羟基红花黄色素A生物合成途径短链还原酶基因的特征及功能研究

目的 探究参与红花黄酮类生物合成途径特别是羟基红花黄色素A（HSYA）关键短链脱氢还原酶基因（SDRs）的功能。方法 基于红花转录组数据库以及代谢组数据库,筛选参与HSYA生物合成途径的SDRs,用qRT-PCR法分析表达模式。采用无缝克隆技术构建过表达载体,以农杆菌GV3101介导遗传转化云南巍山红花品系,对转基因T₂代植株进行阳性验证,并对花冠SDRs的基因表达量进行分析,UPLC-Q-TOF/MS法测定次生代谢物的含量。结果 筛选出3个参与HSYA生物合成途径的关键短链脱氢还原酶基因CtSDR1、CtSDR2、CtSDR3,表达量从高到低依次为花冠>叶>茎>根。花冠中表达量随花冠发育逐渐升高。对转基因T₂代植株进行阳性验证后的花冠进行qRT-PCR分析发现：与空白对照组相比,转CtSDR3过表达T₂代阳性植株花冠中CtSDR3基因的转录水平增加了2~3倍,次生代谢物HSYA的含量提高了7.1%～16.6%（P＜0.05）。结论 CtSDR3可能参与了红花中黄酮类化合物特别是HSYA的生物合成,为阐释CtSDR3在HSYA生物合成途径中的功能提供了数据支撑。     

基于KEGG通路和基因互作网络对充血性心力衰竭相关基因的筛选

目的 筛选与充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF）相关的药物靶点基因，利用DAVID通路数据库和基因互作网络分析目标基因的分布和功能，促进CHF的研究和新药的开发。方法 以"congestive heart failure"检索NCBI基因数据库，提取CHF相关基因数据，采用DAVID分析工具提取基因富集的通路数据。对40个非冗余基因所显著富集的11条KEGG通路进行了分析，同时对富集通路中的基因同HPRD人类蛋白互作网络进行匹配，建立通路中关键基因的互作网络。并对所建立的相关子网进行比较，筛选和CHF相关的药物靶点基因。结果 MMP9、LMNA、DMD、EMD、AGTR1、EDNRB、NOS3和TNF等21个CHF相关基因需要完善研究，LMNA、MMP9和AR 3个基因可能是CHF治疗药物间接作用的重要靶点。结论 CHF发病与cGMP-PKG信号通路、钙离子信号通路、扩张型心肌病、肥厚型心肌病等多个通路相关。MMP9、LMNA、DMD、EMD、AGTR1、EDNRB、NOS3和TNF等21个CHF相关基因在病理和治疗中都占有重要的地位。通过分析疾病相关基因的代谢通路和互作网络，有助于了解疾病的分子基础，并为新药研发提供可借鉴的思路。     

黄酮类化合物对耐药金黄葡萄球菌mecA基因的影响

目的:研究黄酮类化合物对人工诱导的耐药金黄葡萄球菌的耐药基因mec A的mRNA表达水平的影响。方法:采用纸片法测定黄酮类化合物对耐药金黄葡萄球菌的逆转作用;利用RT-PCR法测定耐药基因mec A的相对表达量。结果:耐药金黄葡萄球菌分别被芦丁、姜黄素、木犀草素、槲皮素和芹菜素作用后,耐药基因mec A的相对表达量分别为0.55,0.79,0.76,0.92,和0.84。结论:黄酮类化合物能降低金黄葡萄球菌的耐药基因mec A的表达,能对抗金黄葡萄球菌的耐药性。     

红花中影响山柰素含量测定的化合物研究

目的对红花中影响山柰素含量测定的未知化合物(Imp)进行分离、纯化和结构鉴定。方法采用溶剂法和柱层析法提取、分离得到未知化合物(Imp),并通过理化性质和光谱数据鉴定该化合物的分子结构。结果从红花乙醇提取、酸水解物中分离得到的未知化合物(Imp),经结构鉴定为6-甲氧基山柰酚。结论明确影响红花中山柰素含量测定的化合物为6-甲氧基山柰酚。为红花中山柰素的准确测定提供了依据,且该化合物为红花中首次发现。     

