扇贝糖蛋白抗肿瘤活性初步研究

<正> 近年,随着海洋药物的深入研究,发现了许多结构新颖、生理活性特殊的物质。特别是由海洋贝类中提取分离的糖蛋白具有较强的抗肿瘤活性,引起广泛关注,日本报导虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)中的糖蛋白有很强的肿瘤抑制作用。为此,对我国北方主要养殖的栉孔扇贝中的糖蛋白进行了抗肿瘤初步研究。1.材料与方法 1.1 材料     

栉孔扇贝不同部位多糖的提取分离及抗肿瘤活性研究

目的 研究栉孔扇贝不同部位（柱、性腺、肝脏、外套膜、鳃、足）多糖的抗肿瘤活性。方法 以新鲜栉孔扇贝为原材料,经胰蛋白酶水解、醇沉后得到栉孔扇贝不同部位多糖,通过柱前衍生高效液相色谱法进行栉孔扇贝不同部位多糖的单糖组成分析,以人宫颈癌细胞（Hela）和人肝癌细胞（HepG2）为对象对栉孔扇贝不同部位多糖的抗肿瘤活性进行研究。结果 从新鲜栉孔扇贝中提取得到六种多糖,分别为栉孔扇贝柱多糖（CFCP）、栉孔扇贝性腺多糖（CFGOP）、栉孔扇贝肝脏多糖（CFLP）、栉孔扇贝外套膜多糖（CFMP）、栉孔扇贝鳃多糖（CFGIP）、栉孔扇贝足多糖（CFFP）,其中CFCP仅含一种单糖,其余五种多糖均含十种单糖,且单糖摩尔比各不相同。栉孔扇贝六种部位多糖对Hela细胞的抑制率均随多糖浓度的增大而增大,其中CFLP抑制率最强。CFCP、CFGOP、CFMP对HepG2细胞的抑制率均较弱,CFLP、CFGIP、CFFP对HepG2细胞的抑制率均随多糖浓度的增大而增大,其中CFFP抑制率最强。结论 栉孔扇贝不同部位多糖对Hela细胞的抑制率由高到低依次为CFLP>CFGOP>CFMP>CFGIP>CFFP,对HepG2细胞的抑制率由高到低依次为CFFP>CFLP>CFGIP。同时,CFFP、CFMP、CFGIP、CFLP、CFGOP五种多糖对Hela细胞的抑制作用普遍高于HepG2细胞。     

扇贝糖蛋白中蛋白及多糖的组成

目的研究扇贝糖蛋白的蛋白及多糖的含量及组成。方法栉孔扇贝（Chlamys farreri）的扇贝边经水煮、分离纯化、醇沉及酶解等分离出扇贝酸性糖蛋白（FAGP）、扇贝中性糖蛋白（FNGP）、及扇贝多（FPS）；通过纸层析（PC）、氨基酸分析、UV、IR、元素分析等技术确定其单糖及元素组成。结果PC分析FAGP单糖组成为：葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、岩藻糖、半乳糖、木糖、葡萄糖醛酸。主要元素含量C42．62％、H5．73％、N6．81％。     

扇贝裙边中糖胺聚糖的气相色谱定性定量分析及红外光谱分析

目的 对栉孔扇贝和海湾扇贝裙边中提取分离的糖胺聚糖进行化学组成及结构研究。方法 样品经盐酸—甲醇试剂醇解成单糖．采用标准对照法及内标法进行气相色谱定性定量测定。样品经KBr压片，红外光谱扫描(4000～500cm^-1)。结果 测定出栉孔扇贝糖胺聚糖中单糖含量分别为鼠李糖0．75％，木糖0．63％，岩藻糖0．67％，甘露糖0．97％，葡萄糖1．11％，半乳糖1．59％。红外光谱测定结果显示，栉孔扇贝和海湾扇贝糖胺聚糖具有典型酸性黏多糖的吸收特征。结论 从栉孔扇贝裙边中提取分离的糖胺聚糖，分子中含有中性糖基。与标准品的红外光谱进行比较．两种扇贝糖胺聚糖均与透明质酸的红外光谱相似。     

