白芍总甙对大鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的调节机制

目的：研究不同浓度白芍总甙（ＴＧＰ）调节大鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）作用。方法：在ＭΦ培养系统中有或无环氧酶抑制剂和钙调蛋白抑制剂等工具药，测定４５Ｃａ内流、ＰＧＥ２和ＴＮＦ含量。结果：ＴＧＰ（０．５～１０ｍｇ·Ｌ－１）明显促进ＬＰＳ诱导ＭΦ的４５Ｃａ内流和ＴＮＦ产生。线性回归分析表明，４５Ｃａ内流和ＴＮＦ产生呈明显正相关。三氟拉嗪（４０μｍｏｌ·Ｌ－１）可阻断ＴＧＰ促进ＬＰＳ诱导ＭΦ产生ＴＮＦ。ＴＧＰ－ＬＰＳ的ＴＮＦ释放曲线呈钟罩形，而ＴＧＰ－ＬＰＳ的ＰＧＥ２产生曲线呈浓度依赖性升高。当ＴＧＰ在低浓度（０．５～１２．５ｍｇ·Ｌ－１）时，ＴＮＦ与ＰＧＥ２产生明显正相关，而高浓度（１２．５～２５０ｍｇ·Ｌ－１）两者呈明显负相关。吲哚美辛（１０μｍｏｌ·Ｌ－１）可使ＴＮＦ量效曲线下降支消失，而Ｎω亚硝基－Ｌ－精氨酸（１５μｍｏｌ·Ｌ－１）对此无明显影响。结论：低浓度ＴＧＰ对ＴＮＦ产生上调作用可能与促进４５Ｃａ内流，提高钙调蛋白活性从而促进ＰＧＥ２分泌等有关，而高浓度下调作用是可能与ＭΦ自身产生大量ＰＧＥ２介导有关。     

白芍总甙对大鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的影响

采用Ｌ９２９细胞株细胞毒检测法，观察了白芍总甙（ＴＧＰ）对ＬＰＳ诱导大鼠腹腔巨噬细胞（ＭΦ）产主肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的影响。结果表明、亚适量ＬＰＳ（５ｍｇ·Ｌ－１）诱导大鼠腹腔ＭΦ培养上清在６ｈ对Ｌ９２９细胞杀伤百分率最大．ＴＧＰ（２．５ｍｇ·Ｌ－１）能促进ＬＰＳ诱导大鼠腹腔ＭＯ产生ＴＮＦ，但不改变其动力学过程。ＴＧＰ（０．５～２５０ｍｇ·Ｌ－１）对ＬＰＳ诱导ＭΦ产生ＴＮＦ量效曲线呈钟罩形．提示ＴＧＰ对ＭΦ产主ＴＮＦ具有浓度依赖性双向调节作用。不同浓度ＴＧＰ对Ｌ９２９细胞无直接杀伤作用，亦无ｒｈＴＮＦ－α拮抗作用。     

白芍总甙对大鼠腹腔巨噬细胞产生前列腺素E_2的作用及部分机制研究

白芍总甙（ＴＧＰ，０．０１～１００ｍｇ·Ｌ－１）对亚适浓度Ａ２３１８７（０．１μｍｏｌ·Ｌ－１）激活的大鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭΦ）产生的前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）呈现低浓度促进和高浓度抑制的双向调节作用。而ＴＧＰ对最适浓度Ａ２３１８７（１μｍｏｌ·Ｌ－１）激活的ＰＭΦ产生的ＰＧＥ２呈浓度依赖性的抑制作用，其ＩＣ５０为１６．７ｍｇ·Ｌ－１。在整体模型上，ＴＧＰ（５０ｍｇ·ｋｇ－１×１０ｄ）能使佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠ＰＭΦ产生过高的ＰＧＥ２恢复正常水平。采用Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光法测定ＴＧＰ对Ａ２３１８７（１μｍｏｌ·Ｌ－１）诱导正常大鼠ＰＭΦ胞内游离钙离子浓度［Ｃａ２＋］ｉ，发现ＴＧＰ（≤１０ｍｇ·Ｌ－１）对ＰＭΦ［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，而ＴＧＰ在（１０～１００ｍｇ·Ｌ－１）时，对ＰＭΦ［Ｃａ２＋］ｉ有一定抑制作用。提示高浓度ＴＧＰ对ＰＧＥ２的负向调节作用可能与抑制细胞内钙有关。     

