芦荟多糖对正常细胞株和肿瘤细胞株辐射存活率的影响

目的研究芦荟多糖(A loe polysaccharides,AP)对接受辐射的正常细胞株和肿瘤细胞株的防护作用是否存在差异性。方法X射线照射细胞后,细胞克隆形成分析法检测细胞存活率。结果50μg/m l AP可显著提高正常细胞株293、ECV304和C.L iver的克隆形成率,而对5个肿瘤细胞株则无显著影响。结论AP对正常细胞株有显著辐射防护作用,对肿瘤细胞则无显著影响。     

阿司匹林对人胶质瘤H4细胞株细胞周期的影响

［摘要］目的研究阿司匹林对人胶质瘤H4细胞株细胞周期的影响,探讨阿司匹林抗肿瘤的作用机制。 方法采用噻唑蓝（ MTT）法检测阿司匹林对人胶质瘤H4细胞株的增殖抑制作用。采用流式细胞仪检测H4细胞周期分布。Annexin V FITC/PI双染法检测H4细胞凋亡。Western blotting法检测阿司匹林处理前后p21和p27蛋白表达的变化。结果阿司匹林可抑制H4细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;8 mmol•L 1阿司匹林组H4细胞的G0/G1期比例较对照组明显增加,诱导细胞凋亡,同时上调p21和p27蛋白的表达。结论阿司匹林可引起人胶质瘤H4细胞株周期阻滞及诱导细胞凋亡。上调p21和p27蛋白表达进而诱导细胞周期的阻滞可能是其作用机制之一。     

曲古抑菌素A对结肠癌细胞细胞周期影响的机制研究

目的 研究组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的抑制剂曲古抑菌素A（TSA）对结肠癌细胞株SW480细胞周期、凋亡的影响,初步探讨TSA作用细胞周期的可能机制,为HDAC抑制剂用于结肠癌治疗提供理论依据.方法 培养人结肠癌细胞系SW480,采用HDAC抑制刺TSA干预细胞,运用流式细胞术检测细胞周期、凋亡以及细胞周期素的变化,最后采用Western blot对细胞周期相关的基因进行检测.结果 TSA处理细胞后,流式细胞计数分析显示,TSA能够延缓细胞周期G1-S进程,阻滞细胞于G1期,并且影响细胞周期素cyelinE、cyclinA聚集,而对凋亡无明显的影响.Western blot显示,TSA能够上调p21wafl/Cipl、p27Kipl的表达,下调CDK2、cyclinE以及cyclinA的表达.结论 在结肠癌细胞中,TSA能够通过上调p21Wafl/Cip1、p27Kip1的表达以及下调CDK2、cyclinE、cyclinA的表达,从而阻滞细胞周期于G1期,最终影响肿瘤细胞的生长.     

曲古抑菌素A对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制药曲古抑菌素A(TSA)对肾癌GRC-1细胞生长的影响及其作用机制. 方法使用TSA处理GRC-1细胞. 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期;Western blot免疫印迹分析p53,p21和bcl-2表达. 结果 TSA能明显抑制GRC-1细胞的增殖,且具有明显的剂量依赖性;TSA处理72 h的GRC-1细胞早期凋亡率明显提高,G0/G1期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低. TSA能够明显下调bcl-2的表达,上调p21的表达,而对p53的没有显著影响. 结论TSA可以通过诱导肾肿瘤细胞的凋亡和周期阻滞而抑制癌细胞生长;其发生机制可能与下调抗凋亡基因bcl-2和上调肿瘤抑制基因p21的表达有关,TSA可能依赖非p53途径调控p21的表达.     

