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相似文献
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1.
周文  汪涛  孙玉萍  凌庆 《河北医药》2005,27(8):570-571
目的血管内皮生长因子(VEGF)基因转染骨髓间充质干细胞,探讨骨髓间充质干细胞定向分化血管内皮细胞的可行性研究。方法VEGF165基因的质粒PEGFP-C1,采用超声辅助电穿法转染骨髓间充质干细胞,转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果超声辅助转染后5h可见细胞内有GFP表达,10h后出现表达高锋,持续3d左右,其后有些细胞荧光开始减退。结论VEGF基因转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞内有GFP表达,提示细胞转染成功,骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性。  相似文献   

2.
脂肪干细胞脂向分化过程中miRNA-27b表达的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨与脂肪干细胞脂向分化密切相关的microRNA(miRNA)表达情况,为阐明脂肪干细胞脂向分化的调控机制提供新的线索.方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法结合密度梯度离心获得脂肪干细胞,将第3代细胞采用脂向诱导液(α-MEM培养基内加入100mL/L胎牛血清、1μmol/L地塞米松、10μmol/L胰岛素、200 μmol/L吲哚美辛和0.5mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)进行脂向诱导;分别应用miRNA芯片技术及实时定量PCR技术对脂肪干细胞脂向分化中的miRNA-27b表达情况进行检测,分析miRNA-27b的变化趋势,并结合生物信息学方法探讨miRNA-27b与脂肪干细胞脂向分化相关的生物学功能.结果:建立了脂肪干细胞体外脂向分化的模型,miRNA芯片及实时定量PCR结果均表明miRNA-27b在脂肪干细胞体外脂向分化过程中表达显著下调.结论:miRNA-27b可能与脂肪干细胞的脂向分化密切相关,并可能通过调控其靶基因PPARγ的表达而促进脂肪干细胞的脂向分化.  相似文献   

3.
目的 探讨骨髓间充质干细胞定向分化血管内皮细胞的可行性研究。方法 VEGF165基因的质粒PEGFP-C1,采用超声辅助电穿法转染骨髓间充质干细胞,转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果 超声辅助转染后5h可见细胞内有GFP表达,10h后可达高锋,持续3天左右,其后有些细胞荧光开始减退。结论 VEGF基因转染骨髓间充质干细胞后,骨髓间充质干细胞内有GFP表达,提示细胞转染成功,骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性。  相似文献   

4.
目的体外定向诱导人脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞的分化。方法人脂肪间充质干细胞分3个阶段进行诱导,第一阶段培养在含适当浓度的2-巯基乙醇的高糖-达氏修正依氏培养基(HG-DMEM)培养2d,第二阶段在含适当浓度的B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及表皮生长因子(EGF)的HG-DMEM培养基中诱导6d,第三阶段在含适当浓度的2-巯基乙醇和B27和尼克酰胺高糖无血清DMEM培养基诱导细胞向胰岛样细胞分化。对照组用HG-DMEM培养。在相差显微镜下观察细胞的形态;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导前后nestin、胰岛素基因的表达;用免疫荧光染色法检测诱导前后nestin、胰岛素的表达;诱导第三阶段进行双硫腙染色鉴定胰岛B样细胞团。结果未经诱导的脂肪间充质干细胞呈长梭形贴壁生长,诱导后细胞逐渐变圆,并聚集成团。诱导8d细胞nestin基因呈阳性表达,诱导14d细胞nestin基因表达量下降,胰岛素基因表达呈阳性。诱导后的细胞团双硫腙染色呈棕红色。结论2-巯基乙醇、EGF、bFGF及尼克酰胺等可在体外诱导人脂肪间充质干细胞分化为具有分泌胰岛素功能的胰岛样细胞。  相似文献   

