3蛋白水平的变化 ;比色法检测Caspase3活性变化。结果 :As2 O3 可抑制K5 6 2 ADM细胞增殖 ;K5 6 2 ADM呈典型凋亡形态改变 ;DNA电泳可见梯状条带出现 ;FCM分析示亚G1期细胞比例增高 ,G2 M期阻滞 ;Fas、P5 3蛋白表达明显上调 ;Caspase3活性明显增强。结论 :As2 O3 可通过Fas依赖性Caspase3激活而诱导K5 6 2 ADM细胞凋亡。     

选择性COX-2抑制剂NS-398诱导白血病细胞凋亡的作用机制

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398诱导白血病细胞系K562细胞凋亡的分子机制。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Bcl-2、半胱氨酸酶-3(Caspase-3)的表达;并应用流式细胞术检测Caspase-3的活性。结果①NS-398作用K562细胞24h后,对照组未出现凋亡峰,各药物处理组(100~400μmol·L-1)均出现明显的凋亡峰,其凋亡率分别为(10.51±1.04)%、(27.79±2.40)%、(45.72±3.32)%和(60.22±2.03)%(P<0.01)。②不同浓度NS-398处理后,K562细胞中Bcl-2蛋白表达下降,而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。③NS-398能以剂量依赖方式促进Caspase-3活性的增加,表达活化Caspase-3的细胞百分率分别为(2.67±0.22)%、(9.53±0.15)%、(21.28±0.43)%、(39.63±0.8)%和(63.40±0.69)%(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过调节Bcl-2蛋白表达、活化Caspase-3,从而诱导白血病K562细胞凋亡。     

锰超氧化物岐化酶模拟化合物诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;Annexin V/PI双标记和细胞形态学法检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2和bax基因mRNA的表达水平;流式细胞术(FCM)测定Bcl-2和Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm)、细胞色素C(Cyt C)释放和Caspase-3活性变化。结果0.5~10mg·mL-1MnSODm明显抑制K562细胞增殖(P<0.01),Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;bcl-2基因mRNA和蛋白表达下调,bax基因mRNA和蛋白表达上调,线粒体Δψm降低,Cyt C释放增多,Caspase-3活性增强。结论MnSODm调控Bax/Bcl-2表达,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的:研究黄芩素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用。方法:以H22肝癌细胞接种于正常小鼠左前肢腋窝皮下复制肝癌H22荷瘤模型。实验分为模型对照、环磷酰胺(30mg·kg-1)和黄芩素高、中、低剂量(80、40、20mg·kg-1)组。灌胃给药,每天1次,连续15d。末次给药后处死小鼠,剥离完整的肿瘤组织称重,并计算肿瘤抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡率;按试剂盒说明书测定肿瘤组织中半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的活性;RT-PCR测定瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平。结果:高、中剂量黄芩素可显著抑制模型小鼠体内肿瘤生长(P<0.01或P<0.05),抑制率分别为61.63%和44.65%;可显著提高G0/G1期细胞百分比(P<0.05),并减少S期细胞(P<0.01或P<0.05)。与模型对照组比较,黄芩素高、中、低剂量组细胞凋亡率显著提高(P<0.01或P<0.05)。高、中剂量黄芩素可显著增强肿瘤组织中Capcase-3活性(P<0.01或P<0.05),抑制Bcl-2mRNA表达(P<0.01或P<0.05);高剂量黄芩素可显著提高肿瘤组织中BaxmRNA表达(P<0.05)。结论:黄芩素可促进肝癌H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的凋亡,其机制可能与增强Capcase-3活性、提高Bax表达,并抑制Bcl-2表达有关。     

Baicalein induced in vitro apoptosis undergo caspases activity in human promyelocytic leukemia HL-60 cells.

In this study, we evaluated the potential apoptosis effects of baicalein on human promyelocytic leukemia HL-60 cells in vitro. Apoptosis induction, cell viability, morphology and caspase-3 activity were then performed to determine by flow cytometric assay, DNA gel electrophoresis, anti-ADP-ribose stain and determination of caspase-3 activity. There is a significant difference in cell death of HL-60 cells that was detected between baicalein-treated and untreated groups. Furthermore, there was a further significant increase in apoptosis induction when cells were treated with baicalein compared to without baicalein treated groups. Flow cytometric assays and DNA fragmentation gel electrophoresis also confirmed baicalein induced apoptosis in HL-60 cells. Baicalein also promoted caspase-3 activity then leading to cleavage of poly-ADP-ribose polymerase finally leading to DNA fragmentation occurrence. Furthermore, the baicalein-induced apoptosis was markedly blocked by the broad-spectrum caspase inhibitor, z-VAD-fmk. Taken together, these results suggest that treatment of human leukemia HL-60 cells with baicalein induced apoptosis through activation of caspase-3 activity.     

青蒿素抗肿瘤作用机制研究

目的:运用基因芯片技术检测青蒿素作用于人红白血病细胞株K562细胞后的基因表达情况,从分子水平探讨青蒿素抑制人红白血病细胞株K562增殖的作用机制。方法:人红白血病细胞株K562细胞经不同浓度青蒿素处理24h,用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;提取总RNA,逆转录生成cDNA,同时Cy3标记,标记好的cDNA与基因芯片杂交,用扫描仪检测杂交结果。结果:倒置显微镜下可见细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多;荧光显微镜下可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体;流式细胞仪检测显示:G2期细胞的比例显著增加;扫描信号分析数据,其中10条基因表达下调:cyclinD1、cdk4、cdk2、cdc2、DNA-PK、DNA-TopoI、mcl-1、erk、jnk、VEGF。结论:青蒿素可抑制人红白血病细胞株K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导人红白血病细胞株K562细胞凋亡等有关。     

顺铂诱导人宫颈鳞癌细胞Caski细胞凋亡的分子机制

目的研究顺铂对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及凋亡的影响,探究顺铂诱导宫颈鳞癌细胞凋亡的分子机制。方法运用体外细胞培养,顺铂以不同浓度（20、10、5、2、1μg/ml）作用于人宫颈癌Caski细胞。采用噻唑蓝（MTT）法测定顺铂对细胞杀伤率;用流式细胞检测法测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNALadder现象;Western blot检测凋亡相关基因Bcl-2等表达;荧光染色观察细胞线粒体膜电位的改变。结果顺铂对人宫颈癌Caski细胞有较强的抑制作用,有明显的时间和剂量依赖性;可使Caski细胞G2/M期比例明显下降（P〈0.01）,S期比例升高（P〈0.01）;诱导细胞凋亡发生;顺铂作用Caski细胞后,Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase3活化,线粒体膜电位改变。结论顺铂在体外可有效抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,可能通过影响肿瘤细胞DNA合成,改变细胞周期时相分布、诱导凋亡发挥抑制细胞增殖作用,其凋亡分子机制与Bcl-2家族表达调控,线粒体膜跨膜电位下降的线粒体参与凋亡途径相关。