个体化裸鼠荷人肺癌肿瘤模型的建立

目的:建立人肺癌个体化可传代组织块动物模型.方法:组织块移植组将直径2mm的人肺癌新鲜标本癌组织块移植于BALB/C裸鼠背部皮下组织内,每例人肺癌新鲜标本均移植入5只裸鼠体内,成瘤者为第1代.取第1代移植瘤组织块以相同方法每例标本移植于另5只BALB/C裸鼠背部皮下组织内,成功者为第2代.重复上述传代方法得到第3代移植瘤.将人肺癌细胞株A549、H1795分别移植于BACLC裸鼠背部皮下组织内,成瘤达500 mm3后取癌组织块.分别取实验组的原代人肺癌肿瘤及第1、2、3代移植瘤部分组织,及作为对照的细胞系移植瘤组织,固定于10％福尔马林溶液中,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察比较其形态异同.结果:组织块移植组瘤细胞不仅保留了人肺癌细胞的异型性,还保持原有排列结构；而作为对照的细胞系移植瘤细胞失去了原有的排列结构,仅保留了癌细胞的异型性.结论:利用不同患者的手术切除肺癌标本所建立的裸鼠荷人肺癌肿瘤模型具有个体化特征,为肺癌个体化治疗的研究提供依据.     

血管抑素对口腔鳞癌移植瘤抑制作用的研究

目的:(1)建立口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型。(2)血管抑素(angiostatin)对口腔鳞癌移植瘤抑制作用的研究。方法:建立口腔鳞状细胞癌裸鼠移植瘤模型:将人Tca8113细胞系培养并接种至20只裸小鼠皮下,1周后移植瘤模型建立。再将裸鼠分为一个对照组和3个治疗组,治疗组用3个不同浓度重组人血管抑素干扰。对照组用PBS液注射。每周测量1次肿瘤大小。35天后取标本并称重。结果:rhAGN处理剂量为50mg/(kg·d)、100mg/(kg·d)和200mg/(kg·d)时,肿瘤体积分别为(4945±364)mm3、(2423±258)mm3和(472±48)mm3,与对照组相比,治疗组的体积和重量明显减小(P<0.05,P<0.01);其抑瘤率分别为31.5%、62.0%和85.5%。结论:血管抑素能显著抑制人Tca8113移植瘤的生长,且作用呈剂量依赖性。     

A-NK细胞抗口腔舌鳞状细胞癌的实验研究

目的 观察黏附性自然杀伤(A-NK)细胞体外生长与增殖能力,探讨其治疗裸鼠舌鳞状细胞癌移植瘤的效果及其作用机制,为临床治疗鳞癌提供理论依据。方法 抽取健康人外周血,分选出A-NK细胞和非黏附性自然杀伤(NA-NK)细胞体外培养,镜下观察细胞生长情况。建立裸鼠舌鳞癌皮下移植瘤模型,随机分成3组,每组7只小鼠,分别瘤旁注射生理盐水、A-NK细胞和NA-NK细胞,观察肿瘤体积变化,33 d后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤质量,绘制肿瘤生长曲线。结果 镜下观察,A-NK细胞在第15天达到增殖高峰,NA-NK细胞于第12天达到增殖高峰。培养3周后,A-NK细胞共增加39.33倍,NA-NK细胞仅增加16.33倍。生理盐水组裸鼠口腔舌鳞癌移植瘤体积大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组,3组裸鼠肿瘤体积在组间、时间和交互效应上差异均有统计学意义(P<0.01)。第33天,生理盐水组裸鼠瘤质量大于NA-NK细胞组和A-NK细胞组,NA-NK细胞组大于A-NK细胞组(P<0.05)。结论 A-NK细胞和NA-NK细胞均可在裸鼠体内诱导明显的抗肿瘤效应,且A-NK的抑瘤作用大于NA-NK细胞。     

尼美舒利对人舌鳞癌裸鼠移植瘤环氧化酶-2的影响

目的研究环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对人舌鳞癌裸鼠移植瘤的抑制作用,分析尼美舒利对COX-2基因及蛋白表达的影响,进一步探讨其抑癌机制。方法取人舌鳞癌Tca-8113细胞接种于16只裸鼠皮下,建立人舌鳞癌裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组和尼美舒利治疗组,计算尼美舒利的抑瘤率。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测裸鼠移植瘤组织COX-2mRNA表达。结果尼美舒利治疗组抑瘤率为47.2%。尼美舒利治疗组裸鼠移植瘤组织COX-2mRNA水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 COX-2抑制剂尼美舒利可下调COX-2基因表达,该作用可能是COX-2抑制剂抑制肿瘤血管生成从而抑制肿瘤生长的机制之一。     