二色桌片参的化学成分研究Ⅳ二色桌片参糖蛋白的分离性质与抗肿瘤 …

二色桌片参「Ｍｅｎｓａｍａｒｉａ ｉｎｔｅｒｃｅｄｅｎｓ（Ｌａｍｐｒｔ）」的体壁经水煮提、分离、最后经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析纯化得二色桌片参糖蛋白Ｉ（ＧＰＭＩ－Ｉ）。ＧＰＭＩ－Ｉ经酶解后得二色桌片参糖蛋Ⅱ（ＧＰＭＩ－Ⅱ）。分别研究了ＧＰＭＩ－Ｉ和ＧＰＭＩ－Ⅱ的性状、化学组成和抗肿瘤活性,结果表明：ＧＰＭＩ－Ｉ和ＧＭＰＩ－Ⅱ都是糖蛋白,但蛋白组成和糖含量明显不同。ＧＰＭＩ－Ⅱ对小鼠Ｓ１８     

二色桌片参的化学成分研究Ⅳ二色桌片参糖蛋白的分离性质与抗肿瘤活性的研究

二色桌片参〔Mensamaria intercedens( L ampert)〕的体壁经水煮提、分离、最后经 Sephadex G- 2 0 0柱层析纯化得二色桌片参糖蛋白 ( GPMI- )。GPMI- 经酶解后得二色桌片参糖蛋白 ( GPMI- )。分别研究了GPMI- 和 GPMI- 的性状、化学组成和抗肿瘤活性 ,结果表明 :GPMI- 和 GPMI- 都是糖蛋白 ,但蛋白组成和糖含量明显不同。GPMI- 对小鼠 S180 肉瘤有明显抑制作用 ,而无直接毒性 ,抑瘤率为 4 8.8%。而 GPMI- 却能显著提高 S180 肉瘤荷瘤小鼠的脾指数 ,呈免疫增强作用。     

管角螺肌肉中性糖蛋白的化学组成及抗肿瘤活性研究

目的:研究海洋软体动物管角螺Hemifusus tuba(Gmelin)肌肉中糖蛋白的化学组成、理化性质及抗肿瘤活性。方法:管角螺肌肉用盐水浸提,水提取液再经DEAE-cellulose、Sephadex G-100柱层析分离,冷冻干燥得到1种中性糖蛋白(Neutral Glycoprotein of H.tuba,NGH)和3种酸性糖蛋白(Acidic Glycoprotein ofH.tuba,AGH);HPLC对NGH进行了纯度检测及相对分子质量测定,改良的苯酚-浓硫酸和Folin酚法测总糖、总蛋白质的含量,气相色谱法测定糖组成,IR和NMR法确定糖苷键类型。结果:NGH为均一性组分,相对分子质量为7.66×10~5,其总糖含量为89.6％,蛋白质含量为7.2％;糖组成分析表明:糖链部分主要由半乳糖及少量的甘露糖和葡萄糖组成,其物质的量比为23.5:2.6:1.0;IR及~1HNMR谱分析表明:其单糖残基为α-吡喃构型。初步药理实验表明:NGH对小鼠S_(180)肿瘤具有显著的抑制作用。     

顺糖氨铂(Ⅱ)的合成

以氯铂酸钾为原料，经硫酸氨铂(Ⅱ)中间体制得抗肿瘤药物顺糖氨铂(Ⅱ)，操作简便，总收率46．1％。     

扇贝糖蛋白及多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的:研究扇贝糖蛋白及扇贝多糖对S180小鼠的抑瘤作用。方法:给小鼠接种S180腹水瘤,用不同剂量扇贝糖蛋白及扇贝多糖治疗,观察瘤重及脾脏重量。结果:40 mg·kg-1扇贝糖蛋白对S180小鼠抑瘤率为47．29％,20 mg·kg-1扇贝多糖抑瘤率为46．97％;扇贝多糖还可明显增加小鼠脾脏重量。结论:扇贝糖蛋白及扇贝多糖抑瘤效果显著,扇贝多糖还具增强免疫功能作用。     

