丝裂原活化蛋白激酶通路对慢支大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的影响及枇杷叶三萜酸的作用机制

目的探究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路对慢性支气管炎(CB)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)生成的影响及枇杷叶三萜酸(TAL)的作用环节。为TAL治疗慢支的抗炎作用机制提供进一步的实验依据。方法以AM为实验平台分别给予MAPK 3条通路(ERK,p38,JNK)的特异性阻滞剂,用RT-PCR和Westernblot的方法来分别检测CB大鼠AM中TNF-α的mRNA及蛋白的表达水平。并采用析因实验设计,ELISA法检测AM培养上清中的TNF-α的水平。结果RT-PCR和Western blot的结果均显示ERK特异性阻滞剂(PD98059)和p38特异性阻滞剂(SB203580)对CB大鼠AM中TNF-α的表达有明显的抑制作用。析因分析结果表明TAL、特异性阻滞剂(PD98059和SB203580)及其交互作用项对TNF-α含量的影响存在统计学意义。结论TAL对TNF-α的抑制作用可能与其作用于ERK和p38通路有关,这可能是TAL治疗与防治慢支的主要作用环节之一。     

MAPK通路对慢支大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α表达的影响及枇杷叶三萜酸的作用环节研究

目的：观察丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路对慢性支气管炎（CB）大鼠肺泡巨噬细胞（AM）中细胞因子TNF-α生成的影响,并初步探讨枇杷叶三萜酸（TAL）的作用环节。方法：分离纯化CB模型大鼠的AM,以AM为实验平台。用RT-PCR法检测TAL（0．05,0．5,5,50,500mg／L）对TNF-α生成的影响;用WesternBlot的方法检测MAPK三条通路对CB大鼠AM中TNF—α的蛋白表达的影响,并使用TAL与MAPK通路阻滞剂联合给药的方法进一步验证TAL的作用环节。结果：RT-PCR法检测结果显示50mg/L组的TAL对CB大鼠AM中TNF—α抑制作用最为显著（P〈0．01）;WesternBlot检测结果显示MAPK三条通路中p38对TNF-α生成的抑制作用最为显著（P〈0．01）;与单用TAL或SB203580组比较,SB203580＋TAL组TNF-α蛋白的表达减少,且有统计学意义（P〈0．05）。     

枇杷叶三萜酸对慢性支气管炎大鼠肺泡巨噬细胞花生四烯酸代谢的影响

目的：观察枇杷叶三萜酸（TAL）对大鼠慢性支气管炎（CB）的治疗作用并探讨其对慢支大鼠肺泡巨噬细胞（AM）花生四烯酸（AA）代谢的影响，从而探讨其对慢性支气管炎治疗作用的部分机制。方法：联用BCG尾静脉注射和小剂量LPS气管内注入的方法建立大鼠慢性支气管炎模型，观察TAL灌胃给药对大鼠慢性支气管炎的防治作用及其对AM释放LTB4及PGE2的影响。采用高效液相色谱法及放射免疫法分别测定AM培养上清中白三烯B4（LTB4）及前列腺素E2（PGE2）的含量。     

强心饮对心肌病大鼠模型细胞凋亡因子的影响

目的研究强心饮对阿霉素诱导的心肌病心力衰竭大鼠模型的细胞凋亡相关因子表达的影响,以探讨强心饮对心肌细胞凋亡的作用机制。方法雄性Wistar大鼠分为6组,除空白组外,均采用尾静脉每周注射阿霉素2mg/kg,共6周,治疗组同时分别给于强心饮高、中、低剂量(含生药17.3g/kg、8.65g/kg、4.325g/kg),西药对照组给予培哚普利。治疗结束后,观测心力衰竭大鼠心肌细胞的凋亡情况(TUNEL法),检测B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白X(BAX)。结果强心饮能够减少模型大鼠心肌细胞凋亡,提高Bcl-2/BAX的比值。结论强心饮通过调控Bcl-2/BAX的表达,有效的阻止了心肌细胞凋亡发生。     

