中国南海海绵共附生真菌种群多样性及抑菌活性

目的揭示南海海绵共附生真菌的种群多样性,并筛选具有抑菌活性的真菌菌株。方法采用6种不同的真菌培养基、3个不同培养温度对中国南海10种海绵共附生真菌进行分离培养,并采用牛津杯法进行抑菌活性筛选。结果共分离培养得到177株真菌菌株。基于RFLP分析得到24株代表性菌株,基于18SrRNA基因的分子鉴定证明分别属于子囊菌门(Ascomycota)下的4个目10个属,真菌比例最高的目为Euro-tiales(37.5%)和Hypocreales(41.6%)。部分菌株显示了对革兰阳性细菌和革兰阴性细菌的广谱的抑菌活性。结论揭示的丰富的海绵共附生真菌及其抑菌活性对于深入研究和利用海绵共附生真菌具有重要价值。     

南极普里兹湾海绵共附生放线菌的分离及其次级代谢潜力评估

【目的】通过研究了解南极海域海绵共附生放线菌的多样性以及活性次级代谢产物的合成潜力。【方法】采用11种分离培养基对南极海绵进行放线菌的分离培养,对分离到的菌株进行抗菌及微藻克生活性的筛选,对活性菌株的进行基于聚酮合酶、非核糖体肽合成酶和卤化酶的基因筛选。【结果】共分离得到59株海绵共附生放线菌,分布于9个属中,以链霉菌最多。21株具有较好的抗菌活性;6株菌表现出明显的赤潮微藻克生活性;有7株活性菌株至少含2种关键的功能基因,菌株OAct311和408同时含有4种功能基因。【结论】研究结果揭示了南极海绵共附生放线菌物蕴含丰富的放线菌资源并且有较高的合成活性次级代谢物的潜力,具有深一步研究的价值。     

南极来源嗜/耐冷真菌的多样性及生物活性研究

目的 研究南极来源真菌的多样性及其生物活性。方法 通过形态观察,化学筛选和序列比较,对南极来源的真菌进行排重,依据真菌ITS rDNA基因序列分析比对结果,使用MEGA 5.0软件对排重后的真菌进行鉴定和系统发育分析。采用纸片法进行抑菌活性筛选,采用MTT法进行抗肿瘤活性筛选。结果 南极来源的147株真菌经形态分析,化学排重和序列分析后获得48株代表菌株,ITS基因序列亲缘关系分析结果显示,属于子囊菌门（Ascomycota）的4个目和6个属：Penicillium、Malbranchea、Aspergillus、Cladosporium、Pseudogymnoascus、Emericellopsis。其中,所鉴定的真菌以Penicillium属为优势菌属,占58.9％,12株嗜/耐冷菌在系统发育树中的亲缘关系相近且以Pseudogymnoascus属为优势菌属。通过活性测试筛选显示耐冷真菌具有良好的抑菌和抗肿瘤活性。结论 南极来源菌株具有丰富的种群和生物活性的多样性,是天然产物活性先导化合物的重要生物资源。     

丛生形盔珊瑚共附生真菌的分离及其抗菌活性的筛选

目的本试验旨在研究珊瑚共附生真菌抗菌活性。方法采用96孔板培养法结合酶标仪测定。以6种常见的致病或致食品腐败的细菌为指示菌,对其共附生真菌次级代谢产物进行抗菌活性筛选,对抗菌能力及抗菌谱进行研究。结果结果表明:共分离丛生形盔珊瑚共附生真菌19株,均具有不同程度的抗菌活性。高活性菌株占52.63%,其中4-4、4-5两菌株表现出良好的抗菌活性。结论丛生形盔共附生真菌是潜在的抗菌资源,具有较高的应用潜力和综合开发前景。     

海绵Hymeniacidon corticata共附生微生物代谢产物生物活性的初步研究

目的 采自东海的一种海绵 Hymeniacidon corticata 共附生微生物的分离及其次级代谢产物生物活性的筛选.方法 利用各种分离培养基从海绵中分离出共附生微生物,从中挑出代表性的共附生放线菌8株及真菌5株,发酵培养后提取粗提物检测其对人类痛原菌、植物病原真菌的抑茵作用以及对卤虫的毒性作用.结果 共附生真菌的发酵粗提物抑茵活性较低,而放线菌有较强的广谱抑茵作用.对植物病原真茵生长的抑制,共附生真菌具拮抗作用的菌株较多.一部分放线菌菌株代谢产物对卤虫的毒性作用和抑菌效果表现出负相关性.结论 海绵 H.corticata的部分共附生放线菌及真菌具有较好的生物活性,有进一步研究的潜力.     

