HPLC-ESI-MSn法研究中乌头碱在水中的化学反应

目的:用高效液相色谱-电喷雾-质谱/质谱(HPLC-ESI-MSn)方法研究中乌头碱在水中发生的化学反应。方法:液相用梯度洗脱,质谱用正离子模式。结果:在水解液中发现了5种水解产物,其准分子离子[M H] 分别为590,486,514,618,572。结论:通过对水解产物的准分子离子和碎片离子的初步分析,可以推测其水解产物为中乌头次碱、中乌头原碱和3个初步确定结构的化合物,并推测在水中可以发生脱乙酰基反应同时脱水的反应;脱N上的甲基或16位C上的甲基反应;脱苯甲酰基反应同时脱16位C上的甲基或脱N上的甲基。     

兔体内乌头碱代谢产物研究

目的鉴定乌头碱在家兔尿中主要代谢产物。方法ig给药(5 mg·kg^-1)后,收集给药后♂家兔尿液,固相萃取柱富集、液相色谱-电喷雾离子阱质谱法分离鉴定乌头碱代谢物。结果在给药后尿样中发现乌头碱原形和4种代谢物M1～M4,分别测得准分子离子峰［M+H］+及其各级碎片离子。结论M1～M4为乌头碱的4个代谢物,推测分别为16-O-去甲基乌头碱、乌头次碱、16-O-去甲基乌头次碱、乌头原碱。     

大鼠体内乌头碱代谢产物研究

目的 鉴定乌头碱在大鼠尿液与胆汁中主要代谢产物。方法以0．2mg／kg的剂量对20只大鼠进行灌胃给药，累积收集0-8h，8-24h、24-48h大鼠尿液，同样剂量给药，累积收集胆汁。冷冻干燥有机溶剂提取进行前处理，HPLC分析后，液相色谱-电喷雾离子阱质谱法分离鉴定乌头碱代谢物。结果 在给药尿样中发现乌头碱两种代谢产物M1-M2，分别测得准分子离子峰[M H]^ ，以给药胆汁中发现乌头碱两个代谢产物M3-M4，分别测得准分子峰[M H^ ]及其二级碎片离子。均未检测到乌头碱原形。结论 M1-M2为乌头碱的4个代谢产物，推测分别为乌头碱14位酯键水解后，羟基乙酰化，3、15位羟基甲基化；乌头碱N-去乙基后与甘氨酸结合，15位羟基氧化为羰基；乌头碱N-去乙基后发生N-氧化，3、13位羟基乙酰化；乌头碱6、16位去甲基后3、13位羟基乙酰化产物。     

HPLC-Q-TOF-MS法测定不同厂家小金丸中9种乌头类生物碱的含量

目的：建立高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱（ HPLC-Q-TOF-MS）法测定不同厂家小金丸中乌头类生物碱（乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱）的含量。方法色谱柱：ZORBAX Extend-C18 RRHT柱（1.8μm,2.1×50mm）;流速为0.21mL· min -1;柱温：30℃;流动相：甲醇-水（水相含0.1%甲酸和2.5mmol· L -1醋酸铵溶液）系统梯度洗脱;采用电喷雾离子（ESI）源,正离子方式检测。结果上述9种生物碱在一定范围内具有较好的线性关系,r值均大于0.9997,精密度、重复性和稳定性的RSD都低于5%,加样回收率均在98.73%~103.54%之间。结论该方法简便、快速、灵敏、精密度高、重复性好,可应用于小金丸的质量控制。     

HPLC法测定两种乌头药材中生物碱的含量

高效液相色谱法测定湖北两种乌头药材中乌头碱、次乌头碱、中乌头碱的含量。采用SpherisorbODS柱，以甲醇-水-氯仿-三乙胺（60：40：2：0．1）为流动相，联苯为内标。     

