白子菜水提液对胰岛素抵抗HepG2细胞关键酶活性的影响

摘要 目的 探讨白子菜水提液对胰岛素抵抗HepG2细胞关键酶活性的影响。方法采用葡萄糖临床检测试剂盒、肝糖原测定试剂盒检测白子菜水提液对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗和HepG2细胞的糖原含量的影响;采用葡萄糖 6 磷酸脱氢酶耦联比色法、乳酸脱氢酶耦联比色法及钼酸铵定磷法测定葡萄糖激酶（GK）、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）和葡萄糖 6 磷酸酶（G 6 Pase）的活性。结果白子菜水提液能够促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗,使G 6 Pase及PEPCK活性分别降低71.41%,82.14%,使GK活性和糖原含量分别提高28.77%,96.73%。结论白子菜水提液可降低胰岛素抵抗HepG2细胞G 6 Pase和PEPCK的活性,抑制糖异生作用,从而减少细胞内源性葡萄糖的产生。此外,白子菜水提液还提高GK活性,加快糖酵解的进行,增加糖原含量,减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗状态。     

夹层胶原"三明治"法短期体外培养肝细胞

目的研究胶原、表皮生长因子对新鲜分离SD大鼠肝细胞活率、形态和功能的影响。方法采用胶原酶二步原位循环肝脏灌注法分离SD大鼠肝细胞，测定不同条件培养后各组肝细胞的活性及功能。结果双层胶原及双层胶原 表皮生长因子组培养后细胞活性、细胞DNA含量及细胞功能均优于普通培养组(P＜0．05)。结论双层胶原体外培养体系提供了稳定的三维立体生长环境，有利于细胞在体外长期保存。     

栎精对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达及活性的影响

目的：探讨栎精对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达及活性的影响。方法：将原代培养的大鼠肝细胞在含有25mmol／L的葡萄糖和不同浓度的栎精培养16h后提取RNA，以半定量RT—PCR方法检测葡萄糖-6-磷酸酶的催化亚基（G6PC）和转运亚基（G6PT）的mRNA水平，并应用葡萄糖双脱氢酶偶联法测定葡萄糖-6-磷酸酶的活性。结果：25mmol／L葡萄糖能够使G6PC和G6PT的mRNA水平升高2倍左右（P〈0．05），不同浓度的栎精可抑制G6PC和G6PT的转录及酶的活性。结论：栎精能够抑制体外葡萄糖-6-磷酸酶基因的表达及其活性。     

葡萄糖和木糖醇对葡萄糖6磷酸酶基因表达的调节作用

目的:探讨葡萄糖以及木糖醇对葡萄糖6磷酸酶基因的表达调控机制。方法:将原代培养的大鼠肝细胞在不同浓度葡萄糖和木糖醇的培养液中培养4h后提取RNA,以半定量RT-PCR方法检测细胞葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)和6磷酸葡萄糖转运亚基(G6PT)的mRNA水平。结果:高浓度的葡萄糖可使肝细胞G6PC和G6PT的mRNA水平升高。25mmol/L的葡萄糖能够使G6PC和G6PT的mRNA升高2倍以上(P<0.05)。小剂量的木糖醇能够促进G6PC和G6PT的转录,当木糖醇浓度>5mmol/L时这种促进作用逐渐消失甚至表现为抑制作用。结论:葡萄糖能够明显的促进葡萄糖6磷酸酶基因的转录,该酶在糖尿病的发生发展中起着重要的作用。     

二甲双胍对糖尿病大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶表达的影响

目的：探讨二甲双胍抑制肝糖输出，减轻肝脏胰岛素抵抗的分子学机制。方法：建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组、糖尿病组、低剂量二甲双胍干预组、高剂量二甲双胍干预组，饲养2周后取出肝脏，以半定量RT-PCR方法测定肝脏葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase）mRNA的表达，蒽酮比色法测定肝脏糖原含量。结果：（1）糖尿病组肝脏G6Pase催化亚基（P36）及转运亚基（P46）mRNA的灰度高于正常对照组（P〈0．05），而肝脏糖原含量低于正常对照组（P〈0．05）。（2）二甲双胍可以明显减少肝脏G6Pase mRNA表达并增加肝糖原含量（P〈0．05），且呈剂量依赖性。结论：二甲双胍能够抑制糖尿病状态下肝脏G6Pase催化亚基及转运亚基mRNA表达，使得6-磷酸葡萄糖向葡萄糖的转化减少，从而减少肝糖输出，达到减轻胰岛素抵抗的作用。     