重组人食管癌相关基因4蛋白的体外抑癌功能研究

目的探讨人食管癌相关基因4(esophageal cancer related gene4,ECRG4)蛋白的亚细胞定位和重组ECRG4蛋白的体外抑癌功能。方法用激光扫描共聚焦显微镜成像法和Western blot方法检测ECRG4蛋白的定位;用MTT方法检测纯化的重组ECRG4蛋白的体外抑癌功能。结果激光扫描共聚焦显微镜成像显示,内源性和外源性ECRG4蛋白主要定位在细胞质。Western blot方法在细胞无血清培养液中检测到ECRG4蛋白存在,提示ECRG4蛋白是分泌蛋白。纯化的重组ECRG4蛋白可以体外抑制EC9706细胞的增殖,抑制率随着ECRG4蛋白浓度增加而升高,成剂量-效应关系(P<0.05)。结论重组人ECRG4蛋白体外抑制肿瘤细胞增殖,可以作为ESCC的潜在治疗药物。     

增液汤的网络靶标预测及作用机制研究

目的 采用网络药理学方法对增液汤中活性成分的作用机制进行分析,探讨其成分、靶点及通路间的相关关系。方法 运用中药系统药理学成分分析平台（BAT-MAN）数据库获取增液汤的作用靶标基因,采用Cytoscape 3.5.1软件构建活性成分-靶点网络,STRING平台构建靶蛋白互作网络,利用BiNGO和MCODE插件对相互作用的靶基因进行GO生物过程富集和聚类分析,借助生物学信息注释数据库对靶点进行KEGG信号通路分析。结果 增液汤中23个药效成分作用于268个潜在靶点,聚类分析862个GO生物过程得到物质合成代谢、氧化应激、细胞离子平衡、炎症反应、凝血调节等23个子簇。KEGG信号通路富集主要涉及代谢、神经递质、氨基酸合成、信号转导、心血管和其他等6大类22条信号通路。结论 本研究揭示了增液汤活性成分、靶点及多维药理作用机制,为其临床治疗价值拓展提供新的线索。     

红花类黄酮3-O-糖基转移酶基因CtUF3GT的克隆及功能鉴定

UDP-葡萄糖:类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(UF3GT)以黄酮醇、二氢黄酮醇或花青素作为受体,以UDP-葡萄糖作为供体催化生成类黄酮3-O-糖苷类化合物。本研究以红花为材料,基于同源比对和转录组数据分析,筛选并克隆得到1条UF3GT基因命名为CtUF3GT (GenBank登录号OM948976)。CtUF3GT开放阅读框为1 446 bp,编码481个氨基酸,推测其分子质量为52.36 kD,理论等电点为5.33。生物学信息分析表明CtUF3GT具有植物UGT家族成员特有的PSPG基序,多重序列比对显示, CtUF3GT与来自菊科植物中的UF3GT同源性较高,系统进化分析表明CtUF3GT与其他物种中已鉴定的UF3GT聚为一类。体外催化功能鉴定显示, CtUF3GT催化山柰酚和槲皮素生成山柰酚-3-O-葡萄糖苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷,并且对山柰酚具有较高的底物偏好性; qRT-PCR分析表明, UF3GT基因在花中表达量最高,叶中次之,在苞片和茎中表达量极低,在根中无表达。在花发育的不同时期, UF3GT基因的表达量呈现先升高后降低的趋势,白色和红色红花两个品种中CtUF3GT...     

基于高通量芯片分析早发性精神分裂症差异表达基因

目的比较早发性精神分裂症与健康人群之间基因表达差异,探究精神分裂症发病机制。方法 GEO数据库获取基因芯片数据,通过R工具进行差异表达基因分析,使用DAVID工具进行GO富集和通路分析,利用STRING数据库构建蛋白相互作用网络。结果鉴定到314个显著差异表达基因,包括221个显著上调控基因和93个显著下调控基因,基因本体GO显著富集到20个条目,主要涉及g蛋白偶联受体信号通路,嗅觉感知,磷脂酰丝氨酸酰链重构,磷脂代谢过程,钠离子通道调控激活,神经肽绑定等。KEGG通路显著富集结果主要涉及嗅觉信号传导,醚脂类代谢,长期抑制(LTD),甲状腺激素合成等6个通路。蛋白互作网络分析获得5个核心基因,模块分析结果显示得分最高的模块主要与神经肽绑定和刺激神经组织配体受体交互信号通路相关。结论通过生物信息学方法获得了早发性精神分裂症与健康人的差异表达基因,阐释了早发性精神分裂症发病机制的相关基因及其表达特征,为早发性精神分裂症的诊断和治疗提供理论基础。     