兔胃内容物中乌头碱的LC-MS法检测

目的:研究液相色谱-质谱(LC-MS)法检测兔胃内容物中乌头碱的方法。方法:采用LC-MS法检测兔胃内容物中乌头碱。结果:模拟法医鉴定,在灌服乌头碱引起中毒死亡3d后家兔的胃内容物中检测到尚未代谢的乌头碱。结论:此方法适于胃内容物中乌头碱检测,可供乌头碱中毒法医鉴定参考。     

UPLC-MS法测定消肿片中3个乌头碱类双酯型生物碱的含量

目的:建立同时测定消肿片中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱3个双酯型生物碱含量的超高效液相色谱-质谱分析方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18(100 mm×2.1 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液(35∶65)为流动相,流速0.3 mL·min-1,柱温35℃;ESI+模式下选择离子监测(SIM)质荷比(m/z)为632,646,616的离子。结果:新乌头碱、乌头碱、次乌头碱浓度分别在0.2250～510.0 ng.mL-1(r=0.9996)、0.2500～500.0 ng.mL-1(r=0.9996)和0.2540～508.0 ng·mL-1(r=0.9996)范围内有良好的线性关系,平均回收率(n=9)分别为95.1%,93.6%,93.0%。结论:该方法简便、快捷、准确,同时检测3个有毒生物碱,可用于消肿片的质量控制。     

乌头碱在豚鼠和小鼠肝微粒体细胞色素氧化酶中的代谢作用研究

目的:研究乌头碱(AC)在豚鼠和小鼠体外肝微粒体中代谢产物的差异。方法:优化2个种属肝微粒体与AC的P450反应体系,应用高效液相色谱-高分辨质谱联用(HPLC-HRMS)和超高相液相色谱-多级质谱(UPLC-MS/MS)法测定AC在2种肝微粒体中的细胞色素氧化酶(CYP)代谢产物。结果:AC在2种肝微粒体中均代谢产生8种代谢产物,其中6种为CYP代谢产物;脱甲基、脱乙基、脱氢和氧化反应是其主要代谢特征。结论:乌头碱在豚鼠和小鼠体外肝微粒体中的CYP主要代谢途径相同。     

反相离子对色谱法测定附子中生物碱成分

目的测定附子中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、北乌碱、苯甲酰乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱等6种生物碱的含量。方法用反相离子对HPLC法，使用AichromBond-1 C₁₈柱(250 mm×4.6 mm ID)；流动相：乙腈-5 mmol·L^-1 NaH₂PO₄溶液，磷酸调至pH 4.5(50∶50)，内含7 mmol·L^-1 十二烷基硫酸钠(SDS)；检测波长：235 nm；流速：1.0 mL·min^-1；柱温：35 ℃。结果以上6种生物碱可以完全分离，准确测定。结论该方法准确度高，可应用于附子中生物碱的含量测定。     

高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法快速检测大鼠血浆中6种附子生物碱

目的:建立高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法快速测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的方法。方法:血浆样品加入内标氢溴酸高乌甲素,以甲醇沉淀蛋白进行预处理。采用高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法进行样品测定,色谱柱为Sinochrom ODS-BP C_(18),流动相为乙腈-1%甲酸水溶液(50∶50,V/V),流速为0.6 m L/min,进样量为10μL,柱温为25℃,自动进样器温度为4℃;质谱扫描模式为全离子监测模式,正离子采集,设定检测离子质荷比(m/z)分别为646.32(乌头碱)、632.30(新乌头碱)、616.31(次乌头碱)、604.31(苯甲酰乌头原碱)、590.29(苯甲酰新乌头原碱)、574.30(苯甲酰次乌头原碱)、585.31(内标)。取雄性Wistar大鼠6只,单剂量灌胃附子总生物碱提取物(4 mg/kg),分别于给药前(0 h)和给药后0.5、0.75、1.25、1.5、2、4、6、8、10、24 h时取血,测定血浆药物浓度并以PKSolver V2.0软件计算药动学参数。结果:血浆中6种附子生物碱质量浓度均在0.1~10μg/L范围内线性关系良好(r>0.992),定量限均为0.1μg/L;平均提取回收率均大于75%,日内精密度、日间精密度、基质效应、稳定性试验的RSD均小于15%。大鼠血浆中6种附子生物碱的t_(max)均分别为1.2 h左右,t_(1/2)均分别为10 h左右,单酯型乌头原碱的c_(max)均分别高于双酯型乌头碱。结论:本研究所建立的高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨率质谱法准确、灵敏、简便、快速,可用于6种附子生物碱的血药浓度监测。     

