缬沙坦对球囊损伤后血管平滑肌细胞增生的影响

目的 探讨缬沙坦因子防治人类血管成形术后再狭窄的可行性方法观察新的非肽类血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型(AT_1)受体拮抗剂,缬沙坦(Valsartan),对血管平滑肌细胞(VSMC)增生的影响。对大鼠髂动脉球囊内皮剥脱术后过度增生模型采用~3H-TdR和~3H-Leu掺入,免疫组化染色检测VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及图象分析血管壁形态学变化。结果 缬沙坦显著减少~3H-TdR和~3H-Leu的掺入量,减少新生内膜面积和PCNA阳性细胞数。结论 缬沙坦能抑制大鼠动脉的球褒内皮损伤后的VSMC增生,可能它是防治血管成形术再狭窄的有效药物。     

普罗布考抑制再狭窄与其调节功能性血管重构的关系

目的　研究普罗布考抗动脉成形术后再狭窄与其调节功能性血管重构的关系。方法　用 3 5F球囊导管构建兔动脉粥样硬化动脉成形术后再狭窄模型。动脉成形术 2wk后取其胸主动脉 ,固定染色并进行计算机图像分析 ;观察血管环对乙酰胆碱诱导的舒张百分率 ,然后再观察其对内源性收缩物质去甲肾上腺素 (NA)、KCl以及 5 羟色胺 (5 HT)的收缩反应性。同时 ,在动脉成形术 2wk后留其血清 ,观察普罗布考对动脉成形术后血清一氧化氮 (NO)含量的影响。结果　普罗布考明显增加血管管腔面积 ,减少新生内膜面积 ;可保护动脉成形术后血管的舒张功能 ,保护内皮细胞合成与释放内皮源性舒张因子NO ,降低血管对内源性收缩物质的收缩反应性。结论　普罗布考能提高扩张性血管重塑 ,抑制收缩性血管重塑 ,从而防止动脉成形术后管腔缩窄防止再狭窄的发生     

多西环素及吲哚美辛对大鼠主动脉损伤后狭窄的早期预防作用的研究

<正>动脉损伤存在于一系列疾病病变中,例如动脉粥样硬化、冠状动脉移植的血管狭窄、动脉栓塞取栓术后再狭窄等。心血管系统在损伤后,包括经皮腔内血管成形术后6个月内血管再狭窄率为25%⁵0%[1],严重影响了手术的治疗效果。目前的研究表明:多个机制参与动脉损伤后的狭窄过程,并且认为细胞外基质(ECM)的重建,尤其胶原纤维的重建(collagenⅠ和collagenⅢ)和血管平滑肌细胞(VSMC)迁移、增生有密切的关系[2]。基质金属蛋白酶(MMP)是参与ECM降解的最主要的酶,且能促进VSMC迁移增殖,导致新生内膜增生和血管重塑,最终导致血管狭窄。鉴于MMP在血管损伤后狭窄中的重要作用,抑制MMP的表达及活性成为预防血管     

血管成形术后再狭窄与平滑肌细胞转化和迁移及转化生长因子α表达上调有关

目的为探讨血管成形术后再狭窄形成与平滑肌细胞(Smooth muscle cells,即SMCs)的迁移和表型转化,以及转化生长因子α(Transforming growth factor-α,即TGFα)在内膜增生过程中的表达变化的关系。方法取40只Sprague-Dawle大鼠行右颈总动脉球囊内膜剥脱术建立再狭窄动物模型,于第1,3,9,28天和2月取实验动脉段和对侧正常动脉段行光镜观察及计算机图像分析,同时在透射电镜下观察SMCs亚微结构变化。并以放免测定内膜增生时损伤血管组织中TGFα表达的变化。结果图像分析显示在球囊损伤第3天即见损伤血管中膜出现明显增厚,而后恢复正常厚度。与此同时球囊损伤第3天内膜明显增厚,而在第9～28天逐渐达到高峰;在透射电镜下观察可见:术后第3天损伤血管增生内膜中近腔面的SMCs就已主要表现为合成表型,在28d和2个月时大部分SMCs又恢复收缩表型的形态特征。而通过放免测定发现球囊损伤后第3天对血管组织TGFα表达明显增加,与对侧正常颈总动脉标本中的TGFα含量有统计学意义的差异。结论故认为大鼠再狭窄模型的内膜增生过程具有明显的时相特征,SMCs从中膜向内膜的迁移,而SMCs的表型转化在这过程中显示出明显的双向转化特点,而TGFα在损伤血管的表达明显增加,可能参与了内膜过度增生过程的SMCs的表型转化和迁移的机制。     