柚皮苷转化生成红花素及异红花素的研究

摘要：目的 利用一株日本曲霉,以柚皮苷为底物,转化生成红花素和异红花素并提高产物的发酵单位。方法 对发酵培养基中氮源种类进行筛选并确定最适的添加浓度,考察微量元素对发酵的影响并确定最适添加浓度,降低溶解底物的乙醇浓度并采用二次添加底物的方式等。结果 红花素发酵单位由66 μg/mL提高至389 μg/mL,异红花素发酵单位由263 μg/mL提高至946 μg/mL。热豆粉是最佳氮源,添加浓度为0.3%;添加硫酸亚铁和氯化锰能够分别促进红花素和异红花素的生成,其最适添加浓度分别为0.02%和0.01%;溶解底物的乙醇浓度由50%降低至26.6%,降低了乙醇对转化的不利影响;底物添加次数由1次变为2次,有利于发酵单位的提高。结论 首次发现日本曲霉可直接转化柚皮苷生成红花素和异红花素,且柚皮苷生物转化为红花素和异红花素的发酵单位较高。     

红花注射液对脑复苏大鼠神经元凋亡相关基因的影响

目的：观察红花在大鼠脑复苏时对海马CA1区神经细胞凋亡相关基因的影响。方法：将实验大鼠随机分为手术对照组,心肺复苏组,心肺复苏＋红花组。采用呼气末夹闭气管法造成大鼠窒息心跳停止,制备大鼠动物模型,利用免疫组化法、原位末端标记法检测大鼠脑复苏不同时间内Fas、p53蛋白表达的水平及凋亡细胞数的变化。结果：（1）脑复苏10min再灌注6h,海马CA1区有少量p53蛋白表达的阳性细胞,再灌注12h后增多。（2）脑复苏10min再灌注3h,Fas蛋白表达的阳性细胞,再灌注12h,Fas蛋白表达的阳性细胞达高峰,后下降。（3）神经细胞凋亡数随脑复苏时间延长而增加。（4）给予红花治疗后,上述变化均减轻。结论：红花注射液对脑复苏的作用机制之一可能是抑制或延迟脑缺血时细胞凋亡、调控基因Fas、p53的表达而起到脑保护作用。     

红花的化学成分及其药理活性研究进展

红花为菊科红花属植物红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花,是我国传统中药。红花的化学成分按照结构包括黄酮、生物碱、聚炔、亚精胺、木脂素、倍半萜、有机酸、甾醇和烷基二醇等类型,其中醌式查耳酮为其他植物中较少见的成分。红花具有多种生理活性,研究发现对心脑血管、神经系统、免疫系统等具有一定的作用。本文对近二十年红花化学成分以及药理活性的研究进行系统的综述,为其深入研究提供参考。     

A novel compound N,N-(Z)-N-(E)-tri-p-coumaroylspermidine isolated from Carthamus tinctorius L. and acting by serotonin transporter inhibition

Safflower, the dry flower of Carthamus tinctorius L., has long been applied for empirically treating cerebral ischemia and depression in traditional Chinese medicine. Pathogenesis of major depression involves monoaminergic transmission. The present study assessed whether safflower or its isolate would be effective in functionally regulating monoamine transporter using in vitro screening cell lines. We discovered that safflower insoluble fraction significantly inhibited serotonin uptake in Chinese hamster ovary cells stably expressing serotonin transporter (i.e. S6 cells). This fraction went through an activity-guided isolation and an active ingredient was obtained, which was subsequently elucidated as a novel coumaroylspermidine analog N¹,N⁵-(Z)-N¹⁰-(E)-tri-p-coumaroylspermidine using NMR techniques. Pharmacologically, this compound potently and selectively inhibited serotonin uptake in S6 cells or in synaptosomes, with IC₅₀ of 0.74 ± 0.15 µM for S6 cells or 1.07 ± 0.23 µM for synaptosomes and with a reversible competitive property for the 5HT-uptake inhibition. The potency of it for 5HT uptake was weaker than that of fluoxetine whereas efficacy generally similar for both. Animals treated with this testing compound showed a significant decrease in synaptosomal 5HT uptake capacity. Thus, N¹,N⁵-(Z)-N¹⁰-(E)-tri-p-coumaroylspermidine is a novel serotonin transporter inhibitor, which could improve neuropsychological disorders through regulating serotoninergic transmission.     

