原儿茶酸对碱性成纤维细胞生长因子诱导PC12细胞分化的影响

目的:探究原儿茶酸(PCA)对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导PC12细胞分化的影响。方法:体外培养PC12细胞,采用PCA低、中和高剂量组(16.0、32.0和64.0μmol/L)增强bFGF诱导PC12细胞分化,并通过其细胞形态学的观察、细胞活力的检测,分析突起细胞数目及平均突起长度值,考察不同剂量的PCA对bFGF诱导PC12细胞分化的影响。结果:与对照组相比,低、中和高剂量(16.0、32.0和64.0μmol/L)PCA组能增强bFGF诱导PC12细胞分化。结论:PCA能增强bFGF诱导PC12细胞分化的能力。     

(1R,2R) -SIPI5358和SIPI5358对未分化PC12细胞延迟整流钾电流的抑制作用

利用全细胞膜片钳技术研究新化合物(1R,2R)-SIPI5358和SIPI5358对未分化PC12细胞延迟整流钾电流(Ik)的影响.结果表明,(1R,2R)-SIPI5358和SIPI5358可抑制未分化PC12细胞的Ik,且抑制作用具有浓度和电压依赖性,IC50分别为(0.64±0.17)和(12.05±3.31)μmol/L.l μmol/L的(1R,2R)-SIPI5358可使未分化PC12细胞的Ⅰk稳态激活曲线和失活曲线向超极化方向移动4和20 mV.20 μmol/L的SIP15358可使未分化PC12细胞的Ik稳态激活曲线向去极化方向移动7mV;使失活曲线向超极化方向移动21 mV.(1R,2R)-SIPI5358和SIP15358对Ⅰx的影响可能与其神经毒性有关.     

灵芝酯溶性提取物诱导PC12细胞分化的研究

目的研究灵芝酯溶性提取物对PC12细胞分化的影响。方法采用PC12细胞分散培养法,观察PC12细胞在灵芝的酯溶性提取物及其灵芝酯溶性有效部位B2的诱导下突起生长阳性细胞的百分比,用神经元特异性标记物微管相关蛋白2(MAP2)单克隆抗体进行免疫荧光标记,荧光显微镜下观察MAP2阳性的细胞。结果灵芝酯溶性提取物的浓度为125～500mg·L-1,均可诱导PC12细胞突起生长,其中以500mg·L-1的浓度作用最明显。灵芝提取物与低浓度的NGF合用时对PC12细胞的分化有明显的促进作用。荧光显微镜下MAP2阳性细胞增多。结论灵芝酯溶性提取物能诱导PC12向神经细胞分化。     

慢病毒介导的NGF基因沉默对PC12细胞分化的影响

目的探讨慢病毒介导的神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因沉默后对大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞(pheochromocytoma cell,PC12)分化的影响及其机制。方法构建NGF shRNA慢病毒载体。培养PC12细胞,随机分为5组(n=3):1正常对照组(NC):PC12细胞置于DMEM/HG细胞培养液和促感染试剂polybrene中培养;2空病毒感染组(LV CON):PC12细胞置于空病毒和polybrene中培养;3慢病毒NGF shRNA1感染组(LV sh NGF1):PC12细胞置于慢病毒NGF shRNA1和polybrene中培养;4慢病毒NGF shRNA2感染组(LV sh NGF2):PC12细胞置于慢病毒NGF shRNA2和polybrene中培养;5慢病毒NGF shRNA3感染组(LV sh NGF3):PC12细胞置于慢病毒NGF shRN3和polybrene中培养。处理结束后,荧光显微镜下检测感染效率、荧光定量RT-PCR法检测细胞NGF mRNA表达水平、Western blot法检测慢病毒感染后细胞NGF、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)和磷酸化-ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表达,细胞增殖检验试剂(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活性,显微镜下观察PC12细胞形态,统计细胞突起长度和最大细胞直径。结果慢病毒感染PC12细胞的效率超过90%。与NC组相比,LV sh NGF3组NGF mRNA表达降低(P<0.05),NGF蛋白水平明显降低(P<0.05),ERK1/2蛋白表达和细胞活性无差异,p-ERK1/2蛋白表达有明显下降(P<0.01),细胞形态发生明显变化,细胞突起长度和最大细胞直径均变小(P<0.01),细胞分化被抑制。结论慢病毒介导的NGF基因沉默通过抑制ERK1/2活化,影响PC12细胞分化。     

