冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的抑制作用及机制

目的探讨冬凌草甲素对人胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法以10、20、40μmol/L不同浓度冬凌草甲素(Ori)作用于胰腺癌SW1990细胞,采用CCK-8检测胰腺癌SW1990细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况;RT-PCR法检测Survivin、p21基因mRNA表达水平。结果不同浓度的Ori作用于胰腺癌SW1990细胞1、2、3 d后,胰腺癌SW1990细胞增殖抑制程度不等,药物浓度越高,抑制程度越高,两者间具有明显剂量与时间依赖性。0、10、20、40μmol/L的冬凌草甲素作用于胰腺癌SW1990细胞24 h后,凋亡率分别为0.87%±0.65%、1.85%±1.02%、5.38%±0.15%和16.60%±0.50%,出现明显的G2/M期周期阻滞。与对照组相比,10、20、40μmol/L的Ori作用于SW1990细胞24 h后,p21 mRNA表达增加,而Survivin mRNA表达下降。结论冬凌草甲素通过诱导凋亡和G2/M期周期阻滞来实现对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用,其机制可能与Survivin和p21调节信号有关。     

冬凌草甲素通过下调XIAP增强吉西他滨对胰腺癌SW1990的抑制作用

【摘要】目的探讨冬凌草甲素在体外联合吉西他滨对胰腺癌细胞株SW1990抑制作用及其可能机制。方法 不同浓度的冬凌草甲素（0、10、20、40、80、160μmol/L）作用胰腺癌SW1990细胞24、48、72h后,CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用;冬凌草甲素（40μmol/L）与吉西他滨（20μmol/L）单独及联合处理细胞48h,并设立对照组, CCK-8法检测SW1990细胞的存活率;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;RTPCR检测SW1990细胞中NF-κB和XIAP基因的表达水平。结果冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量与时间依赖性;与其他各组相比,冬凌草甲素联合吉西他滨组细胞存活率明显降低（P<0.05）,凋亡率显著升高（P<0.05）;另外,联合组明显下调胰腺癌细胞中NF-κB和XIAP表达水平（P<0.05）。结论冬凌草甲素在体外能显著增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞的抗瘤效果,其机制可能是通过下调NF-κB及其下游XIAP 的表达,进而诱导胰腺癌细胞的凋亡而实现.     

苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株p21和survivin基因表达的影响

目的研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的生长、凋亡及其对p21和survivin分子表达的影响。方法应用MTT法检测苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的抑制作用,采用流式细胞仪研究苯丁酸钠对人舌鳞癌Tca8113细胞株的细胞周期阻滞和诱导凋亡作用,应用Western blot和RT-PCR检测p21和survivin基因的转录和表达。结果实验表明苯丁酸钠对Tca8113细胞株增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测显示苯丁酸钠诱导Tca8113细胞株G1期阻滞和细胞凋亡;苯丁酸钠能使p21的mRNA及蛋白质表达升高,同时survivin的mRNA及蛋白质表达下降。结论苯丁酸钠通过刺激p21表达增加和抑制survivin的表达,从而抑制Tca8113细胞株增殖,诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡;并且p21mRNA水平的上升和survivin mRNA水平的下降变化呈负相关(rs=-0.548,P<0.01),二者蛋白表达的变化亦如此(rs=-0.514,P<0.01)。     

普伐他汀对人胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　探讨普伐他汀（Pravastatin）对人胰腺癌细胞SW1990 增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法　体外培养人胰腺癌细胞SW1990,给予不同浓度（0,5,10,20 μmol/L）普伐他汀处理,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况及p21Ras、Bcl-2、Bax 蛋白表达,RT-PCR 法检测Bcl-2、Bax mRNA 水平。结果　普伐他汀处理SW1990 细胞后,细胞增殖受抑而凋亡增加,p21Ras、Bcl-2 的蛋白表达降低而Bax 的表达增高,Bcl-2 mRNA 水平降低而Bax mRNA 水平增高。结论　普伐他汀可抑制胰腺癌细胞SW1990 增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能是下调p21Ras、Bcl-2 的表达和上调Bax 的表达。     