HPLC-ELSD法检查抗感颗粒中山银花皂苷类成分

目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器测定方法,对抗感颗粒进行山银花检查。方法 以山银花中两种专属三萜皂苷—灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙作为指标成分,采用Thermo Hypersil Gold C₁₈色谱柱（4.6 mm*250 mm,5 μm）,以水-乙腈为流动相进行梯度洗脱,柱温32 ℃,体积流量1.0 mL·min^-1,蒸发光散射检测器检测（漂移管温度90 ℃,雾化器温度60 ℃,N₂载气流速1.6 L·min^-1）。结果 在收集的53批样品中,49批样品检出了至少1种山银花专属三萜皂苷,存在以山银花投料的情况。结论 建立的方法准确、可靠、专属性强,可用于检查抗感颗粒中山银花的使用情况。     

GSTP1、GSTM1基因多态性与顺铂导致骨髓抑制的相关性研究

目的考察顺铂致骨髓抑制与谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)和谷胱甘肽硫转移酶M1(GSTM1)基因多态性的关系。方法用病例对照研究的方法考察以顺铂为主要化疗方案的100例癌症初治肿瘤化疗患者基因多态性与骨髓移植的相关性,白细胞计数和血小板的数量为指标判断是否发生了骨髓抑制以及骨髓抑制程度。提取DNA扩增测序法判断GSTP1、GSTM1基因型。结果 GSTP1的3种基因型AA、AG、GG型均存在,并且在62例发生骨髓抑制的病例中,GSTP1 AG/GA型的患者的分布明显高于GSTP1 AA型患者。GSTM1包含缺失(-)和非缺失(+)2种基因型,100例病例中GSTM1(+)少于GSTM1(-)。Logistic分析结果表明GSTP1 AG/GG型是顺铂致骨髓抑制的独立危险因素,GSTM基因缺失虽不是顺铂致骨髓抑制的独立危险因素,但能促进GSTP1 AG/GG型的作用,导致顺铂致骨髓抑制进一步加重。结论顺铂导致的骨髓抑制程度与GSTP1基因多态性相关。     

丹参-红花组分配伍对雌、雄性心肌缺血大鼠肝药酶亚型影响的比较研究

目的 比较丹参-红花组分配伍对不同性别大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的影响。方法 取SD大鼠按不同性别随机分为丹参-红花高、低剂量（生药4、2 g/kg）组及模型组和对照组,ip盐酸异丙肾上腺素制备心肌缺血模型,丹参-红花高、低剂量组给予相应提取物,模型、对照组给予等体积的蒸馏水,连续ig给药21 d后,取肝组织剪碎制备微粒体,加入非那西丁、氯唑沙宗、睾酮分别作为CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的特异性探针底物,体外温孵育,建立高效液相色谱（HPLC）法检测探针底物浓度,测定CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性。结果 ①雄性大鼠实验结果显示,与对照组比较,模型组显著抑制CYP2E1和CYP3A4的活性（P<0.05、0.01）;与模型组比较,丹参-红花高剂量组显著抑制CYP2E1和CYP3A4的活性（P<0.05、0.01）;低剂量组显著抑制CYP2E1的活性（P<0.05）,诱导CYP3A4（P<0.01）。②雌性大鼠实验结果显示,与对照组比较,模型组显著抑制CYP2E1和CYP3A4的活性（P<0.05）,对CYP1A2的影响不显著;与模型组比较,丹参-红花高剂量组显著抑制CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的活性（P<0.05、0.01）;丹参-红花低剂量组抑制CYP2E1的活性（P<0.05）,对CYP1A2和CYP3A4的影响不显著。③实验结果对比显示,丹参-红花对雄性、雌性大鼠肝药酶亚型的影响相同点是均抑制了CYP2E1和CYP3A4活性,尤其对CYP2E1的抑制作用比较明显;不同点是丹参-红花低剂量诱导了雄性大鼠CYP3A4活性,但对雌性大鼠CYP3A4活性无明显影响。结论 丹参-红花组分配伍对不同性别大鼠部分肝药酶亚型活性的影响存在一定的差异。     

Theoretical study of the influence of the circadian rhythm of plasma protein binding on cisplatin area under the curve

A mathematical model for area under the curve (AUC)determination is proposed taking into account the circadian variation of cisplatin protein binding. The main theoretical result obtained with the model is that early morning drug administration (2–4 AM) promotes the highest AUC.The model predicts a maximum AUCvariation, due to the binding variation, ranging between 2.4 and 15%. The minimum of AUCbetween 2.45 and 3.30 PM is in agreement with the minimum nephrotoxicity observed when cisplatin is injected in the afternoon.The model can be applied to other drugs that are irreversively bound to proteins or irreversively bound to other plasma components if the binding rate depends on the time of day. The variation intensity of AUC wasdemonstrated to depend on drug characteristics, but can never be higher than the circadian variation of the protein binding rate.     