1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞诱导分化的研究

目的研究1,25-(OH)2D3对胰腺癌细胞的诱导分化作用。方法经1,25-(OH)2D3处理人胰腺癌细胞株Bxpc-3,采用电镜观察形态学;流式细胞仪测定细胞周期动力学;免疫组化法检测p21、DPC-4/Smad4蛋白的表达。结果10-7mol/L1,25-(OH)2D3能使Bxpc-3细胞形态发生变化,细胞周期时相分布出现G0/G1期阻滞,细胞周期有关蛋白p21及DPC-4/Smad4蛋白表达上调。结论10-7mol/L1,25-(OH)2D3具有明显诱导胰腺癌细胞良性分化的作用。     

赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制

目的探讨赖氨大黄酸对HeLa细胞周期的影响及其机制。方法 MTT法检测赖氨大黄酸对HeLa细胞增殖的影响;流式细胞技术检测活性氧水平和细胞周期变化;显微镜下观察HeLa细胞形态变化;Western blot法检测p53和p21蛋白表达。结果赖氨大黄酸剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,IC50约为83μmol·L-1。随着赖氨大黄酸剂量的增加,HeLa细胞中活性氧水平增加,并出现S期和G2期阻滞,以及细胞空泡样变性。通过Western blot研究发现赖氨大黄酸处理后的p53蛋白磷酸化水平呈剂量依赖性地增加,同时下游周期相关蛋白p21表达水平也随之增加,而p53蛋白表达水平未出现显著地剂量依赖性变化。结论赖氨大黄酸通过增加HeLa细胞中活性氧水平,引起细胞周期相关蛋白p53的磷酸化水平和p21蛋白表达水平增加,引起HeLa细胞出现空泡样变性,并诱导S期和G2期阻滞。     

As_2O_3对人非小细胞肺癌细胞株的增殖抑制及其分子机制

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)对非小细胞肺癌腺癌细胞株(A549)的增殖抑制作用及其分子机制。方法体外培养的A549细胞经3μmol/L的As2O3处理5d后,观察细胞形态学、增殖动力学、细胞周期分布及肿瘤相关基因表达改变,并以全反式维甲酸及顺铂作为对照。结果A549细胞经As_2O_3处理后,细胞生长明显减慢,集落形成率显著降低。FCM细胞周期分析:S期细胞显著减少,G0/G1期细胞则明显增加。As_2O_3可使细胞p53、p21表达显著升高而CDKN2明显降低。结论As_2O_3对A549细胞增殖具有显著抑制作用,其分子机制可能是As_2O_3能显著上调p53、p21表达和下调CDKN2的表达而抑制DNA的合成。     

黄连碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞周期和增殖的作用及其机制

目的 探讨黄连碱对人乳腺癌细胞株MDA-MB231细胞周期和增殖的作用及相关机制.方法 MTT法和瑞-姬氏染色法分别检测黄连碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期相关基因包括细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、CDK6、p21及p27mRNA的表达变化.结果 黄连碱可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖;黄连碱处理细胞后G0/G1期细胞比例减少,而S期和G2/M期细胞比例增高(P＜0.05或P＜0.01);黄连碱可上调p21 mRNA的表达、下调CDK4 mRNA和CDK6 mRNA的表达(P＜0.01),而对p27 mRNA水平无显著影响.结论 黄连碱在体外能通过诱导S期及G2/M期周期阻滞来抑制MDA-MB-231细胞的增殖;其机制可能与p21mRNA表达上调导致CDK4 mRNA及CDK6 mRNA减少有关.     