Reaction product analysis of aconitine in dilute ethanol using ESI-Q-ToF-MS

The study was done to identify the reaction products of aconitine in dilute ethanol using electrospray ionization-triple quad time-of-flight mass spectrometry (ESI-Q-TOF-MS). Five hydrolysates were detected, their pseudo-molecules are 632, 604, 586, 570, 500, they are 8-ethyoxyl-14-benzoylaconitine, benzoylaconine, pyraconitine, 8-acetyl-14-ethyoxylaconitine, aconine, respectively. Among them, 8-ethyoxyl-14-benzoylaconitine and 8-acetyl-14-ethyoxylaconitine were identified firstly as reaction products of aconitine in dilute ethanol, and can thus be used as indicators in quality control of medicinal Aconitum preparations used in Traditional Chinese Medicine.     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中乌头碱的浓度

目的:建立LC-MS/MS法检测大鼠血浆中乌头碱的浓度。方法:以维拉帕米作内标,血浆样品经MTBE液液萃取后,采用HyPURITYCyano(150mm×2.1mm,5μm)柱分离,流动相为乙腈:10mmol/L甲酸铵=(70∶30,V/V),流速为0.30mL/min。然后采用电喷雾离子源(ESI源)正离子多反应监测(MRM)扫描分析,乌头碱和维拉帕米的离子选择通道分别为:m/z646.4→586.4和455.2→164.9。结果:乌头碱的线性范围为9.3～2390pg/mL,最低检测浓度为9.3pg/mL,日内和日间变异均<15%。结论:本方法灵敏度高,适用于乌头碱在鼠内的药物代谢动力学研究。     

653例含乌头碱类药物致不良反应文献分析

目的了解含乌头碱类药物致不良反应的特点及规律。方法通过中国医院数字图书馆期刊全文数据库,检索1994～2005年中文医药卫生期刊报道的含乌头碱类药物致不良反应文献96篇,并进行分类、统计。结果含乌头碱类药物致不良反应共653例,主要涉及神经和心血管系统,主要表现为各种类型心律失常。结论含乌头碱类药物可致心脏多种不良反应,一旦发生,应及时救治。     

大黄附子汤中诸药的不同组合及煎法对乌头碱含量的影响

目的 :研究大黄附子汤中各组分不同配伍对附子中乌头碱含量的影响。方法 :以大黄附子汤为基础 ,配伍成不同的组方 ,采用不同的提取工艺 ,应用紫外分光光度法测定乌头碱的含量。结果 :各组方单煎混合提取液中乌头碱的含量比附子单煎下降20 %左右 ,各组方合煎提取液中乌头碱的含量比附子单煎下降45 %左右 ;细辛与附子配伍对乌头碱的含量无影响。结论 :在大黄附子汤中大黄能佐制附子的毒性     

温脾汤中诸药不同组合及煎法对乌头碱含量的影响

目的：研究温脾汤中诸药的不同组合及煎法对乌头碱含量的影响。方法：以温脾汤为基础,配伍成不同组方,采用不同的提取工艺,应用紫外分光光法测定乌头碱的含量。结果：附子与干姜配伍能提高乌头碱含量,附子与大黄、甘草配伍能降低乌头碱含量,人参与附子配伍对乌头碱含量没有影响。结论：在温脾汤中,大黄、甘草能佐制附子的毒性,干姜能增强附子的功效。     

