小檗碱通过JAK2/STAT3信号通路对食管癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘要：目的:研究小檗碱通过JAK激酶2/信号转导及转录激活蛋白3（JAK2/STAT3）信号通路对食管癌细胞的抑制作用。方法:选用50μmol·L-1和100μmol·L-1两个浓度小檗碱处理人食管癌细胞系KYSE170,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力,细胞迁移实验（Transwell）检测细胞迁移与侵袭能力,同时采用Western blot法检测JAK2/STAT3信号通路蛋白以及细胞周期和转移侵袭相关蛋白表达水平。结果:与对照组相比,不同剂量小檗碱处理组的KYSE170细胞的平均存活率、迁移细胞和侵袭细胞数目均显著降低（P＜0.05）;同时,小檗碱处理能显著抑制金属蛋白酶2（MMP-2）和9（MMP-9）、细胞周期蛋白D1（Cy-clinD1）蛋白表达（P＜0.05）,上调P21蛋白表达（P＜0.05）,同时下调JAK2和STAT3蛋白磷酸化水平（P＜0.05）。结论:小檗碱可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路激活,阻断食管癌细胞周期进程和促进凋亡,抑制食管癌细胞转移侵袭能力。     

吴茱萸碱对心肌细胞缺血损伤的研究

摘 要 目的：探讨吴茱萸碱对心肌细胞缺血损伤的保护作用。方法: 培养H9c2心肌细胞,缺氧24 h造成心肌细胞损伤模型,给予不同浓度（0.1,1,5,10 μmol·L^-1 ）吴茱萸预处理细胞12 h,CCK 8检测心肌细胞的活性,RT PCR检测心肌细胞炎症因子的转录,Tunel染色检测心肌细胞凋亡,免疫印迹检测信号通路的改变。结果:4种浓度的吴茱萸碱在基础状态下并未影响心肌细胞活性（P＞0.05）;缺氧24 h后,心肌细胞活性显著降低,给予1,5,10 μmol·L^-1 的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,且其效果呈现剂量依耐性;细胞促炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF α）、白细胞介素 1（IL 1）和白细胞介素 6（IL 6）的转录明显增加,心肌细胞凋亡增多,吴茱萸碱可以增加缺氧损伤的细胞活性,减少细胞炎症因子的转录,减少细胞凋亡数量,给予1 μmol·L^-1 和10 μmol·L^-1 的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。免疫印迹结果显示,吴茱萸碱通过增加蛋白激酶B（AKT）和AMP依赖蛋白激酶α（AMPKα）的活性,抑制核因子 κB（NF κB）的活性发挥其心肌保护作用,给予1 μmol·L^-1 和10 μmol·L^-1 的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:吴茱萸碱能保护心肌细胞缺血损伤,可能成为新的抗心肌缺血药物。     

西格列汀通过调控自噬和凋亡减轻棕榈酸诱导的心肌细胞损伤

目的：观察西格列汀是否通过调节心肌细胞自噬来减轻棕榈酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡。方法：棕榈酸和西格列汀处理H9c2细胞24 h后,CCK-8试剂盒检测细胞存活率;共聚焦和Western blotting检测自噬标志蛋白LC3的表达情况;TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况;Western blotting分析凋亡相关蛋白C-Casp3、C-PARP和Cyt C以及相关调控因子AMPK和mTOR等的表达。结果：棕榈酸抑制H9c2细胞活性,减少LC3的蛋白表达,增加TUNEL阳性的凋亡细胞比率,增加凋亡相关蛋白的表达,抑制AMPK的磷酸化;而西格列汀可抑制PA对H9c2的这些作用,促进LC3蛋白表达,减少凋亡蛋白表达和凋亡细胞比率,增加AMPK的磷酸化。结论：本研究显示西格列汀可能通过促进自噬和减轻细胞凋亡来对抗棕榈酸诱导的细胞损伤,且这种作用可能是通过AMPK信号通路介导的。     

