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相似文献
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1.
以Fura2/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用双波长荧光分光光度计测定了缺氧缺糖时体外培养的大鼠胎鼠神经细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化,并观察了神经生长因子(NGF)的影响。结果表明,脑皮质细胞缺氧缺糖培养16~24h时,细胞大量死亡。NGF剂量依赖地减少神经元缺氧缺糖培养24h时乳酸脱氢酶(LDH)的释放,提高细胞生存力。细胞缺氧缺糖早期引起[Ca2+]i减少,而后期引起[Ca2+]i显著升高,导致细胞损害。NGF50μg·L-1在缺氧缺糖早期提高[Ca2+]i到正常水平,降低后期[Ca2+]i的升高。提示,NGF通过稳定[Ca2+]i或降低后期的胞内钙升高保护了脑皮质神经元免受缺氧缺糖的损害。  相似文献   

2.
目的 观察黄连解毒汤有效部位 (HLJDTAF)对缺糖 /缺氧培养所致大鼠皮层神经细胞损伤的保护作用。方法 体外培养大鼠皮层神经细胞 ,以缺氧加缺糖培养建立神经细胞“缺血”性损伤模型 ,观察HLJDTAF对培养神经细胞“缺血”性损伤的保护作用。结果 HLJDTAF 6 10mg·kg-1能明显增高模型细胞的活性 ;30 5mg·kg-1能显著降低模型细胞乳酸脱氢酶 (LDH)漏出率 ;6 10、30 5、15 3mg·kg-1明显降低上清液中NO含量 ,降低裂解液中MDA含量 ,提高SOD活性。结论 HLJDTAF对正常细胞无明显影响 ,对培养神经细胞“缺血”性损伤具有显著的保护作用 ,其机制可能与其降低NO含量、抗过氧化作用有关  相似文献   

3.
目的:研究氯沙坦对离体培养大鼠海马神经元细胞缺糖缺氧损伤的保护作用及机制。方法:取大鼠海马神经元细胞进行原代培养,分为3组:对照组、氯沙坦低剂量组、氯沙坦高剂量组。通过建立缺糖缺氧培养条件的细胞损伤模型,观察氯沙坦对细胞凋亡的拮抗作用。Tunel染色检测神经元凋亡细胞,Western blot免疫印迹方法观察Caspase-3蛋白表达改变。结果:缺糖缺氧环境可诱导海马神经元凋亡,预先加入不同剂量氯沙坦进行处理后,活性Caspase-3蛋白水平降低,神经元凋亡细胞百分比明显下降(P〈0.05)。结论:氯沙坦预处理能够减少脑缺血缺氧损伤所致的大鼠海马CA1区神经元凋亡,呈剂量依赖性,其作用机制与Caspase依赖性途径相关。  相似文献   

4.
目的观察神经细胞缺氧/缺糖损伤后线粒体膜电位(MMP)和凋亡的变化情况及阿司匹林的保护作用。方法用体外培养7 d的Wistar大鼠皮质神经细胞,随机分为正常对照组、缺氧/缺糖模型组、缺氧/缺糖加100μmol/L浓度阿司匹林组。缺氧/缺糖2 h处理后,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测神经元线粒体活性;流式细胞术检测神经元线粒体膜电位、双染法检测不同组神经元的凋亡情况。结果缺氧/缺糖损伤2 h后,模型组的线粒体活性和MMP水平较对照组显著降低(P<0.01)。细胞凋亡百分率均较对照组显著升高(P<0.01)。而阿司匹林组能显著提高神经元线粒体活性、膜电位,降低细胞凋亡的百分率。结论阿司匹林可抑制缺氧/缺糖损伤所致的神经元线粒体活性和膜电位的降低、稳定线粒体膜电位,抑制神经元凋亡,起到神经元保护作用。  相似文献   