冬凌草甲素诱导胃癌BGC-823细胞凋亡及G2／M细胞周期阻滞作用研究

目的研究冬凌草甲素体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡和细胞周期阻滞的作用，阐明其作用机理，为临床应用提供科学依据。方法用MTT方法测定冬凌草甲素体外抑制BGC-823细胞生长的作用。用共聚焦荧光显微镜和流式细胞仪分别观察诱导凋亡的情况。线粒体膜电位和细胞内钙离子浓度分别用荧光探针标记后流式细胞仪测定。凋亡和细胞周期相关蛋白的表达用Westem blotting进行测定。结果冬凌草甲素对BGC-823细胞的半数生长抑制浓度IC50值为22．21μmol.L^-1，并诱导细胞凋亡，呈现浓度依赖性。此外，能够降低线粒体膜电位，升高细胞内钙离子浓度，激活caspase-3前体。同时，冬凌草甲素能够使得BGC-823细胞阻滞在细胞周期的G2／M期，伴随有cyclin A蛋白的表达下降。在发生凋亡和细胞阻滞之前，观察到p53蛋白的表达增加。结论冬凌草甲素能够诱导BGC-823细胞产生凋亡，并使细胞周期阻滞在G2／M期。其凋亡机理与caspase-3的激活，p53蛋白表达上调及cyclin A表达下调相关。     

冬凌草甲素抑制人胃腺癌细胞生长和诱导凋亡作用研究

目的:研究冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT、透射电镜、流式细胞仪等方法对经冬凌草甲素体外作用的BGC-823细胞进行观察和检测。结果:16、32、64μg·mL-1冬凌草甲素能显著抑制BGC-823细胞的生长,并呈浓度-时间依赖性。64μg·mL-1的冬凌草甲素作用24、48、72h的抑制率分别为68·5%、90·8%、94·7%。32μg·mL-1冬凌草甲素作用2h后,电镜下BGC-823细胞的线粒体和内质网增殖肿胀;作用8h后,线粒体和内质网空泡化,内部结构消失,细胞核染色质边集呈凋亡的典型改变;作用24h后,流式细胞仪检测BGC-823细胞G2/M期阻滞,凋亡率为37·8%。结论:冬凌草甲素对人胃腺癌BGC-823细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,生长抑制可能与G2/M细胞周期阻滞有关,诱导凋亡可能通过线粒体和(或)内质网途径起作用。     

FK228对人肝癌细胞HepG2凋亡及细胞周期基因表达的影响

目的：探讨FK228对人肝癌细胞HepG2凋亡及细胞周期基因p 21,cdk4表达的影响。方法：培养HepG2,应用四氮唑蓝(MTT)比色法观察FK228对HepG2的生长抑制作用,琼脂糖凝胶电泳分析细胞DNA特征,流式细胞术分析细胞周期,以RT-PCR检测HepG2细胞中p 21,cdk4基因表达水平。结果：组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228能抑制人肝癌细胞HepG2生长,并具有时间和剂量依赖性；FK228引起细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡；FK228能明显促进p21mRNA转录,同时抑制cdk4mRNA的转录。结论：FK288能抑制HepG_2细胞增殖,诱导HepG_2细胞凋亡和周期阻滞；调节p21和cdk4基因的表达可能是FK228抑制HepG_2细胞生长的重要机制。     

冬凌草甲素下调STAT3-HKⅡ通路诱导HepG2细胞凋亡的研究

目的研究冬凌草甲素(Oridonin)诱导HepG2细胞凋亡的作用和机制。方法采用MTT法检测HepG2细胞的增殖;Hoechst 33342/PI双染法检测细胞凋亡;RT-PCR检测STAT3和HK-ⅡmRNA水平;Western blot检测STAT3、pSTAT3和HK-Ⅱ蛋白表达。结果冬凌草甲素可降低STAT3和HK-Ⅱ的mRNA及蛋白表达水平,剂量依赖性抑制HepG2细胞生长,促进细胞凋亡;STAT3 siRNA可下调HK-Ⅱ水平;冬凌草甲素诱导的细胞增殖抑制及凋亡可被STAT3siRNA和3-BrPA消除。结论冬凌草甲素可能通过抑制STAT3-HK-Ⅱ通路诱导HepG2细胞凋亡。     

