虫草多糖的分离纯化及结构鉴定

摘 要 目的： 分离纯化冬虫夏草菌发酵液多糖,并对虫草多糖的结构进行分析。方法: 采用液体发酵法培养冬虫夏草菌,水提醇沉法提取虫草发酵液多糖EPS和菌丝体多糖IPS,联合使用葡聚糖凝胶柱色谱对虫草多糖进行分离纯化,采用凝胶过滤法测定其纯度和相对分子质量,气相色谱法分析其单糖组成,再通过硫酸咔唑法分析糖醛酸含量。结果:经分离纯化得到多糖EPS的相对分子质量（Mr）为78 kDa,多糖含量为94.8%,单糖组成为甘露糖、葡萄糖和半乳糖,摩尔比为4.5∶8.0∶1.0;糖醛酸含量为6.0%。多糖IPS 的Mr为42 kDa,多糖含量为92.5%,单糖组成为甘露糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为2.8∶3.0∶;糖醛酸含量为4.5%。结论: 虫草多糖EPS和IPS均是杂多糖。     

药用真菌马勃多糖的分离纯化及结构分析

目的 研究马勃多糖的分离纯化及基本性质.方法 以马勃为材料,经热水浸提,用Sevag法脱蛋白,乙醇沉淀,经DEAE-sepharose FF和Sephacryl S-300 HR层析纯化制备多糖;采用Sephacryl S-300 HR凝胶层析,200～360 nm扫描和SDS-PAGE鉴定多糖的纯度,并测定多糖的表观分子质量;GC-MS分析单糖的组成和摩尔比;咔唑-硫酸法测定糖醛酸的含量;高碘酸氧化、Smith降解和红外光谱分析其结构.结果 经分离纯化得到CGP-Ⅱ、CGP-Ⅱ、CGP-Ⅲ主要多糖组分,经凝胶层析检测显示单一对称蜂;琼脂糖电泳显示单一多糖条带,未见蛋白染色条带,200～360 nm扫描未见特征吸收峰.CGP-Ⅰ、CGP-Ⅱ和CGP-Ⅲ的表观分子质量分别为9.12×10<'4>、18.6×10<'4>、15.6×10<'4>.3种多糖均含有甘露糖、葡萄糖和半乳糖,CGP-Ⅲ还含有另外一种未知单糖,各自的摩尔比分别为1.22∶11.28∶3.92、1.74∶26.45∶0.36、1.06∶9.9∶3.29.CGP-Ⅱ和CGP-Ⅲ的糖醛酸含量分别为17.2%和20.5%,为酸性多糖,CGP-Ⅰ为中性多糖.3种多糖均为1→4连接,有少量的1→6连接.CGP-Ⅰ以α-和β-差向异构为主;CGP-Ⅱ、CGP-Ⅲ以β型差向异构为主,均主要以吡喃糖形式存在.结论 对所纯化的马勃多糖进行了初步的性质研究与结构分析.     

板蓝根多糖A的分离纯化及结构研究

目的:提取分离板蓝根中均一分子量多糖成分,并对其结构进行研究。方法:从板蓝根中提取水溶性粗多糖,经柱色谱分离纯化得到板蓝根多糖A。采用高效凝胶色谱法检测纯度及相对分子量。经UV、IR、NMR和高碘酸氧化、Smith降解法研究各多糖的化学结构。结果:板蓝根多糖A的相对分子量为11700,主要单糖组成为阿拉伯糖和半乳糖,糖苷键构型以α为主,连接方式以1→3键连接为主,并同时存在1→2和(或)1→4的连接方式。结论:板蓝根多糖A的纯度均在96%以上,是一个新化合物。     

白蔹多糖PAJM-I的分离纯化和结构分析

目的 从白蔹中提取分离白蔹多糖,并研究其结构性质.方法 经热水提取、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白后得到粗多糖PAJM,进一步用DEAE-Sapharose Fast Flow, Sephadex G-200分离纯化得到PAJM-I,对分离到的主要多糖应用高碘酸氧化、高效凝胶渗透色谱(HPGPC),GC,GC-MS,IR等方法进行结构分析.结果 提取纯化的白蔹多糖(PAJM-I)是均一的多糖,相对分子量为3.25×104,鼠李糖,木糖,甘露糖和丰乳糖组成摩尔比为:12.98:23.52:45.06:18.44.分子中1??3,1??2,1??6连接的糖苷键数比为51%:26%:23%.结论 首次从白蔹中分离得到PAJM-I均一多糖,且PAJM-I含有α-D-葡萄吡喃糖.     

