血管紧张素Ⅱ与肝纤维化关系的研究进展

血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)具有广泛的生物学效应,它不仅具有调节血压和水盐代谢的作用,还有促进细胞增生、调节细胞外基质代谢和上调细胞因子表达等非血流动力学作用。AngⅡ的生物学效应是由特异性的受体即血管紧张素受体(angiotensin receptor,ATR)介导,血管内皮上的     

淡豆豉异黄酮对增殖血管平滑肌细胞JAK2/STAT3信号转导通路的影响

目的探讨淡豆豉异黄酮对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及Janus激酶2-细胞信号转导及转录活化因子3(JAK2/STAT3)信号通路的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMC增殖模型,MTT法检测VSMC增殖活性;RT-PCR法检测AngⅡ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor1,AT1R)mRNA表达;Westernblot法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白JAK2,STAT3及其磷酸化表达水平。结果100、200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,并明显下调AT1R mRNA表达水平;200μg·L-1淡豆豉异黄酮可明显下调磷酸化JAK2、磷酸化STAT3的表达。结论淡豆豉异黄酮可抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,其机制可能与下调AT1R表达,阻断JAK2/STAT3信号通路的磷酸化有关。     

缬沙坦的临床应用研究进展

血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的主要活性介质.在RAS中,AngⅡ是主要的升压剂,效果包括收缩血管,促进醛固酮分泌,刺激心脏以及肾重吸收钠,在导致高血压和靶器官损伤中产生重要的作用.血管紧张素受体(angiotensin receptor,AT受体)有4种亚型,即AT1、AT2、AT3和AT4.AT1和AT2性质结构已被阐明,它们均可被AngⅡ和AngⅢ活化,AT2具有稳定斑块的作用;AT4主要被AnglV活化,而AT3则还未被完全阐明[1].     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂的临床应用进展

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(angiotensin receptor b lock-ade,ARB)通过抑制血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)和AT1受体的结合,发挥扩张血管、排钠利尿、抑制交感神经兴奋等作用,在高血压、心力衰竭、糖尿病肾病等的治疗中发挥重要作用。该文综述了ARB的最新临床应用。     

晚期糖基化终产物对心肌细胞葡萄糖转运蛋白1表达的影响及机制研究

目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对心肌细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)表达的影响,以及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在此过程中的作用。方法采用酶消化法原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立胰岛素抵抗模型,给予不同干预,用实时定量聚合酶链反应(real-Time PCR)和蛋白印迹方法检测m RNA及GLUT1和p38MAPK的蛋白表达水平。结果胰岛素抵抗心肌细胞有GLU1表达,其中对照组与BSA组GLU1表达比较差异无统计学意义(P>0.05),糖化白蛋白AGE-BSA可诱导其GLU1表达降低,AGE-BSA组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。但在阻断p38MAPK途径后表达量明显上升(P<0.05),对照组与BSA组比较,p38MAPK磷酸化水平差异无统计学意义(P>0.05),AGE-BSA可导致p38MAPK磷酸化的增加,AGE-BSA组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论糖基化终产物AGEs可诱导胰岛素抵抗心肌细胞GLUT1 mRNA和蛋白表达降低,此过程与p38-MAPK磷酸化增加有关。     

RIP140/PGC-1α在AngⅡ调节心肌能量代谢中的作用研究

目的探讨转录辅助因子受体相互作用蛋白140(receptor interacting protein 140,RIP140)与过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1α,PGC-1α)在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)调节心肌细胞能量代谢中的作用。方法借助腺病毒载体系统诱导RIP140和PGC-1α基因过表达;利用荧光检测系统测定乳鼠心肌细胞线粒体ATP的含量;实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测RIP140和PGC-1α的表达情况。结果乳鼠心肌细胞给予100 nmol·L-1AngⅡ刺激36 h后,心肌细胞线粒体ATP的含量降低(P<0.01),同时伴随RIP140 mRNA与蛋白水平的升高,而PGC-1αmRNA与蛋白水平下调。AngⅡ诱导的ATP含量减少在过表达RIP140组中进一步下降,而在过表达PGC-1α组中有所减轻。结论AngⅡ诱导的ATP含量减少与RIP140表达上调和PGC-1α表达下调有关。     