冬凌草甲素对人肺癌A549 和 PC-9 细胞侵袭的抑制作用和机制研究

摘要： 目的 探讨天然产物衍生物冬凌草甲素对人肺癌细胞体外侵袭的抑制作用及其机制。方法 冬凌草甲素处理人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 后, 应用细胞增殖实验 （MTS） 法检测肿瘤细胞生长, Transwell 试验检测肿瘤侵袭能力, 黏附试验检测肿瘤黏附能力, 流式细胞术检测肿瘤细胞周期, Western blotting 和 Realtime-PCR 检测细胞周期蛋白依赖性激酶 1 （CDK1）、 雷帕霉素靶蛋白 （mTOR）、 p53、 p21、 E-钙黏素 （E-cadherin）、 CD44、 β-catenin、 尿激酶型纤溶酶原激活物 （uPA）、 基质金属蛋白酶 （MMP） -2/9、 p-AKT 和磷酸化酪氨酸激酶 （p-Src） 表达, 报告基因技术考察核因子 （NF） -κB 转录活性。结果 冬凌草甲素显著抑制 A549 和 PC-9 细胞的体外增殖、 黏附和侵袭, 将细胞周期阻滞在 G2/M 期, 冬凌草甲素促进 E-cadherin、 p53 和 p21 的表达, 下调 CDK1、 mTOR、 CD44、 β-catenin、 uPA、 MMP-2/9、 p-AKT 和 p-Src 表达和 NF-κB 转录活性。结论 冬凌草甲素可抑制人肺癌细胞系 A549 和 PC-9 的体外侵袭能力,可能与其调节酪氨酸激酶活性有关。     

NS398对胰腺癌细胞周期及其蛋白依赖性激酶抑制物p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2的影响

目的:观察选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS398对胰腺癌细胞周期及细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2转录和表达的影响,探讨NS398的抗胰腺癌机制.方法:以NS398和前列腺素E2(PGE2)处理SW1990人胰腺癌细胞,分别采用MTT法检测细胞活力,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞内PGE2含量,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化,并以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹检测COX-2及细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2的mRNA和蛋白水平.结果:NS398抑制胰腺癌细胞生长,并呈剂量依赖性减少细胞内PGE2的生成;NS398诱导细胞周期相关蛋白p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2转录和表达的升高并诱导部分细胞阻滞在G0/G1期(较对照组升高11%);10nmol/L的外源性PGE2可增加胰腺癌细胞的活力,但并不能拮抗NS398对细胞活力的抑制作用或细胞周期分布的改变,以及COX-2、p21Wafl/cipl、p27Kipl/pic2的转录和表达.结论:NS398可能通过增强p21Wafl/cipl和p27Kipl/pic2的表达而诱导细胞周期的阻滞,从而抑制胰腺癌细胞的生长活力.但NS398并非通过抑制COX-2的唯一机制,还可能存在其它非COX-2途径.     

冬凌草甲素诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡及其机制研究

目的:探讨冬凌草甲素(oridnin)对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响。方法:利用MTT法检测oridnin对A549细胞增殖作用的影响;Hoechst33258染色观察给药后细胞形态改变;透射电镜观察给药后细胞超微结构改变;FITC-Annexin V/PI双标记检测细胞凋亡率。结果:Hoechst33258染色和透射电镜观察,oridonin给药后A549细胞出现空泡变性,染色质高度凝集;FITC-AnnexinV/PI双标记检测oridnin(25,50,100μmol/L)作用细胞48h后凋亡率分别为1.5%,6.2%,59.7%。结论:Oridonin对A549细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用。     

冬凌草甲素对MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用的实验研究

目的探讨冬凌草甲素对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的MCF-7细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用Hoechst 33258荧光染色法以及流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果冬凌草甲素可显著抑制MCF-7细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,并呈现出一定的剂量-效应与时间-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化。结论冬凌草甲素能显著抑制MCF-7细胞的生长,诱导细胞发生凋亡是其重要作用方式。     