5.
用原代培养Wistar大鼠胎鼠脑皮层神经细胞,从形态学和生化学方面研究自由基、无血清培养对神经元的损伤以及脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)的保护作用。结果显示,神经细胞与自由基作用及在无血清培养条件下,细胞生存率明显下降,培养液的上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性显著提高,丙二醛(MDA)含量明显增加,超氧物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活力显著下降。相差显微镜下观察,神经细胞突起回缩,颗粒增加,折光性下降。DHEAS剂量依赖地提高神经细胞损伤后细胞生存率,降低LDH的释放及MDA的生成,并显著提高抗氧化酶活性。结果提示,DHEAS可能通过抑制脂质过氧化物生成及提高抗氧化酶活性来保护拟衰老反应中的大脑皮层神经细胞。  相似文献   

6.
目的研究毛绞股蓝皂甙(SGP)对谷氨酸(Glu)介导的神经毒作用及缺糖缺氧损害的保护作用。方法体外培养小鼠脑皮层神经元,测定孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果SGP2,10mg·L-1可拮抗Glu介导的神经毒作用,使LDH漏出减少,细胞死亡率降低。结论SGP可拮抗Glu介导的神经毒作用,对皮层神经元缺糖缺氧致损伤亦具有保护作用。  相似文献   

7.
研究神经生长因子(NGF)对一氧化氮(NO)介导的大鼠脑皮质神经无毒性的影响。方法:用原代培养的大鼠胎鼠脑皮质神经细胞,测定NO含量及原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达,并研究NGF对细胞缺氧/缺糖损伤的影响。结果:细胞缺氧/缺糖培养 24 h后,细胞死亡率明显增高,NO大量释放。 NGF 100 μg/L显著提高细胞生存力,降低NO释放,但其对硝普钠(SNP)300 μmol/L引起的NO大量释放及细胞死亡率升高无明显影响。 NGF50、100 μg/L显著降低细胞缺氧/缺糖引起的 cNOS mRNA的高表达。结论:NO介导了细胞缺氧/缺糖损伤,NGF通过抑制cNOS活性,降低NO释放来保护神经元免受缺氧/缺糖损伤。  相似文献   

8.
米帕明对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用   总被引:12,自引:1,他引:11  
目的 :研究米帕明 (Imi)对培养大鼠神经细胞缺血和谷氨酸 (Glu)损伤的保护作用。方法 :分离培养 15~ 18d胎龄的大鼠神经细胞 ,用连二亚硫酸钠消除培养基中的氧 ,合并培养基缺糖模拟细胞缺血性损伤 ;加入Glu模拟兴奋毒性损伤 ,测定乳酸脱氢酶、一氧化氮、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量变化 ,观察缺血和Glu对神经细胞的损伤及Imi的保护作用。结果 :缺血及Glu引起神经细胞明显损伤性变化 ,死亡率升高 ,培养上清液中乳酸脱氢酶、一氧化氮含量升高 ,细胞匀浆中丙二醛生成增加 ,超氧化物歧化酶含量明显减少。Imi 10 - 8~ 10 - 6mol·L- 1能不同程度地减轻上述损伤性变化。结论 :Imi对神经细胞缺血性损伤有保护作用 ,机制可能与抗脂质过氧化及钙拮抗作用有关。  相似文献   

9.
神经生长因子对大鼠脑皮质神经细胞凋亡的影响   总被引:19,自引:1,他引:18  
目的研究神经生长因子(NGF)对大鼠脑皮质神经细胞凋亡的影响。方法用原代培养的大鼠胎鼠脑皮质细胞,建立了N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)、缺氧/缺糖诱导的神经细胞凋亡模型,并观察了NGF的保护作用。结果NM-DA300μmol·L-1与细胞作用20min及细胞缺氧/缺糖培养10h可诱导细胞凋亡。提取细胞DNA进行琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯状条带,应用流式细胞仪检测,在G1峰前出现一个“G1亚峰”,凋亡细胞所占比例为50.2%及45.7%,同时出现细胞核染色体聚集、断裂及细胞空泡样变等形态变化。NGF(50,100μg·L-1)能使DNA梯状电泳条带不明显或消失,降低凋亡细胞数,并使细胞超微结构损伤减轻或基本恢复正常。结论NGF能拮抗NMDA及缺氧/缺糖诱导的神经细胞凋亡。  相似文献   