地塞米松对慢性支气管炎肺泡巨噬细胞释放TNF_αTXB_2和6-keto-PGF_(1α)的影响

通过支气管肺泡灌洗（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅ，ＢＡＬ）从１３例慢性支气管炎缓解期病人和１１例正常人获得的肺泡巨噬细胞（ａｌｖｅｏｌａｒｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ，ＡＭ）加入地塞米松４ｍｇ／Ｌ及脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）１ｍｇ／Ｌ体外培养２４小时。结果显示两组ＡＭ合成分泌的ＴＮＦα、ＴＸＢ２和６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１α呈下降趋势，两组间ＡＭ合成分泌的这些活性分子均呈显著差异性（Ｐ＜０．０５）。表明地塞米松抑制ＡＭ的活化，可能慢支病人呼吸道内ＡＭ功能相对亢进。     

脂多糖和地塞米松对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

<正>急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是常见的破坏性极大的,以肺泡及肺实质发生急性炎症过程为特征的临床综合征,目前被认为是一种介质病。越来越多的证据表明[1,2],肺泡巨噬细胞(PAMs)激活后通过分泌炎性细胞因子、趋化因子、损伤介质和抗炎性细胞因子等,在ALI的发生、发展及转归中发挥重要作用。ALI时肺部免疫细胞的凋亡异常在发病中的作用越来越受到关注[3]。     

茶多酚对PM2.5诱导的大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的抑制作用

目的 研究茶多酚（tea polyphenols,TP）对SRM 2786（PM_2.5标准品）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养NR8383细胞,将其分组为对照组、模型组（125 μg·mL^–1的SRM 2786染毒组）及TP干预组（43.75,87.5,175,350 μmol·L^–1 TP+125 μg·mL^–1 SRM 2786）,分别干预24 h后,检测细胞存活率、氧化损伤（ROS和NO释放）、炎症因子释放（IL-6、IL-1β及TNF-α）、细胞凋亡率、线粒体损伤及caspase-3/caspase-9活性。结果 与对照组相比,SRM 2786可显著抑制NR8383细胞存活率,促进NO和ROS释放,促进3种炎症因子释放、线粒体损伤、细胞凋亡及caspase-3/caspase-9活性提升。而TP可显著性抑制SRM 2786诱导的NR8383细胞氧化损伤、炎性损伤、线粒体损伤,最终通过抑制caspase-3/caspase-9活性而降低细胞凋亡率,达到提高细胞存活率的目的。结论 TP可通过降低细胞氧化损伤、炎性损伤和caspase-3/caspase-9活性而抑制PM_2.5诱导的NR8383细胞线粒体途径凋亡,提高NR8383细胞活性。     

麻黄-大黄药对抑制肺泡巨噬细胞M1极化防治急性肺损伤的作用机制

目的 探讨麻黄-大黄(Mahuang-Dahuang, MD)药对抑制肺泡巨噬细胞M1极化,减轻炎症损伤,治疗急性肺损伤的作用和机制。方法 Wistar大鼠分为正常对照组(NC)、模型组(MC)、MD高(MD-H)、中(MD-M)、低剂量组(MD-L)阳性药对照组(DXMS),脂多糖腹腔注射制备急性肺损伤模型,造模后给予MD灌胃,观察肺组织病理变化;免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞标记物F4/80表达,F4/80和CD80、CD80和IL-6的共表达;流式细胞术检测肺组织F4/80和CD80含量的变化;PCR检测肺组织中IL-6、INOS、TNF-αmRNA相对表达;Western blot检测肺组织中CCR2、CCL2、p-p65、p65、p-p38MAPK、p38MAPK蛋白表达。结果 与NC组比较,MC组大鼠肺泡结构破坏,肺间质水肿、增厚、炎细胞浸润,其中巨噬细胞数量明显增多,CCR2、CCL2蛋白表达增强,肺组织M1肺泡巨噬细胞数量增多、表达增强,炎症因子IL-6、INOS、TNF-αmRNA相对表达上调,p-p65/p65,p-p38MAPK/p38MAPK蛋白表达上调;与MC...     

