苦参素对肝星状细胞增殖及I型胶原合成的影响

目的：研究苦参素对肝星状细胞增殖及I型胶原合成的影响，阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法：采用袁桃霞等的肝星状细胞的分离方法和MTT法（甲基噻唑基四唑，metyl thiazolyl tetronzolium）及ABC免疫酶染色方法分别检测肝星状细胞增殖及I型胶原合成的影响。结果：苦参素能明显抑制肝星状细胞的增殖及I型胶原的合成，并呈剂量依赖性。     

苦参素对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响

目的:研究苦参素对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响,阐明其抗肝纤维化的作用机制.方法:采用袁桃霞[1]等的肝星状细胞的分离方法和MTT法(甲基噻唑基四唑,metyl thiazolyl tetronzolium)及ABC免疫酶染色方法分别检测肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原合成的影响.结果:苦参素能明显抑制肝星状细胞的增殖及Ⅰ型胶原的合成,并呈剂量依赖性.     

苦参素对大鼠肝星状细胞形态的影响

目的：观察苦参素对大鼠肝星状细胞形态的影响。方法：采用袁桃霞^[1]等的肝星状细胞的分离方法和免疫酶染色法。结果：苦参素能明显抑制肝星状细胞的增殖。结论：苦参素可通过抑制肝星状细胞的增殖而起到抗肝纤维化。     

复方861对习肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的 观察中药复方861对体外培养肝星状细胞增殖及胶原合成的影响。方法 分离培养大鼠肝星状细胞，传一代后加入不同浓度的复方861作用48小时，以MTT比色法检测对细胞增殖的作用，传一代细胞以10mg/ml复方861作用48小时后，以ELISA法、斑点杂交法检测胶原蛋白分泌及相应mRNA水平的变化。结果 1.56-100mg/ml复方861（经0.45μm滤膜过滤）可使MTT转化率下降，细胞增殖受抑，呈明显的剂量依赖性；10mg/ml复方861可使Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及转化生长因子β1(TGFβ1）mRNA水平及相应蛋白分泌量下降。结论 复方861抗纤维化的部分机理在于抑制活化肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成，从而减少胶原纤维在肝脏内的沉积。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制.方法:培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10-6、10-7、10-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达.结果:在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成;西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达.结论:西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关.     

阿魏酸钠抑制肝星状细胞合成胶原的机制

目的对阿魏酸钠抑制肝星状细胞合成胶原的机制进行探讨。方法³H-脯氨酸参入法检测胶原合成，ELISA方法检测阿魏酸钠对转化生长因子β₁(TGFβ₁)分泌的影响，Mv1Lu细胞增殖抑制实验考察阿魏酸钠对TGFβ₁活性的影响。结果阿魏酸钠对TGFβ₁处理条件下HSC-T6细胞中胶原的合成有抑制作用；能够降低HSC-T6细胞在氧化应激状态下TGFβ₁的表达水平；对TGFβ₁的活性有影响。结论阿魏酸钠抑制肝星状细胞合成胶原与其干预TGFβ₁活性，减少氧化应激状态下HSC-T6细胞分泌TGFβ₁的作用有关。     

复方中药对肝星状细胞胶原合成与降解的影响

目的观察中药复方丹参对肝星状细胞胶原合成与降解的影响.方法选择肝星状细胞系作为体外研究对象,MTT法观察药物对细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清液Ⅰ、Ⅲ、V型胶原含量,RNA-cDNA分子杂交检测细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平.逆转录多聚酶链反应检测间质胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平.结果中药复方丹参明显抑制肝星状细胞增殖且呈剂量依赖趋势,与对照组比较,中药组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量明显降低,细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平明显降低,间质胶原酶基因表达水平明显增强,金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平明显受到抑制(P＜0.01).结论中药复方丹参可能通过抑制肝星状细胞的增殖,抑制胶原的异常合成,促进异常沉积胶原的降解,从而起到抗肝纤维化的作用.     

苦参素对活化肝星状细胞整合素αv的表达和矢巢凋亡的影响

目的探讨苦参素对活化肝星状细胞（HSC）整合素αv的表达和矢巢凋亡的影响。方法把培养激活的大鼠肝星状细胞株（HSC—T6）分为实验组和对照组，实验组以不同浓度的苦参素干预，蛋白质印迹（Western Blotting）法检测整合素αv的表达，末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法（TUNUL）检测凋亡指数。结果药物干预后整合素αv的表达随干预浓度的增加而逐渐降低（P〈0．05）．凋亡指数则逐渐增高（P〈0．05），且呈浓度依赖性（r分别为-0．76、0．81）；整合素αv与凋亡之间呈负相关，r为-0．79。结论苦参素能通过抑制活化HSC的整合素αv的表达促进其凋亡，在肝纤维化治疗中具有重要意义。     

