海洋微生物来源吲哚酮纤溶化合物影响纤溶因子构象特性的研究

摘 要:目的 研究FGFC1对各纤溶因子构象的影响及FGFC1促进纤溶反应的机制。方法 采用圆二色谱法研究FGFC1对各纤溶因子结构的影响,采用发色底物法研究FGFC1对各纤溶因子活性的影响,采用SDS-PAGE电泳法研究FGFC1在纤溶酶原和单链尿激酶型纤溶酶原激活剂构成的相互活化反应体系中的作用。结果 远紫外区的CD结果表明FGFC1在23 μmol?L?1~115 μmol?L?1的浓度范围内均使各纤溶因子的二级结构发生变化,这变化都导致酶分子柔性增加、更易发生反应;近紫外区的CD结果表明,FGFC1使纤溶酶原在285 nm处的摩尔旋光度增大。CD研究结果表明FGFC1对单链尿激酶型纤溶酶原激活剂和尿激酶型纤溶酶原激活剂结构的影响较为微弱,对纤溶酶及纤溶酶原结构的影响复杂而深刻。运用发色底物法检测加入不同浓度FGFC1后各纤溶因子的酶活力,排除了FGFC1对纤溶因子的结构影响而导致的纤溶因子失活的可能性。在体外构筑的纤溶反应体系中,SDS-PAGE的结果显示FGFC1的加入促进FITC-纤维蛋白原的降解,表明FGFC1加速纤溶酶原和单链尿激酶型纤溶酶原的相互活化作用。结论 FGFC1作用于纤溶酶原并辅以改变单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的二级结构发挥纤溶促进作用。     

链霉菌产生的新型纤溶酶的纤溶性质和溶栓作用

目的旨在进一步确证纤溶活性的蛋白酶SW-1的溶栓作用和性质。用体外加热平板法、试管凝块法和在体内对大鼠静脉血栓溶解及对纤溶因子的作用等实验,发现SW-1在体外可直接降解纤维蛋白,而无激活纤溶酶原的作用。在体内,SW-1对大鼠静脉血栓有显著的溶解效果,与同剂量尿激酶的溶栓作用相当。给药(iv)30min后,SW-1引起大鼠血浆中纤溶酶、纤溶酶原水平提高,纤维蛋白原水平下降,而对组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)、α₂-纤溶酶抑制剂无显著影响。提示SW-1是一种具有纤溶活性的蛋白酶,而不是纤溶原激活剂。     

海洋双吲哚化合物溶解大鼠脑微血栓的纤溶作用

目的 检测海洋双吲哚生物碱FGFC1对大鼠脑微血栓的纤溶作用。方法 静脉注射异硫氰酸荧光素-纤维蛋白诱导大鼠脑微血栓形成，低场核磁共振血栓成像和组织切片评价脑微血栓动物模型构建；颈静脉注射给药FGFC1，荧光比色法检测大鼠血浆荧光强度，ELISA方法检测纤维蛋白降解产物和纤溶酶原活性。结果 低场核磁共振血栓成像和HE染色组织切片显示异硫氰酸荧光素-纤维蛋白诱导大鼠脑部密度增强和脑血管管壁增厚；冷冻组织切片显示脑血管存在荧光亮斑；血浆荧光强度显示2 h时异硫氰酸荧光素-纤维蛋白诱导大鼠脑微血栓形成；当FGFC1给药剂量为5 mg/kg时，给药后2 h大鼠血浆FDP、D-D及PLG活性分别为595.24 ng/mL、5.70 ng/mL和86.98 IU/L，与空白对照组差异显著。结论 异硫氰酸荧光素-纤维蛋白诱导大鼠形成脑微血栓模型，FGFC1能够增强脑微血栓动物模型的纤溶活性，实现脑微血栓溶解；海洋纤溶化合物FGFC1具有发展为溶解脑微血栓药物的潜力。     

rAcAP5的溶栓作用及作用机制研究(英文)