白芍总甙对正常人与类风湿性关节炎患者单核细胞和淋巴细胞功能的影响

０．１～２．５ｍｇ·Ｌ－１白芍总甙（ＴＧＰ）对正常人的ＬＰＳ诱导外周血单个核细胞产生ＩＬ－１．ＰＨＡ－Ｐ诱导淋巴细胞增殖反应和ＩＬ－２产生均呈现浓度依赖性的双向作用；ＴＧＰ还可浓度（０．１～１２．５ｍｇ·Ｌ－１）依赖性地降低正常人淋巴细胞上ＩＬ－２Ｒ的密度．ＴＧＰ能使类风湿性关节炎（ＲＡ）患者低下的ＰＨＡ－Ｐ致分裂素反应与ＩＬ－２产生能力恢复正常，使外周血中减少的Ｔｓ细胞数目回到正常水平．但可使ＲＡ患者ＰＢＭＣ过度产生ＩＬ－１降低至正常范围．并能显著降低ＲＡ患者增高的淋巴细胞ＩＬ－２Ｒ的密度。上述结果表明．ＴＧＰ对ＲＡ患者有明显的机能依赖性免疫调节作用．ＴＧＰ对ＲＡ的治疗作用可能与其调整ＲＡ患者异常的免疫功能有关。     

白芍总甙、芍药甙和白芍总甙去除芍药甙对佐剂性关节炎大鼠的免疫调节作用

福氏完全佐剂致炎后ｄ１８，佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠刀豆素Ａ（３ｍｇ·Ｌ－１）诱导的脾淋巴细胞增殖反应显著低于正常对照水平，脂多糖（６ｍｇ·Ｌ－１）诱导的大鼠腹腔巨噬细胞（ＰＭΦｓ）产生ＩＬ－１显著高于正常对照大鼠。０．５～３１２．５ｍｇ·Ｌ－１白芍总甙（ＴＧＰ）、芍药甙（ＰＦ）和白芍总甙去除芍药甙（ＴＧＰ－ＰＦ）均能浓度依赖性地增强ＡＡ大鼠低下的脾淋巴细胞增殖反应（量效曲线均呈钟罩形），降低ＡＡ大鼠ＰＭΦｓ过度产生ＩＬ－１（量效曲线均呈倒钟罩形）。其中，２．５～６２．５ｍｇ·Ｌ－１ＴＧＰ的调节作用显著强于ＰＦ和ＴＧＰ－ＰＦ各等剂量组。这些结果表明，上述三种药物均具有浓度和机能依赖性的双向免疫调节作用，ＴＧＰ的作用最强。     

氨甲喋呤对类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的研究氨甲喋呤（ＭＴＸ）对类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生细胞因子的影响。方法采用ＥＬＩＳＡ双抗夹心法，观察ＲＡ患者ＴＮＦ－α、ＩＬ－６的自发分泌及ＭＴＸ和ＬＰＳ的影响，以及ＭＴＸ和ＰＨＡ对ＩＬ－１０和ＩＦＮ－γ产生的影响。结果低浓度ＭＴＸ（５ｍｇ·Ｌ－１）有抑制ＲＡ患者ＰＢＭＣ自发分泌ＩＬ－６的作用，并对ＬＰＳ（１０ｍｇ·Ｌ－１）诱导ＩＬ－６的产生具有抑制作用，对ＴＮＦ－α的自发分泌及ＬＰＳ促分泌作用无明显影响；而高浓度ＭＴＸ（１５ｍｇ·Ｌ－１）对ＴＮＦ－α、ＩＬ－６和ＩＮＦ－γ均具有抑制作用；并能促进ＰＨＡ（１０ｍｇ·Ｌ－１）诱导ＩＬ－１０的产生；使ＩＬ－１０／ＩＮＦ－γ的比率上升。结论ＭＴＸ通过调节细胞因子网络（增高Ｔｈ２型细胞产生的细胞因子和降低Ｔｈ１型细胞产生的细胞因子）来发挥免疫调节作用和抑制炎症反应，这可能是其对ＲＡ产生治疗作用机制之一     

白芍总甙的抗惊厥作用

采用最大电休克发作（ＭＥＳ）法、士的宁惊厥法和戊血氮最小阈发作（ＭＥＴ）法，观察白芍总甙（ＴＧＰ）对动物惊厥的影响。实验结果表明，ＴＧＰ（２０～８０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｉｐ和ｉｇ×３ｄ）呈剂量依赖性对抗小鼠的ＭＥＳ。ＴＧＰ（６０～１００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｉｐ）能对抗士的宁引起的小鼠和大鼠的惊厥。ＴＧＰ（４０～８０ｍｓ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｉｐ）对小鼠的ＭＥＴ无影响。ＴＧＰ（４０～８０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｉｐ）对小鼠ＭＥＳ的作用高峰时间在０．５～１．５ｈ之间。     