TGF-β对原代培养肝细胞及肝癌细胞BEL7401生长作用的影响

目的 研究转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对正常大鼠肝细胞和肝肿瘤细胞的影响。方法 分离和培养原代大鼠肝细胞,培养ＢＥＬ４０１肝癌细胞,通过测定细胞ＤＮＡ合成、细胞活性（ＭＴＴ）及碱性磷酸酶活性,研究ＴＧＦ－β对正常大鼠肝细胞和肝肿瘤细胞的影响方式及可能的作用途径。结果 实验发现,ＴＧＦ－β可以刺激ＢＥＬ７４０１肝癌细胞的增生,促进其ＤＮＡ合成,并增强其活性ＳＴＧＦ－β对原代培养肝细胞ＤＮＡ合成无明显影响,对其活性有明显的抑制作用。实验还发现,ＴＧＦ－β明显刺激ＢＥＬ７４０１肝癌细胞中的碱性磷酸酶增高,同时抑制原代培养肝细胞的碱性磷酸酶活性。结论ＴＧＦ－β对正常细胞和肝癌细胞ＢＥＬ７４０１的生长有不同的影响作用,这种结果可能是通过不同的细胞信号传导途径实现的。     

化合物G-003的降血糖作用及其机制

目的　研究新型磺酰脲类化合物G 0 0 3的降血糖作用及其降血糖作用机制。方法　①小鼠灌胃给药 ,葡萄糖氧化酶法测定血糖值。②离体培养大鼠胰岛、脂肪细胞及小鼠肝细胞 ,研究化合物G 0 0 3对胰岛素分泌、葡萄糖转运和氧化利用及糖原合成的影响。结果　化合物G 0 0 3显著降低正常小鼠空腹血糖水平 ,刺激离体胰岛分泌胰岛素 ,显著促进脂肪细胞转运和氧化利用葡萄糖 ,对离体肝细胞的糖原合成无明显影响。结论　新型磺酰脲类化合物G 0 0 3具有显著的降血糖作用 ,其降血糖作用机制与刺激胰岛分泌胰岛素、促进脂肪细胞转运和氧化利用葡萄糖密切相关     

克仑特罗对大鼠肝细胞氮代谢及6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的影响

目的探讨克仑特罗(Cl)调节大鼠肝细胞物质代谢及药理学机制。方法测定Cl(1×10^-6 mol·L^-1)对大鼠原代肝细胞培养液尿素氮水平以及肝细胞³H-亮氨酸参入,胰岛素样生长因子I(IGF-I)水平和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性的影响。结果Cl使培养液尿素氮浓度下降25.51%(P<0.05);使肝细胞³H-亮氨酸参入量增加23.35%(P<0.05);增加肝细胞产生IGF-I的趋势(P>0.05);使肝细胞G6PDH活性下降45.22%(P<0.05)。β受体阻滞剂普萘洛尔(Pro)对Cl的上述作用均有阻断作用。结论Cl可增强大鼠肝细胞氮素保留和蛋白质合成,以及抑制肝细胞G6PDH活性而具有调节机体物质代谢的药理学效应。     

磺酰脲类化合物G004体内外糖代谢的实验研究

目的：研究G004体内外对糖代谢的影响。方法：葡萄糖氧化酶法测定小鼠血糖和糖耐量的变化;采用与人肝细胞表型相似的HEPG2细胞,测定G004对其葡萄糖消耗（GC）作用、与胰岛素协同作用、对细胞内糖原含量以及糖代谢关键酶葡萄糖激酶（GK）活性的影响。结果：G004有效降低小鼠空腹血糖,改善糖耐量;表现出非胰岛素依赖性显著增加HEPG2细胞糖耗量作用,量效曲线类似于格列美脲;与HEPG2细胞共同孵育24 h后显著促进细胞糖原合成并增强GK活性,本研究中未发现格列美脲对HEPG2细胞的GK活性有明显促进作用。结论：化合物G004显著促进糖代谢,其作用具有明显的第三代磺酰脲类药物特点,但机制并不完全相同。     