中华眼镜蛇(Naja Naja Atra)毒神经生长因子对PC_(12)细胞κ阿片受体mRNA表达的影响

目的研究眼镜蛇毒神经生长因子(nNGF)对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达的影响,探讨nNGF诱导PC12细胞分化的分子机制。方法用RT-PCR方法半定量地考察nNGF及κ阿片受体的一些拮抗剂和激动剂对PC12细胞κ阿片受体mRNA表达的影响。结果(1)在25,50和100 ng/mL 3个nNGF剂量组中,50和100 ng/mL nNGF显著下调PC12细胞κ阿片受体mRNA的表达。(2)50 ng/mL nNGF分别处理PC12细胞1,3,5,7,10 d后,结果显示κ阿片受体mRNA表达随时间有降低的趋势,7 d时显著下调(P<0.05),10 d时特别显著(P<0.01)。(3)10μmol/L吗啡上调PC12细胞κ阿片受体mRNA表达,并能逆转nNGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。10μmol/L纳络酮对PC12细胞κ阿片受体的表达无显著影响,也能逆转nNGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。但吗啡和纳络酮共存时不能逆转NGF对该κ阿片受体mRNA表达的下调效应。结论nNGF诱导PC12细胞分化时,能下调其κ阿片受体mRNA表达,这种下调能分别被吗啡或纳络酮逆转,但不能被吗啡和纳络酮共存时逆转。     

4个黄芪异黄酮类化合物对PC12细胞分化的影响

目的探究毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷对PC 12细胞分化的影响。方法培养PC 12细胞,与不同浓度的神经生长因子(NGF)、毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷共处理5 d,1次/d,连续3次,观察PC 12细胞突起向外生长的情况。同时,用免疫荧光染色检测上述化合物对β微管蛋白(βⅢ-tubulin)表达的影响。结果与对照组相比,毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷和芒柄花苷(0.01~10.00μmol/L)未能促进PC 12细胞突起向外生长和β微管蛋白的表达。结论毛蕊异黄酮、刺芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷不能促进PC 12细胞分化。     

反式-茴香脑对叠氮钠诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨反式-茴香脑对叠氮钠诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用及作用机制。方法将叠氮钠(9～54 mmol·L~(-1))与PC12细胞共同孵育,采用CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;比色法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果叠氮钠对PC12细胞的损伤呈剂量依赖性。反式-茴香脑与PC12细胞孵育48 h对细胞的存活率无影响;利用10、60μmol·L~(-1)反式-茴香脑预处理PC12细胞8 h,可明显对抗叠氮钠致神经细胞存活率下降,明显降低细胞LDH的漏出率和细胞MDA含量,明显提高细胞SOD活力。结论反式-茴香脑对叠氮钠诱导的PC12细胞损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化酶活性有关。     

mTOR/p70S6K通路在缺氧/复氧诱导的分化后PC12神经细胞凋亡中的作用

目的探讨缺氧/复氧(H/R)诱导的分化后肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)凋亡与哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)通路的关系。方法实验分为正常对照(Con)组、H/R组、H/R+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、H/R+雷帕霉素(Rapa)组、NAC组及Rapa组。应用MTT法检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,用活性氧试剂盒检测细胞内活性氧(ROS)生成,Western blot检测Bax、Bcl-2、p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)的表达。结果H/R诱导分化后PC12神经细胞凋亡,Bax表达增加,Bcl-2表达降低,NAC或Rapa显著抑制H/R所致的细胞凋亡,逆转Bax及Bcl-2表达的变化;H/R增加分化后PC12神经细胞内ROS水平,NAC显著抑制H/R所致细胞内ROS水平的增加,而Rapa对细胞内ROS水平无明显影响;H/R增加分化后PC12神经细胞p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)的表达,NAC或Rapa显著抑制H/R所致细胞p-mTOR(Ser2448)及p-p70S6K(Thr389)表达的增加。结论 H/R可能通过升高细胞内ROS水平,进而激活mTOR/p70S6K信号通路,诱导分化后PC12神经细胞凋亡。     