5.
马一翔 《现代药物与临床》2014,29(11):1203-1208
目的:通过研究Chir99021联合PD0325901对小鼠胚胎干细胞中miRNAs差异表达的影响,为揭示胚胎干细胞的自我更新和分化的机制提供更多线索。方法采用miRNA基因芯片技术检测Chir99021联合PD0325901处理组和PD0325901处理组miRNAs的表达谱差异。选取3倍以上及通过查文献与胚胎干细胞自我更新相关的1.5倍以上3倍以下的miRNAs,采用实时荧光定量PCR法验证,利用miRDB、Miranda两个数据库交叉预测差异表达的靶基因,并应用KEGG Pathway进行靶基因功能富集分析。结果与PD0325901单独处理相比,Chir99021联合PD0325901处理组有47种miRNAs上调1.5倍以上,75种miRNAs下调1.5倍以上;用实时荧光定量PCR验证差异表达的miRNAs,结果显示13个miRNAs与芯片结果相符。靶基因预测分析显示,miR-466a-5p、miR-466d-5p处于重要位置,Plcb1、Prkcb处于关键基因位置。结论 Chir99021可引起小鼠胚胎干细胞中的miRNAs差异表达,差异表达的miRNAs可能通过调控Plcb1、Prkcb基因而影响胚胎干细胞的自我更新。  相似文献   

6.
目的探究人脐带间充质干细胞具有的生物学特性,并对其向神经样细胞的分化进行研究。方法检测人脐带间充质干细胞细胞表面的标记;以β巯基乙醇与丹参诱导其向神经细胞分化,并为分化细胞与未分化细胞进行免疫细胞化学鉴定。此外,半定量RT-PCR检测细胞神经相关基因表达。结果分离自人脐带的贴壁细胞在体外可以生长成类似成纤维细胞的形态,在未分化状态下可以维持稳定增殖形态,且体外增殖远超10代,这类细胞表面标记CD105、CD59、CD44、CD29有较高的表达,而造血细胞的表面标记CD117、CD45、CD34、CD33、CD28、CD14则无表达或低表达,而与其相同表达的还有移植免疫排斥相关的表面标记,如CD86、CD80、CD40。经诱导分化的细胞表达神经元标记β-Ⅲ类神经微管和神经微丝、神经干细胞标记巢蛋白、神经胶质细胞标记的胶质纤维酸性蛋白。经过RT-PCR检测可知,经丹参诱导后的间充质干细胞表达神经干细胞的相关基因Neatin,而诱导前后间充质干细胞全部表达神经细胞基因Pleiotrophin并且在诱导后表达增强。结论人脐带间充质干细胞具有易于培养扩增的生物学特性,其表达间充质干细胞的表面标记,低或不表达造血细胞、与移植排斥有关的细胞标记。同时,其可以分化为神经样细胞并表达神经细胞的基因与相关标记,这种细胞可以作为肝细胞的一个来源,用于中枢神经系统细胞的移植。  相似文献   

7.
地黄及其活性成分药理作用研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
地黄水提液能够保护胃黏膜,抑制肺纤维化,还具有促进造血、降糖、抗炎、抗肿瘤和促进血管内皮细胞增殖等作用;地黄中的主要化学成分低聚糖可以促进骨骼肌成肌细胞的增殖,对骨髓和脂肪间充质干细胞有保护和诱导分化作用,具有降糖和增强学习记忆能力的作用;梓醇具有降糖、改善学习记忆能力的作用;多糖能改善造血功能,对脂肪间充质干细胞有保护作用,对骨髓间充质干细胞有诱导分化作用,还有中枢抑制作用。本文总结归纳了地黄水提液、低聚糖、多糖以及梓醇的药理作用研究进展。  相似文献   

8.
原泉 《中国基层医药》2007,14(4):566-568
目的探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)向神经元样细胞分化的规律,以及神经节苷脂-1(GM- 1)在诱导分化过程中的作用。方法取成年兔颈后脂肪组织采用胶原酶消化法原代培养脂肪间充质干细胞,取第5代脂肪间充质干细胞分别采用β-巯基乙醇及GM-1与β-巯基乙醇联合作用的方式向神经元样细胞诱导。免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达,细胞化学染色检测尼氏小体的生成。结果成功分离出脂肪间充质干细胞,通过β-巯基乙醇及GM-1与β-巯基乙醇联合作用均可使ADSCs定向诱导为神经元样细胞,联合诱导组NSE及尼氏小体表达的阳性率均高于单纯β-巯基乙醇诱导组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论从兔脂肪组织中能够分离出脂肪间充质干细胞,通过诱导可向神经元样细胞分化,GM-1具有促进脂肪间充质干细胞向神经元样细胞分化的能力。  相似文献   