10.
王雁  饶曼人 《药学学报》1998,33(6):413-417
用原代培养Wistar大鼠胎鼠脑皮层神经细胞,从形态学和生化学方面研究自由基、无血清培养对神经元的损伤以及脱氢表雄酮硫酸酯(DHEAS)的保护作用。结果显示,神经细胞与自由基作用及在无血清培养条件下,细胞生存率明显下降,培养液的上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性显著提高,丙二醛(MDA)含量明显增加,超氧物岐化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力显著下降。相差显微镜下观察,神经细胞突起回缩,颗粒增加,折光性下降。DHEAS剂量依赖地提高神经细胞损伤后细胞生存率,降低LDH的释放及MDA的生成,并显著提高抗氧化酶活性。结果提示,DHEAS可能通过抑制脂质过氧化物生成及提高抗氧化酶活性来保护拟衰老反应中的大脑皮层神经细胞。  相似文献   

11.
荭草苷对缺氧-复氧心肌细胞的保护作用   总被引:11,自引:0,他引:11  
目的探讨荭草苷 (orientin)对缺氧 复氧损伤心肌细胞的保护作用及其机制。方法采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,实验分为正常细胞培养组、缺氧 复氧损伤模型组、缺氧 复氧损伤 +荭草苷 (3、10、30 μmol·L-1)组、缺氧 复氧损伤 +verapamil(5 μmol·L-1)组。用黄嘌呤氧化酶法测定SOD的活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量 ,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变并测定LDH含量变化 ,荧光法测定细胞内钙浓度的变化。结果荭草苷可显著提高缺氧 复氧损伤心肌细胞内SOD的活性及细胞内线粒体脱氢酶活性 ,并能显著抑制LDH的活性、MDA的生成以及细胞内钙浓度。结论荭草苷具有明显的抗缺氧 复氧损伤 ,保护心肌细胞的作用  相似文献   

12.
观察小檗胺 ( Ber)对高钾除极 ,Bay K8644,5-羟色胺 ( 5- HT)及咖啡因升高细胞内钙水平( [Ca2 + ]i)的影响。以 Fluo- 3/AM负载家兔培养的主动脉平滑肌细胞 ( VSMC) ,共聚焦显微术测定[Ca2 + ]i,结果以荧光强度 ( FI)表示 .结果 :( 1 )在细胞外钙为 1 .3mmol· L-1时 ,VSMC胞浆静息 FI明显高于核区 ,且不受 Ber的影响 . ( 2 ) Ber 1 0 -1 0 0 μmol·L-1预处理可抑制 KCl60 mmol·L-1或Bay K86441 0 0 μmol·L-1升高的 [Ca2 + ]i,抑制 5-HT 1μmol· L-1升高 [Ca2 + ]i 的持续相 ,但不影响[Ca2 + ]i 的一过性升高。维拉帕米 1 0 μmol· L-1具有相似作用 . ( 3)在无钙 Hanks液中 ,Ber预处理对咖啡因 1 0 0 mmol·L-1升高的 [Ca2 + ]i 无明显抑制作用。结果表明 ,Ber可阻断外钙内流 ,但不抑制内钙释放 ,这可能与 Ber阻断电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道的作用有关 .  相似文献   

13.
目的:研究小檗碱(Ber)对谷氨酸(Glu)引起的新生大鼠脑细胞c-fos表达及游离钙(〔Ca2+〕i)变化的影响。方法:斑点杂交及Fura-2技术。结果:Glu能诱导分离的脑细胞c-fos的一过性高表达及〔Ca2+〕i的显著升高。Ber10μmol·L-1显著抑制Glu诱导的脑细胞c-fos的高表达,而尼莫地平则没有明显作用。Ber1~100μmol·L-1能剂量依赖地抑制Glu引起的〔Ca2+〕i升高。结论:Ber的这种降低脑细胞c-fos基因表达及〔Ca2+〕i水平的作用可能是其治疗脑缺血性疾病的机制之一。  相似文献   