槲皮素对H_2O_2损伤PC12细胞的保护效果与机制

目的研究槲皮素(quercetin)对PC12细胞增殖的影响以及降低H2O2损伤PC12的效果并初步探讨其机制。方法通过MTT比色法检测槲皮素对PC12细胞增殖的影响,并用H2O2诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,通过MTT和LDH比色法以及TUNEL法检测分析槲皮素保护PC12细胞免受H2O2损伤的效果;对比分析槲皮素保护组和对照组PC12细胞内ROS水平和MDA的含量检测抗氧化的效果;比较分析SOD、CAT、GSH-PX活性初步探讨槲皮素的抗氧化机制。结果检测浓度范围内槲皮素对PC12细胞没有毒性;通过提高细胞内SOD、CAT和GSH-PX活性,槲皮素能够降低细胞内活性氧水平,减少MDA的产生,保护H2O2对PC12细胞的氧化损伤。结论槲皮素对PC12细胞没有毒性,能够通过减弱H2O2产生的活性氧保护PC12细胞。     

氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径的研究进展

PC12细胞被广泛用于神经细胞功能、分化、凋亡和神经递质分泌,以及潜在的分子机制的研究。氧化应激可导致PC12细胞凋亡,其作用方式为激活对氧化还原反应敏感的细胞信号传导,主要与丝裂原活化蛋白激酶、线粒体凋亡及NF-κB信号传导途径有关。本文综述了氧化应激致PC12细胞凋亡的信号传导途径,旨在为神经系统氧化应激相关疾病的抗氧化剂药物治疗和凋亡信号途径药物干预治疗提供理论依据。     

Analgesic effect of S (+)‐flurbiprofen plaster in a rat model of knee arthritis: analysis of gait and synovial fluid prostaglandin E2 levels

Objectives

We developed S (+)‐flurbiprofen plaster (SFPP ), a novel NSAID patch containing S (+)‐flurbiprofen (SFP ), a potent cyclooxygenase (COX ) inhibitor. The purpose of this study was to assess efficacy of SFPP by analysing its effect on the gait disturbance and measuring the prostaglandin E₂ (PGE ₂) production in synovial fluid in a rat model of knee arthritis.

Methods

Knee inflammation was induced in rats by intra‐articular injection of a yeast suspension. Subsequently, an NSAID patch containing SFP , ketoprofen or loxoprofen was applied over the affected knee. Gait was assessed at 2, 4 and 6 h after application of the patch. The PGE ₂ concentration in the synovial fluid was measured after the gait assessment.

Key findings

Application of SFPP (0.125, 0.25, 0.5 or 1 mg/sheet) was followed by a decrease in the visual gait score at all the doses examined. In the case of the other two NSAID patches, only the ketoprofen patch (1 or 2 mg/sheet) and loxoprofen patch (5 mg/sheet) produced a decrease in the visual gait score. All of the NSAID patches decreased the PGE ₂ production in the synovial fluid.

Conclusions

These results suggest the potential usefulness of SFPP as an analgesic patch in patients with inflammatory joint pain.

     

中药海蒿子脂肪酸类成分分析

从传统中药海蒿子的脂溶性成分中用气相色谱法分离、鉴定出14种脂肪酸组分,并用内标法进行了含量测定。结果表明：海蒿子中含有丰富的饱和及不饱和脂肪酸,为其药用活性研究提供了一定的化学基础。     

展枝马尾藻硫酸多糖对呼吸道合胞病毒的抗病毒活性及其机理研究

目的研究从褐藻展枝马尾藻Sargassumpatens中分离到的一种硫酸多糖SP2的抗病毒活性及抗病毒作用机理。方法通过细胞致病效应实验、MTT测定和空斑形成抑制实验对该多糖的抗病毒活性、细胞毒性和可能的抗病毒机理进行测定。结果通过空斑形成抑制实验测定结果显示,该多糖对呼吸道合胞病毒有好的抗病毒活性,其EC50值为1.1但没有抗流感病毒A和B、副流感病毒的活性。多糖的CC50高达3000μg.mL-1。其对呼吸道合胞病毒的抗病毒选择性指数被估计大于2727。用SP2预处理宿主细胞,不显示任何对病毒感染的保护作用。SP2对呼吸道合胞病毒有一定的杀病毒活性,其EC50值超过100μg.mL-1。时间加入实验证明,只有在37℃呼吸道合胞病毒吸附时期加入SP2才能完全抑制病毒的复制。结论SP2可能是一种有潜力的抗呼吸道合胞病毒感染的多糖。其对呼吸道合胞病毒的抗病毒作用机制与抑制病毒的吸附有关。     