作用于AT2受体化合物的研究进展

血管紧张素Ⅱ 2型受体(angiotensin receptor type 2, AT2R)是血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)受体亚型之一,选择性激动或拮抗AT2受体可引起血管舒张、抗细胞增殖、促突起生长、阻断神经元兴奋性等。AT2受体可作为潜在的药物靶标用于心血管疾病、纤维化、炎症、神经元疾病和肿瘤等疾病的治疗。新型选择性作用于AT2受体的药物研发以及AT2受体参与的细胞内信号转导机制的研究是一个具有挑战性但值得深入研究的领域。本文对AT2受体蛋白的研究进展以及作用于AT2受体化合物的研究进行阐述,结合构效关系分析,为该领域进一步的研究提供借鉴和指导。     

ACE2小干扰RNA对平滑肌细胞AT1受体蛋白表达及其下游信号通路的影响

目的研究ACE2 siRNA干预SD大鼠平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)后,探讨ACE2对血管紧张素Ⅱ1型受体(AngⅡtype 1 receptor,ATlR)蛋白表达、ERK1/2、STAT3蛋白磷酸化水平的影响。方法(1)用脂质体法将含有ACE2基因的质粒DNA及si-ACE2转染到各对应干预组VSMCs;(2)Western blot检测各组细胞ACE2、AT1R蛋白表达水平以及p-ERK1/2、p-STAT3蛋白的磷酸化水平。结果(1)对比空白对照组、GFP组、脂质体组,si-ACE2组、AngⅡ组ACE2蛋白表达明显降低,而AT1R蛋白表达和p-ERK1/2、p-STAT3蛋白磷酸化水平明显增加(P<0.05);(2)分别对比AngⅡ组和AngⅡ+ACE2组,AngⅡ+si-ACE2组和AngⅡ+ACE2+si-ACE2相应的ACE2蛋白表达均降低,而AT1R蛋白表达、p-ERK1/2、p-STAT3蛋白磷酸化水平均增加(P<0.05)。结论ACE2 siRNA和AngⅡ均能抑制ACE2蛋白的表达,且两者对ACE2起协同抑制作用;ACE2蛋白表达的减少能上调AT1受体蛋白表达,同时提高其下游信号通路ERK1/2、STAT3蛋白磷酸化水平。     

洛沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞c-fos表达及对细胞内游离钙升高的拮抗作用

目的研究血管紧张素AT1 亚型受体拮抗剂洛沙坦(losartan,LT)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c_fos表达及细胞内游离钙变化的影响。方法斑点杂交及Fura_2技术。结果AngⅡ10nmol/L能诱导培养乳鼠心肌细胞c_fos的一过性高表达及[Ca2 ]的显著升高。LT20μmol/L能显著抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞c_fos的高表达 ,而血管紧张素AT2 亚型受体拮抗剂PD123319则无明显作用。LT1～100μmol/L能剂量依赖性地抑制AngⅡ引起的[Ca2 ]i升高。结论Ang Ⅱ诱导的心肌细胞c_fos高表达及[Ca2 ]i升高可能是通过AT1 亚型受体介导而实现的 ,LT可能是一种治疗心肌肥厚的有效药物     

厄贝沙坦抑制大鼠平滑肌细胞AT1R及其下游信号通路

目的本研究目的是利用厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预平滑肌细胞,阐明血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达及其下游信号通路的影响。方法利用Western Blot技术,研究厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ干预平滑肌细胞后对细胞AT1受体蛋白表达及其下游信号通路-细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白磷酸化水平的影响。结果研究发现厄贝沙坦能显著地抑制AngⅡ诱导的AT1受体蛋白表达(0.208±0.022 vs 0.997±0.131,P<0.01)及下游信号通路中的ERK1/2蛋白磷酸化(0.055±0.007 vs 0.103±0.020,P<0.01)、STAT3蛋白磷酸化(0.162±0.010 vs 0.758±0.054,P<0.01)。结论这些研究结果表明厄贝沙坦抑制AT1R和下游的ERK1/2及STAT3信号通路,从而抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖等,发挥控制血压、防治心脑血管疾病作用。     

