不同鲨鱼皮胶原蛋白的分离及其特性研究

目的 探讨不同鲨鱼皮胶原蛋白的分离方法,并对分离胶原蛋白的部分生化特性进行研究.方法 用稀碱溶胀酶解法争缓冲液溶胀分离法分别从水鲨头皮和马鲛鲨皮中分离胶原蛋白,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)、差示扫描量热仪法(DSC)、园二色谱仪法(CD)对分离胶原蛋白进行纯度及分子大小、变性温度和二级结构的测定.结果 鲨鱼皮胶原蛋白回收率为鲜重的2.9%～4.1%;分离胶原蛋白在SDS-PAGE上呈现清晰的3条谱带,相对分子质量分别为205,134,118 KDa水鲨头皮和马鲛鲨皮胶原蛋白的热变性温度分别为69℃、47℃;两种分离胶原蛋白的二级结构均主要是β-折叠和无规卷曲,不存在α-螺旋.结论 采用稀碱溶胀酶解法和缓冲液溶胀分离法均能制备高纯度的胶原蛋白,从水鲨头皮和马鲛鲨皮分离的胶原蛋白相对分子质量争分子构成一致,但提取条件的不同能影响胶原蛋白的热变性温度和二级结构.     

大马哈鱼皮胶原蛋白制备和表征

用稀碱处理大马哈鱼皮,然后进行限制性酶解,制备得到胶原蛋白,检验制备样品的纯度,测定样品的热变性温度和细胞相容性。制备的胶原蛋白α链的含量≥75%,β链的含量≤25%,有微量的γ链;变性温度是12.5℃;细胞培养3天的相对活力是80.0±3.6%;大马哈鱼皮胶原蛋白为基质的细胞活力仅次于对照组(空白细胞培养板),优于聚乳酸、聚羟基丁酸和聚-3-羟基丁酸戊酸。海鱼皮胶原蛋白可进一步应用于生物材料研究。     

曲克芦丁对牛血清白蛋白溶液二级结构影响的研究

目的:采用红外光谱研究曲克芦丁对牛血清白蛋白溶液二级结构的影响。方法:利用红外差谱([蛋白质+药物溶液]-[药物溶液])来研究反应前后蛋白质酰胺带的变化。结果:蛋白质与药物作用后蛋白质分子发生了由螺旋结构向折叠结构的转变。结合蛋白质酰胺Ⅰ带的拟合结果对酰胺Ⅲ带各二级结构的谱峰进行了初步指认:1330~1290 cm-1为α-螺旋;1290~1270 cm-1为β-转角;1270~1250 cm-1为无规则卷曲;1250~1220 cm-1为β-折叠。结论:运用红外光谱的方法研究曲克芦丁和蛋白质的相互作用,为研究其他蛋白质与中药有效成分的相互作用提供一种新的实验方法。     

包裹在脂质体内部胰岛素的二级结构

目的以单纯胰岛素为对照，采用傅立叶红外光谱（Fourier transform infrared， FTIR）研究包裹在脂质体内部胰岛素二级结构的变化。方法分别对单纯胰岛素、胰岛素与空白脂质体混合物（样品I）及包裹胰岛素的脂质体（II）样品进行测定。结果样品I和样品II中胰岛素的FTIR谱图形状与单纯胰岛素相比基本一致，仅α-螺旋百分比略有下降（由36.09%分别下降到31.68%和31.45%），β-折叠百分比略有增加（由47.83%分别增加到53.29%和51.36%）。样品I和样品II中胰岛素的二级结构无明显差别（α-螺旋百分比为31.68%和31.45%，β-折叠百分比为53.29%和51.36%）。结论包裹在脂质体内部胰岛素的二级结构与单纯胰岛素相比无明显变化。     

3种不同方式提取鳕鱼鱼鳔胶原蛋白与胶原蛋白肽的基本特性研究

目的 研究三种不同提取方式所制备的大西洋鳕鱼（Gadus macrocephalus）鱼鳔胶原蛋白的基本特性。方法 采用低温酸溶提取酸溶性胶原蛋白(acid-soluble collagen, ASC),热水抽提明胶(gelatin, GEL),复合蛋白酶酶解制备鳕鱼鱼鳔肽(swim bladder peptides, SWP)对鳕鱼鱼鳔中胶原蛋白的特性进行研究。对提取的胶原蛋白进行感官评定、SDS-PAGE电泳分析、紫外光谱分析、傅里叶红外光谱分析、氨基酸组成分析与扫描电镜分析。结果 ASC、GEL与SWP三种胶原蛋白的提取率分别为42.15%、72.20%与89.11%,且羟脯氨酸的含量为8.73%、8.97%与7.94%;SDS-PAGE图谱显示ASC至少由两条α链与一条β链组成,GEL中存在少量的α链与β链,SWP种α链与β链被降解。紫外光谱结果显示三种蛋白在230 nm波长处均有最大吸收;扫描电镜结果显示ASC与GEL具有一定的交联结构,SWP中无交联结构存在。结论 三种不同提取方式制备的胶原蛋白具有不同的特性,为鳕鱼鱼鳔胶原蛋白的开发与应用拓宽了领域。     

