消化时间对大鼠胰岛分离纯化产量的影响

目的观察消化时间对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛素的最佳消化时间。方法将75只雄性SD大鼠根据随机化原则按消化时间分为5组：Ⅰ组（10min）、Ⅱ组（12.5min）、Ⅲ组（15min）、Ⅳ组（17.5min）和Ⅴ组（20min）,每组15只。通过胆总管灌注胶原酶Ⅴ来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛。以双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能。结果分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活率为90%左右,体外培养中生长良好。在不同消化时间下,各组胰岛产量由低到高为：10min组〈20min组〈12.5min组〈17.5min组〈15min组。消化时间在15min时,获得胰岛产量最高（P〈0.05）,获得的胰岛数量和IEQ量分别为445.27±66.50和614.46±85.50。其次为17.5min组,获得胰岛数量和IEQ量分别为401.80±62.80和539.84±76.89。在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为（1.346±0.128）ng/mL和（2.565±0.208）ng/mL,差异具有统计学意义（P〈0.05）,刺激指数为1.908±0.152,提示胰岛细胞功能良好。结论进行大鼠胰岛分离纯化时最适宜的胶原酶浓度在最佳消化时间为15～17.5min,可获得稳定高产量的胰岛,过短和过长的消化时间都是不适宜的。     

一种新的胰岛细胞提取方法

目的:研究猪胰岛细胞分离纯化及探索一种新的胰岛收集方法.方法:成年猪胰岛消化分离采用Calafiore的方法并加以改进.取10头供体猪的胰腺组成第一组作为对照组,对它们采用传统的胰岛分离方法.再取15头供体猪的胰腺组成第二组作为实验组,对它们采用调整后的胰岛分离方法.结果:用新的胰岛收集方法,成功的完整消化试验组15头猪胰腺中的13头.而传统的消化收集方法只能完整消化对照组10头中的4头,前提是假定完整消化的标准是消化后所剩完整的胰腺组织不到原来的5%.用调整后的方法收集胰岛,其产量提高了.而且同一组中每克胰腺组织的胰岛产量也有所增加.结论:调整后的胰岛细胞分离收集方法,能够减少早期分离出的胰岛细胞对胶原酶的接触时间,而同时又不影响其他胰腺组织的消化过程,从而有效地减少胰岛碎片的出现,使分离出的胰岛细胞尽量保持完整的结构.     

微囊化对大鼠胰岛细胞冻存后功能的影响

对SD大鼠胰岛进行微囊化,并比较分析了微囊化与未微囊化大鼠胰岛冷冻保存后,胰岛损失率以及胰岛素分泌功能变化,微囊化胰岛冻存后胰岛损失率为未微囊化的1／2,冷冻保存前后,微囊化与未微囊化胰岛素分泌无显著差异,微囊能够保护胰岛免受冻伤,保持胰岛素分泌功能。     

ATP在大鼠胰岛分离中的保护作用研究

目的探讨三磷酸腺苷（ATP）在大鼠胰岛分离过程中抑制胰酶对胰岛细胞的消化作用。方法将20只SD大鼠平均分为两组,处理组在胰岛分离全过程中加用ATP进行干预,对照组则不加ATP处理,采用Ficoll非连续密度离心纯化后对两组胰岛细胞的凋亡、胰岛产量及活力方面进行比较性研究。结果加用ATP的处理组的胰岛细胞凋亡率显著低于对照组（P〈0.01）,处理组胰岛产量和胰岛素释放水平均显著高于对照组（P〈0.01）。结论胰岛分离过程中加用一定浓度ATP对胰岛具有抑制凋亡和保护胰岛活力的作用。     