维生素E对大鼠肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的探讨维生素E抗肝纤维化作用的机理。方法采用胶原酶、链蛋白酶E消化及密度梯度离心的方法,分离、培养大鼠肝星状细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及。H-脯氨酸掺入法,观察维生素E对星状细胞增殖及胶原合成的影响。结果低剂量维生素E对肝星状细胞及胶原合成的抑制作用不明显,随着维生素E的浓度增加,对其抑制作用增强,呈明显的药物浓度依赖关系。结论维生素E抑制肝星状细胞增殖及胶原合成是其抗肝纤维化作用机理之一。     

虫草多糖对离体肝星状细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的：探讨虫草多糖(CP)抗肝纤维化的作用机理。方法：用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流消化正常大鼠肝脏,Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞(HSC),以MTT比色法和3H-脯氨酸(3H-Pro)掺人法观察CP对HSC增殖及胶原合成的影响。结果：在(1．0～40)μg／ml剂量范围内,CP可明显抑制HSC增殖及胶原合成,呈药物浓度依赖关系。结论：CP在体外可抑制HSC的增殖和胶原合成,提示该作用可能是其抗肝纤维化的机制之一。     

复方861对大鼠肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的观察中药复方861对体外培养肝星状细胞增殖及胶原合成的影响。方法分离培养大鼠肝星状细胞 ,传一代后加入不同浓度的复方861作用48小时 ,以MTT比色法检测对细胞增殖的作用。传一代细胞以10mg/ml复方861作用48小时后 ,以ELISA法、斑点杂交法检测胶原蛋白分泌及相应mRNA水平的变化。结果1.56～100mg/ml复方861(经0.45μm滤膜过滤)可使MTT转化率下降 ,细胞增殖受抑 ,呈明显的剂量依赖性 ;10mg/ml复方861可使I、III、IV型胶原及转化生长因子β1(TGFβ1)mRNA水平及相应蛋白分泌量下降。结论复方861抗纤维化的部分机理在于抑制活化肝星状细胞的增殖及胶原蛋白的合成 ,从而减少胶原纤维在肝脏内的沉积。     

6种黄酮化合物对大鼠肝星状细胞胶原合成的抑制作用

目的：研究黄颜木素、槲皮素、芹菜素、根皮素、橙皮素和查尔酮对血清、巨噬细胞培养上清液和转化生长因子β1刺激的大鼠肝星状细胞HSC—T6胶原合成的影响。方法：^3H-脯氨酸掺入法测定细胞胶原合成。结果：黄颜木素、槲皮素、芹菜素、根皮素、橙皮素和查尔酮（12．5～50μmol／L）以浓度依赖方式抑制血清、巨噬细胞上清和转化生长因子β1诱导的胶原合成。结论：黄颜木素、槲皮素、芹菜素、根皮素、橙皮素和查尔酮具有抑制肝星状细胞胶原合成的作用，可能具有潜在的肝纤维化治疗作用。     

黄芪总苷对肝星状细胞增殖和合成胶原的抑制作用

目的　探讨黄芪总苷 (AST)对肝星状细胞增殖和合成胶原的影响。方法　采用枯细胞条件培养基 (KCCM )及含新生牛血清 (NBS)和健康大鼠血清 (RS)的混合血清刺激大鼠肝星状细胞 (HSC)系HSC T6 ,用 3H TdR和3H 脯氨酸参入法检测HSC增殖活性和胶原合成状况。结果　AST(1 6、32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )对KCCM 1∶4刺激HSC T6细胞增殖和胶原合成均有明显的抑制作用 ;在含 1 0 %NBS- 3 %RS混合血清刺激的HSC T6细胞 ,AST(32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )作用 48h对HSC T6细胞增殖 ,及AST(1 6、32、64、1 2 8和 2 56mg·L- 1 )作用 72h对HSC T6细胞胶原合成均有明显的抑制作用 ,呈浓度依赖型趋势。结论　AST对体外激活肝星状细胞的增殖和产生胶原有明显抑制作用 ,该作用可能是AST抗肝纤维化的机制之一     

黄芪总提物对大鼠肝星状细胞增殖及产生胶原的影响

目的　研究黄芪总提物　（　TEA　）　对体外肝星状细胞增殖和产生胶原的影响　。方法　采用IV型胶原酶灌流分离大鼠肝星状细胞进行原代培养,　用CCl4急性损伤的大鼠肝枯否细胞条件培养基　（　KCCM　）　刺激肝星状细胞,　用3H-TdR和3H-Proline的掺入法分别检测肝星状细胞的增殖和胶原的产生　。结果　TEA(5～40　mg     