9.
目的筛选缺氧预处理(hypoxia preconditioning,HPC)诱导成年大鼠心肌细胞差异表达的microRNA(miRNA),并预测分析miRNA调控的靶基因与功能。方法体外分离培养成年大鼠心室肌细胞,分为对照组(CON)和缺氧预处理组(HPC),CON组细胞正常培养,HPC组细胞经历10 min缺氧和30 min再给氧,提取心肌细胞总RNA,行miRNA芯片筛选,qRT-PCR验证芯片结果。利用软件预测差异表达miRNA调控的靶基因,分析靶基因富集的基因功能(gene ontology,GO)和信号通路(pathway)。结果与CON组相比,HPC可诱导大鼠心肌细胞miRNA表达谱发生明显改变,共有12个miRNA上调,14个miRNA下调(P<0.01,FDR<0.05);选择其中荧光信号值>500的7个miRNA,用于生物信息学分析。qRT-PCR检测miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216水平,变化趋势与芯片结果一致。生物信息学分析显示差异表达miRNA所调控的靶基因功能明显富集于27个GO和6条信号通路。结论 HPC可诱导成年大鼠心肌细胞miRNA表达谱明显改变,这些差异表达miRNA可能通过调控靶基因参与HPC介导的心肌细胞保护作用。  相似文献   

10.
目的探讨大鼠脂肪间充质干细胞体外分离培养和成骨诱导分化的可行性。方法取6周龄大鼠双侧腹股沟处脂肪,酶鹪法分离培养原代脂肪间充质干细胞,成骨诱导培养18d,检测细胞成骨表型转化:碱性磷酸酶、骨钙素的表达以及细胞矿化细胞外基质的能力。结果大鼠脂肪中能分离培养出一定量的脂肪间充质干细胞,在成骨诱导培养液作用下,可特异性表达成骨分化的标志:碱性磷酸酶、骨钙素,同时也具有矿化细胞外基质的能力。结论大鼠脂肪间充质干细胞可能是一种理想的骨组织工程种子细胞的来源。  相似文献   

11.
AIM: To investigate the effect of tricyclodecane-9-yl-xanthogenate (D609) on cell differentiation in vascular endo- thelial cells (VECs) and marrow stromal cells (MSCs). METHODS: Morphological changes were observed under phase contrast microscope. Electron microscope and immunostaining were used for VECs identification. The expressions of neuron-specific enolase (NSE) and glial fibrillary acidic protein (GFAP) were examined by immunohistochemistry. RESULTS: After 6 h of induc…  相似文献   

12.
骨髓基质干细胞具有取材简单、增殖速度快、培养过程中始终保持多向分化的潜能等特点,已经成为干细胞研究领域的热点,是最好的组织工程种子细胞之一,还可以诱导分化为神经细胞。本文对骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展作一综述。  相似文献   

13.
目的观察华蟾素对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIKC)的表型变化及其对肝癌的细胞毒作用。方法采集健康供者的外周血单个核细胞(MNC)培养,收集非贴壁细胞并加入白细胞介素2(IL-2)诱导培养CIKC,将华蟾素加入CIKC,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测CIKC杀伤BEL7402肝癌细胞株的活性。结果CIKC经华蟾素加入培养后,CIKC细胞群的CD3+CD8+,CD3+CD56+细胞比例和杀伤活性较单纯的CIKC更高。结论华蟾素有助于CIKC的细胞毒活性。  相似文献   

14.
目的分离培养人脂肪干细胞(hADSCs),用不同浓度GDF-5进行诱导,观察细胞形态变化及检测相关蛋白的表达,评价其是否具有软骨样细胞的特性。方法取人抽脂术后的无菌脂肪组织,酶消化法分离培养hADSCs,观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖能力。用含0、50、100ng/mlGDF-5的软骨诱导液培养,观察形态变化,检测Ⅱ型胶原及GAG的表达。结果 hADSCs呈长梭形,P10以后仍具有较强的增殖能力。经GDF-5诱导的hADSCs逐渐变为圆形、多角形,部分细胞聚集生长,形成软骨样结节;诱导28d的细胞Ⅱ型胶原表达阳性,甲苯胺蓝将GAG染成蓝色,但100ng/mlGDF-5诱导组阳性表达明显高于50ng/ml诱导组。结论 hADSCs在100ng/mlGDF-5的诱导下可分化为软骨样细胞。  相似文献   