14.
异丙酚对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制   总被引:8,自引:2,他引:8  
目的 研究异丙酚对离体大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 以原代培养的大鼠海马神经元作为研究对象 ,建立缺氧、H2 O2 和谷氨酸损伤模型 ,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测缺氧前后 ,单个海马神经元内Ca2 + 浓度和线粒体膜电位 (△Ψm)的变化。用电子自旋共振技术测定异丙酚对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。结果  6~ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1) ,作用程度均呈剂量相关 (r =0 89,P <0 0 5 ) ;2 4~ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低H2 O2 损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1) ;12~ 4 8mg·L-1浓度的异丙酚可明显降低谷氨酸损伤时的细胞死亡率 (P <0 0 1)。 3~ 4 8mg·L-1异丙酚对缺氧诱发的细胞内钙离子超载有抑制作用(P <0 0 5 ) ;12、4 8mg·L-1异丙酚能减缓缺氧引起的△Ψm降低 (P <0 0 1)。 12、4 8mg·L-1异丙酚对羟基自由基的清除率分别为 17 1%和 2 1 1% ,但对超氧阴离子自由基无清除作用。结论 异丙酚对离体培养的大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用 ,其作用机制部分与异丙酚抑制缺氧引起的 [Ca2 + ]i 异常升高、抑制线粒体膜电位的下降和清除羟基自由基有关  相似文献   

15.
目的探讨超低分子量肝素(ultra low molecular weight heparin,ULMWH)对谷氨酸(Glu)诱导原代培养大鼠大脑皮层神经细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法采用体外培养大鼠大脑皮层神经细胞,建立谷氨酸(Glu)诱导损伤模型,采用MTT法检测细胞活力、Hoechest33258染色法观察凋亡细胞形态改变和检测凋亡细胞数。同时,采用Fura-2/AM双波长荧光分光光度法测定神经细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)。结果提前应用ULMWH可提高Glu损伤神经细胞的生存能力,降低Glu诱导的凋亡细胞数。同时,ULM-WH不论是在含Ca2+测量介质还是在无Ca2+测量介质中均可降低神经细胞[Ca2+]i。结论ULMWH对Glu损伤神经细胞具有保护作用,该作用可能与其抑制神经细胞内Ca2+释放而降低胞内[Ca2+]i有关。  相似文献   

16.
目的观察5-LO表达对铝盐致原代培养海马神经元损伤的影响。方法将5-LO过表达重组体腺病毒(Ad5-LO)和5-LO RNAi重组体腺病毒(Ad5-LO-RNAi)转染原代培养7 d的海马神经元,实验随机分为7组:空白对照组(NaCl 200μmol.L-1)、空载腺病毒组(MOI=100)、5-LO过表达腺病毒组(MOI=100)、5-LO RNAi腺病毒组(MOI=100)、空载腺病毒(MOI=100)+铝盐负荷组(AlCl3200μmol.L-1)、5-LO过表达腺病毒(MOI=100)+铝盐负荷组(AlCl3200μmol.L-1)、5-LO RNAi腺病毒(MOI=100)+铝盐负荷组(AlCl3200μmol.L-1)。采用荧光显微镜观察海马神经元形态变化,以RT-PCR和Western blot方法分别检测神经元5-LO mRNA和蛋白表达,以MTT测定和LDH漏出率检测神经元存活情况,以生化方法测定海马神经元SOD活性和MDA含量变化。结果空载腺病毒+铝盐负荷组神经元数目明显减少,胞体萎缩,突起减少变短,5-LO mRNA和蛋白表达增多,MTT值降低,LDH漏出率增多,SOD活性降低,MDA含量增加。与空载腺病毒+铝盐负荷组比较,5-LO过表达腺病毒处理使铝盐负荷神经元上述指标的变化更加明显;5-LO RNAi腺病毒处理能明显阻遏铝盐负荷组海马神经元上述指标的变化。结论 5-LO过表达可增加大鼠海马神经元对铝盐损伤的易感性,而抑制5-LO表达能够减轻铝盐对大鼠海马神经元的损伤。  相似文献   