三七总苷对体外培养细胞胶原合成模型的影响

目的 建立体外培养细胞胶原合成模型并研究三七总苷对胶原合成的影响。方法 用不同浓度和比例的新生牛血清和大鼠血清混合,筛选刺激HSC-T6细胞胶原合成的最佳条件, 继而用3H-Proline掺入法研究三七总苷对其胶原合成的影响。结果10%新生牛血清加3%大鼠血清为刺激HSC-T6细胞胶原合成最佳培养条件。培养48和72 h后,0.01,0.05,0.25,1.00 和1.25 mg•mL-1浓度的三七总苷对 HSC T6细胞胶原合成有明显的抑制作用（P＜0.05）;并呈剂量效应关系和时间效应关系,方差分析,F分别为4.517和5.832（均P＜0.05）。结论 成功建立了体外培养细胞胶原合成模型,三七总苷对细胞胶原合成有明显抑制作用 。     

肝星状细胞激活的分子机制及其防治策略

肝星状细胞（HSC）是肝纤维化发生的中心环节和肝内最主要的胶原合成细胞，与肝纤维化的发生发展密切相关。HSC激活主要分为始动阶段和持续阶段。始动阶段即激活早期，包括基因表达及表型的早期变化，使HSC具有对细胞因子和其他局部刺激的反应性，主要和炎症细胞、损伤肝细胞或胆管细胞的旁分泌刺激以及细胞外基质组分的早期变化激活了HSC信号转导途径和启动转录因素有关。持续阶段即通过旁分泌、自分泌刺激及细胞外基质重建，进一步放大HSC的表型变化（如增殖、收缩、纤维形成、基质降解、趋化、白细胞化学吸引、维生素A缺乏和细胞因子释放）．维持其激活状态。     

KLF4基因沉默对大鼠肝星状细胞 HSC-T6胶原代谢的影响及机制研究

目的：探讨大鼠KLF4基因沉默,对大鼠肝星状细胞HSC-T6胶原代谢的影响及其机制。方法设计并构建针对大鼠KLF4基因的3个干扰质粒（pGPU6-1,pGPU6-2,pGPU6-3）以及阴性对照。采用实时荧光定量RT-PCR（ Real-time RT-PCR ）和western blot的方法分析KLF4 mRNA和蛋白的表达情况,筛选出沉默最好的干扰质粒,将筛选出来的干扰质粒pGPU6-3,转染大鼠HSC-T6细胞。转染24 h和48 h后分别采用Real-time RT-PCR法和western blot的方法检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13,MMP-13）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA和蛋白的表达。 Real-time RT-PCR法以GAPDH为内参照,用2－ΔΔCt法进行分析计算。 western blot的方法以β-actin蛋白为内参照,进行分析。结果 Real-time RT-PCR结果显示, pGPU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TIMP-1相对于对照组的mRNA表达分别下降为0敂．358±0．038,0．298±0．041和0．478±0．048;而MMP-13 mRNA的表达则上升为1．712±0．034。 Western Blot检测中,pG-PU6-3转染大鼠HSC-T6细胞后,以β-actin为内参照,Ⅰ型胶原蛋白,Ⅲ型胶原蛋白和TIMP-1蛋白的表达分别下降为0．326±0．051,0．283±0．074和0．331±0．039;而MMP-13蛋白的表达则上升为1．273±0．038。结论 KLF4基因沉默可以显著减少大鼠HSC-T6细胞Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,其机制与增加MMP-13表达,而抑制TIMP-1的表达有关。     

红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增殖及胶原基因表达的影响

目的探讨红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖、α1(I)型胶原mRNA合成、IκB和NF-κB表达的影响。方法用原位杂交、免疫细胞化学和凝胶电泳迁移率技术(EMSA)检测HSC的增殖和胶原基因表达。结果乙醛刺激HSC增殖、α1(I)型胶原mRNA合成 ,使IκB表达下降、NF-κB活性增加。红景天苷(0.5～2.5 mg·mL^-1)对上述影响有抑制作用,且以1.5 mg·mL^-1组效果最好。结论红景天苷明显抑制乙醛刺激的HSC增殖及胶原基因的表达。     

黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响

目的观察黄芪总苷对血吸虫卵抗原活化的肝星状细胞增殖与胶原合成的影响。方法小鼠腹腔注射日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Solub le egg antigen,SEA),制备SEA活化的腹腔巨噬细胞条件培养基(Solub le egg antigen inducedm acrophage cond itioned m ed ium,SEA-MCM)。采用肝星状细胞株HSC-T6细胞,以细胞增殖抑制率为指标,用噻唑蓝(MTT)测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;通过3H-脯氨酸参入法测定黄芪总苷对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞胶原合成的影响。结果SEA-MCM能明显促进HSC-T6细胞的增殖和胶原合成。黄芪总苷(32.5、65和130 mg.L-1)对SEA-MCM诱导的HSC-T6细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用,且呈药物浓度依赖性关系。结论黄芪总苷对SEA-MCM诱导的肝星状细胞增殖及胶原合成有明显的抑制作用。