葛根素对高胰岛素环境下大鼠肝细胞一氧化氮合成的影响

目的：观察葛根素对高胰岛素环境下大鼠肝细胞一氧化氮（NO）合成的影响。方法：体外培养BRL大鼠肝细胞株，用高胰岛素诱导其形成胰岛素抵抗细胞模型，观察葛根素对肝细胞一氧化氮合成的影响。结果：葛根素可调节高胰岛素环境下大鼠肝细胞一氧化氮合酶（NOS）的活性，增加肝细胞NO的合成。结论：葛根素可通过适度调节肝细胞NO的产生，从而促进肝细胞对葡萄糖转化，改善肝细胞胰岛素抵抗的作用。     

视神经星状胶质细胞的培养

目的：探索建立视神经星状胶质细胞培养的最佳方法,观察该细胞体外水解酶表达情况。方法：分别取不同年龄WISTAR大鼠（出生4d、7d、成年）的视神经,利用胰蛋白酶加EDTA、胶原酶、木瓜酶、胰蛋白酶加胶原酶等不同方法消化。分别接种在0．2％明胶、鼠尾胶、多聚赖氨酸包被的培养瓶中,进行原代培养,观察细胞生长状况。利用免疫组化鉴定分离培养的细胞。连续传代观察其衰老情况。利用水解空斑法观察其水解酶表达。结果：几种方法均可见细胞生长,年龄4、7d大鼠视神经要比成年大鼠视神经胶质细胞培养成功率高,利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化要比其他消化方法细胞损失小。速度快,细胞成活率高。培养细胞呈典型星状胶质细胞形态,GAFP呈阳性。常规3d传代一次,可传代40次。胶质细胞在蛋白膜上可形成明显的水解空斑。结论：利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化法,从新生鼠取材,可成功培养视神经星状胶质细胞,体外可传代40代。该细胞在体外可分泌蛋白水解酶。     

肉苁蓉的愈伤组织培养

报道由肉苁蓉（Cistanchedeserticola）不同部位诱导出愈伤组织，并筛选出适合于愈伤组织快速生长的最佳培养条件。结果表明：幼芽愈伤组织诱导率较种子高；愈伤组织生长的基本培养基以B5最好；适宜的激素种类和配比为IAA0．5mg／L和KT2mg／L。适宜的培养条件为pH6．0。     

不同培养因素对蝉花培养物中麦角甾醇的影响

目的 建立HPLC法对不同培养阶段及不同培养基培养的蝉花培养物中麦角甾醇水平进行测定。方法 建立麦角甾醇HPLC检测方法,应用Agilent Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相为100%甲醇,等度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;进样量10 μL;检测波长281 nm;外标法测定麦角甾醇水平。对液体、固体培养基不同培养阶段,假单胞菌选择培养基（PSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDAY,1 000 mL中含葡萄糖量分别为20、30、40 g）,以及包括江苏农垦、烟农24、烟农15和济麦22在内的固体培养基培养的蝉花培养物中麦角甾醇的水平进行测定,利用SPSS 16.0统计软件对测定结果进行多重统计分析,验证并找出引起差异的原因。结果 建立的HPLC法,麦角甾醇分离度良好,精密度、稳定性、重复性的RSD分别为0.30%、0.07%、1.37%,加样回收率为104.3%,实验重现性、耐用性良好,均符合要求,可用于蝉花培养物中麦角甾醇的检测;液-固不同培养阶段麦角甾醇生长曲线的表现特征不同;不同培养基培养的蝉花培养物中麦角甾醇水平差异显著,斜面培养基中,随着葡萄糖量的增加,麦角甾醇水平增加;固体培养基济麦22和烟农15的麦角甾醇的水平显著高于烟农24和江苏农垦。结论 液-固培育阶段麦角甾醇的生长曲线特征不同,且对于培养基具有一定的选择性,为人工蝉花培养工艺的确定及优化提供了依据,也为针对性的药物开发奠定基础。