AQP1基因沉默对前列腺癌PC-3细胞的影响

目的:探讨水通道蛋白1(AQP1)基因沉默对在前列腺癌PC-3细胞的作用.方法:培养PC-3细胞至对数生长期,随机分为质粒转染组和质粒空白组.针对AQP1基因设计合成小片段RNA,并构建高效表达载体.利用转染试剂Lipo-fectamineTM2000用脂质体介导的基因转染技术将质粒转染入PC-3细胞.RT-PCR检测PC-3细胞AQP1mRNA的表达情况及激光共聚焦观察室观察、拍照AQP1表达的情况,转染后72h.将鼠龄为6周的60只BALB/C-nu/nu雄裸鼠随机分成两组,其中正常对照组30只,转染组30只.转染组把转染后的前列腺癌PC-3细胞注射裸鼠腋窝处皮下;对照组把未经转染的前列腺癌PC-3细胞注射到裸鼠腋窝处皮下.每日观察肿瘤生长及体重情况,裸鼠饲养6周处死,完整取出移植瘤瘤体测量体积和重量.结果:与质粒空白组相比,转染组应用RNA干扰技术后AQP-1在前列腺癌PC-3细胞系中mRNA的水平降低,与对照组相比,转染组裸鼠移植瘤体积为(573.39±175.24) mm3明显小于对照组(1482.50±327.86) mm3,(P＜0.05).转染组肿瘤重量为(0.55±0.11)g明显小于对照组(1.31±0.29)g,差别具有统计学意义(P＜0.05).结论:AQP-1广泛的表达在正常前列腺组织和前列腺癌组织中,对内环境稳态起着重要的作用.更多的AQP-1促进了前列腺癌细胞的增长,抑制AQP-1的表达可以使前列腺癌移植瘤生长减慢,体积减小.     

靶向DcR3的siRNA抑制人结肠癌裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的以脂质体为载体,探讨靶向诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)的siRNA对人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。方法裸鼠背部皮下种植结肠癌SW480细胞,建立结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型。针对靶标DcR3基因,利用Dharmacon公司软件设计并合成siRNA序列,通过瘤体局部多点注射脂质体与DcR3 siRNA混合物,将DcR3 siRNA转染到裸鼠背部皮下移植瘤内。同时设立阴性对照组和空白对照组。观察肿瘤治疗前后体积变化,评价DcR3 siRNA对肿瘤的抑制作用;比较肿瘤治疗前后的细胞形态学改变;免疫组织化学及RT-PCR检测DcR3基因表达;原位细胞凋亡检测肿瘤的凋亡情况。结果治疗组肿瘤体积明显小于对照组,肿瘤组织内坏死面积增大,细胞凋亡率显著增高,DcR3蛋白表达水平降低。治疗过程中裸鼠生长良好,无明显毒性反应。结论脂质体介导的DcR3 siRNA对裸鼠皮下结肠癌SW480细胞移植瘤有明显抑制、杀伤作用,细胞凋亡是DcR3 siRNA所致肿瘤细胞死亡的重要形式。     

Her-2/neu siRNA表达质粒对前列腺癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 观察Her-2/neu siRNA表达质粒对前列腺癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 40只裸鼠皮下接种人前列腺癌PC-3M细胞,分成4组,每组10只.于形成的肿瘤内分别注射转染试剂FuGene HD与Her-2/neu siRNA表达质粒(A组)或无关非同源性序列质粒(B组)的复合物、转染试剂FuGene HD(C组)及生理盐水(D组),每周给药1次,连用4周.首次给药4周后取出肿瘤,测量肿瘤长短径及重量,流式细胞术检测肿瘤细胞周期及细胞凋亡,免疫组化方法 检测肿瘤组织中核增殖抗原(Ki67).结果 A组裸鼠移植瘤体积及重量均明显低于其它三组,凋亡指数显著高于其它三组(P<0.05).A组肿瘤细胞增殖指数显著低于C组(P<0.01).A组肿瘤组织中Ki67阳性的细胞数明显少于其它三组(P<0.01).结论 Her-2/neu siRNA表达质粒对裸鼠前列腺癌移植瘤的生长有抑制作用,并显著促进移植瘤细胞的凋亡.     

