一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷的保护作用

目的:探讨一氧化氮诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制.方法:MTT和乳酸脱氢酶活性测定细胞存活率,DNA凝胶电泳观察DNA的断裂情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率、检测线粒体跨膜电位.结果:500 μmol·L-1 硝普钠(SNP)可诱导PC12细胞凋亡,细胞线粒体跨膜电位明显下降.预先经过 0.1、1和10 μmol·L-1 等浓度芍药苷处理后, SNP诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱一氧化氮对线粒体跨膜电位的影响.结论:芍药苷可抑制一氧化氮诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其稳定细胞线粒体跨膜电位有关.     

尼古丁对6-羟多巴胺诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的　探讨尼古丁对 6 羟多巴胺 (6 OHDA)诱导PC1 2细胞凋亡的拮抗作用及其与烟碱受体的关系。方法　用 6 OHDA诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株PC1 2细胞凋亡的细胞模型 ;用MTT、二乙酸荧光素活细胞染色、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测PC1 2细胞的凋亡 ;用尼古丁及N型和M型受体拮抗剂预处理 ,观察尼古丁的拮抗作用及其与受体的关系。结果　尼古丁可明显拮抗 6 OHDA(50 μmol·L-1 )诱导PC1 2细胞凋亡 ,呈钟型浓度效应关系 ,1 0 μmol·L-1 尼古丁的拮抗作用最强。用 1 0 μmol·L-1 尼古丁预处理PC1 2细胞 2h可明显降低 6 OHDA诱导的细胞凋亡。用 1 0 μmol·L-1 六甲溴胺阻断烟碱受体 ,可取消尼古丁对 6 OHDA诱导细胞凋亡的拮抗作用 ;但用阿托品阻断M型胆碱受体 ,对尼古丁的拮抗作用则无明显影响。结论　尼古丁对 6 OHDA诱导的PC1 2细胞凋亡有明显的拮抗作用 ,这种作用由烟碱受体所介导。     

多巴胺诱导PC12细胞凋亡与多巴胺黑素生成的关系

目的　探讨多巴胺黑素 (dopamine melanin ,DA M )的生成在多巴胺 (dopamine ,DA)诱导神经元凋亡中的意义。方法　以PC12细胞为多巴胺能神经元的细胞模型 ,采用透射电镜和流式细胞仪 (flowcytometry ,FCM )观察细胞凋亡 ,紫外 -可见光分光光度计检测DA M。结果　DA可诱导PC12细胞凋亡 ,DA M的生成与DA诱导的PC12细胞凋亡之间呈正相关关系。结论　DA M的生成量在DA诱导神经细胞凋亡具有重要作用     

赤芍总苷对PC12细胞缺血性损伤的保护作用

目的：探讨赤芍总苷对ＰＣ１２细胞缺血样损伤模型的保护作用及其机制。方法：采用组织培养法,以肾上腺嗜瘤克隆化细胞株ＰＣ１２细胞为材料,制备缺糖损伤、缺氧损伤、自由基损伤、咖啡因损伤、一氧化氮（ＮＯ）损伤及谷氨酸毒性损伤模型。结果：形态学检查发现赤芍总苷对６种脑缺血样损伤模型中的ＰＣ１２细胞具有明显保护作用,ＭＴＴ染色提示赤芍总苷可显著提高损伤模型中ＰＣ１２细胞的存活数,降低胞浆释放的ＬＤＨ水平。结论：赤芍总苷对上述６种ＰＣ１２细胞缺血损伤均有显著的保护作用,其作用机制可能主要针对损伤后期出现ＮＯ毒性损伤及胞内钙超载等环节。     

芍药苷对氯化钾及N—甲基—D—门冬氨酸诱导的PC12细胞钙超载损伤的保护作用

目的：探讨芍药苷对PC12细胞钙超载损伤模型的保护作用及其机制。方法：采用组织培养法,以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株PC12细胞为材料,制备氯化钾及N－甲基－D－门冬氨酸诱导的钙超载损伤模型。结果：形态学检查发现芍药苷对2种不同类型的钙超载损伤模型中PC12细胞均具有明显保护作用。MTT法活细胞测定提示12．5－200ug.mL^-1的芍药苷可显著提高损伤模型中PC12细胞存活数,减少胞内乳酸脱氢酶渗漏,并显著减少胞内钙离子浓度,结论：芍药苷对钙超载所致PC12细胞 伤有显著的保护作用。     

人参皂苷Rg1对PC12细胞凋亡保护作用的可能机制

目的探讨人参皂苷Rg1对多巴胺诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法用流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白表达率,RT-PCR分析bcl-2和baxmRNA表达水平,荧光分光光度计法检测CPP32活力.结果经10μmol·L^-1Rg1预处理后,由多巴胺诱导的PC12细胞凋亡受到明显的抑制.同时,Bcl-2蛋白和mRNA表达增加,Bax蛋白和mRNA表达减少,CPP32活力明显下降.结论Rg1可抑制多巴胺诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能通过调节Bcl-2与Bax蛋白的比值和抑制CPP32的激活而起作用.     