香菇多糖的提取、分离纯化及结构分析研究进展

香菇多糖作为香菇的主要活性成分,具有多种药理活性.经现代医学和药理学的研究表明,香菇多糖具有抑制肿瘤、调节免疫、抗氧化、抗病毒等药理活性.本文主要综述了国内外香菇多糖提取、分离纯化、结构分析方面的研究概况,并对香菇多糖的未来研究方向进行展望.     

蜜环菌多糖的分离纯化及PMP衍生化HPLC分析

目的:对蜜环菌发酵液进行多糖的提取、分离纯化,得到均一多糖,对其进行单糖组分分析.方法:分离纯化采用分步醇沉和葡聚糖凝胶(Sephadex G-200)色谱法;纯度鉴定及分子量测定采用高效液相色谱法;单糖组成采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生HPLC法测定.结果:获得两种均一多糖(AMFP-Ⅰ、AMFP-Ⅱ),峰位分子量分别为 812 939D、596 217D,重均分子量(MW)分别为995 098D、872 640D,分布宽度(Mw/Mn)分别为1.268 93、1.235 20;测定单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖.结论:两种多糖分子量分布及单糖组成均不同,AMFP-Ⅰ主要由半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖组成,AMFP-Ⅱ主要由半乳糖醛酸、半乳糖、木糖组成.     

白蔹多糖PAJM-Ⅰ的分离纯化和结构分析

目的从白蔹中提取分离白蔹多糖,并研究其结构性质。方法经热水提取、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白后得到粗多糖PAJM,进一步用DEAE-Sapharose Fast Flow,Sephadex G-200分离纯化得到PAJM-Ⅰ,对分离到的主要多糖应用高碘酸氧化、高效凝胶渗透色谱(HPGPC),GC,GC-MS,IR等方法进行结构分析。结果提取纯化的白蔹多糖(PAJM-Ⅰ)是均一的多糖,相对分子量为3.25×104,鼠李糖,木糖,甘露糖和半乳糖组成摩尔比为:12.98∶23.52∶45.06∶18.44。分子中1→3,1→2,1→6连接的糖苷键数比为51%∶26%:23%。结论首次从白蔹中分离得到PAJM-Ⅰ均一多糖,且PAJM-Ⅰ含有α-D-葡萄吡喃糖。     

固元胶囊多糖的分离纯化与初步结构研究

目的 对固元胶囊多糖的分离纯化与初步结构研究.方法 用高效分子排阻色谱(HPSEC-ELSD)法分析纯度、相对分子质量分布以及用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定单糖组成.结果 得到了固元胶囊结构的初步信息;要得到固元胶囊进一步的结构信息,可采用甲基化、部分以水解等得到糖链结构片段,通过核磁共振仪等仪器分析法得到其高级结构信息.结论 对固元胶囊多糖的分离纯化与初步结构研究能为固元胶囊的质量标准提供依据.     

钝顶螺旋藻酸性多糖的分离纯化和结构分析

本研究从钝顶螺旋藻中分离纯化了酸性多糖,并进行了结构分析.多糖经DEAE-纤维素柱和Sephadex-200凝胶柱纯化得到螺旋藻酸性多糖纯品,HPLC检测纯度达96.7%,分子量均一,约1.62×10~5.TLC和GC分析表明该多糖主要由D-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖和D-甘露糖醛酸构成,摩尔比为65.5:19.5:9:6.经IR、~(13)C NMR和甲基化分析,推测该多糖可能以1,3-连接的鼠李糖为主链.其中木糖为β构型,鼠李糖、葡萄糖和甘露糖醛酸均为α构型,所有糖基均呈吡喃型.     