卡托普利对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响

目的:研究心肌细胞凋亡和凋亡相关基因在心力衰竭发展中的变化及卡托普利的干预作用,从细胞凋亡角度探讨血管紧张转化酶抑制剂治疗心力衰竭的机制。方法:选用雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham组)、心梗组(M I组)和心梗后卡托普利干预组(M I+C ap组),经冠脉前降支结扎术建立心肌梗死模型,术后24小时的M I+C ap组大鼠给予C ap 400m g.kg-1.-d 1,饮水给药,sham组和M I组大鼠饲普通饮用水。术后4周、6周检测大鼠非心梗区心肌细胞凋亡指数;w estern蛋白印迹检测心肌细胞凋亡加速基因Bax和凋亡抑制基础B cl-2的蛋白表达水平,并计算Bax/B cl-2蛋白比;压力传感器记录左室血流动力学改变。结果:①术后6周非心梗区心肌细胞凋亡指数,M I组及M I+C ap组均显著高于sham组(P<0.01),但M I+C ap组显著低于M I组(P<0.01);②与sham组相比,M I组和M I+C ap组术后6周时的Bax蛋白表达量均显著增高(P<0.01),但M I+C ap组显著低于M I组(P<0.01);M I组和M I+C ap组的B cl-2蛋白表达量均低于sham组(P<0.01),而M I+C ap组显著高于M I组(P<0.01);③M I组和M I+C ap组大鼠的心功能明显降低(与sham组比,P<0.01),而M I+C ap组大鼠的心功能显著改善(与M I组比,P<0.01)。结果:血管紧张素转化酶抑制剂可通过调节凋亡相关基因Bax和B cl-2的蛋白表达,减少心肌细胞凋亡,改善心功能。     

丝裂原活化蛋白激酶亚族p38信号转导通路与慢性支气管炎的关系

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是体内四大信号转导系统之一,现已发现p38、ERK5/BMK1、ERK以及JNK/SAPK 4个亚族。它参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡及细胞间功能同步等多种细胞过程,其中p38通路在炎症反应过程中起着非常重要的作用。在慢性支气管炎(chronic bronchitis)的进程中,p38通路通过对肺泡巨噬细胞(AM)等多种细胞的作用、对多种炎症因子生成的调控、对酶的诱导以及促进转录因子活化等机制来调节炎症过程的发生发展。该文就p38通路在慢支发病中的作用及研究进展作一综述。     

ERK／MAPK信号传导通路在胃肠道肿瘤治疗靶向中的意义

细胞外信号调节激酶／丝裂原活化蛋白激酶（ERK／MAPK）信号传导通路在胃肠道肿瘤的发生和发展中有着重要的作用。ERK／MAPK信号传导通路有3个重要分子靶：小G蛋白Ras、Raf激酶及其MEK1／2和ERK1／2。目前主要有3种抑制ERK／MAPK信号传导通路的办法：（1）破坏靶蛋白的结构和（或）功能;（2）采用功能缺失策略;（3）破坏蛋白与蛋白之间的相互作用。这些办法可为胃肠道肿瘤的治疗提供新的思路。     

慢性支气管炎局部神经功能紊乱对肺泡巨噬细胞的影响

目的 探讨肾上腺素神经和胆碱能神经在慢性支气管炎中的作用及作用机制.方法 分别检测慢性支气管炎（慢支）组、慢性支气管炎合并肺气肿组患者和正常对照组外周血、支气管肺灌洗液（BALF）中胆碱脂酶（ChE）和去甲肾上腺素（NE）的含量,支气管肺泡灌洗液肺泡巨噬细胞内环磷酸腺苷（cAMP）及环磷酸鸟苷（cGMP）含量.结果 慢支组与正常组BALF中ChE无显著差异,而NE升高;在慢支合并肺气肿组患者BALF中ChE较正常组增高,而NE较正常对照组少;慢支组BALF AM内cAMP/cGMP比值正常, 而慢支合并肺气肿组AM内cAMP/cGMP较正常对照组明显降低,β2-受体激动剂（舒喘灵）作用于AM后,慢支组cAMP/cGMP比值上调,而慢支肺气肿组AM内cAMP/cGMP比值无明显变化.结论 肾上腺素神经、胆碱能神经及肾上腺素受体参与了慢性支气管炎的发生发展过程,在不同的疾病阶段其作用不同.     

