芝麻素协同吉西他滨对人肺腺癌A-549细胞株的作用

目的观察芝麻素及联合吉西他滨对人肺腺癌A-549细胞株的作用。方法体外培养A-549细胞株。MTT法检测细胞增殖,Hoechst33258荧光染色法观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度变化,免疫细胞化学法观察caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达。结果 20⁸0μg·mL-1芝麻素对A-549细胞均有一定的增殖抑制作用(P<0.01),而随着浓度增加,至70μg·mL-1时,增殖抑制作用逐渐减弱,IC50浓度为40μg·mL-1。0.00180μg·mL-1芝麻素对A-549细胞均有一定的增殖抑制作用(P<0.01),而随着浓度增加,至70μg·mL-1时,增殖抑制作用逐渐减弱,IC50浓度为40μg·mL-1。0.001²0μg·mL-1吉西他滨对A-549细胞的生长均具有抑制作用(P<0.01),且呈现浓度依赖性,IC50浓度为1.0μg·mL-1;40μg·mL-1芝麻素+1.0μg·mL-1吉西他滨组的增殖抑制作用更为显著(P<0.01)。40μg·mL-1芝麻素组、1.0μg·mL-1吉西他滨组和芝麻素+吉西他滨组作用A-549细胞48 h后在荧光染色荧光显微镜下观察发现受抑制细胞核浓缩,细胞核染色质高度凝聚、边缘化,与对照组相比细胞内Ca2+浓度水平增高,caspase-3、caspase-8和caspase-9表达均显著增加(P<0.05),联用组均显著高于两药单用组(P<0.01)。结论芝麻素联合吉西他滨可协同抑制A-549细胞,其机制可能与提高细胞浆内Ca2+浓度进而诱导细胞凋亡,激活caspase通路有关。     

蛇葡萄素钠协同卡铂对肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用

目的:研究蛇葡萄素钠(AMP-Na)协同卡铂对肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用。方法:以6.25、12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na+3.125、6.25、12.5、25、50μg/ml卡铂培养细胞4 h,测定细胞活力并计算抑制率与半数抑制浓度(IC50)。以12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na+12.5μg/ml卡铂培养细胞12 h,流式细胞仪检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)表达。结果:系列质量浓度AMP-Na与系列质量浓度卡铂联用后对细胞生长有明显抑制作用,随质量浓度的升高,卡铂对Lewis细胞的IC50逐渐降低;AMP-Na质量浓度范围在6.25~50μg/ml时,与3.125~25μg/ml卡铂联用后,对Lewis细胞增殖的协同抑制作用最强。AMP-Na与卡铂联合培养细胞12 h后,细胞Caspase-3表达明显增强。结论:AMP-Na与卡铂合用对Lewis细胞增殖具有协同抑制效应,其机制可能与AMP-Na激活细胞Caspase-3,从而诱导细胞凋亡有关。     

黄癸素对拓扑异构酶的影响及联合羟喜树碱的抗肿瘤作用

观察黄癸素联合应用羟喜树碱对肿瘤细胞的协同抑制作用,并探讨黄癸素对拓扑异构酶的影响。采用MTT法检测黄癸素联合应用羟喜树碱对体外培养肿瘤细胞增殖的抑制作用,计算IC50和联合指数(CI值)判断药物协同作用效果;通过琼脂糖凝胶电泳法测定黄癸素对SW480细胞DNA拓扑异构酶活性的影响。结果显示,与两药单用比较,黄癸素联用羟喜树碱对SW480、SGC-7901、SW1116细胞的抑制作用更显著,IC50显著降低,两药联用对各种人癌细胞株的CI值均小于1,HepG2、SW480、SGC-7901、SW1116细胞的CI值最低分别达0.447、0.626、0.161和0.178,表现为较显著的协同效果。琼脂糖凝胶电泳法结果显示,经黄癸素(2.0～8.0 mg·L-1)处理的SW480细胞拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性均有所降低。研究表明,黄癸素可抑制拓扑异构酶的活性,与典型的TopoⅠ抑制剂羟喜树碱合用具有良好的协同抑制肿瘤细胞增殖作用,该结果可能与两药在作用机制方面的协同有关。     