高良姜素对非小细胞肺癌A549细胞SIRT1/mTOR通路及放射敏感性的影响

摘要：目的:探讨高良姜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞沉默信息调节因子1（SIRT1）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路及放射敏感性的影响。方法:体外培养NSCLC A549细胞,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测不同浓度(10,20,40,60,80,100μmol·L-1)高良姜素处理的A549细胞的增殖抑制率;将A549细胞经不同剂量（0,1,2,4,6,8 Gy）放射处理,并设置各剂量与35μmol·L-1高良姜素联用组,克隆形成实验观察高良姜素的放射增敏作用;将A549细胞分为高良姜素+放射线组(35μmol·L-1+6 Gy)、高良姜素组(35μmol·L-1)、放射线组（6 Gy）及对照组,流式细胞术检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法检测增殖蛋白细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、细胞增殖核抗原（Ki67）、凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-3、Caspase-9及STRT1/mTOR通路蛋白SIRT1、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、磷酸化mTOR（p-mTOR）、mTOR的表达。结果:与对照组比较,随着高良姜素浓度的增加,A549细胞增殖抑制率逐渐增加（P<0.05）;与各剂量射线单独处理的A549细胞相比,35μmol·L-1高良姜素+各剂量射线处理的A549细胞存活分数降低（P<0.05）,辐射增敏比（SER）=1.522;与对照组比较,高良姜素组、放射线组、高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）;与高良姜素组、放射线组比较,高良姜素+放射线组A549细胞凋亡率、Caspase-3、Caspase-9、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高,高良姜素+放射线组CyclinD1、Ki67、SIRT1、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论:高良姜素可能通过调控SIRT1/mTOR通路影响A549细胞的增殖凋亡及放射敏感性,可能是治疗NSCLC的潜在药物。     

pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用

目的：构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法：提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG-AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,West-ern Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧（A/R）损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性。结果：AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论：构建成功的pFlAG-AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。     

SIRT3-FOXO1介导自噬在H9C2心肌细胞缺血再灌注损伤中的保护作用

目的　探究沉默信息调节因子2相关酶类3（SIRT3）-叉头盒转录因子O1（FOXO1）通路介导自噬在心肌细胞缺血再灌注损伤中的作用。方法　慢病毒感染H9C2心肌细胞构建SIRT3过表达稳定株。实验分4组：正常对照（NC）组、缺血再灌注（IR）组、SIRT3过表达+缺血再灌注（S+IR）组、SIRT3过表达+IR+SIRT3抑制剂（S+IR+3-TYP）组。Western blot检测SIRT3、乙酰化FOXO1（Ac-FOXO1）、自噬标记蛋白LC3B、Beclin1及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达;流式细胞分析仪检测细胞凋亡率;全自动生化仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平。结果　与NC组相比,IR组SIRT3表达降低,Ac-FOXO1表达升高,自噬标记蛋白LC3B、Beclin1表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低,促凋亡蛋白Bax表达升高,LDH水平和细胞凋亡率升高（P＜0.05）。与IR组相比较,S+IR组SIRT3表达升高,Ac-FOXO1表达降低,LC3B、Beclin1表达升高,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,LDH水平和细胞凋亡率降低（P＜0.05）;加入SIRT3抑制剂3-TYP后,与S+IR组相比,SIRT3表达水平无明显变化,但Ac-FOXO1表达升高,LC3B、Beclin1表达降低,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,LDH水平和细胞凋亡率升高（P＜0.05）。结论　SIRT3-FOXO1通路激活可提高H9C2心肌细胞自噬水平,对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。     

基于LKB1/AMPK信号通路探究金雀异黄酮对癫痫大鼠海马神经元凋亡和自噬的影响

摘要：目的:基于肝激酶B1（LKB1）/5’-磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMPK）信号通路探究金雀异黄酮对癫痫大鼠海马神经元凋亡和自噬的影响。方法:于腹腔内注射氯化锂与匹罗卡品诱导建立癫痫大鼠模型,随机分为5组（每组12只）:模型组、金雀异黄酮低剂量组(7 mg·kg-1)、金雀异黄酮高剂量组(14 mg·kg-1)、金雀异黄酮(14 mg·kg-1)+空载（空载质粒）组、金雀异黄酮(14 mg·kg-1)+LKB1敲低（LKB1 siRNA质粒）组,另取12只Wistar大鼠,腹腔内注射等剂量生理盐水作为正常对照组,以金雀异黄酮和质粒分组给药干预后,检测各组大鼠癫痫评分及平均癫痫发作时间;以跳台实验检测各组大鼠学习记忆能力;以原位末端标记法（TUNEL）染色检测各组大鼠海马神经元凋亡率;以酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒测量各组大鼠血清致炎因子环氧化酶-2（COX-2）、白细胞介素（IL）-1β、IL-17水平;以免疫印迹检测各组大鼠脑组织自噬、凋亡及LKB1/AMPK通路蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）表达水平显著升高（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著降低（P＜0.05）;与模型组相比,金雀异黄酮低、高剂量组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白caspase-3、Bax表达水平显著降低（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著升高（P＜0.05）,且金雀异黄酮低、高剂量组间各指标差异均有统计学意义（P＜0.05）;与金雀异黄酮高剂量组相比,金雀异黄酮+LKB1敲低组大鼠癫痫评分、平均癫痫发作时间、跳台实验犯错次数、海马神经元凋亡率、血清COX-2、IL-1β及IL-17水平、脑组织凋亡蛋白caspase-3、Bax表达水平显著升高（P＜0.05）,大鼠跳台实验潜伏期、脑组织自噬蛋白LC3-II/LC3-I、P62及LKB1/AMPK通路蛋白p-AMPK/AMPK、LKB1表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:金雀异黄酮可通过激活LKB1/AMPK信号而减轻癫痫大鼠炎症,增强脑组织自噬,抑制大鼠海马神经元凋亡,提高其学习记忆能力,改善其癫痫症状。     