Ku80/p53信号转导通路对石英诱导的细胞周期改变及p21蛋白表达的影响

目的探讨Ku80/p53通路在石英诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变中的作用以及对p21、CyclinE、CDK2蛋白表达的影响。方法采用RNAi技术分别建立抑制Ku80及p53蛋白表达的HELF细胞系(H-Ku80及H-p53)。200μg/ml石英处理阴性对照细胞系(H-NC)、H-Ku80及H-p53,采用流式细胞技术检测细胞周期,免疫印迹技术检测p21、CyclinE、CDK2蛋白的表达,并用Image-Proplus 6.0软件对条带光强度进行半定量分析。结果石英刺激阴性对照细胞,G1期细胞所占比例由(83.53±2.24)%下降到(69.11±3.12)%;抑制Ku80表达后,石英诱导的G1期细胞的比例进一步减少,由(85.16±3.73)%下降到(59.92±3.31)%;抑制p53蛋白表达后,也同样显示石英诱导的G1期细胞比例进一步减少,由(73.02±1.43)%下降到(57.72±2.36)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。石英刺激阴性对照细胞,p21、CyclinE、CDK2蛋白表达增高。抑制p53蛋白表达,可明显抑制石英诱导的p21蛋白表达增高,但是对CyclinE、CDK2蛋白的表达无影响。结论 Ku80/p53/p21信号通路负性调节石英诱导的细胞周期改变,石英诱导的CyclinE、CDK2的过表达是p53非依赖性的。     

二氢青蒿素对体外培养胃癌细胞株BGC-823周期蛋白D1 P16蛋白表达的影响

目的探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用及周期蛋白D1、P16蛋白表达的影响。方法以25～100μmol/L DHA干预人胃癌细胞株BGC-823细胞后通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖率,吖啶橙-溴化乙定(AO-EB)染色观察细胞凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡周期、蛋白质印迹法检测细胞中周期蛋白D1、P16蛋白表达情况。结果 DHA对人胃癌细胞具有时间、浓度依赖性抑制作用;且浓度依赖性阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。DHA浓度依赖性下调cyclin D1蛋白,上调p16蛋白的表达(P<0.05)。结论 DHA通过下调cyclin D1蛋白,上调p16蛋白的表达,调节细胞周期调控通路,阻滞细胞于G0/G1期,有效抑制人胃癌细胞的增殖。     

扇贝多肽抑制中波紫外线导致的人皮肤成纤维细胞周期阻滞

目的探讨扇贝多肽(PCF)对中波紫外线(UVB)辐射导致的细胞周期阻滞的作用。方法应用流式细胞术检测扇贝多肽对细胞周期的影响;蛋白质印迹检测p53和p21Cip1的变化;2,7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)探针检测活性氧(ROS)的变化。结果 UVB辐射导致人皮肤成纤维细胞周期发生G1期阻滞,扇贝多肽缓解了UVB辐射诱导的细胞周期阻滞,抑制了细胞的p53及p21Cip1蛋白表达,清除了细胞中的ROS。结论扇贝多肽抑制了UVB辐射引起的人皮肤成纤维细胞G1期阻滞,其保护作用是通过抑制ROS-p53-p21Cip1途径实现的。     

拓扑异构酶Ⅱβ抑制剂XK469对肿瘤细胞生长的抑制效应

目的研究人工合成的喹喔啉苯氧丙基的酸性衍生物XK469对于肿瘤细胞生长的影响及其机制。方法分别使用Northernblot和Westernblot法检测p53和p21在mRNA和蛋白水平的表达;结晶紫比色法检测细胞的生长情况;流式细胞术分析细胞周期。结果①在XK469处理人肺癌细胞H460后,在第8小时即出现明显的G2/M期阻滞,同时能够在一定剂量范围内对其有剂量依赖性生长抑制作用;能够分别在mRNA和蛋白水平诱导p53及其下游靶分子p21的表达;②以XK469处理HCT116p53+/+、p53-/-、p21+/+和p21-/-细胞后,虽然HCT116p53-/-细胞缺少p21的表达,但是和HCT116p53+/+相比对于XK469的敏感性却基本相同;和HCT116p21+/+相比HCT116p21-/-对XK469比较不敏感。结论XK469可以分别通过p53依赖和非依赖途径抑制肿瘤细胞的生长。由于肿瘤组织的p53突变的发生率很高,XK469的这种p53非依赖性G2/M周期阻滞和拓扑异构酶Ⅱβ抑制作用的多重机制或许可以解释其广泛的肿瘤抑制作用。     