4味中药乙醇提取物祛黄褐斑作用的比较研究

目的比较白附子、银花、白芨、六月雪4味中药乙醇提取物祛黄褐斑作用的差异,选出作用最强的药材。方法以MTT法测定小鼠B16黑素瘤细胞增殖抑制率、酪氨酸酶活性、黑素含量变化;采用多重比较法进行统计分析。结果银花的浓度为62.5μg.mL-1,白芨、白附子各浓度(500、250、125、62.5μg.mL-1)均对B16鼠黑素瘤细胞增殖抑制作用较强。白附子的浓度为250μg.mL-1或银花的浓度为62.5μg.mL-1对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性抑制作用最佳。白附子的浓度为125μg.mL-1对黑素合成抑制作用最好。结论白芨与白附子可作为祛黄褐斑有效成分的候选药材。     

姜黄素与甘草次酸联合用药的体外抗肿瘤作用

目的：研究姜黄素与甘草次酸联合用药的体外抗肿瘤作用。方法：采用MTT法,研究姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药分别对人肝癌细胞株HepG-2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肺癌细胞株A549的细胞增殖抑制率,并计算出相应的IC50值。结果：得到姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药对三种肿瘤细胞株的抑制率IC50值分别为：姜黄素（16.3～19.3μg.mL-1）;甘草次酸（11.6～36.1μg.mL-1）;姜黄素和甘草次酸联合用药（10.5～16.2μg.mL-1）。结论：甘草次酸可以显著加强姜黄素对HepG-2、MCF-7、A549癌细胞增殖的抑制作用,而且两者在癌细胞的增殖抑制方面表现出协同作用。     

苦瓜提取液体外抗柯萨奇病毒的实验研究

目的:探讨苦瓜提取液体外抗柯萨奇病毒(CVB3)的作用及抗病毒作用的机制,从而为柯萨奇病毒感染的治疗提供新的手段。方法:根据病毒复制周期,设计2个药物抗病毒作用靶点,观察苦瓜提取液在不同靶点对柯萨奇病毒的作用。在H ep-2单层细胞上,通过观察细胞病变效应(CPE)、四甲基偶氮唑蓝(M TT)法检测细胞活性、病毒抑制率测定,以确定苦瓜提取液体外抗病毒活性。结果:苦瓜提取液对H ep-2细胞的半数毒性浓度(TC50)为1004.8μg.mL-1;苦瓜提取液抑制病毒组对柯萨奇病毒的抑制率随药物浓度的增加而增加,其半数抑制浓度(IC50)为35.4μg.mL-1,T I为7.82。苦瓜提取液直接灭活病毒组,各浓度组均出现典型CVB3所致的细胞病变,与病毒对照孔无显著区别。结论:苦瓜提取液可通过抑制病毒增殖发挥抗柯萨奇病毒作用。     

贝母素乙对5种肿瘤细胞的化疗增敏作用研究

目的:研究贝母素乙对5种肿瘤细胞的化疗增敏作用。方法:以人食管癌Eca-109细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人小细胞肺癌A549细胞、人肝癌Hep G2细胞、人宫颈癌He La细胞为研究对象,采用MTT法检测最大无毒浓度(20μg/mL)的贝母素乙与不同质量浓度梯度(0.026~2.1、0.026~2.1、0.125~2.0、0.125~2.0、0.062 5~0.10μg/mL)的阿霉素共同作用于上述5种肿瘤细胞72h后的细胞生长抑制率,并计算半数抑制浓度(IC50);采用结晶紫染色法观察最大无毒浓度的贝母素乙与低质量浓度(0.02、0.005、0.04、0.02、0.01μg/mL)的阿霉素共同作用于上述肿瘤细胞7 d后的细胞增殖情况,并设溶剂对照和贝母素乙、阿霉素单用对照。结果:与阿霉素单用比较,贝母素乙和阿霉素联用后可不同程度提高5种肿瘤细胞的生长抑制率,大部分差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);IC50值均明显减小,差异均具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与溶剂对照比较,贝母素乙单用或阿霉素单用7 d对5种肿瘤细胞的增殖均无明显影响,而贝母素乙和阿霉素联用7 d均能明显抑制5种肿瘤细胞的增殖。结论:贝母素乙可不同程度地增强上述5种肿瘤细胞对阿霉素的敏感性,具有一定的化疗增敏作用。     