类叶升麻苷对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

目的研究类叶升麻苷对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞分为正常对照组、模型对照组、阳性药组和类叶升麻苷给药组。除正常对照组外,其余各组均以1.5 mmol·L-1谷氨酸处理24 h,再分别以10μmol·L-1维生素E和15.625,31.25,62.5,125,250μmol·L-1类叶升麻苷作用。通过倒置显微镜观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,酶标法试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸(TBA)法试剂盒测定丙二醛(MDA)含量,WST[2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐]法试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测胞内活性氧(ROS)含量。结果与模型对照组比较,除类叶升麻苷Ⅰ组(15.625μmol·L-1AS)以外,其余各类叶升麻苷给药组均可明显改善PC12细胞形态,提高细胞存活率和SOD酶活性(P<0.01),抑制LDH活性及MDA和ROS生成(P<0.01或P<0.01)。结论类叶升麻苷对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤具有保护作用。     

根皮苷对过氧化氢诱导损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨根皮苷对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法以H_2O_2损伤PC12细胞建立氧化损伤模型,随机分为空白对照组、模型组(400μmol·L~(-1) H_2O_2)、阳性对照(20μmol·L~(-1)N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度根皮苷(16、32、64μmol·L~(-1))预处理组。采用MTT法检测细胞活力,显微镜观察细胞形态,ELISA检测细胞活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果模型组细胞活力较空白对照组显著降低,ROS和MDA含量增加,SOD活力下降,Nrf2和HO-1蛋白表达下降(均P<0.05)。根皮苷低、中、高浓度(16、32、64μmol·L~(-1))组较模型组细胞存活率均显著提高,ROS和MDA含量降低,SOD活力升高,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(均P<0.05)。结论根皮苷能够抑制H_2O_2对PC12细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞死亡并调控Nrf2信号通路有关。     

胡黄连苷Ⅱ在谷氨酸诱导的PC12细胞损伤中的保护作用

目的：以谷氨酸为工具药建立氧化应激模型,观察胡黄连苷Ⅱ的保护作用并初步探讨其作用机制。方法：分别用不同浓度的胡黄连苷Ⅱ和10mmol/L的谷氨酸处理PC12细胞,通过MTT法检测细胞的活力,CDCFH染色法检测细胞氧自由基水平,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Western blot检测bcl-2表达。结果：胡黄连苷Ⅱ能明显减轻谷氨酸对PC12细胞的损伤,提高细胞的存活率,降低细胞内的氧自由基水平,上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡。结论：胡黄连苷Ⅱ对谷氨酸引起的PC12细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制或清除谷氨酸诱导的细胞内活性氧的生成,调节凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达有关。     

银杏叶标准提取物对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：探讨银杏叶标准提取物EGB761对过氧化氢（H2O2）诱导大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞（PC12细胞）凋亡的保护作用及可能的机制。方法：PC12细胞常规培养生长至对数期,进行如下分组试验：正常对照组（NS）,H2O2组（H2O2,200μmol/LH2O2）,低剂量EGB761组（GL,10μg/mlEGB761＋H2O2）,中剂量EGB761组（GM,20μg/mlEGB761＋H2O2）,高剂量EGB761组（GH,50μg/mlEGB761＋H2O2）。用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定PC12细胞活力;流式细胞仪测定PC12细胞凋亡率;分光光度计测定过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活力和抗氧化能力（T-AOC）以及丙二醛（MDA）含量;Western blot法测定胞浆内Bcl-2、Bax以及Caspase-3的表达。结果：与正常对照组比较,H2O2组的PC12细胞的活力明显降低,细胞凋亡率显著增加（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组的PC12细胞活力显著增强,且呈剂量依赖关系（P〈0.05）;GM组和GH组CAT,GSH-Px,T-SOD和活性和T-AOC均显著提高（P〈0.05）,MDA含量显著下降（P〈0.05）,GL组T-SOD活力和T-AOC水平升高以及MDA含量下降（P〈0.05）,而CAT和GSH-Px活力无显著变化（P〈0.05）。与H2O2组比较,EGB761低、中、高组PC12细胞的Bcl-2的表达量增加,Bax的表达量下降,Bcl-2/Bax的比值显著增加（P〈0.05）,Caspase-3的表达显著降低（P〈0.05）。结论：H2O2可诱导PC12细胞凋亡,EGB761能显著抑制H2O2诱导PC12细胞凋亡并对细胞有保护作用;EGB761有较强的抗氧化能力,通过其抗氧化作用改善H2O2诱导的氧化应激状态,并能显著提高Bcl-2/Bax的比值,抑制Caspase-3的活化,发挥保护作用。     