远志YZ-50对慢性应激抑郁模型大鼠海马Bax、Bcl-2表达的影响

目的：探讨远志YZ-50对慢性应激抑郁模型大鼠海马神经元凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响。方法：采用健康雄性Ⅱ级Wistar大鼠慢性应激抑郁模型，通过免疫组化染色法检测模型大鼠海马区凋亡调控因子Bax、Bcl-2蛋白的表达，从分子水平探讨在给予远志YZ．50后凋亡调控因子Bax、Bcl-2在慢性应激抑郁大鼠海马组织的变化规律。本实验共设五组，分别是空白对照组、慢性应激模型组、地昔帕明组（20mg·kg^-1）、YZ-50低剂量组（2．8g生药·kg^-1）、YZ-50高剂量（5．6g生药·kg^-1）组。结果：在给予大鼠慢性应激刺激21d，造成应激抑郁模型后，通过检测表明模型组动物Bax蛋白的表达明显增加，Bcl-2蛋白表达很弱；YZ-50低、高剂量组动物Bcl-2蛋白的表达与模型组动物相比明显增加；Bax蛋白的表达与模型组动物相比均显著降低（P〈0．05）。结论：YZ-50能够提高慢性应激抑郁模型大鼠海马区CA3区Bcl-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达，调控Bcl-2／Bax比例而抑制神经细胞的凋亡，减少外界刺激对脑部神经元的损害，从而改善其抑郁状态。     

雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的观察雷米普利对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法大鼠口服雷米普利(1 mg.kg-1)或等剂量生理盐水,24 h后制备心肌缺血30m in再灌注120 m in模型,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定心肌梗死范围,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测心肌细胞凋亡并用免疫组化方法测定抑凋亡基因(Bc l-2)和促凋亡基因(Bax)的表达。结果与对照组相比,雷米普利组由缺血/再灌注损伤引起的心肌梗死范围缩小,细胞凋亡指数减少且DNA琼脂糖凝胶电泳呈现减弱的DNA梯形图谱,Bc l-2表达增加以及Bc l-2/Bax比值增加。结论雷米普利通过减少/缺血再灌注心肌细胞坏死和凋亡以及上调抑凋亡基因Bc l-2的表达发挥心脏保护作用。     

镍染毒大鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨硫酸镍诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的类型及其对生精细胞Bcl-2、Bax蛋白表达和雌二醇水平的影响。方法健康性成熟Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组,正常对照组,硫酸镍1.25、2.5、5.0 mg/kg 3个剂量组。腹腔注射染毒,1次/d,连续30 d。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化SABC法检测生精细胞Bcl-2和Bax蛋白表达;放射免疫法检测血清雌二醇(E2)水平。结果与对照组比较,各剂量组大鼠睾丸生精细胞凋亡增多(P<0.05),且凋亡细胞主要是生精早期和晚期阶段的精原细胞和精母细胞。各剂量组大鼠生精细胞Bcl-2阳性表达减少而Bax阳性表达增多,且血清E2水平降低(P<0.05)。结论硫酸镍可诱导大鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡,其机制可能与生精细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调以及雌二醇水平降低有关。     