新型阳离子聚合物非病毒载体介导野生型p53基因体外转染效果的研究

目的:研究新型阳离子聚合物非病毒载体———尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因体外转染人肝癌细胞系HepG2的效果。方法:载体UAC包裹含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因和wt-p53治疗基因的质粒(pEGFP-p53)转染HepG2细胞,利用流式细胞术和荧光显微术检测细胞内GFP的表达,优选最佳转染条件;采用RT-PCR法检测细胞内p53mRNA的表达,流式细胞术评价基因转染对细胞周期的影响,Western blot法检测细胞内p53及其下游细胞周期调控蛋白的表达。结果:在低pH(pH=6.9)条件下,采用低壳聚糖分子量(20000)的UAC作为载体,与pEGFP-p53形成高N/P(N/P=30)的UAC/pEGFP-p53复合物转染HepG2细胞,可获得最佳转染效果;载体UAC介导wt-p53基因转染细胞后,p53mRNA表达水平明显上调,G0/G1期出现显著阻滞,p53、p21和Rb蛋白表达水平明显上调,cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显下调。结论:载体UAC可成功介导wt-p53基因转染HepG2细胞,并诱导其产生细胞周期阻滞。     

氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制作用及机制研究

目的观察氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7周期、周期蛋白相关基因及产物表达的影响,探讨氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其机制。方法MTT检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR技术检测细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA的表达;Western blot检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21的蛋白表达。结果氨氯地平剂量和时间依赖性的抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol.L-1。经7.22μmol.L-1(1/2IC50)、14.439μmol.L-1(IC50)、28.88μmol.L-1(2IC50)的氨氯地平作用人乳腺癌MCF-7细胞48h,G0/G1期细胞较对照组明显增高(P<0.05);并使人乳腺癌MCF-7细胞中cyclinD1mRNA及蛋白表达降低;p21mRNA及蛋白表达升高。结论氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞具有抗增殖作用,并使细胞阻滞于G1期。其G1阻滞机制可能与调控细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA及蛋白的表达相关。     

苯并(a)芘对HELF细胞S期细胞周期相关蛋白的作用

目的观察由于苯并(a)芘(Ba P)作用阻滞于S期的人胚肺成纤维细胞(HELF)的细胞周期蛋白和关卡蛋白表达水平的改变,探讨Ba P影响细胞周期的作用机制。方法 5μmol/L Ba P处理4 h,于处理后24 h收获细胞,利用流式细胞术对Ba P作用后的G0/G1期和S期细胞进行分选,Western blot方法分析相关蛋白表达水平的变化。结果Ba P作用HELF后,在总细胞群中和分选获得的S期细胞中均发现Chk1磷酸化水平升高,Cdc25A的表达水平降低;只在分选获得的S期细胞中,发现Cyclin E表达水平降低,CDK2和p53的表达水平升高。结论 Ba P通过启动Chk1-Cdc25A和p53两条信号转导通路共同作用于Cyclin E/CDK2,从而引发HELF细胞发生S期阻滞。     

苯丙素苷类抗氧化剂异毛蕊花苷对人胃癌细胞生长和分化的影响

目的：探讨苯丙素苷类抗氧化剂异毛蕊花苷对人胃癌MGC 803细胞生长和分化的影响。方法：以1．5％二甲基亚砜为阳性对照,采用细胞计数、肿瘤形成率实验、酶活性测试、流式细胞仪分析和Western blot等方法分别评价异毛蕊花苷对MGC 803细胞生长、致瘤性、碱性磷酸酶（ALP）及乳酸脱氢酶（LDH）活性、细胞周期和周期相关基因表达的影响。结果：MC 803细胞经异毛蕊花苷处理后,细胞生长和增殖呈浓度和时间依赖性抑制;异毛蕊花苷20μmol/L可使细胞致瘤性明显受抑,胃癌细胞分化标志酶ALP和LDH活性均呈时间依赖性下降,细胞周期表现为G0／G1期阻滞,G1→S期调控点相关蛋白p53、p21/WAF1和p16/INK4表达上调,C－myc蛋白表达受抑。结论：异毛蕊花苷可明显抑制MGC 803细胞生长及逆转胃癌细胞恶性表型进而诱导分化,这可能与细胞周期G0／G1期阻滞及其对周期相关基因表达的调控作用有关。     