基于响应曲面设计的抑制流感病毒神经氨酸酶活性的组分中药筛选——以双黄连注射液为例

旨在建立组分中药组方筛选新方法,以期客观评估多组分内在关系及优化配比。以流感病毒神经氨酸酶(NA)活性抑制率为指标,采用Box-Behnken响应曲面设计法,对双黄连注射液(SHL)中主要指标成分进行抑制NA活性筛选,探讨其活性组分间的相互作用关系,并以SHL为参照,预测组合成分的最佳配比。结果表明,原方中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸和黄芩苷有较强的NA活性抑制作用,且绿原酸与隐绿原酸间存在拮抗作用,咖啡酸对其他组分具有协同增效作用;连翘酯苷A、连翘苷等未见明显(或协同)NA活性抑制作用;拟合的模型预测组分最佳配比为绿原酸-隐绿原酸-咖啡酸-黄芩苷(107μg.mL-1∶279μg.mL-1∶7.99μg.mL-1∶92μg.mL-1),经实验验证,其NA活性抑制作用强于SHL(P<0.05)。Box-Behnken响应曲面设计法具有普筛高效、预测准确等优势,适合用于组分中药组方的筛选与优化配比研究,为有效推进现代组分中药的发展提供了技术支持。     

5-Fu与TRAIL联用抗结肠癌细胞株HT-29效应的实验研究

目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与5-氟尿嘧啶(5-Fu)联用对结肠癌细胞株HT-29体外生长增殖、凋亡的影响,评价其联用效果.方法 体外培养HT-29细胞,采用磺基罗丹明B(SRB)法测定细胞的存活率,Webb系数法判断联用是否具协同作用,流式细胞FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡.结果 结肠癌细胞株HT-29对TRAIL不敏感(IC50＞10 μg·mL-1),对5-Fu敏感(IC50＜10 μg·mL-1);0.1、1、10 μg·mL-1 TRAIL分别与0.05、0.1、0.5 μg·mL-1 5-Fu联用48 h,除0.1 μg·mL-1 TRAIL与0.5 μg·mL-1 5-Fu联用组外,其余联用组细胞存活率均明显低于TRAIL单用组或5-Fu单用组水平;0.1 μ·mL-1 TRAIL及0.5 μg·mL-1 5-Fu单用或联用时,HT-29细胞凋亡率分别为8.6%、18.1%和30.8%.结论 5-Fu 与TRAIL联用具有协同的细胞毒和细胞凋亡作用.     

噻唑蓝法测定香菇多糖体外对癌细胞毒作用

目的评价香菇多糖对癌细胞的体外细胞毒作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法测定香菇多糖对人前列腺癌细胞PC-3、人肺癌细胞A-549、人肝癌细胞HepG2和人白血病细胞K-562的细胞毒作用。结果香菇多糖对人前列腺癌细胞PC-3、人肺癌细胞A-549、人肝癌细胞HepG2和人白血病细胞K-562的半数抑制浓度(IC50)值分别为(25.8±3.4),(90.0±7.8),(63.3±4.2),(33.1±3.3)μg.mL-1,生长曲线显示香菇多糖100μg.mL-1对PC-3细胞及HepG2细胞的抑制率随着时间增加而增强,表现出一定的时-效关系。结论香菇多糖对癌细胞具有一定的体外细胞毒作用。     