藻酸双酯钠对硝普钠所致神经细胞株PC12细胞损伤的保护作用

目的:观察藻酸双酯钠(PSS)对硝普钠所致PC12细胞损伤的保护作用。方法:培养的PC12细胞分为对照组,损伤组,PSS低、中、高浓度(50、100、150μg·mL-1)组和尼莫地平组,应用MTT法测定细胞存活率,以碘化丙啶染色,流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率;测定细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、游离钙及半胱天冬酶-3(caspase-3)水平。结果:与损伤组比较,PSS各浓度组都能显著减少细胞死亡率,降低LDH漏出量及MDA生成,提高SOD活性,降低细胞内游离钙含量及caspase-3活性,抑制PC12细胞凋亡。结论:PSS对硝普钠所致PC12细胞损伤具有显著的保护作用,其机制可能与PSS钙拮抗作用及抗脂质过氧化作用有关。     

超氧化物歧化酶对浓缩铀诱发PC12细胞凋亡的保护作用

目的 研究超氧化物歧化酶（SOD）对浓缩铀诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法 在PC12细胞中加入浓缩铀DMEM／F12工作液，计算PC12细胞的内照射吸收剂量。结果 SOD可抑制浓缩铀诱发细胞迅速下降及DNA链断裂，同时提高细胞内游离精脒含量。结论 研究表明外源性SOD在清除自由基、抑制凋亡、保护细胞抗浓缩铀诱发损伤中有着重要作用。     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究天麻多糖(polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP)对皮质酮(corticosterone,CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法:采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP.将培养好的细胞分为正常对照组、模型组(200 μmol·L-1 CORT)和GEP高(1 000 μg·ml-1)、中(500 μg·ml-1)、低(250 μg·ml-1)剂量组.GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态.结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多.当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01).结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据.     

天麻多糖对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

摘 要 目的:研究天麻多糖（polysaccharides from gastrodia elata blume,GEP）对皮质酮(corticosterone, CORT)诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法: 采用水提醇沉法提取,经Sevag法脱蛋白及透析处理制得GEP。将培养好的细胞分为正常对照组、模型组（200 μmol·L^-1 CORT）和GEP高（1 000 μg·ml^-1）、中（500 μg·ml^-1）、低（250 μg·ml^-1）剂量组。GEP与CORT共孵PC12细胞48 h后,采用MTT比色法判断细胞损伤的程度;化学比色法测定乳酸脱氢酶的释放量;倒置显微镜和DAPI荧光染色法观察PC12细胞凋亡形态。结果:与正常对照组相比,模型组细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH释放量增加,且凋亡细胞增多。当给予GEP后,各剂量组均能显著降低LDH释放量,细胞存活率增加,凋亡细胞显著减少(P<0.01)。结论:GEP对皮质酮诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用,为GEP的临床应用提供试验依据。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代型谷氨酸受体激动剂对6-羟基多巴诱导的PC12细胞毒性无保护作用

阐明Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,mGluRs)激动剂对6—羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞毒性是否具有保护作用。方法：应用高效液相色谱仪联用荧光检测技术测定谷氨酸浓度，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定PC12细胞活性。结果：6—OHDA剂量依赖性地诱导PC12细胞释放谷氨酸、减低细胞活性，Ⅱ组mGluRs激动剂DCG—IV和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4对6—0HDA诱导的PC12细胞释放谷氨酸和细胞活性的降低均无显影响。结论：6—OHDA对多巴胺神经元的损伤作用与其诱导谷氨酸过度释放及其继发的兴奋性神经毒性有关，Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对6—OHDA诱导的PC12细胞毒性无保护作用。     

丙泊酚预处理对高温损伤嗜铬细胞瘤细胞的保护作用

［摘要］目的探讨丙泊酚预处理对大鼠嗜铬细胞瘤株(PC12)细胞高温损伤的影响及其可能的机制。方法体外培养PC12细胞，分为4组：正常对照组(C组)，常规(37 ℃)培养；高温损伤组（H组），将细胞置于46 ℃培养箱中2 h，随后恢复常规培养；丙泊酚预处理＋高温损伤Ⅰ组（P1＋H组）和丙泊酚预处理＋高温损伤Ⅱ组（P2＋H组）将细胞分别于高温损伤前置于37 ℃培养箱中以含丙泊酚终浓度25，50 μmol·L-1培养液作用1 h，余同H组处理。处理完毕后四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力，乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤，测定细胞内超氧化物歧化酶( SOD)活性和丙二醛(MDA)水平反映抗氧化活性。结果与H组比较，P1＋H组和P2＋H组MTT值升高（P＜0.01，LDH释放量减少（P＜0.01，同时细胞内SOD活性增高，MDA生成量明显减少。P1＋H组和P2＋H组之间比较，各指标差异无显著性（P＞0.05）。结论丙泊酚预处理对PC12细胞高温损伤有保护作用，这一作用可能与其抗氧化作用有关。     