蒲公英根多糖的分离、纯化及结构的初步分析

目的提取蒲公英根多糖,并对该多糖进行分离、纯化和结构的初步分析。方法采用超声波协同酶法进行提取多糖,分离纯化后,经Sephadex G-75柱分成A,B,C,D4级,采用优化的PMP柱前衍生HPLC分析单糖组成。采用紫外、红外等方法进行结构的初步分析。结果 4种多糖均含有D-鼠李糖、葡萄糖、D-半乳糖、D-木糖和D-阿拉伯糖;它们的单糖的摩尔比依次为,A：0.098∶2.88∶0.125∶0.01∶0.33;B：0.113∶0.68∶0.13∶0.011∶0.19;C：0.139∶2.46∶0.36∶0.13∶0.086;D：0.028∶0.36∶0.031∶0.012∶0.94。结论 4种多糖在结构上有明显的不同。     

桑叶总黄酮的提取纯化工艺研究

目的:优选桑叶总黄酮的提取纯化工艺。方法:采用正交设计法优选提取条件,以大孔树脂柱层析纯化。结果:最佳工艺条件为用20倍原料质量的60%乙醇,80℃超声提取40min。结论:所得工艺具有较好提取效果,可为工业化生产提供理论依据。     

桑叶中1-脱氧野尻霉素的纯化及含量测定

目的提取纯化桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ),并用柱前衍生化高效液相法进行含量测定。方法桑叶加0.05mol·L-1盐酸溶液超声提取,提取物进行反相柱色谱纯化,纯化物用柱前衍生化-高效液相-荧光检测法测定DNJ的含量。结果桑叶中DNJ的含量为0.27%～0.49%,纯化物中DNJ的含量达到了10.7%,DNJ在0.6～60μg·mL-1内浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997),平均回收率为104.46%。结论运用反相色谱技术分离纯化DNJ简单易行,含量测定方法精确,重复性好。     

桑叶中的黄酮类化合物

为了研究桑叶的化学成分与生物活性之间的相关性, 采用硅胶、Sephadex LH-20、RP-C₁₈等色谱方法分离纯化, 通过核磁共振谱、质谱等波谱分析手段鉴定化合物结构。从长穗桑的95%乙醇提取物中分离到4个Diels-Alder类加合物, 分别鉴定为mulberrofuran F₁ (1)、mulberrofuran F (2)、chalcomoracin (3) 和kuwanon J (4); 2个查耳酮类化合物, 鉴定为morachalcone A (5) 和isobavachalcone (6); 3个黄酮类化合物, 鉴定为 norartocarpetin (7)、kuwanon C (8) 和6-geranylapigenin (9)。化合物1和6为首次从该种植物中分离, 化合物4～5、7～9为首次从桑叶中分离得到, 其中化合物1为新化合物。采用MTT法对化合物1～5进行了抗肿瘤活性筛选, 结果显示化合物1～3对人肿瘤细胞A549、Bel7402、BGC823、HCT-8以及A2780具有抑制作用。     

响应曲面法优化桑枝多糖提取工艺

目的:利用响应曲面法优化桑枝多糖的提取工艺。方法:以桑枝多糖得率为指标,采用单因素和响应曲面法对提取温度、提取时间、料液比和提取次数进行考察,优选最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺条件为提取温度100℃、料液比1:20、浸提时间2.5h、提取2次,实际测得的多糖得率为6.15%,与模型预测值基本相符。结论:模型可较好地预测桑枝多糖的得率,响应曲面法对桑枝多糖提取条件参数优化具有可行性。     

Two new prenylflavonoids from Morus alba

Two new prenylflavonoids, morusalbols A and B (1 and 2), were isolated from the branches and leaves of Morus alba, together with three known compounds, kuwanon C (3), morusin (4), morusinol (5). The structures of these two prenylflavonoids were elucidated by extensive analyzes of the spectroscopic data.     