犬钩虫抗凝肽（Ancylostoma caninum anticoagulant peptide,AcAP5）是一种已报道的FXa抑制剂,它对防止血栓溶解的TAFIa具有很强的抑制作用,本文进一步研究rAcAP5的纤溶活性和溶栓活性。采用发色产物法测定rAcAP5对TAFIa的抑制作用,用比浊法测定rAcAP5对尿激酶（UK）诱导的纤维蛋白溶解时间的影响,通过血栓称重法进行体外溶栓实验和体内动静脉旁路溶栓实验。采用常规方法测定正常大鼠优球蛋白溶解时间（ELT）,血浆纤维蛋白原含量和纤维蛋白降解产物（FDP）含量。rAcAP5浓度依赖地抑制TAFIa活性,其IC₅₀为63.7 nmol/L,为一个强的TAFIa抑制剂。rAcAP5（5-40 nmol/L）能够显著地加速尿激酶诱导纤维蛋白的溶解,缩短纤溶时间。rAcAP5能够提高尿激酶诱导的血栓减重（P<0.05）,单独使用rAcAP5也能显著增加体外实验的血栓减重（P<0.05）。在大鼠体内的动静脉旁路模型中,单次静脉给予rAcAP5（50-200μg/kg）能够剂量依赖地增加血栓减重（P<0.01）。rAcAP5在有效剂量对正常大鼠的ELT、血浆纤维蛋白原含量和FDP含量均无明显影响。研究结果提示:rAcAP5是一个强效溶栓多肽,它可能通过抑制TAFIa的活性而在血栓表面具有溶栓活性,而不影响循环血液中的纤溶活性和纤维蛋白原含量。     

尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶FⅡa对不同血栓模型的溶解作用(英文)

目的:本文研究尖吻蝮蛇毒纤维蛋白溶解酶FⅡ_a体内的溶栓作用。方法:采用兔颈动脉血栓模型,大鼠颈动脉血栓模型和大鼠大脑中动脉血栓模型三种动脉血栓模型,观察FⅡ_a的体内溶栓活性。结果:FⅡ_a剂量为0.625mg/kg时,对兔颈动脉血栓和大鼠颈动脉血栓即有溶解作用;而在1.25mg/kg时,对大鼠大脑中动脉血栓才有溶解作用。随着剂量的增加,对三种血栓的溶解作用相应增强。大鼠的肾、肝、心、肺组织学检查没有发现出血。结论:FⅡ_a在体内能够溶解血栓,并且在有效的溶栓剂量下不会引起出血反应。     

少棘蜈蚣纤溶活性蛋白的抗血栓作用

目的研究少棘蜈蚣(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch)纤溶活性蛋白的抗血栓作用。方法采用离子交换层析和分子筛等制备法从少棘蜈蚣中纯化到蜈蚣纤溶酶(Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch fibrinolyti cenzyme,SSFE),用纤维蛋白平板检测酶活力,常规方法检测了SSFE溶血性和出血性,进行了SSFE体外溶栓和体内溶栓实验,并检测了凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)3个标准化指标。结果PAGE显示SSFE为单一组分,具有纤溶活性;证明SSFE无致出血性且无致溶血活性,低、中、高剂量SSFE使小鼠APTT和TT均明显延长,中剂量SSFE对PT有延长作用,而高剂量作用不明显。结论蜈蚣纤溶酶具有抗血栓作用。     

去纤酶无直接溶栓作用

在以贫含血小板血浆为媒介的体外溶栓模型上,尿激酶(5×10~5～5×10~6IU·L~(-1))作用30min使人造混合血栓的重量呈剂量依赖性的降低。剂量为2×10~6IU·L~(-1)时,作用达峰值。相反,去纤酶(6.25～25IU·L~(-1))使血栓重量呈剂量相关性的增加。用大剂量凝血酶(1×10~5IU·L~(-1))消耗媒介中的纤维蛋白原后,去纤酶不再增加血栓重量,与生理盐水相比,亦未见有明显的降低血栓重量的作用。本结果提示去纤酶无直接溶栓作用。     