重组HPV病毒样颗粒二级结构的圆二色谱法预测

目的 分析重组HPV病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）的二级结构。方法 取重组HPV16、18、52、58型VLP各1批,均调整蛋白浓度至250〜500 μg/ml,采用圆二色谱远紫外扫描,预测重组HPV VLP的二级结构。结果 重组HPV16 VLP二级结构的预测结果为α螺旋11.7%,反平行β折叠37.1%,平行β折叠4.5%,β转角19.2%,不规则卷曲30.3%;重组HPV18 VLP二级结构的预测结果为α螺旋11.9%,反平行β折叠36.9%,平行β折叠4.6%,β转角19.0%,不规则卷曲30.7%;重组HPV52 VLP二级结构的预测结果为α螺旋12.3%,反平行β折叠37.1%,平行β折叠4.7%,β转角19.0%,不规则卷曲30.2%;重组HPV58 VLP二级结构的预测结果为α螺旋11.7%,反平行β折叠35.3%,平行β折叠4.4%,β转角20.4%,不规则卷曲31.3%。结论 圆二色谱法预测了重组HPV16/18/52/58型VLP的二级结构,该技术可用于重组HPV VLP的结构确证研究。     

纳米二氧化硅暴露对金属硫蛋白和人血清白蛋白二级结构的影响

目的研究纳米二氧化硅(NPSiO₂)对金属硫蛋白(MT)和人血清白蛋白(HSA)二级结构的影响,为深入探讨NPSiO₂的生物安全性提供基础数据。方法将3个浓度0.05,0.5和5 g·L^-1和3种粒径20,60和100 nm的NPSiO₂(NPSiO₂-20 nm,NPSiO₂-60 nm和NPSiO₂-100 nm)分别与MT 0.2 g·L^-1和HSA 0.25 g·L^-1按体积比1∶1混合,于25℃反应30 min后,使用圆二色谱仪检测MT和HSA的圆二色光谱改变,用Spectra Manager Version2软件分析MT和HSA中4种二级结构(α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲)含量的变化。结果3种粒径的NPSiO₂均可使MT的β-折叠在4种二级结构中所占比例减少、β-转角所占比例增加,其中NPSiO₂-60 nm 0.05 g·L^-1对β-折叠影响较为明显,β-折叠在4种二级结构中所占的比例由53.30%减少到43.70%。NPSiO₂-20 nm 0.05 g·L^-1使HSA的α-螺旋在4种二级结构中所占比例增加、β-折叠所占比例减少。3种粒径的NPSiO₂0.5和5 g·L^-1使HSA中α-螺旋和无规卷曲在4种二级结构中所占比例减少、β-折叠所占比例增加;其中5 g·L^-1时使HSA中β-转角的出现受粒径的影响,粒径越大,出现的β-转角越多,NPSiO₂-20 nm,NPSiO₂-60 nm和NPSiO₂-100 nm使β-转角在4种二级结构中所占的比例由0.00%分别增加到1.60%,3.70%和8.20%。结论NPSiO₂可使MT和HSA二级结构发生改变,且由于使HSA中出现了天然结构中不存在的β-转角结构,其对HSA二级结构的影响强于对MT二级结构的影响。     

Ca~(2+)/CaMKⅡ信号通路在肿瘤坏死因子-α诱导心肌肥大中的作用

目的研究钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;[3H]-亮氨酸参入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变;Westernblot法测定CaMKⅡδB的表达。结果①TNF-α(100μg.L-1)明显诱导心肌细胞蛋白含量、蛋白合成及体积的增加,CaMKⅡ特异性抑制剂KN93(0.2μmol.L-1)明显抑制TNF-α诱导的心肌肥大,但对正常心肌细胞生长无影响。②TNF-α引起心肌细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)瞬间变化幅度增高,KN93明显降低TNF-α诱导的上述改变。③TNF-α明显增强心肌细胞内CaMKⅡδB的表达。结论TNF-α可能通过引起心肌细胞[Ca2+]i升高,促进CaMKⅡδB表达诱导心肌细胞肥大的。     

乳铁蛋白的抗病毒作用

乳铁蛋白（1aetoferrin，LF）是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白，相对分子质量为70000～80000，对病原性微生物具有初级防御作用。LF广泛存在于乳汁、唾液、泪腺等外分泌物或血浆中。LF分子由一条多肽单链和两条多聚糖侧链组成，侧链与肽链上的天冬氨酸残基相连，二级结构由α-螺旋和β-折叠交替排列而成，且α-螺旋多于β-折叠。LF的多肽链折叠成两个对称的环形叶（C-叶和N-叶），每个叶包含两个结构域（C1、C2和N1、N2），每个结构域由一个包含金属结合位点的中心空穴定位。     

巴沙鱼皮胶原蛋白的提取、组成及变性温度研究

目的 从巴沙鱼皮中提取胶原蛋白并分析其结构类型及氨基酸组成,同时研究物理、化学交联法对其变性温度的影响。 方法 采用酸提法和酶提法提取巴沙鱼皮中的胶原蛋白,并用SDS-PAGE凝胶电泳、FTIR和HPLC分析胶原蛋白的结构类型和氨基酸组成。通过测定粘度值研究物理、化学交联法对其变性温度的影响。 结果 酸提法提取胶原蛋白的提取率为58.2%,酶提法的提取率为22.0%;巴沙鱼皮鱼胶原蛋白为I型胶原蛋白;经120 ℃热交联后,巴沙鱼皮胶原蛋白的变性温度从34.2 ℃下降至28.0 ℃,经四甲基乙二胺(EDC)交联后,其变性温度上升至35.8℃。 结论 巴沙鱼皮富含I型胶原蛋白,酸提法比酶提法提取效率高,采用化学交联法可提高其变性温度,因而巴沙鱼皮可作为胶原蛋白的重要来源,可用于制备多种生物医用材料,具广泛的应用前景。