醛固酮受体拮抗剂对心肌细胞凋亡的影响

目的研究醛固酮受体拮抗剂螺内酯对急性心肌梗死心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的作用。方法通过结扎左冠状动脉前降支造成大鼠左室大面积心肌梗死模型。SD大鼠随机分为心肌梗死对照组(AMI组,0.9%氯化钠溶液2ml/d灌胃,n=24)和螺内酯治疗组(Spi组,螺内酯20mg/kg/d,2ml灌胃,n=24),另设假手术组(Sham组,0.9%氯化钠溶液,2ml/d灌胃,n=24)。分别于术后2、7、14、21d观察下列指标:用流式细胞学方法测定非梗死心肌细胞凋亡率及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与Sham组相比较,AMI组大鼠和Spi组非梗死区心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.01);BCL-2蛋白表达降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05);与AMI组比较,大鼠心肌细胞凋亡率和非梗死区心肌细胞BCL-2蛋白表达在2d、7d差异无统计学意义(P>0.05),14d、21d有所升高(P<0.05)。Bax蛋白表达在2d、7d差异无统计学意义(P>0.05),14d、21d有所降低(P<0.05)。结论螺内酯治疗可减少心肌细胞凋亡,同时增加凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达和减弱Bax蛋白的表达。     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨茅莓总皂苷对缺血性脑损伤的神经保护机制。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血2h,再灌注24 h模型,以HE染色,TUNEL标记和免疫组化的方法观察茅莓总皂苷5、10、20 mg.kg-1对凋亡细胞数目及相关蛋白Bc l-2,Bax表达的变化。结果3个剂量的茅莓总皂苷治疗组显示神经元形态病理改变明显减轻,降低残存细胞中TUNEL阳性细胞的百分率。增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,Bc l-2/Bax的表达比例增加。结论茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用,其机制可能与增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,提高Bc l-2/Bax有关。     

黄芪杂多糖对佐剂性关节炎大鼠促炎因子分泌及关节滑膜细胞凋亡的调节作用

建立大鼠佐剂性关节炎 (AA) 模型, 研究黄芪杂多糖 (AHPS) 对佐剂性关节炎大鼠促炎因子分泌及关节滑膜细胞凋亡的调节作用。采用常规病理组织学检查大鼠膝关节滑膜, 放射免疫法测定血清中IL-1β和TNF-α的含量, Tunel检测滑膜细胞凋亡, 免疫组化检测Bcl-2、Bax表达, 并进行足爪容积测定和关节炎症评分。结果显示: AHPS和雷公藤多苷 (TWP) 均能显著改善AA大鼠原发和继发性临床症状及关节滑膜炎的炎性变化; AHPS (1 000和500 mg·kg⁻¹)及TWP (60 mg·kg ⁻¹) 可使AA大鼠的血清TNF-α、IL-1β水平显著降低 (P < 0.01或P < 0.05), 并可使AA大鼠的膝关节滑膜细胞凋亡数量显著升高 (P < 0.01或P < 0.05); AA大鼠的Bax阳性表达率有所升高 (P > 0.05), Bcl-2阳性表达率升高显著 (P < 0.01), 而AHPS (1 000和500 mg·kg⁻¹) 可显著下调AA大鼠膝关节滑膜Bcl-2的阳性表达和上调Bax的阳性表达 (P < 0.01或P < 0.05)。结果表明: AHPS诱导AA大鼠膝关节滑膜细胞凋亡的作用与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关, 抑制促炎因子分泌是其抗炎症作用的分子机制之一。     

DIDS对Bcl-2/Bax在staurosporine诱导心肌细胞凋亡中表达的影响

目的探讨氯离子通道阻断剂DIDS(4,4′-diisothiocy-ano-2,2′-stilbene-disulfonic acid)对staurosporine(STS)诱导心肌细胞凋亡的调节蛋白Bcl-2/Bax表达的影响。方法在STS诱导心肌细胞凋亡模型上,观察DIDS对心肌细胞存活率、caspase-3活性、Bcl-2/Bax蛋白表达水平及Bax细胞内分布的影响。实验分组:对照组、STS组、DIDS组。结果与STS组比较,DIDS能够明显抑制STS诱导的心肌细胞凋亡发生,心肌细胞存活率增加,caspase-3活性水平降低(P<0.01)。对照组、STS组和DIDS组在全细胞水平上Bcl-2、Bax表达差异无显著性(P>0.01),在亚细胞水平上发现STS组有明显的Bax蛋白从胞质向线粒体转位,DIDS可以抑制STS诱导的Bax线粒体转位。结论DIDS抑制心肌细胞凋亡可能与抑制促凋亡分子Bax由胞质向线粒体转位有关。