氯沙坦调节高血压大鼠血管重塑及其对p38MAPK信号蛋白表达的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ受体-1阻断剂氯沙坦对肾性高血压大鼠血管重塑及其分裂原激活的蛋白激酶p38MAPK表达的影响。方法两肾一夹法复制肾血管性高血压大鼠(2K1C-RHR)模型;采用尾动脉套管法和颈动脉插管法测量大鼠血压,大血管(胸主动脉)苏木素-伊红(HE)染色进行形态学观察;治疗组采用氯沙坦灌胃治疗;反转录-聚合酶链反应和免疫印迹方法检测主动脉血管p38MAPK的表达。结果实验组大鼠和对照组(假手术组)普通饲料饲养6周,模型组血压为(158±7)mmHg,对照组血压为(104±11)mmHg;两组间差异有显著性(P<0.05);模型组大鼠胸主动脉内径增大,中层厚度增大,细胞层数略微增加。经氯沙坦治疗后,血压降为(132±9)mmHg,血管重塑现象氯沙坦治疗组较实验组明显改善;免疫印迹方法检测,重塑血管主动脉血管p38MAPK的表达增高,氯沙坦干预可以抑制其表达。结论氯沙坦可明显改善肾血管性高血压大鼠血管重塑,这种调节可能是通过阻断血管紧张素Ⅱ受体信号途径或调节p38MAPK表达而发挥作用。     

番石榴叶总黄酮对高血压模型大鼠心肌肥厚的改善作用

目的研究番石榴叶总黄酮对高血压模型大鼠心肌肥厚的改善作用。方法从60只健康SD大鼠中随机取10只作为正常组;另外50只大鼠复制高血压模型,将其中建模成功的44只采用随机体质量排序法分为模型组、茴香霉素组[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)激活剂,1 mg/kg]、番石榴叶总黄酮+茴香霉素组(200 mg/kg番石榴叶总黄酮+1 mg/kg茴香霉素)、番石榴叶总黄酮组(200 mg/kg),每组11只。正常组和模型组大鼠灌胃3%羟甲基纤维素钠溶液,其余各组大鼠灌胃相应药液,每天1次,连续6周。检测大鼠血压(收缩压、舒张压、平均动脉压)水平和心脏指数、左心室指数;检测大鼠心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6水平;观察大鼠心肌组织的病理形态学变化;检测大鼠心肌组织中p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)蛋白的表达水平。结果与正常组比较,茴香霉素组、模型组大鼠的收缩压、舒张压、平均动脉压水平,心脏指数、左心室指数和心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及p-p38 MAPK、p-ERK1/2、p-JNK蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05);心肌细胞肥大,心肌纤维走向紊乱,心肌纤维间结缔组织疏松水肿、增生,炎症细胞浸润增多等。与茴香霉素组、模型组比较,番石榴叶总黄酮+茴香霉素组、番石榴叶总黄酮组大鼠上述指标水平均显著降低(P<0.05);心肌细胞稍大、排列尚可,心肌细胞肥大程度及结缔组织疏松水肿、增生情况减轻,且番石榴叶总黄酮组的改善效果更为显著(P<0.05)。结论番石榴叶总黄酮可降低高血压模型大鼠的血压水平,并改善其心肌肥厚,其作用机制可能与抑制p38 MAPK信号通路活性及炎症因子表达有关。     

AT1-R-JAK／STAT 信号通路对肥大心肌细胞表达内脂素的调节

目的：观察心肌细胞肥大过程中应用不同的信号通道阻断剂阻断AngⅡ作用后内脂素的表达情况,研究内脂素水平变化的意义。方法采用SD乳鼠（出生2～3 d）,利用差速贴壁法提取原代心肌细胞并进行培养,48 h后改为无血清的培养基继续培养,24 h后分组。分别应用不同的信号通道阻断剂阻断AngⅡ的干预作用。应用RT-PCR、Western-Blot技术检测心肌细胞中内脂素表达情况,应用Western-Blot技术检测心肌细胞脑氨钠素（ BNP）表达情况。结果心肌细胞活力（光密度值）和BNP表达水平在AngⅡ浓度为10－8、10－7、10－6 mol／L时逐渐升高,AngⅡ浓度为10－6 mol／L时达峰值,而AngⅡ浓度升高为10－5 mol／L时心肌细胞活力下降,BNP表达水平下降。内脂素和内脂素mRNA水平,在AngⅡ浓度为10－8、10－7、10－6 mol／L时呈逐渐升高趋势, AngⅡ浓度为10－5 mol／L时达峰值。在AngⅡ浓度为10－6 mo1／L时,心肌细胞活力、内脂素mRNA表达和内脂素蛋白表达与对照组比较,差异均有统计学意义（ P ＜0．05）。心肌细胞MTT产物（ OD值）、内脂素mRNA和蛋白表达、BNP蛋白表达水平,随时间延长而增加。PD123319预干预组和AngⅡ干预组内脂素mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组和替米沙坦预干预组（P＜0．05）。AngⅡ组内脂素mRNA和蛋白表达水平与对照组、AG490＋AngⅡ组、SP600125＋AngⅡ组和U0126＋AngⅡ组比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）,AG490＋AngⅡ组、SP600125＋AngⅡ组和U0126＋AngⅡ组明显高于对照组（P＜0．05）。结论在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大中内脂素表达的增加,由AT1-R-JAK／STAT信号通路所介导。     