海洋假单胞菌纤溶酶的体外溶栓实验研究

目的确证血纤维蛋白溶酶的体外溶栓作用。方法用血纤维蛋白平板法、体外血块溶解实验研究该酶的纤溶特点及对血块的溶解作用。结果可直接水解血纤维蛋白 ,溶栓活性同蝮蛇抗栓酶类似 ,但对红细胞形态没有影响。结论血纤维蛋白溶酶是一种直接纤溶酶 ,有较强的纤溶活性     

一种新型海洋纤溶酶体外抗凝与溶栓作用研究

目的对本实验室制备的一种相对低分子质量新型海洋纤溶酶的体外抗凝和溶栓作用进行初步评价,为进一步的动物实验研究打下基础。方法以pH7.4的生理盐水作阴性对照,以蚓激酶作阳性对照,在体外研究新型海洋纤溶酶对Wistar大鼠和家兔新鲜血液的抗凝集和血栓溶解作用。结果该新型海洋动物纤溶酶具有显著的血栓溶解作用,并具有一定的抗凝血效果,从血栓中释放的血细胞形态较使用蚓激酶优。结论该新型海洋纤溶酶具有潜在的应用价值。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂及其突变体的溶血栓研究

目的 比较重组人组织型纤溶酶原激活剂(rht-PA)及其突变体FsGGI和FrGGI的溶血栓作用,验证突变体的构建思想。方法 采用兔颈静脉溶栓模型和体外溶栓试验对纯化的rht-PA及其突变体FsGGI和FrGGI进行家兔体内外溶栓研究。结果 rht-PA、FsGGI及FrGGI三者均有体内外溶栓作用,体外溶栓能力基本相似;体内溶栓活力突变体FsGGI与FrGGI类似,均显著高于rht-PA,溶栓度分别为20.1％、49.1％和46.6％。在体内溶栓作用的同时均未引起血浆纤维蛋白原滴度下降。结论 溶栓作用是血栓特异性的,两种突变体是优于野生型t-PA的溶栓剂,上游的构建思想是正确的。     

纳豆激酶的纤溶活性及其机理研究

目的研究纳豆激酶的抗血栓作用 ,探讨其主要作用机理。方法通过药理实验方法观察纳豆激酶对体内急性血栓形成 ,以及对血液凝固系统全血凝血时间、凝血酶原时间、凝血酶时间、活化部分凝血活酶时间和血液中纤维蛋白原含量变化的影响。结果纳豆激酶提取物可对抗小鼠体内血栓形成 ,对内外源性凝血途径均有影响 ,同时有直接的溶栓作用。结论纳豆激酶具有较强的纤溶活性。     

蛇毒纤溶酶的分离纯化及其溶栓作用

目的获得大量高纯度的蛇毒纤溶酶并进行药效实验。方法用离子交换柱色谱和单克隆抗体亲和色谱技术进行纯化 ,用体外和半体内血栓模型研究其抗血栓作用。结果得到纯度为 95 %以上的纤溶酶。结论纯化后的蛇毒纤溶酶具有显著的抑制血栓形成的作用     

纤溶酶产生菌株BS-26的发酵工艺优化

目的对纤溶酶产生菌株BS-26发酵工艺进行优化。方法通过单因素试验和正交试验,确定了摇瓶发酵的最佳条件。结果该菌株产纤溶酶最佳的发酵条件为:3%糊精、1%酵母粉、0.02%CaCl2、0.07%MgSO4,初始pH7.0,接种量为6%,装液量为70/250(mL/mL),摇床温度37℃,转速180 r/min,发酵时间60 h,在该条件下产酶酶活可达593.03 U/mL,是原发酵培养条件下产酶活力的4.5倍。结论此发酵条件可以很好地提高纤溶酶的活力,为发酵规模的扩大奠定了基础。     

Circulatory Concentrations of Fibrinolytic Species During Thrombolytic Therapy Estimated by Stirred-Tank Reactor Analysis