蓖麻毒素A链的分离、纯化及活力测定

本文应用饱和硫酸铵沉淀法提取蓖麻毒素(Ricin),得到毒素粗提液,通过CM·Sephadex C-50及Sepharose 4B分离纯化,得到蓖麻毒素。蓖麻毒素经过2-巯基乙醇(β-ME)还原,分解为A链(Ricin A-chain)及B链(Ricin B-chain),通过DEAE-Sephadex A-50离子交换分离,得到RTA及RTB粗提液,RTA粗提液通过CM-Sephadex C-50及Sepharose 6B层析分离,得到RTA;RTB粗提液经过Sepharose 4B及CM-Sephadex C-50进一步纯化,得到RTB。毒性试验表明:毒素致死量为0.2μg。分别腹腔注射0.5mg RTA及0.25mg RTB的小鼠均无死亡。利用RTB-Ellman’s与RTA反应检测RTA活力,重组毒素对小鼠的致死量为0.25μg.     

库拉索芦荟多糖的分离纯化和含量测定

目的分离纯化库拉索芦荟多糖并建立含量测定方法.方法醇沉法提取库拉索芦荟多糖,Sephadex G-100凝胶柱色谱纯化.以甘露糖为标准,苯酚-硫酸法测定库拉索芦荟多糖含量.结果经分离纯化得到的主要组分库拉索芦荟多糖Ⅰ含量为81.11%,测定平均回收率为100.3%.结论该方法可从库拉索芦荟中提取分离纯度较高的多糖,含量测定方法简便、快速、重现性好.     

金线莲多糖的分离纯化与含量测定

目的：从金线莲中分离纯化多糖，并建立金线莲多糖含量测定方法。方法：用水提醇沉法提取金线莲多糖，用SephadexG-100凝胶柱色谱纯化多糖；并用改良的苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果：测得金线莲粗多糖生药量为37．45％，精制金线莲多糖（AFPS）含量为72．84％，AFPS生药量为27．14％，测定平均回收率为100．40％。结论：金线莲中多糖含量较高，具有开发利用价值。     

虫草多糖的分离纯化及含量测定

目的采用发酵法从冬虫夏草发酵液及菌丝体中提取、分离虫草多糖。方法采用乙醇沉淀法分离冬虫夏草发酵液和菌丝体中的多糖;采用苯酚硫酸法测定样品中多糖含量。结果采用此法进行制备、检测,方法简单快速,结果准确,适宜推广使用。结论此法无需多糖纯品,具有快速简单、精确度高、灵敏度高、重现性较好的优点,是检测虫草多糖含量的较优方法之一。     

灵芝多糖分离鉴定及抗肿瘤活性的研究

目的探讨灵芝多糖的分离纯化、理化性质及初步抗肿瘤活性。方法采用热水提取 ,乙醇分级沉淀 ,DEAE 32离子交换柱色谱等方法从灵芝子实体中分离得到灵芝多糖。用SephadexG 10 0凝胶柱色谱法测定其纯度和平均分子量。用薄层色谱及气相色谱法测定其单糖组成。溴化四唑蓝法测定其初步体外抗肿瘤活性。结果从灵芝子实体中分离得到 4种均一多糖 (GLPL1 ～GLPL4 ) ,其中GLPL1 和GLPL3为主要成分 ,其分子量为 4 10 0和 5 70 0。GLPL1 由葡萄糖组成 ;GLPL3由葡萄糖和半乳糖组成。GLPL1 和GLPL3对人鼻咽癌细胞增殖有显著的抑制作用 ,GLPL3还对人胃癌细胞、人结肠癌细胞增殖有一定的抑制作用。结论灵芝多糖GLPL1 、GLPL3是很有潜力的抗肿瘤或辅助抗肿瘤药物     

栀子黄色素的分离纯化

目的研究栀子黄色素的大孔吸附树脂富集纯化工艺。方法以栀子黄色素的纯度和得率为指标,考察大孔吸附树脂FU02对栀子提取液动态富集纯化最适工艺。结果大孔吸附树脂FU02对栀子黄色素的最适动态吸附条件：料液中栀子黄色素浓度5g/L、栀子苷浓度30~32g/L,料液流速1Bv/h,此条件下大孔吸附树脂FU02对栀子黄色素的吸附率为82.5%,栀子苷去除率可达69.7%。吸附在树脂上的栀子黄色素的最适动态解吸条件：以80%乙醇溶液为解吸液、解吸流速2Bv/h,此条件下栀子黄色素洗脱率可达96.0%,制备的栀子黄色素A238/A440可降至0.35~0.38。结论采用大孔吸附树脂FU02富集纯化,制备高纯度的栀子黄色素,是方便可行的。     