雷帕霉素抑制增生内膜中基质细胞衍生因子-1的表达

目的：进一步探讨雷帕霉素抗血管内再狭窄的分子机制。方法：球囊拉伤大鼠颈总动脉建立血管内膜增生的动物模型,口服雷帕霉素（25mg/kg）,4周后处死动物。HE染色观测血管病变,免疫组化检测增生内膜中基质细胞衍生因子-1（SDF-1）的表达,小室迁移系统观察SDF-1对平滑肌细胞迁移的影响。结果：球囊拉伤明显诱导血管内膜增生,增生内膜中有明显的SDF-1的表达,雷帕霉素能显著下调增生内膜中SDF-1的表达,而SDF-1浓度依赖性地诱导平滑肌细胞的迁移。结论：雷帕霉素可能通过下调SDF-1的表达从而抑制血管再狭窄。     

猪十二指肠类肝素抗血管内膜增生的研究

目的以挤压大鼠颈总动脉造成血管损伤 ,观察猪十二指肠类肝素 (冠心舒 )对血管损伤后再狭窄的防治作用。方法 6 0只大鼠随机分为 5组 ,即病理模型组 ,低、中、高剂量冠心舒组及阿司匹林对照组。术前 1周开始灌服药物 ,每天 1次 ,共 4周。术后 3周 ,在光镜下以显微测微计测量、计算内膜增生程度。结果病理模型组 (不给药 )血管内膜横切面积占有率明显增大 ,管腔面积占有率明显缩小 ;与病理模型组比 ,给冠心舒动物血管内膜横切面积剂量依赖地明显缩小 ,管腔面积占有率明显增大 ,并有抑制平滑肌细胞转型及促内皮修复作用。结论冠心舒有抗大鼠颈总动脉挤压伤后再狭窄作用     

蝮蛇抗栓酶防治实验性再狭窄

目的：研究蝮蛇抗栓酶对实验性再狭窄的影响。方法：建立再狭窄实验动物模型,肌注给药。结果：蝮蛇抗栓酶显著抑制损伤后１周时血管内膜厚度,内膜厚度／管腔直径比值,内膜面积,内膜面积／管腔面积比值。结论：早期使用蝮蛇抗栓酶是防治再狭窄的有效方法之一。     

血管平滑肌细胞增殖信号转导通路与血管再狭窄防治

上游激活蛋白(Ras)信号通路与血管再狭窄的发生有着十分密切的关系。雷帕霉素和紫杉醇等药物涂层支架主要通过抑制Ras下游的信号转导发挥抗细胞增殖作用,新基因Mfn2可直接抑制Ras，抑制点更高，效果更明显，因而可望用于研制基因涂层球囊与基因涂层支架，从而成为血管再狭窄等血管增殖性疾病基因治疗的新靶点。     

全反式维甲酸抑制兔颈动脉内皮损伤后内膜增殖和聚集素表达的研究

目的观察全反式维甲酸(atRA)对兔颈动脉内皮损伤后内膜增生、聚集素表达的影响,探讨atRA抗血管再狭窄的作用及机制。方法新西兰雄性大白兔36只,随机分为6组:治疗组(A、B)、对照组(A、B)、假手术组(A、B),每组6只。治疗组和对照组给予高脂饮食,2周后行颈动脉内膜空气干燥术,假手术组正常饮食,手术但不损伤内膜,治疗组术前3d开始atRA灌胃。分别于术后7、28d处死A、B组动物,取病变血管进行形态学观察,免疫组化检测聚集素、PCNA表达水平。结果对照组术后7d内膜开始增生,28d增生明显,管腔狭窄,有粥样斑块形成。治疗组内膜增生较轻,28d时内膜面积、内膜/中膜面积比、管腔狭窄度均低于对照组(P<0.01),聚集素、PCNA阳性表达低于对照组(P<0.05或<0.01)。结论 atRA抑制动脉内皮损伤后新生内膜增殖及动脉粥样硬化病变形成,抑制聚集素表达是机制之一。     

丝裂素活化的蛋白激酶反义寡脱氧核苷酸防治血管内膜增殖

目的：探讨Ca^2 -钙调蛋白依赖性蛋白激酶（丝裂素活化的蛋白激酶）（CCDPK）在生长因子诱导体外培养大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用及反义CCDPK寡脱氧核苷酸（ODN）对球囊损伤后大白鼠血管内膜增生的抑制作用。方法：利用脂质体转染17－mer CCDPK反义ODN进入培养的血管平滑肌细胞以抑制CCDPK活性,设正义及随机ODN作对照。用蛋白质印迹法测定CCDPK表达。[^3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入测定平滑肌细胞DNA合成。用2F球囊导管造成大白鼠颈动脉再狭窄模型,利用多聚胶F127－ODN系统由血管外膜部位给药。于损伤后2周取样,固定及HE染色观察内膜增生情况。FITC标记的ODN观察体内外给药方法的分布及吸收情况。结果：CCDPK反义ODN能明显抑制PDGF及ET诱导的CCDPK蛋白表达及[^3H]胸腺嘧啶核苷酸掺入。在大鼠颈动脉再狭窄模型,能明显抑制血管内膜增生。结论：CCDPK介导了PDGF及ET诱导的血管平滑肌细胞增殖。针对p42-和p44-CCDPK起始部位设计的17－mer反义ODN能有效抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞的增殖及球囊损伤大鼠血管内膜增生。     