褪黑素对大鼠松果腺细胞产生前列腺素E_2的影响

采用松果腺细胞培养、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）放射免疫测定等方法，研究了松果除分泌的褪黑素（ＭＴ）对松果腺细胞产生ＰＧＥ２的影响。结果表明：ＭＴ０．１～１０μｍｏｌ·Ｌ－１抑制松果腺细胞产生ＰＧＥ２，０．０１～１０μｍｏｌ·Ｌ－１对抗去甲肾上腺素刺激松果腺细胞产生ＰＧＥ２，且以１μｍｏｌ·Ｌ－１的作用最为明显。提示ＭＴ对松果腺细胞功能有负性调节作用。Ｐ＜０．０１图２ＭＴ对去甲肾上腺素刺激松果腺细胞（１０５ｃｅｌｌｓ）转引产生ＰＧＥ２的影响●－●：ＮＥ；○－○：ＮＥ＋ＭＴ；ｎ＝４与对照组比较，Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１；与对应的去甲肾上腺素比较，△Ｐ＜０．０５，△△Ｐ＜０．０１３讨论支配松果腺细胞的交感神经纤维在暗相时产生与释放大量去甲肾上腺素，作用于松果腺细胞膜上的β１、α１受体，双重受体激动后通过Ｇ蛋白使蛋白激酶Ｃ激活，Ｃａ２＋、Ｋ＋、花生四烯酸增多，继而使ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ产生明显增加，松果腺细胞内特有的合成ＭＴ的限速酶Ｎ－乙酰转移酶和羟基吲哚－０－甲基转移酶被激活，从血液中摄取的色氨酸迅速转化为ＭＴ。在ＭＴ合成过程中，ＰＧ起很重要作用，因α１受体激动可使ＰＧ产生增多，ＰＧ进而促进ｃＧＭＰ生成和ＭＴ的合成?     

烟碱对白细胞介素1β诱导的培养牛脑微血管内皮细胞表达E-选择素的增强作用

目的··：观察烟碱对牛脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）表达Ｅ－选择素的影响。方法··：离体培养新生牛脑微血管内皮细胞;血细胞计数仪测定ＢＣＭＥＣ粘附大鼠血单核细胞（ＭＮ）的数目;应用ＥＬＩＳＡ法检测ＢＣＭＥＣ表达Ｅ－选择素的量。结果··：高浓度烟碱（１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）单独作用于ＢＣＭＥＣ２ｈ后,使ＢＣＭＥＣ对ＭＮ的粘附率从１２．９％±ｓ０．４％增至１５．７％±ｓ０．６％,且ＢＣＭＥＣ也可表达少量的Ｅ－选择素;而当烟碱与ＢＣＭＥＣ作用２ｈ后,再经白细胞介素１β（ＩＬ－１β）诱导４ｈ,烟碱可浓度依赖性（１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１－１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１）地增强ＩＬ－１β的诱导作用,增加ＢＣＭＥＣ对ＭＮ的粘附率以及Ｅ－选择素的表达量;抗Ｅ－选择素单克隆（ＡＥｍＡｂ）能显著阻断ＩＬ－１β诱导ＢＣＭＥＣ后对ＭＮ的粘附率。结论··：烟碱增强ＩＬ－１β诱导的脑微血管内皮细胞表达Ｅ－选择素的作用。     

大鼠脂肪细胞β受体亚型的研究

用异丙肾上腺素（ＩＳＯＰ）和非典型β受体激动剂ＢＲＬ３７３４４作用于大鼠脂肪细胞，测定所产生的ｃＡＭＰ含量，结果二种激动剂的量效曲线相似。ＩＳＯＰ和ＢＲＬ３７３４４的ＥＣ５０分别为２．３×１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１和２．０×１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１，二者的ＥＣ８０都是１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１。在普萘洛尔（ＰＲＯＰ）和选择性β１受体阻断剂ＣＧＰ２０７１２Ａ存在的情况下，ＩＳＯＰ的作用被阻断，ＰＲＯＰ与ＣＧＰ２０７１２Ａ的ＩＣ５０分别为２．０×１０－７ｍｏｌ·Ｌ－１和５．０×１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１。但ＰＲＯＰ及ＣＧＰ２０７１２Ａ却难以阻断ＢＲＬ３７３４４的作用，只有在很高浓度（１０－４ｍｏｌ·Ｌ－１）时才能阻断其作用。上述结果表明大鼠脂肪细胞上存在着β１受体和非典型的β受体。     