Protective effect of diosmin on LPS-induced apoptosis in PC12 cells and inhibition of TNF-α expression

Several studies have demonstrated a link between increased pro-inflammatory mediators and apoptosis in neurodegenerative diseases. It has been reported that lipopolysaccharide (LPS) induces apoptosis mostly through the production of TNF-α. In this study, we investigated the possible protective and anti-inflammatory mechanisms of diosmin, a natural flavone glycoside, on LPS-induced PC12 cells death through inhibition of TNF-α production. PC12 Cells were pretreated with diosmin for 2 h prior to LPS treatment for 48 h to assess PC12 cells viability, TNF-α expression, and cell death mechanisms. Diosmin significantly increased cells survival and suppressed LPS-induced TNF-α in a concentration-dependent manner. Diosmin also significantly reduced the DNA fragmentation of LPS-induced cells, and its anti-apoptotic effect was confirmed by the decrease in the expression of pro-apoptotic protein Bad and the increase in the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 on Western blot analysis. Furthermore, diosmin inhibited LPS-induced caspase-3 activation further confirming its anti-apoptotic effects. This is the first study to report the anti-inflammatory and anti-apoptotic effects of diosmin via inhibition of TNF-α and a caspase-dependent pathway in neuronal PC12 cells. These results support the potential for diosmin to be investigated as a potential agent for the treatment of neurodegenerative diseases.     

Parkin represses 6-hydroxydopamine-induced apoptosis via stabilizing scaffold protein p62 in PC12 cells

Aim:

Parkin has been shown to exert protective effects against 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced neurotoxicity in different models of Parkinson disease. In the present study we investigated the molecular mechanisms underlying the neuroprotective action of parkin in vitro.

Methods:

HEK293, HeLa and PC12 cells were transfected with parkin, parkin mutants, p62 or si-p62. Protein expression and ubiquitination were assessed using immunoblot analysis. Immunoprecipitation assay was performed to identify the interaction between parkin and scaffold protein p62. PC12 and SH-SY5Y cells were treated with 6-OHDA (200 μmol/L), and cell apoptosis was detected using PI and Hoechst staining.

Results:

In HEK293 cells co-transfected with parkin and p62, parkin was co-immunoprecipitated with p62, and parkin overexpression increased p62 protein levels. In parkin-deficient HeLa cells, transfection with wild-type pakin, but not with ligase activity-deficient pakin mutants, significantly increased p62 levels, suggesting that parkin stabilized p62 through its E3 ligase activity. Transfection with parkin or p62 significantly repressed ERK1/2 phosphorylation in HeLa cells, but transfection with parkin did not repress ERK1/2 phosphorylation in p62-knockdown HeLa cells, suggesting that p62 was involved in parkin-induced inhibition on ERK1/2 phosphorylation. Overexpression of parkin or p62 significantly repressed 6-OHDA-induced ERK1/2 phosphorylation in PC12 cells, and parkin overexpression inhibited 6-OHDA-induced apoptosis in PC12 and SH-SY5Y cells.

Conclusion:

Parkin protects PC12 cells against 6-OHDA-induced apoptosis via ubiquitinating and stabilizing scaffold protein p62, and repressing ERK1/2 activation.     

Comparative toxicity and apoptosis induced by diorganotins in rat pheochromocytoma (PC12) cells

As ubiquitous environmental toxicants, organotin (IV) compounds (OTC) accumulate in the food chain and potential effects on human health are disquieting. The present study compared the cytotoxicity of three diorganotins, namely, dimethyltin (DMT), dibutyltin (DBT) and diphenyltin (DPT), in rat pheochromocytoma (PC12) cells, and the molecular mechanisms responsible for their cytotoxic effects were also explored. Twenty-four hours exposure of PC12 cells to DBT and DPT resulted in a concentration-dependent decrease in cell viability with median lethal concentration (LC₅₀) of 2.97 μM and 7.24 μM, respectively. However, DMT at concentrations up to 128 μM had no obvious effect on cell viability. The mechanistic study revealed that the extent of apoptosis was greater for DBT than that for DPT, followed by DMT, as evidenced by acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) fluorescent staining method and annexin V-FITC/PI staining flow cytometry analysis, as well as generation of intracellular reactive oxygen species (ROS), mitochondrial membrane potential (MMP) disruption, release of cytochrome c (Cyt c), and consequent activation of caspase-9, and -3. These investigations suggested that the cytotoxic potency of three diorganotins in PC12 cells was in the order of DBT > DPT ≫ DMT, and these compounds could induce PC12 cells apoptosis through ROS mediated mitochondrial pathway.