牛主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白介导的胞内钙离子变化

目的　研究主动脉内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白(EPA)介导胞内钙离子变化的特征 ,并探讨培养牛主动脉内皮细胞EPA功能的变化。方法　以Fluo 3,Frua 2为荧光探针 ,采用共聚焦和荧光光度法测定内皮细胞 [Ca2 + ]i。结果　Ach能够引起体外培养 6代以内内皮细胞 [Ca2 + ]i 的增加 ;Ach激发的内皮细胞 [Ca2 + ]i 信号表现为瞬时性单次或连续 2次的钙振荡 ,具有异时性和快速耐受的特点。未观察到烟碱和其它M受体激动剂引起的 [Ca2 + ]i 变化。Ach对胞内 [Ca2 + ]i 浓度的作用以原代细胞增加最为明显 ,但随培养时间的延长 ,此效应逐渐减弱 ,至 13代后无效应。结论　血管内皮细胞乙酰胆碱激活蛋白激活能介导胞内钙离子的增高 ,经培养后EPA功能丧失。     

15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响

目的　通过阻断细胞外钙离子 (Ca2+ )内流,观察 15 羟化二十烷四烯酸 ( 15 HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2+ ]i)的影响,探讨缺氧时 15 HETE引起细胞钙动员的机制。方法　采用组织浴槽血管环方法观察L 型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15 HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定 15 HETE对细胞内 [Ca2+ ]i的作用。结果　在正常组和缺氧组, 10μmol·L-1硝苯地平和无钙液对 1μmol·L-1 15 HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的 15 HETE组细胞 (正常培养的细胞暴露于 1 μmol·L-1 15 HETE下继续孵育 8min)与正常对照组相比,细胞内 [Ca2+ ]i明显增加 (P<0 05)。结论　15 HETE可引起肺动脉平滑肌细胞 [Ca2+ ]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放。     

PGF_(2α)对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌的影响

目的探讨PGF2α对葡萄糖刺激性胰岛素分泌和[Ca2+]i变化的影响。方法运用放免方法检测不同浓度的PGF2α在不同情况下对NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌量的变化,并以F luo-3AM为探针,利用激光共聚焦显微镜检测细胞内钙的改变。结果在16.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,0.1、1、5μmol.L-1的PGF2α剂量依赖性的促进了NIT-1β细胞葡萄糖刺激性胰岛素分泌,其中5μmol.L-1时作用最强(P<0.01),而在10μmol.L-1时,PGF2α却抑制了葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05);预先加入0.5 mmol.L-1EGTA后,5μmol.L-1的PGF2α不能促进胰岛素分泌,同样在预先加入n ifed ip ine或EGTA+n ifed ip ine后,PGF2α也无促进胰岛素分泌(P>0.05)。在0、5.5 mmol.L-1葡萄糖刺激下,5μmol.L-1的PGF2α无促进胰岛素分泌作用(P>0.05)。另外,应用5μmol.L-1的PGF2α能够引起β细胞内钙升高(P<0.01),在无钙环境下,PGF2α只引起缓慢的幅度较小的细胞内钙升高,恢复细胞外钙浓度时,β细胞内钙升高(P<0.01)。结论在NIT-1β细胞,一定范围浓度的PGF2α能够促进高浓度葡萄糖刺激下的胰岛素分泌,可能与PGF2α增加细胞外钙内流有关。     

海马内钙离子水平对小鼠记忆巩固的影响

采用一次性被动回避反应模型，观察了海马（双侧）定位注射ＣａＣｌ２（２．９μｇ·只－１）和ＥＧＴＡ（１ｎｇ·只－１）对记忆巩固过程的影响。电击（０．３ｍＡ，５ｓ）后立即注射上述化合物，２４ｈ后检测，并运用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子的荧光探针，采用精密的ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统，检测了分离的单个神经细胞内游离钙及其变化。结果表明，与生理盐水对照组相比，海马内注射ＣａＣｌ２或ＥＧＴＡ都使小鼠的步入潜伏期缩短，说明记忆保持下降。以３Ｈ－亮氨酸为标记物进行的高体实验表明：ＣａＣｌ２或ＥＧＴＡ都使３Ｈ－亮氨酸参入海马突触体蛋白质的总量降低，但从ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳条带来看，受这两种化合物影响的突触体蛋白质分子量范围不完全一致。提示海马内游离Ｃａ２＋水平过高或过低都能损害记忆巩固过程，其作用机理与Ｃａ２＋影响突触体蛋白质合成有关。     

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca~(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响

