石花多糖脱蛋白工艺研究

［摘要］目的对地衣类石花多糖进行脱蛋白处理，筛选最佳方法。方法采用Sevag法、酶法、Sevag/酶法、三氯醋酸 正丁醇法、酶法结合三氯醋酸 正丁醇等5种方法对石花多糖进行脱蛋白处理。结果酶法结合三氯醋酸 正丁醇联合使用脱蛋白效果较其他4种方法好。结论酶法和三氯醋酸 正丁醇联合使用脱蛋白方法，当蛋白酶用量为底物浓度的1%，pH为7时，50 ℃水浴酶解3 h，再加入与多糖溶液同体积的三氯醋酸 正丁醇液（V/V＝1：10），振摇20 min，静置1.0 h，蛋白质去除率最高且多糖损失较少，是一种良好的脱蛋白方法。     

萝藦果壳多糖脱蛋白方法研究

目的确定萝藦果壳多糖脱蛋白的最优方法。方法以蛋白脱除率和多糖损失率为指标,比较氯仿-正丁醇法(Sevag法)、三氯乙酸法(TCA法)、木瓜蛋白酶-Sevag法和木瓜蛋白酶-TCA法。结果 Sevag法、TCA法、木瓜蛋白酶-Sevag法、木瓜蛋白酶-TCA法的蛋白脱除率分别为73.14%,71.55%,86.03%,75.33%,多糖损失率分别为24.40%,25.68%,8.47%,17.13%。结论木瓜蛋白酶-Sevag法是除去萝藦果壳多糖中蛋白的最佳方法。     

红芪多糖的脱蛋白及脱色素工艺

目的：研究红芪多糖（HPS）的脱蛋白、脱色工艺。方法：采用L9（34）正交试验和单因素试验分别优选Sevage法脱蛋白工艺与过氧化氢脱色素工艺。结果：Sevage法脱蛋白工艺为：样液与试剂的体积比为1∶1,氯仿与正丁醇的体积比为4∶1,振摇30min,静置20min。过氧化氢脱色素条件是脱色时间为2～4h,用量为5～20ml过氧化氢每50ml样液。结论：优化后的条件适合于红芪多糖的脱蛋白、脱色素。     

枳根口服液中总多糖的含量测定

目的 建立枳根口服液中总多糖的含量测定方法.方法供试品经60%乙醇醇沉去杂质、氯仿-甲醇（2：1）溶液脱脂、Sevag 混和液 （氯仿∶正丁醇为5∶1）除蛋白,90%乙醇醇沉得总多糖,以苯酚-硫酸法,在490 nm波长处测定总多糖含量.结果回归方程为A=0.001 8X-0.007 4（r=0.999 1）,葡萄糖的检测质量浓度在26.636～266.36 mg·L-1 范围内与吸光度呈良好的线性关系,测定方法经精密度、稳定性、重现性、加样回收试验验证,证明方法科学、可行.结论 该方法简便、准确、重现性好,可用于枳根口服液中总多糖的含量测定.     

猴头菇多糖纯化及活性研究

目的筛选制备猴头菇浸提液的最优工艺条件及研究猴头菇多糖的免疫增强作用。方法将猴头菇粉碎、脱脂,然后经水浸提液浸提,再经减压浓缩、Sevag法去除游离蛋白、乙醇沉淀得到猴头菇多糖。采用^3H-TDR法测定小鼠LAK细胞活性。结果经正交实验得到制备浸提液的最优工艺条件：温度85℃,时间4 h,加水量150 ml;除蛋白的最优工艺条件：样液：氯仿-正丁醇（体积比）=3;当乙醇体积分数为75%时可沉淀出较多的糖。给予猴头菇多糖小鼠LAK细胞抗肿瘤活性增强。结论利用本工艺可较好的提取猴头菇多糖,且该多糖有显著的免疫活性。     

松茸多糖的分离与纯化

目的：研究松茸多糖的分离与纯化方法,筛选出松茸多糖脱蛋白、脱色的最佳方案。方法：以多糖损失率和脱蛋白率为考察指标,优化了脱蛋白工艺;以脱色前后溶液颜色的改变和多糖损失率为考察指标,优化了脱色工艺;通过D101大孔吸附树脂和Sephadex G-100凝胶滤过色谱对松茸多糖进行了分离纯化。结果：采用Sevag法脱蛋白和活性炭脱色效果较为理想,最终得到3个松茸多糖组分MTS-1、MTS-2、MTS-3。结论：该研究可为今后更深入地研究松茸多糖的结构特征和生物活性等提供依据。     