MC002诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及其作用机制

目的与雷公藤内酯醇(PG490)进行比较,观察雷公藤内酯醇衍生物MC002对人喉癌Hep-2细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以MC002和PG490分别处理人喉癌细胞Hep-2,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测药物对Hep-2细胞的增殖抑制作用并计算IC50值;利用软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力;选用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;用ROS检测试剂盒分析药物对细胞活性氧水平的影响;以实时荧光定量PCR技术(Realtime-PCR)检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax mRNA水平的表达变化。结果 MC002及PG490均对体外培养的人喉癌Hep-2细胞有增殖抑制作用,且具有剂量依赖性,IC50值分别为183.58nmol/L和119.35nmol/L,而且两种药物可以抑制细胞的锚定非依赖性生长能力;此外,MC002及PG490可以降低ROS水平,并且使凋亡相关因子BaxmRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调。结论 MC002具有与PG490相同的作用,可以抑制人喉癌细胞株Hep-2的生长,诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及ROS的表达有关。     

茉莉酸甲酯诱导人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C凋亡作用机制

探讨茉莉酸甲酯对人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长抑制作用及其对凋亡抑制蛋白家族成员XIAP和survivin表达的影响。1～2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯处理BE(2)-C细胞6～24 h后， MTT法检测瘤细胞生长活性， 克隆形成实验检测细胞增殖能力， PI单染流式细胞术检测细胞周期， AO/EB荧光染色法、 Hoechst 33258荧光染色法、 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡， 半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测细胞周期素D1(cyclin D1)、 X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein， XIAP)及survivin表达。结果表明， 各浓度茉莉酸甲酯作用后， BE(2)-C细胞呈时间、 浓度依赖性生长抑制， 1， 1.5和2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24 h后， 细胞生长抑制率为20.6%～85.5%(P<0.01)， IC₅₀为1.35 mmol·L^-1； S期细胞比率增高， 部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变， 早期凋亡细胞(FITC⁺ PI^-)分别占13.51%、 17.32%和24.59%(均P<0.01)，细胞死亡率分别为29.36%、 54.73%和75.52%(均P<0.01)； XIAP和survivin表达分别下调18.5%～68.9%和22.4%～48.7%(均P<0.05)， 而cyclin D1表达无显著变化(P>0.05)。可见， 茉莉酸甲酯能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长活性， 下调XIAP和survivin基因表达可能是其作用机制之一。     

土槿乙酸衍生物PBA-D1诱导Hela细胞凋亡及其机制

目的研究土槿乙酸衍生物PBAD1体外能否诱导宫颈癌细胞株(Hela细胞)发生凋亡及其发生机制。方法采用MTT、SRB、细胞生长曲线、细胞集落、荧光显微镜检测凋亡细胞、DNAladder、流式细胞仪等方法进行凋亡检测,用Westernblot方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化。结果土槿乙酸衍生物PBAD1在体外试验中对Hela细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNAladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,同时观察到细胞周期的变化。在凋亡过程中,凋亡相关基因p53基因表达明显增高,而bcl2表达下调。结论PBAD1体外能诱导Hela细胞发生凋亡,其机制可能与p53基因表达上调及bcl2基因表达下调有关。     

氯化钴诱导化学缺氧对N9小胶质细胞的损伤作用及机制

目的研究氯化钴(CoCl2)对N9小胶质细胞的损伤作用及机制。方法不同剂量CoCl2处理N9小胶质细胞后,XTT法检测细胞活力;倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;硫代巴比妥酸(TBA)显色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)含量;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期变化。结果 CoCl2(50～1 000μmol.L-1)处理24 h后,细胞活力明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。细胞形态发生明显改变,部分细胞出现皱缩、破碎,细胞密度减小,随CoCl2剂量增大,细胞形态损伤程度进一步恶化。MDA含量检测结果显示,氯化钴处理后,细胞上清液中MDA含量明显增多(P<0.05)。Hoechst 33258染色结果显示,氯化钴处理组的细胞凋亡比例较对照组明显增多(P<0.01),且比例随CoCl2剂量增大而增多。细胞周期检测结果显示,CoCl2可使细胞周期阻滞于G1/G0期。结论 CoCl2可呈剂量依赖性损伤N9小胶质细胞,机制与诱导细胞凋亡、引发氧化应激反应及细胞周期阻滞有关。     