海绵共附生菌Streptomyces olivaceus LHW2444的分离鉴定及其抗青枯菌活性代谢产物研究

目的 从海绵中分离培养放线菌,筛选具有抗青枯菌活性的菌株,分离鉴定活性代谢产物。方法 以来源于南海西沙永兴岛附近海域的海绵Leucetta chagosensis为实验材料,采用三种选择性分离培养基分离海绵的共附生放线菌,利用16S rRNA序列分析对各菌株进行种属鉴定。对各菌株的发酵提取物进行抗青枯菌活性筛选,采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和高效液相色谱法对筛选到的活性菌株的发酵产物进行分离、纯化,运用核磁共振(NMR)、质谱(MS)等手段,鉴定化合物的结构。采用微量稀释法测定化合物的最小抑菌浓度(MIC)。结果 分离培养海绵共附生放线菌16株,筛选得到一株具有较好抗青枯菌活性的菌株Streptomyces olivaceus LHW2444,并从该菌株的发酵产物中分离鉴定2个吡咯类化合物、1个苯并二恶茂类化合物、2个吡喃酮类化合物,分别为pyrrole-2-carboxamide(1)、pyrrole-2-carboxylic acid(2)、1,3-benzodioxole-2-one-4-carboxylamide(3)、germicidin B(4)、germicidin C(5),化合物1-5为首次从该种属放线菌分离得到。首次发现pyrrole-2-carboxylic acid对青枯菌具有较强抑制作用,MIC值为8 μg/mL。结论 海绵共附生菌Streptomyces olivaceus LHW2444是潜在的植物青枯病生防菌,pyrrole-2-carboxylic acid是抗青枯菌的活性代谢产物。     

发形霞水母共附生微生物的分离鉴定及其发酵液的抑菌活性研究

目的对发形霞水母(Cyanea capillata)共附生微生物进行分离鉴定并测定其抑菌活性,以期获得具有较高抑菌活性的菌株。方法利用4种分离培养基从C.capillata各部位分离共附生微生物,首先对挑选的单个菌落进行反复的划线分离,获得各菌株的纯培养;利用形态学观察、生理生化特征检测和16SrDNA序列测定和分析等手段对获得的菌株进行鉴定;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌,利用滤纸片扩散法测定菌株发酵液的抑菌活性;通过正交试验方法进一步优化发酵条件,提高菌株发酵产生抑菌活性物质的能力。结果从C.capillata触手、胃囊、伞部、肌肉4个部位共分离出83株菌株,其中放线菌...     

柳珊瑚共附生真菌Alternaria sp.(WZL003)抑菌化合物的分离及其作用机制初步研究D

目的研究1株柳珊瑚共附生真菌具有抑菌活性次级代谢产物及抑菌作用机制。方法采用活性追踪分离的方法,运用硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析和半制备HPLC等手段,对采自中国南海的柳珊瑚Echinogorgia rebekka中分离获得的共附生链格孢霉属真菌Alternaria sp.(WZL003)的发酵产物进行分离和纯化,利用NMR、MS等波谱方法,并与文献对照,确定化合物的结构;以海洋病原菌和污损菌鳗弧菌Vibrio anguillarum为对象研究化合物的抑菌作用机制。结果从该菌发酵液的乙酸乙酯提取物中,分离获得1个对V.anguillarum具有较强抑菌活性的蒽醌类化合物macrosporin。结论初步的抑菌作用机制研究发现,该化合物能破坏鳗弧菌的细胞壁和细胞膜,导致细胞通透性增加,胞内大量内容物外泄,最终导致菌体死亡,从而起到抑菌作用。本研究首次报道了macrosporin对鳗弧菌的抑菌作用及其作用机制。     