斑蝥酸钠抑制人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长及作用机制的实验研究

目的 初步探讨斑蝥酸钠对人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用及其可能的作用机制.方法 建立人胃癌细胞系BGC823裸鼠皮下移植瘤模型,观察斑蝥酸钠对移植瘤生长的影响,同时应用免疫组织化学和TUNEL法分别检测斑蝥酸钠作用前后移植瘤细胞的增殖活性和细胞凋亡情况.结果 不同浓度的斑蝥酸钠均能明显抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P＜0.01);斑蝥酸钠作用后肿瘤细胞的增殖活性明显低于作用前(P＜0.01);斑蝥酸钠作用后肿瘤细胞的凋亡指数显著高于对照组(P＜0.01).结论 斑蝥酸钠对人胃癌棵鼠皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其作用机制可能是通过抑制肿瘤细胞增殖或诱导肿瘤细胞凋亡而实现的.     

帕瑞昔布对人结肠癌SW1116细胞裸鼠移植瘤生长的影响及安全性观察

目的观察帕瑞昔布对人结肠癌SW1116细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及安全性。方法建立人结肠癌SW1116细胞裸鼠皮下移植瘤模型。将24只BALB/C裸鼠随机分为对照组、帕瑞昔布组和5-Fu组。记录各组裸鼠的体重和瘤体积变化,用药30 d后取瘤及脾脏,计算脾脏指数、抑瘤率,检测血清ALT和BUN,并用透射电镜观察瘤组织的形态学变化。结果帕瑞昔布组未见明显的药物相关毒副反应。帕瑞昔布能抑制SW11 16细胞裸鼠皮下移植瘤的生长。在干预前18 d,帕瑞昔布组的肿瘤抑制率逐渐增加,但随着药物干预时间的延长,抑制率却逐渐降低。结论裸鼠体内短期应用帕瑞昔布(15~18 d)是安全的,并能抑制SW1116细胞皮下移植瘤的生长。     

原代人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用组织块直接贴壁法将新鲜人结肠癌组织进行原代细胞培养,反复贴壁法和胰酶消化法使之纯化。纯化后的结肠癌细胞接种于裸鼠左侧腋处皮下。观察成瘤时间、肿瘤生长情况、移植肿瘤大小及裸鼠摄食、活动状况。实验结束后取移植瘤以HE染色和CEA及CK20免疫组化检验。结果本实验原代结肠癌细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后第8天见有移植瘤形成,成瘤率为80%。病理切片显示组织细胞排列成不规则腺体状,有核分裂相。CEA及CK20检验阳性。结论初步建立了人结肠癌的裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究结肠癌奠定了基础。     

珍珠菜总黄酮对白血病HL-60细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 研究珍珠菜总黄酮(ZE4)对白血病HL-60细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 成功建立人白血病HL-60细胞皮下移植瘤模型(移植瘤体积约100 mm3)后的30只裸鼠均分为五组:A、B、C组分别腹腔注射ZE4 100、200、400 mg/kg;D组注射环磷酰胺(CTX) 50 mg/kg;E组以生理盐水对照;每2天注射一次.21d后测量移植瘤大小,采用免疫组化法检测移植瘤组织中细胞增殖抗原Ki-67和血管内皮细胞膜抗原CD34的表达水平.结果 与E组比较,B和C组移植瘤生长明显抑制,抑瘤率分别可达51.32％和46.06％;免疫组化结果显示,B、C组移植瘤中Ki-67和CD34的表达明显少于E组.结论 ZE4对白血病HL-60细胞裸鼠移植瘤具有较明显的抑制作用,可能与其抑制肿瘤细胞增殖和肿瘤新生血管形成相关.     

ErbB2高表达的人乳腺癌原位移植瘤裸鼠模型的建立

目的采用人乳腺癌细胞株BT-474建立稳定高表达ErbB2的人乳腺癌裸鼠移植瘤模型,选择合适的模型制作方法。方法实验前1d在36只裸鼠颈部皮下埋植0.5mg17β雌二醇缓释片,并随机分为3组:原位组将5×106个BT-474细胞接种于裸鼠左侧第二乳房垫内,胁部皮下组将同样数量的BT-474细胞接种于裸鼠左侧胁部皮下,腋窝组则接种于裸鼠左侧腋窝内;观察3组裸鼠荷瘤情况及移植瘤病理组织学特点,并采用免疫组化方法动态监测移植瘤的ErbB2表达情况。结果 3组裸鼠的荷瘤率均为100%,都保持了原发肿瘤高表达ErbB2的特点;和两组对照相比,原位组肿瘤形状、生长速度及细胞增殖与血管生成等生物学特征一致性更强;此外,原位组的肿瘤对治疗药物处理也有良好反应。结论 BT-474细胞接种于乳房垫内比胁部皮下及腋窝建立的裸鼠移植瘤模型更适于进行抗ErbB2抗体等药物的药理学研究。     