Purpose. A model for calculating the circulatory concentrations of fibrinolytic species is proposed and the findings are compared to reported values where available. Methods. The model uses a CSTR analysis with fourth order Runge-Kutta solution of the differential equations to determine concentration profiles of key fibrinolytic species as a function of time during fibrinolytic therapy. Concentrations of the species are also determined for various dosage regimens of streptokinase and plasminogen. Results. Data calculated by the model is in agreement with general experimental trends determined in vitro and in vivo. Conclusions. The proposed model can be used to predict concentration profiles of key fibrinolytic species during administration of streptokinase.     

地衣芽孢杆lw-72合成纤溶酶的摇瓶发酵工艺优化

通过单因素试验和正交试验确定地农芽孢杆菌lw-72摇瓶发酵合成纤溶酶的最佳条件,最佳培养基组成为:玉米粉0.5%、黄豆饼粉2.0%、Na_2HPO_4 0.4%、NaH_2PO_4 0.2%、CaCl_2·2H_2O 0.01%、KCI 0.01%;培养摹初始pH为7.0;最佳培养条件:装液量30 ml/250 ml摇瓶,接种量10%,发酵时间为72 h.在该条件下发酵液中纤溶酶酶活力为622 u/ml,是初始发酵培养基的3.4倍.     

白眉蝮蛇蛇毒纤溶酶的聚乙二醇修饰

为提高纤溶酶的临床适用性，采用4种针对氨基修饰的mPEG试剂——mPEG—SPA5K、mPEG—SMB5K、mPEG—ButyrALD5K和mPEG2-NHS40K修饰蛇毒纤溶酶，以获得高比例的单修饰产物和较高的酶活性保留率。优化修饰反应条件，用Superdex75凝胶过滤色谱法分离纯化修饰产物。最终确定mPEG—SPA5K为最适宜的修饰剂。产物经sDs—PAGE和MALDI-TOF-MS法检测为单修饰，修饰产物酶活性收率为67．3％，修饰产物的热稳定性提高，免疫原性显著下降。     

复方黄龙胶囊对凝血、纤溶功能的影响

目的探讨复方黄龙胶囊的抗凝血、纤维蛋白溶解作用。方法按试剂盒说明书对复方黄龙胶囊进行动物活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）的测定。用常规方法测定体外凝血时间（CT）、血块溶解时间（BLT）、优球蛋白溶解时间（ELT）。采用纤维蛋白平板法测定复方黄龙胶囊纤溶活性。结果复方黄龙胶囊体内外能明显延长APTT,PT,TT;与对照组比较,大、小剂量给药组BLT及ELT明显缩短,差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;在普通纤维蛋白平板和加热平板上能溶解纤维蛋白。结论复方黄龙胶囊具有抗凝作用,能直接溶解纤维蛋白。     

盐效应分离纤溶活性化合物FGFC1

目的探索通过盐效应分离长孢葡萄穗霉FG216(Stachybotrys longispora 216)发酵液中纤溶活性化合物FGFC1(fungi fibrinolytic compound 1)的方法。方法长孢葡萄穗霉FG216经过种子液培养和发酵培养获得的发酵液经浓缩后添加氯化钠、氯化铵和氯化钙至不同饱和度,用乙酸乙酯萃取,通过HPLC检测FGFC1的分离效果,并分析FGFC1的质谱和光谱特性。结果随着氯化钠、氯化铵和氯化钙的饱和度从20%升高到90%,氯化钠和氯化钙的盐效应分离作用效果呈现逐渐增强的趋势,60%饱和度的氯化钠能达到18.8 mg/mL的FGFC1提取率,是甲醇分离方法的118%,采用盐效应分离和用甲醇分离获得的FGFC1的质谱和光谱特性一致。结论用氯化钠盐效应分离长孢葡萄穗霉FG216发酵液中FGFC1是一种有效的分离方法,该盐效分离结果符合盐效分离的基本理论。