灵芝多糖的提纯、组成及活性研究

目的探讨灵芝多糖的分离纯化、单糖组成以及抗肿瘤活性。方法采用热水提取,Sevag法去蛋白质,乙醇分级沉淀,DEAE-32离子交换色谱法从灵芝子实体粉中分离得到灵芝多糖。用SephadexG-100凝胶柱色谱法判断其纯度及相对分子质量,用薄层色谱法及气相色谱法鉴定其单糖组成,溴化四唑蓝法测定其体外抗肿瘤活性。结果从灵芝子实体粉中分离得到两种粗多糖GLPⅠ、GLPⅡ。GLPⅠ进一步分离得到两种均一多糖GLPH1、GLPH2。GLPH1糖苷键为β型,相对分子质量为45000。GLPH1由葡萄糖、半乳糖和痕量甘露糖、岩藻糖组成。GLPH1对KB细胞、BGC细胞、B16细胞的增殖具有一定的抑制作用。结论灵芝多糖GLPH1可望开发成抗肿瘤药或辅助抗肿瘤药。     

金黄色葡萄球菌细胞壁可溶性肽聚糖的分离纯化和鉴定

目的：从金黄色葡萄球菌中提取纯化可溶性肽聚糖并鉴定其活性。方法：采用小剂量青霉素作用金黄色葡萄球菌（ATCC25923），诱导合成可溶性肽聚糖（PGN）粗品，经Sephadex G-100凝胶层析进一步分离纯化；采用SLP试剂盒对纯化的可溶性PGN定性，ELISA法检测纯化的可溶性PGN对小鼠RAW264．7细胞的活化作用。结果：分离纯化的可溶性PGN经SLP试剂检测阳性，该可溶性PGN可刺激RAW264．7细胞释放TNF-α，并具有明显的量效关系。结论：采用青霉素诱导结合凝胶层析技术可从金黄色葡萄球菌获取纯度及生物学活性较高的可溶性PGN。     

猴头菌多糖的分离纯化及活性探讨

目的 :猴头菌多糖的分离纯化及活性探讨。方法 :人工栽培的猴头菌子实体经热水提取、去蛋白、超滤、醇化、真空干燥得多糖粗品 ,经 DEAE- 5 2、Sephacryl S- 4 0 0柱层析得到精品多糖 HEP,并对 HEP进行免疫活性研究。结果 :精品多糖HEP均一、分子量为 5 .5× 10 4 ,可明显增强细胞因子 IL- 2的生物活性。结论 :猴头菌多糖分离纯化工艺的建立及其免疫活性研究结果为以后进一步研究和开发猴头菌多糖提供了便利条件。     

麦胚凝集素的分离纯化和鉴定

目的研究用鸡卵黏蛋白为配基亲和色谱法分离纯化麦胚凝集素,并对纯化的麦胚凝集素进行性质分析。方法先制备鸡卵黏蛋白的亲和吸附剂,然后用其纯化麦胚凝集素。结果此亲和色谱方法使纯化后的麦胚凝集素比其粗提液纯度提高约10 0 0倍,相对分子质量为2 0 4 2 0 ,pI为5 .10。结论鸡卵黏蛋白亲和色谱法是一种经济适用的纯化麦胚凝集素的好方法     