提高人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤成瘤率的方法学研究

目的：提高人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤的成瘤率。方法：人肺腺癌SPC-A-1、GLC-82培养细胞或相应的瘤组织匀浆接种于裸鼠皮下之前,先用富含生长因子的小鼠肉瘤S180腹水上清液按比例稀释,然后在裸鼠背部或腋窝皮下接种。观察人肿瘤细胞或肿瘤组织在加入小鼠肉瘤S180腹水上清液后,对移植瘤生长速度及成瘤率的影响。结果：加入小鼠肉瘤S180腹水上清液后,人肺腺癌SPC-A-1和GLC-82成瘤率明显提高,而且移植后的人肿瘤生长速度较未加小鼠肉瘤S180腹水上清液的人肺腺癌细胞明显加快。结论：小鼠肉瘤S180腹水上清液能明显提高人肺腺癌SPC-A-1和GLC-82裸鼠皮下移植瘤的成瘤率,促进肿瘤生长。     

重组质粒白细胞介素-24对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的生长及血管生成的抑制作用研究

目的探讨基因重组质粒白细胞介素(IL)-24对人宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的生长及血管生成的抑制作用。方法对4周龄裸鼠注射人宫颈癌细胞株Hela细胞建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,把造模成功的裸鼠分为磷酸盐缓冲液(PBS)、空载质粒、基因重组质粒IL-243组,分别向瘤内注射PBS、pDC316+Lipofec-tamine2000、pDC316-hIL-24+Lipofectamine2000,比较干预后各组移植瘤的体积及微血管生成的情况。结果 IL-24基因成功转染入实验组肿瘤细胞并在其中成功表达,移植瘤的质量组间比较差异有统计学意义(P<0.01),PBS组、空载质粒组的移植瘤质量高于基因重组IL-24组(P<0.01),PBS组、空载质粒组移植瘤质量差异无统计学意义(P>0.05);PBS组、空载质粒组微血管密度显著高于重组IL-24组(P<0.01),但PBS、空载质粒组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IL-24能够抑制宫颈癌Hela细胞裸鼠移植瘤的生长,抑制肿瘤新生血管生长是抑制肿瘤生长的机制之一。     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的采用人肺腺癌SPC—A-1细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,为体内研究肺腺癌发病机制及靶向治疗提供工具。方法通过直接皮下注射细胞悬液法建立裸鼠皮下移植瘤模型,以每只2×10^6SPC-A-1细胞数接种于5只裸鼠右前肢腋窝皮下,观察成瘤时间、移植瘤长径、短径、重量、体积及病理形态等情况。结果5只裸鼠均成瘤,平均成瘤时间为7d,28d后瘤体平均长径为（19．20±3．85）mm,平均短径为（14．94±2．78）mm,平均瘤体体积为（2144．10±1237．72）mm^3,平均瘤重为（1．37±0．60）g。镜下见大多数移植瘤包膜完整,瘤细胞腺样排列,呈腺癌形态,部分瘤块中央还可见局灶性坏死。结论成功建立裸鼠皮下人SPC-A-1肺腺癌模型,有利于后续体内实验。     

人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人结肠癌SW480细胞移植瘤模型,研究其形态学及生物学特性。方法将处于对数生长期的人结肠癌SW480细胞接种于10只裸鼠右侧背部皮下,待瘤体生长至直径1～2 cm时处死裸鼠,取出肿瘤组织,将其磨碎并与培养基混合、过滤,滤液与基质胶混合,再将基质胶细胞悬液接种于30只裸鼠右侧背部皮下7,d后处死裸鼠,观察肿瘤大体特征,光镜及电镜下观察肿瘤病理学特征。结果接种SW480细胞的裸鼠于接种后4周有3只成瘤。接种基质胶细胞悬液的裸鼠在接种后7 d有28只成瘤,瘤体形状规则,肿瘤组织呈现典型癌变特征。结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型,该模型成瘤率高,瘤体形状规则,病理学改变与临床非常相似,为研究人结肠癌干预措施提供了较为理想的动物模型。     