15.
张波  范新兰  林天歆  许可慰  黄健 《江苏医药》2012,38(17):1989-1991,1984
目的从PC-3人前列腺癌细胞中分离并富集前列腺癌干细胞。方法体外无血清悬浮培养PC-3细胞,通过传代更新、诱导分化验证PC-3悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新及分化潜能,实时荧光定量核酸扩增检测系统检测CD44和CD133mRNA的表达,流式细胞术检测CD44+CD133+细胞和侧群(SP)细胞比例。结果 PC-3成球细胞可以在无血清培养液(SFM)中生存并形成可以稳定传代的悬浮细胞球。PC-3成球细胞具有自我更新和分化能力,其前列腺癌干细胞标志物CD44和CD133mRNA的相对表达量分别是PC-3贴壁细胞的41.83倍和10.48倍(P<0.05)。PC-3悬浮成球细胞中CD44+CD133+细胞比率为13.94%,SP细胞含量为3.10%,均显著高于PC-3贴壁细胞的0.77%和0(P<0.05)。结论通过无血清悬浮聚球培养可以从PC-3细胞中简便、高效地富集前列腺癌干细胞。  相似文献   

16.
体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞为血管内皮细胞的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
丁洋  万圣云 《安徽医药》2008,12(4):324-325
目的研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)定向分化为血管内皮细胞,为组织工程血管化及细胞移植修复损伤组织提供理想的细胞来源。方法贴壁法分离SD大鼠MSCs进行体外培养和连续传代,采用第四代MSCs,以血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth facotr,bFGF)进行体外诱导,免疫荧光染色方法鉴定内皮细胞,并通过透射电镜观察内皮细胞W-P小体。结果免疫荧光染色证实实验组细胞阳性表达,透射电镜观察到内皮细胞特有的WP小体。结论MSCs可以在体外定向分化为具有血管内皮细胞特性的细胞。  相似文献   

17.
罗蔚锋  张志琳  包仕尧  刘春风  霍红梅 《江苏医药》2007,33(4):375-377,F0002
目的 研究还原型谷胱苷肽(GSH)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)的诱导分化作用.方法 用SD大鼠股骨、胫骨以及肱骨骨髓细胞体外培养.采用GSH诱导rBMSCs 24h,免疫细胞化学染色评价神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)表达率.结果 诱导6、24h时,MSCs分化成神经元样细胞,形成网络状结构,免疫细胞化学染色诱导出的神经元样细胞NSE表达阳性率分别为(64.0±4.3)%和(71.0±5.0)%.结论 GSH可诱导MSCs分化形成神经元样细胞.  相似文献   

18.
目的观察黄芪提取物抑制胃癌细胞上清对腹膜间皮细胞的凋亡作用。方法将胃癌细胞(MKN45)上清单独或与黄芪提取物联合作用于人腹膜间皮细胞HMrSV。光镜下观察人腹膜间皮细胞形态学变化;MTT检测黄芪作用后人腹膜间皮细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果 MTT及流式细胞仪检测出胃癌细胞(MKN45)上清诱导人腹膜间皮细胞凋亡呈时间依赖性;荧光显微镜观察胃癌细胞(MKN45)上清作用后,间皮细胞出现典型凋亡特征。结论黄芪提取物明显抑制胃癌上清促间皮细胞凋亡作用。  相似文献   

19.
目的探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的体外培养和向神经元样细胞分化的方法。方法通过梯度分离获得成年大鼠MSCs,在细胞因子和氧化剂作用下对其诱导分化为神经元样细胞,免疫细胞化学方法检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经巢蛋白(Nestin)的表达情况,流式细胞仪检测分析诱导率。结果BMSCs被转化神经元样细胞并表达Nestin。应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、叔丁基对羟基茴香醚(BHA)所获得的神经元样细胞诱导率高(49.7%)。结论bFGF、BHA能促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞。  相似文献   

20.
肺干细胞的研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
肺干细胞(lung stem cells)是指在特定条件下能分化为功能性肺组织,在维持肺组织更新和肺损伤修复中起着重要作用的细胞。近年来对肺干细胞的研究已取得了很大的进展,该文就肺干细胞的来源、分离方法、应用以及肺癌干细胞等方面的研究进展作如下综述。  相似文献   

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