乌头类药材及中毒案例未知品中酯型生物碱的检出及测定

目的：建立乌头类主要毒性尬发新乌头碱，乌头碱，次乌头碱的检出方法和含量测定方法。方法：以TLC法和HPLC法双重鉴定各药材及未知品中酯型生物的存在并测定其含量。结果：TLC法能有效检出新乌头碱，乌头碱和次乌头碱，HPLC法可进一步确证各酯型生物碱的存在并测定TLC1/500点样量的乌头碱含量。结论：该方法操作简单，快速，准确，可作为乌头类药材及中毒案例未知品的鉴定与含量测定方法。     

27例急性乌头碱中毒的救治分析

目的:探讨急性乌头碱中毒的救治方法,以提高抢救的成功率。方法:回顾性分析我院近年来救治的乌头碱中毒患者的临床资料。结果:27例乌头碱中毒患者治愈26例,死亡1例。结论:及时明确的诊断,根据疾病严重程度,早期进行以血液灌注治疗为主的综合治疗,可提高抢救成功率。     

The susceptibility of ventricular arrhythmia to aconitine in conscious Lyon hypertensive rats

AIM: The present work was designed to investigate the relationship between hemodynamic parameters and the susceptibility of ventricular arrhythmia to aconitine in conscious Lyon hypertensive rats (LH). METHODS: Male LH and Lyon low blood pressure rats (LL) were used. After the determination of baroreflex sensitivity (BRS), ventricular arrhythmia was induced by aconitine infusion in conscious rats. Blood pressure (BP) was recorded during the period of infusion. RESULTS: Compared with the LL rats, the LH rats possessed significantly higher BP, blood pressure variability and lower BRS. The threshold of aconitine required for ventricular fibrillation and cardiac arrest in the LH rats were significantly lower than those in the LL rats. It was found that all the hemodynamic parameters studied were not correlated with the threshold of aconitine required for arrhythmia, with the exception of BRS, which was positively related to the threshold of aconitine required for ventricular premature beat. CONCLUSION: The LH rats possessed greater susceptibility to aconitine-induced ventricular arrhythmias when compared to the LL rats. This greater susceptibility could not be attributed to any one of the hemodynamic parameters alone studied in the LH rats. It is proposed that various hypertension-associated abnormalities, including the abnormal hemodynamics, may co-contribute to this vulnerability to ventricular arrhythmias.     

Blocking effects of hypaconitine and aconitine on nerve action potentials in phrenic nerve-diaphragm muscles of mice

The mechanisms of neuromuscular blockade by hypaconitine and aconitine were investigated electrophysiologically in isolated phrenic nerve-diaphragm muscles of mice. Hypaconitine (0.08-2 microM) and aconitine (0.3-2 microM) depressed the nerve-evoked twitch tension, without affecting the contraction evoked by stimulation of the muscle. At the concentrations of hypaconitine (up to 5 microM) and aconitine (up to 2 microM) that depressed the nerve-evoked twitch tension, the resting membrane potential of the muscle cells was unchanged. Hypaconitine (0.1-2 microM) and aconitine (2 microM) blocked the end-plate potential (epp), without affecting the amplitude of the miniature epp (mepp). The quantal content of end-plate potentials was decreased by these agents in parallel with the decrement in amplitude. The nerve compound action potential was inhibited by hypaconitine (5 microM) and aconitine (2-10 microM), as well as by 1 microM tetrodotoxin (TTX). When the nerve compound action potential was completely blocked by 2 microM aconitine, the muscle action potential was unaffected, although 1 microM TTX suppressed both potentials to the same degree. These results indicate the neuromuscular blockade produced by hypaconitine and aconitine were caused by reducing the evoked quantal release. The mechanism of this effect was attributed mainly to blocking of the nerve compound action potential.