扇贝糖胺聚糖对六羟基多巴胺诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

<正>研究报道[1-2]多种海洋多糖可通过抗氧化应激发挥神经保护作用,但海洋贝类多糖神经保护活性的研究则鲜有报道。扇贝糖胺聚糖(Chlamys farreri skirts glycosaminoglycan,CFS-GAG)是本组从海洋贝类栉孔扇贝裙边中提取的活性成分,已获专利(专利号:ZL200410035656.3)。已证实CFSGAG对血管内皮细胞氧化应激损伤有保护作用[3],本文研究其对六羟基多巴胺(6-OHDA)诱导SH-SY5Y神经元细胞凋亡的保护作用。     

栉孔扇贝边的营养价值和应用研究

采用酶解方法制备栉扇贝蛋白粉。测定了扇贝蛋白粉与扇贝柱中的氨基酸含量，分别为８３．８４％和７６．１５％，两者中氨基酸的组成比例基本一致。     

Polypeptide from Chlamys farreri attenuates murine thymocytes damage induced by ultraviolet B

Aim： Polypeptide from Chlamysfarreri （PCF, molecular mass is 879） is a new marine polypeptide compound isolated from Chlamysfarreri. This study investigates the possible protective roles and the mechanism of PCF against ultraviolet B （UVB）-induced apoptosis in murine thymocytes. Methods： The rate of apoptosis and caspase-3 activation was measured by flow cytometry. The expression of stress-response genes c-fos and c-jun was observed by RT-PCR. Western blot analysis was performed to determine the release of cytochrome c. Results： It was found that UVB induced murine thymocyte death. The cells treated with UVB showed an increase in cytochrome c release, caspase-3 activity, as well as in the expression of c-fos and c-jun. In addition, all were involved in UVB-induced cell apoptosis. Conclusion： Our present observations pointed to the ability of PCF to avert UVB-induced apoptosis in thymocytes by modulating c-fos and c-jun expression, cytochrome c release, and the consequent activation of caspase-3, which were essential components of the UV-induced cell apoptotic pathway. The results suggested that PCF is a promising protective substance against UV radiation.     

海洋肽的体外抗氧化作用

海洋肽系栉了孔扇贝中提取的多肽,分子量为800～1000。为研究其抗皮肤衰老的作用机制,测定了海洋肽对由邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子、Fenton反应产生羟自由基的清除率,过氧化脂质的最终分解产物丙二醛(MDA),油脂过氧化值(peroxide value,POV)。结果表明,海洋肽(3％,15％)对超氧阴离子的清除率分别为11.7％和41.8％,对羟自由基的清除率分别为8.6％和38.4％,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。同时,海洋肽(0.05％,0.50％)能降低5d和10d的POV和MDA含量(P<0.05,0.01)。实验证明,海洋肽通过有效清除超氧阴离子、羟自由基并抑制脂质过氧化而抗皮肤老化。     

海洋肽的皮肤毒理学研究

为确保海洋肽面膜使用的安全性,并为产品应用提供实验依据,对海洋肽的皮肤毒理学进行了研究。应用豚鼠皮肤急性毒性、刺激性和过敏性实验,对海洋肽面膜进行安全性评价。结果表明,海洋肽面膜(5倍)对完整皮肤未引起急性毒性反应,单次和多次实验皮肤未出现水肿和红斑反应,病理检查,皮肤结构完整,层次清晰;经致敏接触和激发接触,2,4-二硝基氯苯组皮肤平均反应值0.9～1.0,致敏率为90％～100％,海洋肽面膜皮肤致敏率10％。提示该产品未引起皮肤急性毒性反应,无刺激性,为轻度致敏物。     

扇贝多肽保护单次UVA氧化损伤HaUaT细胞

目的探讨扇贝多肽对单次长波紫外线辐射HaCaT角质形成细胞氧化损伤的保护作用机制。方法从栉孔扇贝中提取扇贝多肽(PCF,Mr=879)。UVA辐射强度为5J·cm-2。酶生化法测定胞质SOD,GSH-px活性,ROS、MDA水平;透射电镜观察细胞超微结构的改变;原位杂交技术检测细胞内p21mRNA的变化。结果在5J·cm-2UVA辐射下,在给定浓度范围内PCF能剂量依赖性降低胞质ROS、MDA水平;提高SOD,GSH-px活力;电镜下可见PCF可保护细胞超微结构;p21mRNA原位杂交发现PCF可明显抑制其表达。结论扇贝多肽对单次UVA诱导的人HaCaT细胞氧化损伤有保护作用。其机制与清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、抑制p21mRNA表达及细胞凋亡有关。     