Activation of ATM-Chk2 by 16-dehydropregnenolone induces G1 phase arrest and apoptosis in HeLa cells

The natural pregnane steroid 16-dehydropregnenolone (16-DHP) showed the growth inhibitory activity against human tumor cells; however, the mechanisms of actions of 16-DHP were not clarified. In this study, 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay was used to investigate the growth inhibitory effect of 16-DHP. Cell cycle distribution was analyzed using flow cytometry. Hoechst 33258 staining and DNA agarose gel electrophoresis were used to detect apoptosis. The levels of proteins were probed by Western blotting, and caspase activities were analyzed using Caspase Activity Kit. We found that 16-DHP inhibited the growth of human cervical carcinoma cells (HeLa cells) in a time- and dose-dependent manner. The growth inhibitory effect of 16-DHP was associated with G1 arrest mediated by ataxia telangiectasia mutated (ATM)-checkpoint kinase 2 (Chk2)-p53 signaling, as demonstrated by induction of the phosphorylations of ATM, Chk2, and p53 proteins. Followed by G1 arrest, 16-DHP-treated HeLa cells underwent caspase-dependent apoptosis. The inhibitors of caspase-3 and caspase-9 but not caspase-8 inhibitor blocked 16-DHP-induced apoptosis. Moreover, 16-DHP increased the level of Bax protein and the release of cytochrome c from mitochondria, but had no effect on the level of Bcl-2. These results suggested that 16-DHP inhibited the growth of HeLa cells via inducing ATM-Chk2-p53 activation-mediated G1 arrest and mitochondrial cell apoptosis.     

Oridonin induces NPM mutant protein translocation and apoptosis in NPM1c＋ acute myeloid leukemia cells in vitro

Aim： Skewed cytoplasmic accumulation of NPM mutant protein （NPM1c＋） is close related to leukemia pathogenesis. The aim of this study was to investigate whether oridonin, a diterpenoid isolated from the Chinese traditional medicine Rabdosia rubescens, was able to interfere with NPM1c＋ protein trafficking and induce apoptosis in NPM1c＋ acute myeloid leukemia cells in vitro.
Methods： OCI-AML3 cell line harboring a NPM1 gene mutation was examined. Cell growth was detected by MTT assay. Cell apoptosis was evaluated using flow cytometry and Hoechst 33258 staining. The expression and subcellular localization of relevant proteins were detected by Western blot and immunofluorescent staining. The mRNA expression was detected by RT-PCR.
Results： Oridonin （2–12 μmol/L） dose-dependently inhibited the viability of OCI-AML3 cells （the IC50 value was 3.27±0.23 μmol/L at 24 h）. Moreover, oridonin induced OCI-AML3 cell apoptosis accompanied by activation of caspase-3 and nuclear translocation of NPM1c＋ protein. Oridonin did not change the expression of Crm1 （the export receptor for nuclear export signal-containing proteins）, but induced nuclear translocation of Crm1. Oridonin markedly increased the expression of nucleoporin98 （Nup98）, which had an important role in Crm1-mediated nuclear protein export, and induced nuclear accumulation of Nup98. Furthermore, oridonin markedly increased the expression of p14arf and p53.
Conclusion： In NPM1c＋ leukemia cells, oridonin induces NPM1c＋ protein translocation into the nucleus possibly via nuclear accumulation of Crm1; the compound markedly increases p53 and p14arf expression, which may contribute to cell apoptosis.     

干扰素α对Raji细胞的生长抑制作用及其作用机制

目的 :探讨干扰素α对白血病Raji细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法 :以不同浓度的干扰素α作用于体外培养的Raji细胞 ,应用MTT法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,Hoechst 332 5 8荧光染色法观察细胞凋亡 ,TRAP PCR ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果 :5× 10 3 U·ml-1以上的干扰素α可显著降低Raji细胞端粒酶活性 ,抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡 ,并呈现出明显的量 效与时 效关系。药物 (10×10 3 U·ml-1)作用 4 8～ 6 0h在Hoechst染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的凋亡改变。结论 :干扰素α能抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生调亡 ,降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一 ;这为干扰素应用于临床治疗淋巴瘤细胞白血病提供了有力的试验依据