目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 ,而改善VD临床症状     

体外培养新生大鼠海马神经细胞方法的探究

海马作为边缘系统的一个重要部分,主要功能是参与近期记忆、情绪及内脏功能调节。是老年性痴呆、癫痫等疾病的主要病灶之一。为了能在细胞水平和分子水平深入研究发育中海马神经细胞的生化、代谢、生理、药理及形态,建立海马神经细胞原代分散培养技术,越来越引起基础医学和临床医学的重视。     

TRPV1对LPS致热大鼠体温及下丘脑中Ca2＋浓度和cAMP含量的影响

目的探讨TRPV1在脂多糖（LPS）致大鼠发热过程中的作用和机制。方法48只6SD大鼠随机分为4组,正常对照组（N）、capsazepine组（CPZ）、LPS组（LPS）和capsaz—epine＋LPS组（CPZ＋LPS）。连续观察体温变化;在发热高峰期通过颈椎脱臼迅速处死动物,以Fura-2／AM为荧光指示剂,测定下丘脑细胞内[Ca2＋]i;应用放射免疫法检测下丘脑中cAMP含量的变化。结果①各组体温变化最大值（△Tmax）由高至低顺序为：CPZ＋LPS组〉LPS组〉CPZ组〉N组;其中,CPZ＋LPS组与LPS组比较,AT（300～480min期间）及体温反应指数TRI。均增高（P〈0．01）;②在发热高峰期,CPZ＋LPS组[Ca2＋]i明显低于其它3组（P〈0．01）;③CPZ＋LPS组cAMP含量与其它组比较增多（P〈0．01）。结论capsazepine可能通过阻断下丘脑TRPV1通道,改变细胞内钙离子浓度,进而影响LPS性发热过程。     

铝对大鼠海马神经细胞线粒体酶的影响

目的探讨线粒体酶在铝致大鼠凋亡神经细胞中的改变。方法健康雄性SD大鼠40只，按体重随机分为4组：生理盐水、AL^3＋ 2．5、5、10mg／kg组。腹腔注射染毒60d后处死，用TUNEL法检测细胞凋亡，电镜观察线粒体结构的改变，用试剂盒测定线粒体超氧化物歧化酶（SOD），琥珀酸脱氢酶（SDH），三磷酸腺苷（ATP）酶（总ATP、Na^＋-K^＋ATP，Ca^2＋ ATP和Mg^2＋ ATP酶）活力。结果 随染铝剂量的增高，凋亡指数（AI）逐渐升高（P〈0．05），Na^＋-K^＋ ATP酶、Ca^2＋ ATP酶、Mg^2＋ ATP酶和SOD均降低（P〈0．05）；海马神经细胞SDH均数降低，但差异无显著性（P〉0．05）。海马神经细胞凋亡指数与Na^＋-K^＋ ATP酶、Ca^2＋ ATP酶、Mg^2＋ ATP酶和SOD呈负相关（r=-0．439，-0．501，-0．530，-0．815，P〈0．05），与SDH没有相关性（r=0．287，P〉0．05）。结论铝可以诱导大鼠海马神经细胞凋亡，并引起线粒体结构和线粒体酶活力的改变。     

阿米洛利对大鼠压力超负荷性心肌肥厚的抑制作用

目的　观察钠氢交换体 (NHE)抑制剂阿米洛利 (Ami)对压力超负荷左室肥厚 (LVH)大鼠心功能、心肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)及心肌细胞膜Na+ 、K+ ATP酶活性的影响。方法　①同步记录离体工作心脏LVSP、LVEDP、±dp/dtmax及T值 ;②测定Fura 2 /A负载后的单个心室肌细胞的 [Ca2 + ]i;③光电比色法测定Na+ 、K+ ATP酶的活性。结果　①与对照组相比 ,LVH组LVEDP和T值明显增加 ,-dp/dtmax明显降低 (均P <0 0 1) ;与LVH组相比 ,Ami组和Ena组的LVEDP及T值明显下降 (均P <0 0 1)。②与对照组相比 ,LVH组的心肌细胞 [Ca2 + ]i明显增高 ,细胞膜Na+ 、K+ ATP酶活性明显降低 (均P <0 0 1) ;Ami及Ena可降低LVH大鼠的 [Ca2 + ]i,升高其Na+ 、K+ ATP酶活性 (均P <0 0 1)。结论　压力超负荷大鼠心脏舒张功能明显下降 ,心室肌细胞 [Ca2 + ]i增高 ,心肌细胞膜Na+ 、K+ ATP酶活性受损 ,Ami及Ena均可抑制此类异常