注射用大蒜油羟丙基-β-环糊精包合物的体外抗真菌作用研究

目的:研究注射用大蒜油羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合物的体外抗真菌作用。方法:采用沙氏培养基以倍比稀释法测定注射用大蒜油HP-β-CD包合物、大蒜油注射液、氟康唑注射液6个梯度浓度(3.1～100μg.mL-1)对白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、烟曲菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果:对上述4种受试菌注射用大蒜油HP-β-CD包合物的MIC分别为50、50、50、25μg.mL-1,大蒜油注射液的MIC分别为50、50、100、50μg.mL-1,2种制剂对烟曲菌的MBC均为100μg.mL-1;而氟康唑注射液对前3种菌的MIC分别为25、50、50μg.mL-1,对烟曲菌无效。结论:注射用大蒜油HP-β-CD包合物与大蒜油注射液对4种受试菌具有相似的广谱抗真菌作用,提示临床上可与氟康唑注射液联合用药。     

高效液相色谱法同时测定扑地麻滴鼻液中3组分的含量

目的:建立以高效液相色谱法同时测定扑地麻滴鼻液中盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏、地塞米松磷酸钠含量的方法。方法:色谱柱为ShimpackODS,流动相为甲醇-50mmol.L-1磷酸二氢钾缓冲液(45∶55),检测波长为240nm,流速为1.0mL.min-1,柱温为室温。结果:盐酸麻黄碱、马来酸氯苯那敏、地塞米松磷酸钠检测浓度分别在100~400(r=0.9993)、50~200(r=0.9997)、10~40(r=0.9998)μg.mL-1范围内与峰面积积分值线性关系良好,平均回收率分别为(99.59±0.41)%、(100.25±0.61)%、(100.70±1.66)%。结论:本方法对3组分和附加剂分离效果好,精密度和回收率高,可用于该药的含量测定。     

HPLC法测定血压安缓释片中3组分的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定血压安缓释片中阿替洛尔、氢氯噻嗪及硝苯地平含量的方法。方法:色谱柱为ZORBAXSBC18,流动相为0.01mmol·L-1磷酸二氢钠-甲醇-乙腈(6∶3∶1),流速为1.0mL·min-1,检测波长为272nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果:阿替洛尔、氢氯噻嗪和硝苯地平检测浓度的线性范围分别为10～250(r=0.9994)、6～150(r=0.9996)、5～125μg·mL-1(r=0.9992);平均回收率分别为(98.51±0.98)%～(99.12±0.98)%、(98.87±1.10)%～(99.69±1.43)%、(98.80±1.27)%～(99.38±1.13)%,RSD分别为1.00%、1.17%、1.25%。结论:本方法操作简便、灵敏度高、专属性强、重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

林可霉素甲硝唑凝胶的制备及质量控制

目的:制备林可霉素甲硝唑凝胶并建立其质量控制方法。方法:以甘油、卡波姆-940等为辅料制备凝胶;采用高效液相色谱法和紫外分光光度法分别测定其中主药含量。结果:所制备凝胶性状、鉴别等均符合2005年版《中国药典》相关规定;林可霉素、甲硝唑检测浓度的线性范围分别为248.00～1033.34(r=0.9999)、2.29～22.90μg.mL-1(r=1.0000),平均回收率分别为101.10%(RSD=1.54%)、100.47%(RSD=0.62%)。结论:本制剂制备工艺简便可行,质量稳定可控。     

HPLC法测定犬血浆中的苦参素和苦参碱

目的:建立同时测定Beagle犬血浆中苦参素和苦参碱的高效液相色谱(HPLC)方法。方法:以高氯酸沉淀蛋白,在强碱条件下用二氯甲烷萃取苦参素和苦参碱,通过HPLC法分别测定苦参素和苦参碱的血药浓度。结果:苦参素和苦参碱分别在0.2～15μg.mL-1和0.1～5μg.mL-1的浓度范围内呈现良好的线性关系,最低检测限均为20ng.mL-1,提取回收率、方法回收率、日内精密度和日间精密度均符合要求。结论:本方法简便、准确、干扰少,灵敏度高,可以同时检测到苦参素和苦参碱,适用于苦参素体内药动学的研究及其体内转化过程和代谢途径的研究,并对研制苦参素的新制剂有一定的指导作用。     