黄海葵相关细菌抗菌活性菌株的筛选及其初步分类鉴定

目的 对分离自硇洲岛黄海葵(Anthopleura xanthogrammica)样品的126株细菌进行抗菌活性筛选和初步分类鉴定.方法 以8种微生物(3株革兰阳性菌、3株革兰阴性菌和2株真菌)作为指示菌,采用琼脂扩散法筛选抗菌活性菌株,采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析和生物学特性研究对其中抗菌谱较广且抗菌活性稳定的菌株进行初步分类鉴定.结果 67株菌具有抗菌活性,阳性率为53.2%,抗菌谱较广且活性较强的9株,占受试菌株总数的7.1%.经过形态观察、生理生化特征及基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,9株具有较强抗菌活性的菌株分别属于芽孢杆菌属(Bacillus)、盐芽孢杆菌属(Halobacillus)、短杆菌属(Brachybacterium)、拟诺卡菌属(Nocardiopsis)、盐单胞菌属(Halomonas)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)和弧菌属(Vi6rio)菌株.结论 分离自中国南海的黄海葵相关微生物抗菌活性菌株具有丰富的类群多样性.     

海洋微生物抗菌活性的初步研究

从南海、东海、黄海等海域的海洋底质、生物样品中分离到1003个海洋微生物菌株．包括520株放线菌、111株真菌、222株常温细菌和150株耐热细菌。通过纸片法对其抗菌活性进行筛选．结果发现321株海洋微生物具有抑菌活性，占总分离菌株的32．0％。放线菌、真菌、常温细菌、耐热细菌的活性菌株比例分别为39．6％，32．4％。17．1％，27．3％。具有抑菌活性的菌株比例与样品来源密切相关。生物样品来源的细菌抑菌活性较高的菌株比例较底质样品来源的要高，而海洋放线菌与海洋真菌结果相反。各类海洋微生物菌株的抗菌谱有很大的不同。     

井冈山地区龙脑樟来源真菌多样性和抗菌活性研究

摘要：目的 探究井冈山地区龙脑樟来源真菌的物种多样性和抗菌活性,为新型抗菌活性天然产物的研发提供菌种资源。方法 采用组织切块及研磨法分离植物来源真菌;依据形态学特征观察、ITS测序对菌株进行鉴定;菌株发酵产物经乙酸乙酯萃取,粗浸膏经琼脂纸片扩散法进行抗菌活性检测。结果 从龙脑樟树的叶片、树皮、种子及树周苔藓中分离纯化出真菌197株,经ITS测序比对归属于29个属,显示出较好的真菌多样性。对真菌室温静置发酵后获得的代谢粗提物进行抗菌活性筛选,发现其中50株真菌的次级代谢产物具有抗菌活性,从菌株JDWHS-7-081发酵产物中获得1个化合物。结论 井冈山地区龙脑樟来源真菌具有丰富的物种多样性,筛选获得的抗菌活性菌株具有潜在的研究价值。     

锡林郭勒盟高原盐湖放线菌资源勘探及抗菌活性筛选

摘要：目的 探究锡林郭勒盟高原盐湖放线菌的多样性、新颖性及抗菌活性,为新型抗菌活性产物的发掘储备菌种资源。方 法 采用20种分离培养基,以平板涂布法分离放线菌;依据16S rRNA基因的同源性对菌株进行分子鉴定;PCR检测代表菌株的I型聚 酮合酶(PKS I)、II型聚酮合酶(PKS II)和非核糖体多肽合成酶(NRPS)功能基因;菌株的发酵液上清和菌体分别经乙酸乙酯和丙酮提取, 提取样品经纸片扩散法进行抗菌活性检测。目标菌株合成次级代谢产物的能力通过antiSMASH对基因组序列进行分析预测。结果 从 7份盐湖土壤样品中分离获得了365株放线菌,其分布于放线菌纲的8个目15个科28个属,优势菌属为链霉菌属和拟诺卡菌属。分离获 得的链霉菌新颖性突出,13株链霉菌与近缘菌株16S rRNA基因的最高相似度≤98.0%,推测其归属于10个链霉菌属新种。受试放线菌 对革兰阳性菌的抗菌活性显著,并从中筛选出3株抗菌作用强且抗菌谱较广的链霉菌;20株受试放线菌同时含有3种抗生素生物合成基 因。菌株XMNu-295基因组含有24个潜在的次级代谢产物生物合成基因簇,以聚酮类、非核糖体多肽类和萜烯类等为主。结论 锡林 郭勒盟高原盐湖中可培养放线菌多样性较为丰富,新颖性突出,目标菌株值得进一步开展次级代谢产物的化学研究。     