Ultrasound microbubble-carried PNA targeting to c-myc mRNA inhibits the proliferation of rabbit iliac arterious smooth muscle cells and intimal hyperplasia

Objective: To elucidate the transfected effect of albumin ultrasound microbubbles carrying peptide nucleic acids (PNAs) against c-myc gene to the vascular walls and their effect on the intimal proliferation induced by vascular denudation.

Methods: A rabbit iliac artery intimal proliferation model was constructed and PNA against c-myc mRNA was designed and synthesized and was added to albumin solution before ultrasound microbubbles were prepared and encapsulated in matrix of albumin. The ultrasound microbubbles carrying PNA were transfected to intima under ultrasound exposure. The transfected effect was identified by a histochemical method and the expression of c-myc was detected by in situ hybridization. The proliferation of intimal smooth muscle cells was estimated by the expression of proliferative cell nuclear antigen (PCNA) of them. The intimal area and thickness were judged morphologically for intimal hyperplasia.

Results: The ultrasound microbubbles with PNA were successfully prepared and c-myc PNA was transfected to vascular intimal cells. The expression of c-myc and PCNA by intimal vascular smooth muscle cells (vSMCs) was inhibited significantly and the intimal thickness and area were reduced remarkably.

Conclusion: Transfection of c-myc PNA could inhibit proliferartion of vSMCs and intima in the rabbit iliac artery intimal proliferation model and the targeted transfection of albumin ultrasound microbubbles carrying PNA offers a feasible way to facilitate its access to specific cells in vivo and produce bioavailability.     

宫颈鳞癌中癌基因C-myc与相关蛋白E_2F-1P15~(INK4b)的表达及临床意义的研究

目的探讨宫颈鳞状细胞癌癌变过程中C-myc基因与其相关蛋白E2F-1、P15INK4b的表达以及与宫颈鳞癌临床病理特征的相关性。方法选取60份宫颈鳞癌、61份宫颈上皮内瘤变(CIN)组织(其中CINⅠ～Ⅱ级31份,CINⅢ级30份)和21份正常宫颈组织。所有病例制成组织芯片,采用原位杂交技术检测各组宫颈病变中C-mycmRNA的表达情况;免疫组织化学法(Elivison二步法)检测各组中E2F-1、P15INK4b蛋白的表达。统计学方法采用χ2检验和Spearman等级相关分析。结果随着宫颈从正常组织到发生CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ直至发展为鳞状细胞癌,C-mycmRNA、E2F-1和P15INK4b蛋白的阳性表达率显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。C-mycmRNA在2组间的表达差异均有统计学意义。E2F-1蛋白的阳性表达在CINⅢ与宫颈鳞癌组之间差异有统计学意义。P15INK4b蛋白的阳性表达在CINⅠ～Ⅱ与CINⅢ、CINⅢ与鳞癌组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。C-mycmRNA与E2F-1、P15INK4b的阳性表达均呈正相关(P<0.01)。E2F-1与P15INK4b的阳性表达呈正相关(P<0.01)。结论 C-myc癌基因在子宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程中起重要作用,其高表达预示子宫颈鳞状细胞的不良转化。C-myc癌基因与E2F-1、P15INK4b蛋白共同作用于CINⅢ向浸润性鳞癌的发展过程。     

槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与Bcl-2、C-myc表达的影响

目的:研究槲皮素对结直肠癌细胞SW480增殖与B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、癌基因C-myc表达的影响。方法:5、10、20、40、80、160μmol/L槲皮素处理SW480细胞后,采用MTT法检测SW480细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率;实时荧光定量反相聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法检测Bcl-2、C-myc mRNA和蛋白表达水平。结果:槲皮素对SW480细胞有明显抑制作用,能够诱导SW480细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关;40μmol/L槲皮素可明显抑制Bcl-2、C-myc mRNA的表达;处理48、72 h时40μmol/L槲皮素明显抑制Bcl-2、C-myc蛋白的表达(P<0.05)。结论:槲皮素能够抑制SW480细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性,槲皮素可能通过下调Bcl-2、C-myc的表达水平而发挥抗结直肠癌作用。     

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制兔颈总动脉球囊损伤后血管内膜和平滑肌细胞增殖的作用研究