反相高效液相色谱法同时测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中2组分的含量

目的:建立以反相高效液相色谱法同时测定注射用氨苄西林钠氯唑西林钠中氨苄西林和氯唑西林含量的方法。方法:色谱柱为LBondapakC18,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(7∶93),流速为1.0mL.min-1,检测波长为225nm,柱温为25℃。结果:氨苄西林和氯唑西林检测浓度分别在45~134μg.mL-1和44~131μg.mL-1范围内呈良好线性关系(r=0.9995),平均回收率分别为99.7%(RSD=0.60%)和101.3%(RSD=0.58%)。结论:本方法简单、快速、准确,适用于该注射剂的质量控制。     

苦豆子总碱泡腾栓的制备及质量标准研究

目的:制备苦豆子总碱泡腾栓并研究其质量标准。方法:以苦豆子总碱(TASa)为主药制备苦豆子总碱泡腾栓;用HPLC法测定氧化苦参碱、苦参碱和槐果碱的含量:色谱柱为DiamonsiLC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.05mol.L-1磷酸钾缓冲液(2‰三乙胺)=10.5∶89.5,检测波长为210nm,柱温为室温,流速为1.0mL.min-1。结果:上述3种生物碱分别在1~10、10~60、5~40μg.mL-1浓度范围内与平均峰高呈良好的线性关系;平均回收率分别为76.63%、83.14%、95.2%,日内及日间RSD均小于0.07%。结论:该制剂制备工艺简单,所建标准可用于制剂的质量控制。     

RP-HPLC法测定人血浆中头孢他美浓度

目的:建立以RP-HPLC法测定人血浆中头孢他美浓度的方法。方法:色谱柱为Hypersil C18,流动相为0.04%高氯酸溶液-乙腈(83∶17),柱温为40℃,流速为1.0mL.min-1,检测波长为265nm。结果:头孢他美检测浓度在0.125~8.0μg.mL-1范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 8),最低检出浓度为0.125μg.mL-1,平均回收率为100.6%(RSD=1.2%);日内RSD≤5.3%(n=5),日间RSD≤4.0%(n=5)。结论:本方法简便、灵敏、准确、重现性好,可为头孢他美酯胶囊药动学和生物利用度研究提供参考。     

HPLC法测定参苏丸中橙皮苷的含量

目的:建立以HPLC法测定参苏丸中橙皮苷含量的方法。方法:色谱柱为Microsorb C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-甲醇-0.2mol·L-1醋酸铵-冰醋酸(65∶11∶23∶1),柱温为23℃,检测波长为283nm,流速为0.8mL·min-1。结果:橙皮苷在10~50μg·mL-1浓度范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9996);平均回收率为99.37%,RSD=1.63%。结论:本法快速、简便、回收率高、重现性好。     

HPLC法同时测定人血浆中霉酚酸与霉酚酸葡糖苷酸的浓度

目的:建立以高效液相色谱法同时测定人血浆中霉酚酸(MPA)与霉酚酸葡糖苷酸(MPAG)浓度的方法。方法:色谱柱为LunaC18,流动相为(20mmol·L-1磷酸二氢钾+40mmol·L-1四丁基溴化铵(pH5·5))-乙腈=73:27,流速为1·6mL·min-1,MPA与MPAG采用二极管阵列检测器和荧光检测器串联检测,MPAG检测波长为250nm,MPA荧光检测波长为316nm(激发波长)、430nm(发射波长),柱温为38℃,其中血样加乙腈沉淀蛋白后进样10μL。结果:MPA、MPAG检测浓度分别在0·2～20(r=0·9993)、1～100(r=0·9999)μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系,最低检测限分别为0·05、0·1μg·mL-1;平均回收率分别为95·54%、100·22%;MPA日内、日间RSD均<6%,MPAG日内、日间RSD均<4%。结论:本方法快捷、简便、灵敏,可用于测定人血浆中MPA与MPAG的浓度。