穿龙薯蓣内生真菌分离鉴定及其抑菌活性研究

目的 分离纯化穿龙薯蓣内生真菌,并对分离得到的内生真菌进行抑菌活性筛选及分类鉴定。方法 采用组织分离法纯化穿龙薯蓣内生真菌,采用载片培养法、挑片培养法、插片培养法,对照《真菌鉴定手册》和《半知菌纲手册》进行初步鉴定;以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、白色葡萄球菌Staphylococcus albus、柠檬色葡萄球菌Staphylococcus citreu、四联球菌Micrococcus tetragenus、大肠杆菌Escherichia coli、伤寒杆菌Salmonella typhi、铜绿色假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、变形杆菌Bacterium termo、肺炎杆菌Bacillus endocarditidis capsulatus、福氏痢疾杆菌Shigella flexneri、乙型副伤寒杆菌Bacterium paratyphosum B作为受试对象,检测内生真菌菌株发酵液以及菌丝提取物的抑菌活性,应用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行分类鉴定。结果 从穿龙薯蓣叶片中分离得到52株内生真菌,根据形态学特征将10株产孢子的内生真菌初步鉴定为2个目、3个科、9个属;其中有3株内生真菌的菌丝提取物具有广谱抗菌活性,结合形态学和分子生物学特征鉴定C37菌为赤霉属Gibberella真菌,C30和C50菌为链格孢属Alternaria真菌。结论 穿龙薯蓣叶片中存在具有抑菌活性的内生真菌,具有开发抑菌生物制剂的潜力。     

大狼毒内生真菌的分离、鉴定与抑菌活性研究

目的 分离和鉴定大狼毒根中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 用组织块法分离,点植法对分离菌株进行分类鉴定;选择3种人类病原细菌作为指示菌进行体外抑菌试验.结果 分离获得内生真菌41株,鉴定为1纲、4目、6科、15属;其中9株有稳定的抑菌活性,尤其对大肠杆菌有显著抑制作用.结论 大狼毒根中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源.     

三角叶黄连内生真菌的多样性及其抑菌活性的筛选

目的分离和鉴定三角叶黄连Coptis deltoidea根状茎、叶柄及叶中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用平板法分离菌株,对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基的颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行分类鉴定;选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌的发酵上清液进行体外抑菌试验。结果从三角叶黄连中分离获得的297株内生真菌,分属2目、3科、32属;抑菌实验表明:22株内生真菌的发酵液对指示菌均有不同程度的抑制作用,其中6号内生真菌同时对两种致病菌的抑菌效果明显。结论三角叶黄连内生真菌在种类、不同部位呈多样性分布,且部分内生真菌的代谢产物具有较强的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

基于高通量测序技术的濒危植物黄瑞香Daphne giraldii Nitsche根部内生真菌多样性研究

通过研究濒危植物黄瑞香根部真菌种类的多样性,为濒危植物黄瑞香真菌库的建立及筛选促进黄瑞香生长和提高其活性成分祖师麻甲素含量的内生真菌提供科学依据。以甘肃、山西两省的9份野生黄瑞香植株为研究对象,利用Illumina高通量测序技术对其测序并进行生物信息学分析,共获得632766条有效序列,包括348个OTU,4门,20纲,48目,108科,154属,208种,丰度占比前3的真菌属之和能够占到总丰度的65%以上,最高可以达到98.4%,链格孢属(Altemaria)、茎点霉属(Phoma)为黄瑞香的核心菌属,链格孢属为优势属;黄瑞香根部内生真菌多样性丰富,不同产区内生真菌多样性依次为:甘谷县>五台县>宕昌县。     