右美托咪定调控Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

摘要：目的:探讨右美托咪定通过调控核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶-1（HO-1）通路对过氧化氢（H2O2）诱导的心肌细胞氧化应激损伤发挥保护作用。方法:体外培养H9c2心肌细胞,选择对数生长期细胞进行实验,分为对照组、模型组、右美托咪定低、中、高剂量组。对照组不进行处理;模型组加入终浓度为200μmol·L-1的H2O2;右美托咪定低、中、高剂量组分别加入终浓度为5,10,20μmol·L-1的右美托咪定,同时给予终浓度为200μmol·L-1的H2O2,继续培养24 h后,检测各组细胞存活率、凋亡率、细胞中抗氧化指标、一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、HO-1和Nrf2蛋白变化情况。结果:与对照组相比,模型组和右美托咪定各剂量组H9c2细胞存活率、谷胱甘肽（GSH）、NO、HO-1和Nrf2蛋白水平降低（P<0.05）,凋亡率、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、TNF-α和IL-6升高（P<0.05）;与模型组相比,右美托咪定各剂量组H9c2细胞存活率、GSH、NO、HO-1和Nrf2蛋白水平升高（P<0.05）,凋亡率、LDH、MDA、ROS、TNF-α和IL-6降低（P<0.05）,且右美托咪定各剂量组之间上述指标呈剂量依赖性（P <0.05）。结论:右美托咪定可能通过激活Nrf2/HO-1通路,减轻心肌细胞的氧化损伤,促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,从而发挥心肌保护作用。     

FUNDC1通过调控线粒体分裂影响高糖损伤H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的 探讨含FUN14域蛋白1（FUNDC1）在高糖损伤的H9c2心肌细胞中通过调控线粒体分裂影响心肌细胞凋亡的作用机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞并建立高糖损伤模型,分别进行细胞转染,使用腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）激活剂5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷（AICAR）后,分为正常对照组（CTRL组）、高糖组（HG...     

灯盏乙素对过氧化氢致心肌细胞损伤的作用与机制研究

目的：探讨灯盏乙素对过氧化氢（H2O2）损伤心肌细胞的保护作用。方法：将大鼠H9C2心肌细胞分为对照组、H2O2 (200 μmol·L-1)干预组以及灯盏乙素(100、200 μmol·L-1)+H2O2 (200 μmol·L-1)干预组,每组设6个复孔。各组经过药物干预6 h后,通过 MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸激酶（CK）、谷草转氨酶（AST）活性和丙二醛（MDA）含量;测定细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果：与对照组比较,H2O2干预组H9C2心肌细胞存活率显著降低且凋亡率显著升高,培养液中 LDH、CK、AST 活性和 MDA 含量均显著升高,细胞中 SOD、CAT、GSH-Px 活性显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。与 H2O2干预组比较,灯盏乙素（100、200 μmol·L-1）+H2O2（200 μmol·L-1）干预组培养液中H9C2心肌细胞存活率显著升高、凋亡率显著降低,培养液中LDH 、AST、CK活性和MDA 含量均显著降低,细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性显著升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：灯盏乙素能够有效提高 H2O2诱导状态下 H9C2 心肌细胞存活率并降低凋亡率,改善细胞中抗氧化酶活性、降低细胞损伤,提示灯盏乙素对H2O2诱导 H9C2心肌细胞氧化应激损伤具有剂量相关性的保护作用。