左旋棉酚对人鼻咽癌细胞凋亡的影响

目的探讨左旋棉酚对人鼻咽癌细胞株CNE2凋亡的影响及其机制。方法采用MTT实验检测左旋棉酚对CNE2细胞的增殖抑制作用,流式细胞术分析左旋棉酚诱导细胞凋亡及其对Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,caspase-3分光光度法检测试剂盒测定caspase-3活性。结果≥10μmol／L左旋棉酚可显著抑制CNE2细胞增殖,并表现出剂量、时间依赖效应。左旋棉酚可调节CNE2细胞的细胞周期,使其主要被阻滞于G0／G1期,在诱导细胞凋亡过程中,凋亡相关基因Bcl-2表达下降,而Bax表达则相对上调,caspase-3活性在24h达到高峰。结论左旋棉酚在体外可诱导鼻咽癌细胞CNE2凋亡,其机制可能与Bcl-2基因下调、Bax基因上调、caspase-3的激活有关。     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人卵巢癌细胞恶性表型的抑制作用

目的 探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人卵巢癌细胞恶性表型的作用及其可能的分子作用机制。方法 （1）选取 2 组人卵巢癌细胞(SKOV3 和 SKOV3/DDP; HO8910 和 HO8910-PM)后, 设置对照组和终浓度为 1、 3、 5 及 7 μmol/L SAHA 组(SAHA 1~4 组), 采用 CCK-8 法分别检测 SAHA 对细胞增殖的影响。（2） 设置对照组和 SAHA 1、 2 组(2 和 5 μmol/L), Annexin V-FITC/PI 双标记流式细胞术分别检测 SAHA 对细胞凋亡及周期的影响。（3） RT-PCR 和 Western blot 检测 SAHA 1~4 组表型相关蛋白的表达水平。结果 （1）随着 SAHA 浓度的增加, SKOV3 细胞株 SKOV3/DDP 及 HO8910 细胞株 48 h 光密度 （OD） 值均呈逐渐降低趋势(均 P＜0.05)。（2） 48 h SAHA 1、 SAHA 2 组凋亡率高于对照组(均 P＜0.05); SAHA 作用 48 h, 细胞周期发生阻滞, 与对照组比较, SAHA 1 组和 SAHA 2 组 SKOV3 和 SKOV3/DDP 细胞 S 期和 G2/M 期比例增高, HO8910 和 HO8910-PM 细胞 G0/G1期比例增高(P＜0.05)。（3） SAHA 1、 2 组 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的 mRNA 表达水平均低于对照组, Caspase-3、 p21 和 p53 的 mRNA 表达水平明显高于对照组(P < 0.05); SAHA 1~4 组 Ac-Histone H3 和 Ac-Histone H4 和 p53 蛋白的表达较对照组明显增强, CyclinB1、 Cdc2 (p34)蛋白的表达减弱。结论 SAHA 通过调节恶性表型相关蛋白 Caspase-3、 p53、 CyclinB1 和 Cdc2(p34)的表达水平, 促进组蛋白乙酰化, 抑制卵巢癌细胞增殖, 阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株p21和survivin基因表达的影响

目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用Western blot和RT-PCR检测p21和survivin基因的转录和表达。结果实验表明苯丁酸钠对Tca8113细胞株增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导Tca8113细胞株G1期阻滞和细胞凋亡;苯丁酸钠能使p21的mRNA及蛋白质表达升高,同时survivin的mRNA及蛋白质表达下降。结论苯丁酸钠通过刺激p21表达增加和抑制survivin的表达,从而抑制Tca8113细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡;并且p21mRNA水平的上升和survivin mRNA水平的下降变化呈负相关(rs=-0.548,P<0.01),二者蛋白表达的变化亦如此(rs=-0.514,P<0.01)。     

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。