基于CiteSpace对红花研究进展及未来趋势的可视化分析

目的 通过分析红花研究领域的英文文献,归纳红花研究热点,总结红花的药理活性,挖掘红花未来研究方向。方法 基于Web of Science数据库,运用CiteSpace 5.8.R3软件通过检索平台收录2000—2021年红花相关研究的英文文献进行文献计量学分析,从机构发文量、国家发文量、作者发文量、Top20被引文献、Top15期刊发文量、关键词的共现以及未来热点等方面进行分析和可视化展现。结果 研究共纳入1230篇文献,2007—2021年发文量占比89.5%,主要集中在亚洲国家,例如中国、伊朗以及印度等。发文机构主要集中在亚洲国家的高校,其中伊朗伊斯兰阿扎德大学为发文量最多的机构,多达53篇;在中国范围内形成了以中国科学院大学、北京大学等大学为核心的科研合作网络,是红花研究领域的密切合作机构。发文量最多的作者是以Meili Guo为代表的团队,该团队研究内容涉及红花以及其近缘种的遗传机制,发文量共计13篇。关键词分析显示研究方向集中在红花的种植、有效成分、药理机制、活化反应等方面,红花有效成分的抗氧化能力以及对阿尔茨海默病的治疗将成为未来的研究热点。结论 红花的年发文量呈逐年递增趋势,其未来的研究热点方向主要集中在发掘其有效成分新的药理作用以及疾病治疗效果的验证方面。对于红花的相关研究仍处于发展阶段,相关研究团队应加强跨区域合作,为后续红花的相关研究提供重要参考。     

丹参-红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响

目的 研究丹参、红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。方法 分别选用咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的探针药物。将大鼠随机分为4组,即空白对照组、丹参（1.2 g生药/kg）组、红花（0.4 g生药/kg）组、丹参（1.2 g生药/kg）+红花（0.4 g生药/kg）组,按上述剂量ig给药7 d。于末次给药后30 min,尾iv探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑溶液,在不同的时间点取血进行检测;以甲硝唑为内标,采用HPLC法检测探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的量,评价各药物组对大鼠CYP3A4、CYP2E1和CYP1A2活性的影响。结果 与空白对照组比较,丹参组咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的清除率（CL）有所增强,曲线下面积（AUC）减少,其半衰期（t_1/2）有减少趋势,但差异均不显著;红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL有所降低,但差异不显著,咪达唑仑的CL显著降低（P<0.01）,氯唑沙宗的AUC增加,但差异不显著,咖啡因和咪达唑仑的AUC明显增加（P<0.05、0.01）;丹参+红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL明显降低（P<0.05）,曲线下面积（AUC）明显增加（P<0.05）,其t_1/2有延长趋势,但差异不显著。结论 丹参、红花配伍后对CYP450亚型CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,这可能是丹参、红花配伍协同增效的作用机制之一。     

纳米氧化铁颗粒tk及hprt基因突变试验比较研究

目的 使用L5178Y细胞分别开展tk基因突变试验和hprt基因突变试验评价纳米氧化铁颗粒（iron oxidenanoparticle, IONP）的潜在基因突变风险,比较两种方法的灵敏性。方法 不同质量浓度的PEG-IONP（31.25、62.5、125、250、500 μg/mL）分别与细胞作用3 h,于给药后第0、2、6天将细胞接种于96孔板继续培养9～10 d,用于计算平板接种效率。分别在给药后第2天或第6天加入三氟胸苷（TFT）和6-硫鸟嘌呤（6-TG）作为tk基因和hprt基因选择剂,继续培养14 d后分析基因突变频率。试验平行设置灭菌注射用水溶媒对照组和甲基甲烷磺酸酯（MMS,10 μg/mL）阳性对照组。结果 溶媒对照组和阳性对照组的hprt基因突变率均低于tk基因突变率,且统计学结果提示hprt基因突变试验数据获得显著性差异的起始浓度（250 μg/mL）高于tk基因突变试验（125 μg/mL）。但整体而言两种试验方法对PEG-IONP的评价结果一致。结论 PEG-IONP可引起小鼠淋巴瘤L5178Y细胞tk基因及hprt基因突变率显著性升高。该研究结果可为纳米材料基因突变风险评价的选择提供借鉴与参考。     

啤酒花抗骨质疏松的应用及展望

啤酒花是我国新疆药食兼用的特色资源植物。除广泛用于啤酒酿制外,人们很早就认识到啤酒花的药用价值,尤其是将其用于绝经后骨质疏松的治疗。现代药理研究发现,啤酒花的多种活性成分在抗骨质疏松药物研发方面具有巨大潜力。然而,近年来,我国野生啤酒花资源品种退化严重,活性成分含量差异较大。保障优良的啤酒花种质资源,是啤酒花开发利用的前提。本文就啤酒花的主要化学成分及其防治骨质疏松症的作用及相关应用进行综述,并就目前存在的问题进行探讨,旨在为啤酒花抗骨质疏松的开发利用提供借鉴。