威灵仙多糖的分离纯化及其理化性质

目的:对威灵仙多糖进行分离纯化,并进行组成和理化性质分析。方法:威灵仙根经热水提取、DEAE-SepharoseFF柱层析得到威灵仙多糖CCP-Ⅰ、CCP-Ⅱ、CCP-Ⅲ3个组分。CCP-Ⅲ再经Superdex-200柱层析得到威灵仙多糖CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb。通过HPLC和比色等方法对CCP-Ⅲa、CCP-Ⅲb进行分析测定,采用红外、气相色谱、高碘酸氧化等手段对其结构进行初步研究。结果:CCP-Ⅲa为均一组分,其总糖含量、糖醛酸含量分别为92.4%,27.6%,相对分子质量为3.1×105Da,单糖组成及摩尔比为鼠李糖-阿拉伯糖-甘露糖-葡萄糖-半乳糖(4.7∶1.0∶5.6∶26.4∶3.9);CCP-Ⅲb也为均一组分,其总糖含量、糖醛酸含量分别为89.9%,39.5%,相对分子质量为1.5×105Da,单糖组成及摩尔比为鼠李糖-甘露糖-葡萄糖-半乳糖(1.5∶1.0∶25.8∶16.3)。糖苷键主要为β-构型,且均含有1→3、1→6连接键型。结论:CCP-Ⅲa和CCP-Ⅲb是2种均一的酸性杂多糖。     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的分离纯化及抗氧化活性的研究

目的改进苦瓜籽核糖体失活蛋白的提取工艺 ,并对其抗氧化活性进行研究。方法苦瓜籽经粉碎 ,50mmol/L乙酸抽提 ,硫酸铵沉淀 ,经阳离子交换及凝胶柱色谱等步骤进一步纯化后 ,测定所得两种核糖体失活蛋白的理化性质。结果纯化后得到一种分子量为 2 9.6kD的蛋白质和一种小分子量蛋白质 ,两者在无细胞系统中抑制50 %蛋白质合成浓度分别为 4 .3× 1 0 - 6 、1 .4× 1 0 - 6 mol/L ,含糖量分别为 4 .83 %、1 .82 % ,类超氧化物歧化酶 (SOD)活性分别为 79.0 5、1 7.2 5u/mg。阳性对照纯品SOD活性为 1 2 67u/mg。结论从苦瓜籽中分离纯化出两种不同分子量的核糖体失活蛋白均为糖蛋白质 ,且具有一定的抗氧化活性     

肠浒苔凝集素的分离纯化及性质研究

肠浒苔Enteromor pha intestinalis经PBS缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE-52纤维素离子交换层析和SephadexG-200分子筛层析，从中纯化出肠浒苔凝集素(EIL)。肠浒苔凝集素在PAGE和等电聚焦电泳上均显示单一蛋白染色带，其等电点为8．9，用SephadexG-200分子筛层析测得其相对分子质量为17783。肠浒苔凝集素对单胞藻及兔、鲤、鲫、人血型红细胞(A，B，AB，O)均表现出一定程度的凝集活性，对鲫的凝集活性最强，且不被已测试的D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖、牛甲状腺球蛋白、鸡卵白蛋白、γ-球蛋白抑制。肠浒苔凝集素在PH4．0～10．2范国内均有活性，而在PH6．9～8．0范国内活性较高。肠浒苔凝集素在90℃加热1h，活力并未减弱，说明这种凝集素具有很强的耐热性。     

台湾金线莲多糖的分离纯化及其体外抑瘤活性研究

目的研究台湾金线莲(Anoectochilus formosanus)的水溶性多糖(AFP)分离纯化条件,检测单一组分多糖的细胞活性及其结构。方法采用DEAE-Cellulose Fast Flow阴离子交换色谱和Sephadex G-200分离AFP,得到AFP-1和AFP-2两个水溶性单一多糖组分;采用红外光谱检测结构;检测AFP、AFP-1和AFP-2对SMMC-7721肝癌细胞,Hela宫颈癌细胞,spc-A1肺腺癌细胞和Bcap37人乳癌细胞进行细胞杀伤活性。结果AFP-1和AFP-2均为β-D型的吡喃糖环。AFP、AFP-1和AFP-2对癌细胞均具有较好的杀伤作用。结论台湾金线莲多糖(AFP、AFP-1和AFP-2)是非常有前景的抗肿瘤药物或辅助抗肿瘤药物。