败酱草多糖的脱蛋白研究

目的研究败酱草多糖的脱蛋白工艺。方法采用Sevag法、三氯乙酸法、酶法对败酱草多糖进行脱蛋白研究。结果酶法脱蛋白效果明显好于Sevag法,三氯乙酸法的多糖损失较多。在木瓜蛋白酶用量4%（W/V）、pH值6.0、温度55℃、酶解时间2.5 h的条件下,败酱草多糖的蛋白脱除率为51.65%,多糖损失率为7.93%。结论用酶法脱蛋白效果较好。     

不同生长年限泰山四叶参中多糖的含量测定

目的:从栽培的不同生长年限的泰山四叶参中提取多糖并测定其含量。方法:四叶参粗粉经脱脂、醇提后用水提醇沉法提取粗多糖,氯仿-正丁醇(4∶1)脱蛋白,苯酚-硫酸法测定其含量。结果:2年、3年和4年生泰山四叶参中多糖的含量依次为8.82%、10.47%和11.32%;平均回收率为96.09%,RSD=1.25%(n=6)。结论:4年生泰山四叶参中多糖含量最高。本法简便、准确,可为确定泰山四叶参的合理采收时间奠定科学基础。     

香菇多糖提取分离工艺改进

目的：获得香菇多糖提取分离的最佳工艺。方法：香菇多糖提取采用热水抽提法，分离采用萃取法。结果：PH=7．0。95℃左右，浸提3．5小时，原料：水(V：V)=1：20，醇析浓度为70％乙醇。香菇多糖分离(除去蛋白质)。采用萃取法：样品-氯仿 正丁醇(V：V)为1：1；氯仿-正丁醇(V：V)为4：1，萃取时间30分钟。     

红芪多糖“脱蛋白-大孔吸附树脂”的纯化富集工艺考察

目的 研究红芪多糖(HPS)标准提取物,筛选优化其“脱蛋白-大孔吸附树脂纯化富集”的工艺方法与工艺参数。方法 以蛋白脱除率和多糖损失率为指标,比较4种不同方法的脱蛋白效果,并对筛选出的方法进行工艺参数优化;以吸附量和吸附率为指标,考察4种型号大孔吸附树脂(AB-8、D-101、NKA-9、X-5)对HPS的纯化富集效果,并进行相关工艺参数优化;采用苯酚硫酸法和考马斯亮兰法分别测定多糖和蛋白质含量;采用紫外分光光度(UV)和红外光谱(IR)法比较纯化前后多糖的基本特征。结∶果筛选出的脱蛋白方法为Sevag法,优选的树脂为AB-8大孔吸附树脂。通过工艺参数优选,确定的纯化工艺为：10 mg·mL^-1粗多糖水溶液,以1/2倍体积氯仿-1,∶v/v)混合试剂进行脱蛋白操作2次;除去残留有机溶剂后,以质量浓度为1.5 mg·mL^-1的水溶液,上预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱[树脂量(g)与上样体10]∶,以2.0 mL·min^-1流速循环上样2次,动态吸附后再静态吸附6～8 h,后以30%乙醇1.0 mL·min^-1<...     

苯酚-硫酸法测定围乐颗粒中总多糖的含量

目的:建立以苯酚-硫酸法测定围乐颗粒中总多糖含量的方法。方法:样品经Sevag法脱蛋白,以苯酚-硫酸法显色(60℃水浴加热30min),以葡萄糖为对照品,测定围乐颗粒中总多糖的含量。结果:葡萄糖的检测浓度在20·47～102·36μg·mL-1范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0·9994);平均回收率为99·09%,RSD=0·92%(n=6)。围乐颗粒中总多糖的平均含量为41·63%。结论:本方法简单、准确、重现性好,可用于围乐颗粒的质量控制。     

Sevag法去除黄芪粗多糖中蛋白质成分的研究

目的研究Sevag法去除黄芪粗多糖中蛋白质成分的效果。方法Sevag法去除蛋白质,以考马斯亮蓝法和苯酚-硫酸法测定黄芪粗多糖应用Sevag法前后蛋白质和多糖含量的变化。结果经过6次Sevag法处理后,黄芪粗多糖冻干粉中70.8%的蛋白质被去除,而多糖组分的含量变化不大,仅下降4.44%。结论Sevag法用于去除黄芪粗多糖中蛋白质成分切实可行,可作为纯化黄芪粗多糖的手段之一。     