白细胞介素Ⅰ的检测及白芍总甙对其产生的影响

本文对小鼠胸腺细胞增殖法检测IL—1的条件及白芍总甙(TGP)对其产生的影响进行了探讨。结果表明,LPS诱导大鼠腹腔Mφ产生IL—1的最佳浓度为8mg/L,诱导出富含IL—1的上清经活化的小鼠脾细胞检测表明无明显IL—2污染。富含IL—1的待测上清协同亚适量Con A诱导小鼠胸腺细胞增殖反应的最佳稀释度为1:90。TGP和亚适浓度LPS与大鼠腹腔Mφ体外共育6h后洗去药物和LPS,结果表明,TGP(0.5～12.5mg/L)可浓度依赖性地增加IL—1的产生,但高浓度TGP(62.5～125mg/L)时,IL—1产生显著降低,量效曲线呈钟罩形趋势,提示TGP对IL—1的产生具有双向作用。     

白芍总甙对佐剂性生关节炎大鼠的免疫调节机制

动态观察白芍总甙（ＴＧＰ，５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｉｇ×２７ｄ）对佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠脾细胞刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）增殖反应发现，ＴＧＰ能使ｄ１４，２１与ｄ２８低下牌细胞增殖反应恢复正常。采用贴壁法纯化牌淋巴细胞（Ａ－），再回加２．５％的同系大鼠的腹腔巨噬细胞（ＰＭφ）建立重组细胞培养系统。结果发现，ＡＡ组的ＰＭφ能抑制正常和ＡＡ组Ａ－细胞的ＣｏｎＡ增殖反应，而ＴＧＦ治疗的ＡＡ组的ＰＭφ使上述培养的ＣｏｎＡ反应恢复正常，提示ＰＭφ是ＴＧＰ发挥治疗作用的一种靶细胞。采用放免法，动态观察ＴＧＰ对ＡＡ大鼠产生ＰＧＥ２的影响，发现ＴＧＰ能使ＡＡ鼠ｄ７、１４、２１与ｄ２８产生过高的ＰＧＥ２均恢复到正常水平。ＰＧＥ２与ＣｏｎＡ反应经相关性分析，发现ｒ＝－０．５５（Ｐ＞０．０５），提示ＡＡ大鼠ＰＭφ对ＣｏｎＡ增殖反应的抑制作用，除ＰＧＥ２外还有其它因子参与。     

白芍总甙对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞功能和脾细胞增殖反应的影响

本文研究了白芍总甙（ＴＧＰ）对大鼠佐剂性关节炎（ＡＡ）滑膜细胞功能以及脾淋已细胞增殖反应的影响及其作用机理。结果表明，ＴＧＰ５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×１０ｄｉｇ可使ＡＡ大鼠滑膜细胞过度分泌白介素１，肿癌坏死因子（ＴＮＦ）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的功能恢复正常，继而下调滑膜成纤维细胞的增殖；吲哚美辛２ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×１０ｄｉｇ抑制ＰＧＥ２产生，但增加ＡＡ大鼠滑膜细胞分泌白介素１与ＴＮＦ，从而促进滑膜成纤维细胞的增殖。ＴＧＰ５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１×１０ｄｉｇ恢复ＡＡ大鼠脾细胞过低的伴刀豆球蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）增殖反应与其下调巨噬细胞产生一氧化氮和ＰＧＥ２有关；体外实验亦证明，高浓度（０．４——６．４ｍｇ·Ｌ－１）ＴＧＰ负调节脾细胞ＣｏｎＡ增殖反应与其促进巨噬细胞产生一氧化氮和ＰＧＥ２有关。     

黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能的作用

应用小鼠烧伤模型，对黄芪多糖（ＡＰＳ）的免疫增强作用进行了体内外研究。结果表明：体内应用ＡＰＳ（２５０ｍｇ·ｋｇ－１，ｑｄ，连续５ｄ），可明显提高烧伤小鼠Ｔ淋巴细胞转化，ＩＬ－２的产生及ＩＬ－２Ｒ的表达；体外分别应用５０、１００、２５０ｍｇ·Ｌ－１的黄芪多糖，发现其可纠正烧伤小鼠Ｔ淋巴细胞转化，ＩＬ－２的产生及ＩＬ－２Ｒ表达的受抑状态，并促进巨噬细胞产生ＩＬ－１，抑制ＰＧＥ２合成，且呈剂量依赖关系；体外去除烧伤小鼠脾细胞中的巨噬细胞后，ＡＰＳ对Ｔ淋巴细胞转化，ＩＬ－２产生及ＩＬ－２Ｒ表达的调节作用消失。提示ＡＰＳ对烧伤小鼠的免疫调节作用依赖于巨噬细胞，通过调节其分泌ＩＬ－１，抑制ＰＧＥ２合成，而促进ＩＬ－２产生及ＩＬ－２Ｒ表达，进而增强Ｔ淋巴细胞增殖。     