黄芪多糖在未成年大鼠心肌缺血再灌注炎性损伤中的作用

目的：研究黄芪多糖在未成年大鼠心肌缺血再灌注炎性损伤中的作用。方法：1周龄雄性SD大鼠随机分为5组,假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、黄芪多糖组（40 mg·kg^-1,APS组、p38MAPK阻断剂SB203580组（5 mg·kg^-1,SB组）,APS+SB203580组（APS 40 mg·kg^-1+SB203580 5 mg·kg^-1,APS+SB组） ,给药20 d后,进行冠状动脉左前降支结扎60 min后恢复血流再灌注120 min,经眼眶采血后处死大鼠。ELISA法和Western-blot法分别测定外周血和心肌组织中TNF-α、NF-κB、p38MAPK及p-p38MAPK蛋白表达。结果：在外周血和心肌组织中,与S组比较,I/R组、APS组、SB组、及APS+SB组中TNF-α、NF-κB、p-p38MAPK表达水平均明显升高（P值均小于0.05）;与I/R组比较,APS组、SB组及黄芪APS+SB组中TNF-α、NF-κB和p-p38MAPK表达水平明显降低（P值均小于0.05）。APS+SB组对TNF-α、NF-κB、和p-p38的蛋白表达抑制作用要显著强于APS组的抑制作用（P值均小于0.05）。结论：黄芪多糖和p38MAPK阻断剂（SB203580）均能够有效改善未成年大鼠的心肌缺血再灌注损伤时的炎症反应,黄芪多糖和SB203580联用可以明显抑制TNF-α和NF-κB的表达,抑制p38MAPK信号通路,具有抑制心肌缺血再灌注损伤的协同作用。     

丝裂原活化蛋白激酶38在糖尿病小鼠肾组织中的表达

目的研究丝裂原活化蛋白激酶38（p38MAPK）在链脲左菌素（STZ）诱导的糖尿病小鼠肾组织中的表达及活化情况,从分子信号角度探讨糖尿病肾病。肾纤维化的发病机制。方法采用STZ腹腔注射诱导小鼠糖尿病模型,并检测血糖、血肌酐、24h尿白蛋白排泄率、肾小球细胞外基质;用免疫组织化学方法检测糖尿病小鼠肾组织磷酸化p38MAPK和TGFβ的表达,用RT-PCR的方法检测肾组织p38MAPK和TGFβmRNA的表达。结果腹腔注射STZ后,模型组小鼠均出现明显的多食、多饮、多尿和体质量下降等糖尿病症状,血糖明显升高,血肌酐水平明显增高,24h尿白蛋白排泄率明显增加,肾小球细胞外基质明显增宽。正常。肾组织有基础的磷酸化p38MAPK和p38MAPKmRNA表达,糖尿病形成后4周,磷酸化p38MAPK和p38MAPKmRNA在肾组织中的表达明显增高,并持续增加到8周,第12周至16周磷酸化p38MAPK和p38MAPKmRNA的表达有所减少。正常肾组织有基础的TGFβ1蛋白和mRNA表达。糖尿病形成后4周,TGFβ1蛋白和mRNA在。肾组织中的表达均明显增高,并持续增加到12周,第16周肾组织TGFβ1的表达有所减少。肾组织磷酸化p38MAPK和TGFβ1的表达趋势一致,并呈明显正相关（r=0．64,P〈0．01）,且与肾小球细胞外基质的积聚密切相关。结论p38MAPK的表达和活化可能通过介导TGFβ1的表达参与了小鼠糖尿病肾病模型肾纤维化的发生。     