HPLC法比较不同产地桑叶药材品质差异

目的:研究不同产地桑叶药材的品质差异,探讨产地、基原对桑叶品质的影响。方法:建立桑叶药材的高效液相色谱(HPLC)分析方法:色谱柱为Phenomenex Luna C18(2)(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,检测波长为320nm。比较不同样品的HPLC图谱相似度,并进行聚类分析。结果:不同产地桑叶药材化学成分的组成与含量有较大差异。结论:桑叶药材的品质与产地、基原有较明显的相关性。     

不同产地桑叶药材UPLC指纹图谱研究

目的 建立不同产地桑叶UPLC指纹图谱.方法 采用ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×50.0 mm,1.7 μm）色谱柱,流动相为甲醇-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱,检测波长为358 nm,流速为0.6 ml/min,柱温40℃,进样体积1μl.结果 建立了桑叶专属性的UPLC指纹图谱,确定了15个共有峰,不同产地桑叶样品具有较好的相似度.结论 UPLC指纹图谱方法重复性好,简便可靠,可用于桑叶的快速鉴别,可以为桑叶的质量控制和市场应用提供依据.     

New 2-arylbenzofuran metabolite from cell cultures of Morus alba

A new 2-arylbenzofuran compound, 5-dehydroxy-moracin U (1), along with 10 known compounds (2–11), were isolated from cell cultures of Morus alba. Their structures were elucidated on the basis of extensive spectroscopic analyses. The anti-inflammatory activity assay of 1–8 showed that 2 and 8 exhibited significant inhibitory effect on LPS-induced NO production with the values of 76.4% and 98.7% at 10^? 5 M, respectively.     

Three new alkaloids from the fruits of Morus alba

From the fruits of Morus alba, three new alkaloids, mulbaines A (1), B (2), and C (3) were isolated. The structures of these compounds were elucidated on the basis of spectroscopic methods (UV, IR, HR-ESI-MS, 1D, and 2D NMR).     

基于UPLC指纹图谱与色度值的桑白皮生品和炮制品的鉴别及炮制终点研究

目的:为桑白皮生品和其炮制品(蜜桑白皮)的鉴别及蜜桑白皮炮制终点的确定提供参考。方法:采用超高效液相色谱(UPLC)法进行测定。色谱柱为Waters BEH Shield RP C18;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱);流速为0.30 mL/min;柱温为30℃;程序波长为280 nm(0~4 min)、320 nm(4~35 min)。使用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(2012版)分别建立13批桑白皮和蜜桑白皮的UPLC指纹图谱以及进行相似度评价,并结合对照品图谱对色谱峰进行指认。测定13批桑白皮和蜜桑白皮粉末的色度值(L、a、b)并计算其平均总色度值(E),结合偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)法和聚类分析法分析桑白皮炮制前后指纹图谱和色度值的差异性;同时分析不同炮制时间下蜜桑白皮指纹图谱和色度值的动态变化规律,以确定其炮制终点。结果:桑白皮炮制前后指纹图谱存在明显差异,13批桑白皮和蜜桑白皮样品的相似度均在0.9以上。桑白皮、蜜桑白皮图谱中分别共标定了21、23个共有峰,其中峰1、峰2是桑白皮经蜜炙后新产生的化合物;同时,指认了峰2、峰7、峰14、峰19分别为5-羟甲基糠醛、桑皮苷A、氧化白藜芦醇、桑黄酮G。OPLS-DA分析结果显示,峰1、峰2、峰18、峰20的峰面积/称样量比值以及色度值(L、a、b)是影响蜜桑白皮炮制前后差异最主要的因素;以E范围75.84~80.88作为蜜桑白皮的炮制终点,确定炮制时间为22~34 min。结论:所建立的UPLC指纹图谱和色度值的测定方法可用于桑白皮生品和炮制品的鉴别以及蜜桑白皮炮制终点的确定。