甘草与海藻 大戟 芫花配伍对大鼠肝脏CYP2E1酶活性及mRNA表达的影响

目的研究甘草与海藻、大戟、芫花合用对CYP2E1酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。方法采用高效液相色谱法测定CYP2E1活性;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)评价药物对CYP2E1 mRNA水平的影响。结果甘草单用能明显诱导CYP2E1酶活性,与海藻、大戟、芫花合用后对CYP2E1酶活性的诱导作用没有甘草单用明显。CYP2E1 mRNA水平基本与酶活性水平相平行。结论甘草与海藻、大戟、芫花合用后诱导CYP2E1酶活性,酶活性变化可能主要通过影响基因转录来实现。     

海藻及其混伪品性状显微比较研究

目的：研究海藻及其混伪品的性状、显微特征,以便准确鉴别海藻药材。方法：采用性状和显微鉴别方法对海藻及其混伪品进行形态组织对比研究。结果：海藻及其混伪品在药材性状和组织结构上存在差异。结论：采用形态和显微鉴别方法可准确鉴定海藻药材基原。     

羊栖菜多糖抗肿瘤作用及其作用机制的研究

目的观察羊栖菜多糖对6种不同组织肿瘤的抑瘤作用，并对其作用机制进行了讨论。方法通过对S180、H22荷瘤小鼠瘤重和生存时间的研究，观察了羊栖菜多糖的体内抗肿瘤作用，采用MTT法和集落形成实验法观察羊栖菜多糖的体外抗肿瘤作用。采用流式细胞仪观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响。结果羊栖菜多糖对人胃癌细胞SGC-7901和人直肠癌COLO-205有较好的疗效。羊栖菜多糖可阻滞SGC-7901人胃癌细胞内Go／G，期进入S期，升高细胞凋亡指数(APO％)。结论羊栖菜多糖对人胃癌细胞和直肠癌细胞效果较好，这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡达到的。     

羊栖菜多糖对氧化应激人成纤维细胞的保护作用

目的研究羊栖菜多糖对氧化应激的人皮肤成纤维细胞的保护作用及机制。方法以0.8 mmol/L H2O2诱导人皮肤成纤维细胞建立氧化应激模型,MTT法测定不同浓度羊栖菜多糖(15、30、60mg/L)对过氧化氢(H2O2)损伤人皮肤成纤维细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,流式细胞仪测定细胞周期分布。测定细胞丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、还原性谷胱甘肽(GSH)水平和活性氧(ROS)水平。结果羊栖菜多糖可抑制H2O2对人皮肤成纤维细胞增殖活性的下降和凋亡率的上升,维持细胞正常形态。流式细胞仪检测表明,羊栖菜多糖能显著降低H2O2损伤的细胞G0/G1期阻滞现象;升高SOD和GSH-Px活力,降低MDA和ROS水平,升高GSH水平,差异有统计学意义且具有剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论羊栖菜多糖能减轻H2O2对人皮肤成纤维细胞的氧化损伤,具有较好的抗氧化保护作用,与其增强抗氧化酶活性,降低脂质过氧化有关。     

甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性及mRNA表达的影响

目的:研究甘草与海藻提取液合用对CYP3A1/2酶活性的影响及在mRNA水平的调控作用。方法:采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;采用RT-PCR评价药物对CYP3A1、CYP3A2 mRNA水平的影响。结果:甘草、海藻提取液合用后诱导了CYP3A1/2的酶活性;合用后诱导CYP3A1、CYP3A2 mRNA表达。结论:甘草、海藻提取液合用后诱导CYP3A1/2酶活性,酶活性增强可能主要由诱导其mRNA水平来实现。