目的:探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对兔颈总动脉球囊损伤后内膜及平滑肌细胞增殖的影响。方法:30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、F2高剂量给药组(2mg/kg)、F2中剂量给药组(1mg/kg)、F2低剂量给药组(0.5mg/kg)。模型组及F2各给药组行左侧颈总动脉球囊损伤,各组分别于术后7d取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,免疫组化法测定α-actin、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组术后7d血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积、血管壁细胞PCNA表达显著增加(P<0.01),F2剂量依赖地降低上述指标。与假手术组比较,模型组血管壁α-actin阳性染色减少,F2各给药组可增加血管壁平滑肌细胞中α-actin阳性染色率。结论:F2能抑制兔颈总动脉机械损伤后血管内膜和平滑肌细胞的增殖。     

醋酸曲普瑞林对人子宫内膜腺癌HEC-1B的作用及对C-myc表达的调控

目的探讨醋酸曲普瑞林对人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞的抑制作用及其分子机制。方法体外培养人子宫内膜腺癌HEC-1B细胞,用不同浓度醋酸曲普瑞林(10-9,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L)为实验组,0mol/L组(不含醋酸曲普瑞林的培养液)为对照组,分别和HEC-1B细胞作用24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞抑制率,绘制肿瘤细胞生长抑制率曲线。免疫组织化学染色法检测72h细胞中C-myc蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测72hC-mycmRNA的表达。结果①当醋酸曲普瑞林浓度为10-9mol/L时,HEC-1B细胞生长即受到抑制,抑制率为8.97%;随着浓度的增大,抑制率渐高,浓度为10-5mol/L时抑制率上升至34.12%,与对照组比较抑制率差异有统计学意义(P<0.05)。②浓度从10-9～10-5mol/L的醋酸曲普瑞林作用72h后,C-myc蛋白和C-mycmRNA表达均有不同程度的下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论醋酸曲普瑞林可以抑制HEC-1B细胞的生长,其机制可能是通过下调HEC-1B细胞C-myc蛋白的表达而实现。     

Ginsenoside Rb₁ inhibits the carotid neointimal hyperplasia induced by balloon injury in rats via suppressing the phenotype modulation of vascular smooth muscle cells

This study aims to investigate the effects of ginsenoside Rb(1) on vascular intimal hyperplasia in rats and explore the mechanisms. The rat vascular neointimal hyperplasia model was made by rubbing the endothelia of carotid artery with a balloon and Rb(1) (10 and 30 mg/kg/day) was given the day after surgery for 14 consecutive days. The neointimal hyperplasia level and the degree of vascular smooth muscle cells (VSMCs) proliferation were evaluated by histopathology and by calculating the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) positive expression percentage; protein expressions of PCNA, phosphorylation extracellular signal-regulated kinase 1/2 (pERK1/2), smooth muscle α-actin (SM α-actin), and the mRNA expressions of proto-oncogene c-myc, SM α-actin, SM-emb (embryonic smooth muscle myosin heavy chain) and p38 MAPK were detected by immunohistochemistry and Real Time RT-PCR, respectively. Compared with the endothelia rubbing model group, Rb(1) 10 and 30 mg/kg/day medication significantly ameliorated the neointimal hyperplasia (P<0.05), and decreased the positive expression percentage of PCNA(P<0.05). Rb(1) medication also significantly decreased the elevated protein expression of pERK1/2 and the mRNA expression of c-myc(P<0.05), and tended to reduce the expression of p38 MAPK mRNA. Endothelial rubbing increased the SM-emb mRNA expression, but decreased the expression of SM α-actin mRNA which was reversed by Rb(1) (P<0.05). The results indicate that Rb(1) inhibits the vascular neointimal hyperplasia induced by balloon-injury in rats via suppressing the VSMC proliferation, which may be involved in part the inhibition of pERK1/2 protein and related to its inhibition on VSMC phenotype modulation.     

蓝萼甲素对人肝癌细胞HepG2细胞株的作用

目的观察蓝萼甲素对人肝癌细胞HepG2的抑制和诱导细胞凋亡作用。方法不同浓度蓝萼甲素处理HepG2细胞后,MTT检测24h,48h细胞生长抑制率,LDH试剂盒检测细胞LDH释放量,倒置显微镜观察细胞形态,RT-PCR法对凋亡相关基因Bc-l 2,bax和c-myc的mRNA表达进行检测,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果在1.25~20μmol.L-1剂量范围内,蓝萼甲素对HepG2的生长有显著抑制作用,并呈剂量依赖性。蓝萼甲素5,10,20μmol.L-1能够使HepG2培养液中的LDH释放量显著增加,倒置相差显微镜观察,可见细胞明显皱缩。同时蓝萼甲素可使细胞Bc-l2表达减少,Bax表达增加,c-myc表达减少。结论蓝萼甲素可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与调控Bc-l2,Bax,c-myc的mRNA的表达有关。