浙江天目山和建德地区产银杏中内生真菌多样性的比较研究

目的比较银杏内生真菌在浙江天目山地区和建德地区以及在同一地区雄株与雌株银杏中的种群结构。方法利用PDA培养基对采集自天目山地区和建德地区以及天目山地区雄株和雌株的银杏内生真菌分别进行分离、纯化,根据菌株群落的培养特征及5.8S和ITS区片段序列相似性比较和系统发育分析,进行菌株鉴定。结果从天目山地区和建德地区分别分离得到440、382株内生真菌。天目山地区内生真菌归属到9目、14科、19属、28种;建德地区内生真菌归属到8目、10科、11属、26种。银杏各组织部位内生真菌的数量和种类按由多到少排序:枝条>树皮>叶。天目山地区雄株银杏内生真菌在定殖率和菌株个数上均高于雌株银杏。结论银杏内生真菌具有极其丰富的物种多样性,天目山地区银杏内生真菌在种类和数量上均多于建德地区。天目山地区雌雄株银杏在菌种种类和数量上存在差异,雄株银杏内生真菌在菌种数量上具有一定的优势。     

Antiproliferative effect of extract from endophytic fungus Curvularia trifolii isolated from the “Veracruz Reef System” in Mexico

Context: It is well known that marine fungi are an excellent source of biologically active secondary metabolites, and by 2011, it was reported that over 400 bioactive metabolites were derived from marine fungi.

Objective: This study establishes the basis for future research on antiproliferative compounds of marine endophytes inhabited in the Veracruz Reef System.

Materials and methods: Isolation of the 34 fungal strains was carried out by microbiological method from samples of sponges, corals, and other biological material from the Veracruz Reef System. The fungal biomass and broth were separated and extracted with a mixture of solvents MeOH:CHCl₃. Characterization and molecular identification of the fungal strains were performed through microbiological methods and the analysis of the ITS-rDNA regions. Antiproliferative activity was tested at a dose of 250 μg/mL on human solid tumor cell lines HBL-100, HeLa, SW1573, T-47D, and WiDr by the SRB assay after 48 h-exposure to the fungal extracts.

Results: The extracts from five isolates showed an antiproliferative effect against one or more of the tested cell lines (percentage growth < 50%). The mycelial extract from the isolate LAEE 03 manifested the highest activity against the five cell lines (% PG of 17 HBL-100, 19 HeLa, 23 SW1573, -6 T-47D, and 10 WiDr) and the strain was identified as Curvularia trifolii (Kauffman) Boedijn (Pleosporaceae).

Discussion and conclusion: The results obtained indicate that the extract from a marine derived C. trifolii has the antiproliferative effect, thus suggesting that this organism is a good candidate for further analysis of its metabolites.     

2017—2020年克拉玛依市中心医院抗菌药物使用强度与分离菌耐药性变化情况

目的 分析克拉玛依市中心医院2017—2020年住院患者常见分离菌分布及耐药率的变迁情况,为指导抗菌药物临床合理应用提供依据。方法 收集2017—2020年克拉玛依市中心医院住院患者抗菌药物使用情况及分离菌,分析主要分离菌对常见抗菌药物的耐药率变化趋势。结果 2017—2019克拉玛依市中心医院抗菌药物使用率和使用强度呈下降趋势,4年共有分离菌12 135株,其中革兰阳性菌2 567株,占21.15%;革兰阴性菌6 310株,占52.00%;真菌3 258株,占26.85%。居前5位的分离菌分别是白色假丝酵母菌（19.59%）、大肠埃希菌（16.84%）、肺炎克雷伯菌（13.33%）、鲍曼不动杆菌（8.71%）和铜绿假单胞菌（7.94%）。主要分离菌对常用抗菌药物耐药率总体呈下降趋势,肠杆菌科细菌对临床常用抗菌药物耐药性下降最明显。结论 克拉玛依市中心医院分离菌逐年增加,耐药率有下降趋势,抗菌药物临床应用基本合理,但需完善真菌检测能力。