扇贝多肽保护单次UVA氧化损伤HaCaT细胞

目的探讨扇贝多肽对单次长波紫外线辐射HaCaT角质形成细胞氧化损伤的保护作用机制。方法从栉孔扇贝中提取扇贝多肽(PCF,Mr=879)。UVA辐射强度为5J·cm-2。酶生化法测定胞质SOD,GSH-px活性,ROS、MDA水平;透射电镜观察细胞超微结构的改变;原位杂交技术检测细胞内p21mRNA的变化。结果在5J·cm-2UVA辐射下,在给定浓度范围内PCF能剂量依赖性降低胞质ROS、MDA水平;提高SOD,GSH-px活力;电镜下可见PCF可保护细胞超微结构;p21mRNA原位杂交发现PCF可明显抑制其表达。结论扇贝多肽对单次UVA诱导的人HaCaT细胞氧化损伤有保护作用。其机制与清除氧自由基、提高抗氧化酶活性、抑制p21mRNA表达及细胞凋亡有关。     

Inhibitory effect of polypeptide from Chlamys farreri on UVA-induced apoptosis in human keratinocytes

Polypeptide from Chlamys farreri (PCF, Mr = 879) is a novel marine active product isolated from gonochoric Chinese scallop Chlamys farreri which has been served as sea food for several thousand years. As an octapeptide, PCF consists of 8 amino acids, namely, Pro, Asn, Ser, Thr, Arg, Hyl, Cys, and Gly. PCF had been identified as a marine chemopreventive drug that protected hairless mice's epidermis against UV-induced damage in our previous study. However, the molecular mechanisms that underlie the effect of PCF on ultraviolet A-induced apoptosis in ketatinocytes are not well understood yet. In the present study, PCF was investigated as a potential inhibitory agent for UVA-induced apoptosis in a human keratinocyte cell line, HaCaT. The effects of PCF on UVA-induced generation of ROS and MDA, DNA damage, apoptosis rate were examined. We also investigated whether PCF could inhibit UVA-induced decreasing of mitochondrial membrane potential and the changing of morphology of the cells. We found that, compared with UVA only group, PCF attenuated UVA-induced generation of ROS and MDA, increased the mitochondrial membrane potential, and decreased the apoptosis rate. These results indicate that PCF may protect HaCaT keratinocytes against UVA-induced apoptosis.     

扇贝多肽对UVA损伤HaCaT细胞UCP2表达及线粒体功能的影响

目的探究紫外线A(ultraviolet A,UVA)损伤对HaCaT角质形成细胞线粒体解偶联蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)表达的影响以及扇贝多肽(polypeptide from Chlamysfarreri,PCF)的调节作用,并研究PCF对UVA损伤HaCaT细胞线粒体功能的保护作用。方法复制8 J.cm-2 UVA辐射损伤HaCaT角质形成细胞模型,免疫印迹法检测UVA损伤后HaCaT细胞UCP2蛋白表达的变化及PCF的影响、PCF对UVA损伤HaCaT细胞凋亡蛋白酶激活因子(apoptot-ic protease-activating factor 1,Apaf-1)、细胞色素C(Cyto-chrome C,Cyt C)蛋白表达的影响;电子自旋共振(electronspin resonance,ESR)技术检测ROS的释放量;流式细胞术检测线粒体膜电位;紫外分光光度法测定PCF对UVA损伤HaCaT细胞线粒体呼吸链复合酶Ⅰ(NADH-辅酶Q还原酶)活性的影响。结果正常HaCaT细胞UCP2几乎不表达,UVA照射后表达升高,3 h达高峰,6 h开始逐渐下降;1.42～5.69 mmol.L-1剂量范围内的PCF对UCP2的表达有抑制作用;PCF可明显抑制UVA诱导的ROS产生、线粒体膜电位下降、Cyt C的释放及Apaf-1的表达,可有效抑制UVA损伤后HaCaT细胞呼吸链复合酶I活性的下降。结论 PCF对UVA引起的HaCaT细胞线粒体损伤具有保护作用。