粉防己碱对人膀胱移行细胞癌BIU-87细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的研究粉防己碱(TET)对人膀胱移行细胞癌BIU-87细胞株裸鼠移植瘤的作用机制。方法-14只裸鼠右后腿背侧皮下接种BIU-87移植瘤细胞后随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(7只)和25μg·mL-1TET治疗组(7只)。接种1个月后开始,每3 d一次于肿瘤局部注射给予PBS或TET,每3 d测量1次肿瘤大小;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达;Western-blot分析survivin、Capseae-3蛋白表达。结果 TET对人膀胱癌BIU-87细胞裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,抑制率达66.6%。RT-PCR检测结果显示,与PBS对照组相比,TET能明显下调移植瘤Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax mRNA的表达(P<0.05);Western-blot结果显示经TET处理后survivin蛋白出现明显下调,而Capseae-3蛋白的表达上调明显(P<0.05)。结论 TET能够抑制人膀胱癌BIU-87细胞裸鼠移植瘤的生长,其作用的分子机制与下调Bcl-2、survivin和上调Bax、Capseae-3基因表达有关。     

大肠癌裸鼠移植瘤实验模型的建立及T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1封闭载体的治疗作用

目的 通过建立大肠癌SW620细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1( Tiam1)封闭载体在动物体内的治疗作用.方法 构建编码一条短发夹RNA的Tiam1质粒表达封闭载体,并用之转染SW620细胞;应用Hoechst 33342荧光染色技术观察细胞形态学变化.将皮下接种SW620细胞的裸鼠分为3组,每组8只,在接种后第2周分别瘤内注射生理盐水(对照组)、HK错配链(HK组)和Tiam1封闭载体(Tiam1组).第16天处死各组裸鼠,取出移植瘤移重.结果 通过DNA测序证实封闭载体构建成功.SW620细胞经Tiam1封闭载体转染后,细胞核可见凋亡小体.对照组平均移植瘤重量(2.84±0.27)g,HK组(2.89±0.18)g,Tiam1组(1.47±0.20)g,Tiam1组与其他2组比较差异有统计学意义(P＜0.01),而HK组和对照组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 所构建的Tiam1封闭载体能有效抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长.     

人白细胞介素-24治疗人宫颈癌荷瘤裸鼠的实验研究

目的探讨人白细胞介素(hIL)-24基因重组质粒对人宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其作用机制。方法建立荷宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤模型,15只裸鼠随机分为3组:白细胞介素(IL)-24重组质粒组,空质粒组,磷酸盐缓冲液(PBS)组,根据肿瘤体积的生长情况绘制肿瘤生长曲线;处死裸鼠后切取瘤体并称质量,计算肿瘤抑制率;用流式细胞仪检测细胞周期。结果体内实验表明,IL-24重组质粒能够抑制肿瘤的生长,IL-24重组质粒组移植瘤的体积明显小于空质粒组和PBS组(P<0.05),空质粒组和PBS组移植瘤体积则差异无统计学意义(P>0.05)。IL-24重组质粒组抑瘤效果显著,其抑瘤率为56.5%,差异有统计学意义(P<0.05),空质粒组抑瘤率为1.3%,差异无统计学意义(P>0.05)。经流式细胞术检测,与空质粒组和PBS组比较,IL-24重组质粒组G0/G1期细胞增多(P<0.05),S期细胞减少,G2/M期细胞减少(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期,空质粒组和PBS组则差异无统计学意义(P>0.05)。结论于荷瘤裸鼠的瘤内注射IL-24重组质粒可抑制肿瘤生长,提示IL-24具有明显的体内抗肿瘤作用。     

紫花牡荆素对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究紫花牡荆素(CAS)对人宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立人宫颈癌HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为五组,每组5只,即生理盐水组、顺铂组、低剂量CAS组、中剂量CAS组和高剂量CAS组。观察各组裸鼠移植瘤生长情况,裸鼠体质量变化,骨髓抑制情况,肝、肾功能损伤情况等。结果 CAS对移植瘤生长有明显抑制作用,呈剂量和时间依赖性;而对裸鼠体质量,骨髓抑制,肝、肾功能均无明显影响。结论 CAS具有抑制人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的作用,而无骨髓抑制,肝、肾功能损害。