17.
谷氨酸触发大鼠大脑皮质神经元Ca~(2+)内流与PTK的关系   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 研究谷氨酸 (glutamate,Glu)触发大鼠大脑皮质神经元Ca2 + 内流特性 ,蛋白酪氨酸激酶 (PTK)抑制剂genistein及蛋白酪氨酸磷酸酶 (PTP)抑制剂vanadate对其影响 ,揭示PTK与Glu触发大鼠大脑皮质神经元Ca2 + 内流的内在联系。方法 采用Fura 2 /AM荧光测定胞浆Ca2 + 变化技术 ,在原代培养的大鼠大脑皮质神经元上观察药物对Glu触发Ca2 + 内流的影响。结果 Glu触发的Ca2 + 内流不受电压依赖性钙通道 (VDCC)阻断剂尼莫地平影响 ,亦不受非VDCC阻断剂SK&F96 36 5影响 ,但可被PTK抑制剂genis tein抑制 ,被PTP抑制剂vanadate增强。genistein(1~ 30μmol·L-1)呈浓度依赖性抑制Glu触发的Ca2 + 内流。vana date则浓度依赖性增强Glu触发的Ca2 + 内流。结论 对尼莫地平敏感的VDCC及对SK&F96 36 5敏感的非VDCC没有参与Glu触发的Ca2 + 内流。PTK激活参与了Glu触发的Ca2 + 内流  相似文献   

18.
复方沙棘颗粒对大鼠皮层神经细胞缺血性损伤的保护作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 :研究复方沙棘颗粒对体外培养的大鼠大脑皮层神经细胞谷氨酸 (Glu)损伤的保护作用及机理。方法 :分离培养新生 (1d)大鼠大脑皮层神经细胞 ,加入Glu模拟兴奋性损伤 ,MTT法测定细胞存活率 ,比色法测定上清中乳酸脱氢酶 (LDH)含量 ,细胞中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽 (GSH Px)活性、丙二醛 (MDA)含量。结果 :细胞经Glu损伤后 ,上清LDH含量、细胞中MDA含量显著增加 ,SOD和GSH Px活力明显下降。复方沙棘处理组可有效防止上述改变。结论 :复方沙棘颗粒可有效保护由Glu引起的大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。其机理可能与抗脂质过氧化、清除自由基有关  相似文献   

19.
目的观察异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的心肌细胞凋亡的影响并探讨可能的机制。方法采用SD新生大鼠进行心肌细胞原代培养。实验分为5组:正常对照组、t-BHP组和异丙酚1、10、30μmol.L-1组。分光光度计法检测细胞内谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物岐化酶(SOD)活性;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞线粒体活性,罗丹明123(Rhodamine123)荧光染色、流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3的表达。结果与正常对照组相比,100μmol.L-1的t-BHP处理心肌细胞4 h后,细胞内GSH水平明显下降(P<0.05),MDA含量增加(P<0.01),抗氧化酶SOD活性降低(P<0.01),细胞线粒体活性降低(P<0.01),线粒体膜电位ΔΨm明显下降(P<0.01),细胞凋亡率和caspase-3的表达明显升高(P<0.01);异丙酚10、30μmol.L-1能减少过氧化氢所致的细胞中MDA含量升高;提高SOD活性和GSH水平;提高线粒体活性、膜电位;抑制心肌细胞凋亡和caspase-3的表达升高(P(0.05,P(0.01)。结论异丙酚能减弱过氧化氢所致的心肌细胞凋亡,其作用机制可能是通过减少活性氧自由基导致的细胞膜氧化损伤、提高线粒体活性、维持线粒体的膜电位,从而抑制心肌细胞凋亡的发生。  相似文献   

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