HPLC法测定痛可舒贴中马兜铃酸A的含量

目的：建立痛可舒贴中马兜铃酸A的含量测定法。方法：采用HPLC法测定痛可舒贴中马兜铃酸A的含量。色谱柱为Lichrospher．c18柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-四氢呋喃-0．05％三氟乙酸溶液（39：3：58），检测波长为390nm。结果：在7．52×10--60．16×10-3ng进样范围内，马兜铃酸A的峰面积与进样量线性关系良好（r=0．9998）。平均回收率为99．3％，RSD为0．49％。当信噪比为3：1时，马兜铃酸A的检出限为1．78×10-3ng；信噪比为10：1时，马兜铃酸A的最低定量限为5．93×10-3ng。结论：该法简便、准确、灵敏度高、重复性好，可用于痛可舒贴中马兜铃酸A的含量检测。     

5-硝基水杨酸合成新工艺

目的:采用新方法合成5-硝基水杨酸。方法:以水杨酸为原料,采用硝酸脲/硫酸为硝化试剂,反应得到5-硝基水杨酸以收率为指标考察了反应条件包括硝酸脲/水杨酸物料配比、反应温度、反应时间对反应的影响。结果:得到适合的反应条件为硝酸脲/水杨酸(摩尔比)=1.2:1,反应温度25℃,反应时间6 h,收率为86.4%。结论:新方法收率较高,反应条件温和,适合工业化生产。     

L-精氨酸齐墩果酸复合物的制备与鉴定

目的：制备L-精氨酸齐墩果酸复合物,拓宽齐墩果酸的给药途径。方法：利用超声法、搅拌法、回流法制备L-精氨酸齐墩果酸复合物,通过粉末X射线衍射分析（PXRD）、差示扫描量热分析（DSC）和热重分析（TG）对L-精氨酸齐墩果酸复合物进行分析鉴定,同时对L-精氨酸齐墩果酸复合物的超声制备工艺通过正交试验进行了优化。结果：L-精氨酸与齐墩果酸形成了新的复合物,制备的最佳工艺为超声制备,反应物摩尔比为1：1,反应温度为60℃,反应溶剂为80％乙醇,反应时间为90min。结论：优化的L-精氨酸齐墩果酸复合物制备方法简捷实用,有助于提高齐墩果酸的生物利用度。     

双苯氟嗪的解离常数及油水分配系数的测定

目的：测定双苯氟嗪的解离常数（p鼠）和油水分配系数（1酽）。方法：采用非对数滴定法,以不同比例的乙醇．水（70：30、60：40、50：50、40：60,纠n为溶剂配制不同浓度（O．01、0．02、0．03mmol／L）的双苯氟嗪溶液,用盐酸溶液滴定,经数学计算推算出双苯氟嗪的pKb;以正辛醇．水为模拟系统,采用摇瓶法．紫外分光光度法测定油水分配平衡（正辛醇与水相体积比为1：l、1：3）后双苯氟嗪的浓度,计算双苯氟嗪的lgP。结果：双苯氟嗪的雠为8．11;正辛醇与水相体积比为1：1、1：3时双苯氟嗪的lgP分别为0．59±O．038、0．85±0．046。结论：双苯氟嗪属于脂溶性强的药物。     

柱前衍生化顶空气相色谱法同时检测非布司他原料药中3种微量有机酸

目的:建立测定非布司他原料药中3种微量有机酸(三氟乙酸、甲酸和乙酸)含量的方法。方法:采用气相色谱法。以浓硫酸-甲醇混合液对有机酸进行柱前衍生化后采用顶空进样法测定5批原料药中的有机酸含量。色谱柱为Supelcowax-10毛细管柱,检测器为氢火焰离子化检测器,气化室温度为160℃,检测器温度为260℃,程序升温,载气为氮气,分流比为10:1,顶空瓶平衡温度为60℃,平衡时间为60min。结果:3种有机酸衍生物达到基线分离,检测浓度线性范围分别为4.190～605.3、3.586～672.5、3.773～667.4μg.mL-1(r≥0.9990),检测限分别为1.25、1.07、1.13μg.mL-1;5批样品中均未检出有机酸。结论:本法准确、快速,可有效地分离、测定非布司他原料药中3种微量有机酸。     

优化柱前衍生-HPLC法测定血清中丙戊酸的血药浓度

目的：优化柱前衍生-高效液相色谱法监测血清中丙戊酸浓度的方法。方法：以乙腈为蛋白沉淀剂,以弘溴苯乙酮为衍生化试剂进行测定。色谱柱为ANAX丙戊酸专用分析柱,流动相为乙腈-水（70：30）,柱温为40℃,流速为0．7mL·min-1,检测波长为266nm。结果：丙戊酸血药浓度在4．88-139．46μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0．9996）,平均回收率为100．01％,日内、日间RSD均〈3％。结论：本法可简便、快速、稳定地测定血清中丙戊酸的浓度,能满足临床监测的要求。