白芍总苷对IL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rIL-1α(0.01、0.1、1、10μg.L-1)和1μg.L-1rIL-1α(3、6、12、24h)体外刺激下,CIA大鼠FLS产生的PGE2和cAMP水平均升高;TGP(2.5、12.5、62.5、125、250mg.L-1)体外给药可不同程度地抑制FLS的增殖反应和PGE2产生,而进一步升高cAMP水平。结论在不同浓度同一时间和同一浓度不同时间的rIL-1α体外刺激下,FLS产生PGE2和cAMP水平均升高;TGP体外作用FLS可抑制其增殖和产生PGE2,进一步升高cAMP的水平。     

4，5－二氢－6－［（苯乙酰基－哌嗪基）苯基］－5－甲基－3（2H）－哒嗪酮对血小板聚集，花生四烯酸代谢及cAMP含量的影响

４，５－二氢－６－［（苯乙酰基－哌嗪基）苯基］－５－甲基－３（２Ｈ）－达嗪酮（ＳＭＤ。）０．１一２．５ｐｍｏｌ·Ｌ能使血小板激活因子（ＰＡｎ及血栓素Ａ，类似物Ｕ４６６１９诱导的兔血小板聚集剂量一效应曲线不移且最大反应降低。其ｐＤ２分别为６．０±ｓ０．４及６．１±ｓ０．３ＳＭⅡ４还能抑制ＡＤＬ花生四烯酸（ＡＡ）及Ｕ４６６１９诱导的人血小板聚集，其ＩＣ（５０）分别是１２，１３及１．６μｍｏｌ．Ｌ．用放射性薄层层折及放射免疫测定法分别检测血小板ＡＡ代谢产物及ｃＡＭＰ含量表明，ＳＭⅡ４对血小板ＡＡ代谢没有显著影响，但能剂量依赖性地升高血小板内ｃＡＭＰ含量，ＰＡＦμｍｏｌ·Ｌ不能改变此作用     

Total glucosides of paeony suppresses adjuvant arthritis in rats and intervenes cytokine-signaling between different types of synoviocytes

Total glucosides of paeony (TGP) are active compounds extracted from the roots of Paeonia lactiflora Pall. In this study, we investigated the mechanisms of total glucosides of paeony (TGP) in the treatment of adjuvant arthritis (AA). AA in rats was established. Synoviocytes proliferation and activity of IL-1 were determined by 3-(4, 5-2dimethylthiazal-2yl) 2, 5-diphenyltetrazoliumbromide (MTT) assay. Tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) and prostaglandin E2 (PGE2) were measured by radioimmunoassay. Ultrastructure of synovioctes was observed under transmission electron microscope. Phosphorylation of c-Jun N-terminal kinase (JNK), extracellular regulating kinase (ERK) and p38 kinase and expression of matrix metalloproteinases (MMPs) were detected by Western blot analysis. TGP (25, 50 and 100 mg kg(-1), ig, days 14-21) inhibited secondary inflammatory reaction, bone destruction and ultrastructure change of synoviocytes in AA rats. The administration of TGP (50 and 100 mg/kg, ig, days 14-21) in AA rats significantly decreased the production of IL-1, PGE2 and TNF-alpha by macrophage-like synoviocytes (MLS). TGP (25 mg/kg) also decreased the production of PGE(2) by MLS in AA rats. Furthermore, the increased phosphorylation of MAPKs, cell proliferation, and MMPs expression in fibroblast-like synoviocytes (FLS) stimulated by supernatants of MLS in AA rats could also be inhibited by TGP (50 and 100 mg/kg, ig, days 14-21). The results suggest that TGP possesses anti-inflammatory effects by modulating the pro-inflammatory mediators production from MLS and phosphorylation of MAPKs from FLS.     

白芍总甙对白细胞介素-2产生的影响

白芍总甙(0.5～62.5mg/L)对ConA(3mg/L)诱导的大鼠脾细胞产生白细胞介素-2具有双向调节作用。同时用活化小鼠脾细胞检测了ConA诱导大鼠脾细胞产生白细胞介素-2的纯度,表明,主要以白细胞介素-2为主。