G蛋白信号调节因子6对心肌细胞肥大的作用及机制研究

目的探讨G蛋白信号调节因子6(RGS6)对心肌细胞肥大的调控作用及机制。方法用AdRGS6和AdshRGS6慢病毒分别感染心肌细胞使RGS6表达上下调,AngⅡ构建肥大模型。测定各组细胞面积和ANP、BNP的表达,检测活性氧(ROS)和丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2、p38、JNK1/2)的表达。明确改变的信号通路后,用ROS抑制剂(DPI)开展逆转实验。结果 (1)与AdG FP/AngⅡ组相比,AdRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显增加,信号通路中ROS和磷酸化(p)-JNK1/2表达增加。(2)与AdshRNA/AngⅡ相比,AdshRGS6/AngⅡ组细胞面积、ANP和BNP明显降低,信号通路中ROS和p-JNK1/2表达下降。(3)逆转实验:与AdRGS6/AngⅡ组相比,DPI干预的AdRGS6/AngⅡ组心肌细胞面积明显降低,p-JNK1/2蛋白表达降低。结论 RGS6通过激活ROS/JNK1/2通路促进心肌细胞肥大。     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK信号通路调控高糖微环境下成骨细胞分化

目的 探讨唑来膦酸盐（ZOL）对高糖微环境下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）通路的调节作用。方法 体外培养MC3T3-E1细胞并分为低糖（LG）组、LG+ZOL组、高糖（HG）组、HG+ZOL组。ZOL为0.1 μmol/L,LG、HG的葡萄糖浓度分别为5.5 mmol/L和16.5 mmol/L。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖水平;鬼笔环肽染色观察细胞骨架;试剂盒检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;免疫荧光法检测Wnt5a、p38 MAPK的荧光表达强度。另设HG+ZOL+p38 MAPK通路抑制剂（SB203580）组,SB203580为10 μmol/L。Western blot检测5组细胞中Wnt5a、p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、骨形态发生蛋白2（BMP2）和Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）的表达水平。结果 4组细胞增殖水平差异无统计学意义（P>0.05）。与LG组比较,LG+ZOL组细胞骨架清晰程度,ALP活性,茜素红矿化结节生成,Wnt5a、p38 MAPK蛋白荧光表达强度,Wnt5a、p38 MAPK、p-p38 MAPK、BMP2和COLⅠ蛋白表达水平明显升高;HG组上述指标变化相反（P<0.05）。与HG组相比,HG+ZOL组细胞骨架清晰程度,ALP活性,茜素红矿化结节生成,Wnt5a、p38 MAPK蛋白荧光表达强度,Wnt5a、p38 MAPK、p-p38 MAPK、BMP2和COL Ⅰ蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与HG+ZOL组相比,HG+ZOL+SB203580组Wnt5a、p38 MAPK、p-p38 MAPK、BMP2和COL Ⅰ的蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论 高糖对细胞成骨分化起抑制作用,ZOL可有效改善其抑制作用,其机制可能与p38 MAPK通路相关。     

Inhibition of phosphorylation of p38 MAPK involved in the protection of nephropathy by emodin in diabetic rats

To explore the protection of emodin on renal dysfunction in the streptozotocin-induced diabetic rats with nephropathy and the role of p38 mitogen-activated protein kinase (p38 MAPK) signal transduction pathway in this protection. 30 male Spraque-Dawley rats were randomly divided into control group, model group and emodin group. The rats in the model group and emodin group were administered with streptozotocin (60 mg/kg) to induce diabetes. 40 mg/kg/day of emodin were orally given to the rats in emodin group. The rats in other groups were only given solvent. Biochemical index were analysed by oxidase and oxidase dynamical enzyme method. Glomerular area and volume were determined quantitatively by using Image Analysis System. Western blotting and immunohistochemical staining was used to detect the total p38 MAPK, phosphorylated p38 MAPK, phosphorylated cAMP response element binding protein (CREB) and fibronectin. The average kidney weight/body weight, glomerular area, glomerular volume and all biochemical indexes significantly increased in model group as compared to the control group (P<0.05), while the average body weight decreased. The expressions of phosphorylaed p38 MAPK, phosphorylated CREB and fibronectin increased by 1.98-fold, 1.94-fold and 1.96-fold respectively in model group compared with those in the control group (P<0.05). Emodin markedly decreased the average kidney weight/body weight, glomerular area, glomerular volume and all biochemical indexes (P<0.05), having a weak action on the level of blood glucose. The expressions of phosphorylated p38 MAPK, phosphorylated CREB and fibronectin also significantly downregulated in emodin group compared with those in model group (P<0.05). Emodin was efficient to ameliorate renal dysfunction in diabetic nephropathy rats probably by its inhibition of the activation of p38 MAPK pathway and downregulation of the expression of fibronectin.