钾通道阻断剂部分抑制三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡

目的研究钾通道阻滞剂对三氧化二砷诱导的HeLa细胞死亡的作用。方法采用MTT法评价HeLa细胞的存活情况，采用膜片钳技术记录HeLa细胞的电压依赖性钾电流。结果As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育24 h引起显著的HeLa细胞死亡，As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育24 h后存活的细胞表现明显的电压依赖性钾电流密度增加。+80 mV电压下，As₂O₃(5 μmol·L^-1)孵育组电流密度(61±18) pA/10 pF(n=8)明显高于对照组(38±10) pA/10 pF(n=8,P<005)。As₂O₃诱导的HeLa细胞死亡可被共同孵育钾通道阻滞剂四氨基吡啶(3 mmol·L^-1)或四乙基铵(5 mmol·L^-1)所部分抑制。3 mmol·L^-1四氨基吡啶或5 mmol·L^-1四乙基铵对HeLa细胞无明显细胞毒作用。结论As₂O₃长期处理增加HeLa细胞的电压依赖性钾电流。As₂O₃诱导的HeLa细胞死亡可被钾通道阻滞剂四氨基吡啶或四乙基铵部分抑制。     

羟乙基葛根素对过氧化氢致牛脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究牛脑微血管内皮细胞(BCMEC)过氧化损伤机制并探讨羟乙基葛根素对牛脑微血管内皮细胞损伤的保护作用。方法用MTT法和LDH活性检测测定BCMEC的损伤；倒置相差显微镜下一般形态学观察、透射电子显微镜超微结构观察及流式细胞术测定BCMEC凋亡变化。结果H₂O₂ (200 μmol·L^-1)损伤BCMEC后，细胞存活率下降，LDH释放增加，羟乙基葛根素和edaravone可减轻此损伤。H₂O₂ (100 μmol·L^-1)可诱导BCMEC凋亡，羟乙基葛根素 和edaravone对此有保护作用。结论羟乙基葛根素和edaravone对H₂O₂导致的BCMEC坏死和凋亡有保护作用，该作用与其抗氧化作用有关。     

1,3-二甲基-4-酰基-5-吡唑酮二烃基锡抗癌配合物与单核苷酸作用的研究

目的研究1,3-二甲基-4-乙酰基-5-吡唑酮(HL₁)的二烃基锡抗癌配合物在近生理条件下与单核苷酸和DNA的作用机制。方法以高分辨核磁共振研究有机锡化合物在不同时间、不同条件下与核苷酸的作用方式并用UV法进一步研究有机锡化合物与DNA的作用。 结果(L₁)₂SnEt₂与AMP作用时可引起AMP碱基上H(8),H(2)和³¹P峰化学位移值显著变化并可引起DNA增色效应;(L₁)₂SnMe₂与AMP作用时只引起AMP的³¹P化学位移值的显著变化,未观察到AMP的H(8)和H(2)化学位移值的明显改变,(L₁)₂SnMe₂与DNA的作用可导致DNA的减色效应;(L₁)₂SnEt₂和(L₁)₂SnMe₂在与dCMP和dGMP作用时只引起dCMP和dGMP的³¹P的化学位移数值的明显变化。结论 3-二甲基-4-乙酰基-5-吡唑酮的二乙基锡配合物(L₁)₂SnEt₂可与AMP的碱基N₁和磷酸根氧原子螯合并可能会破坏DNA的双股螺旋结构;而二甲基锡配合物(L₁)₂SnMe₂易与单核苷酸的磷酸氧结合,难以与单核苷酸的碱基氮原子稳定结合且只引起DNA双股螺旋的收缩。     

H2受体介导组胺对大鼠海马缺氧缺糖诱导细胞水肿及活性降低的保护作用

目的探讨组胺对海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低的作用，以及与受体亚型的关系。方法大鼠海马脑片以缺氧缺糖(OGD)诱导缺血损伤后，实时检测CA1区透光度变化评价细胞水肿；并测定2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)产物甲，评价脑片活性。观察不同浓度组胺的作用，以及组胺受体拮抗剂对组胺作用的影响。结果 组胺(0.01～10 μmol·L^-1)明显抑制OGD诱导的海马脑片透光度增加，并提高脑片活性。H₁受体拮抗剂苯海拉明(0.1～10 μmol·L^-1)不影响组胺的作用，H₂受体拮抗剂西咪替丁(0.1～10 μmol·L^-1)则部分拮抗组胺的保护作用。结论组胺对大鼠海马脑片缺血诱导细胞水肿及活性降低有保护作用，该作用与H₂受体有关。     

新的核苷类化合物β-L-D4A的化学合成及体外抗HBV作用

目的以D型谷氨酸为原料，通过一系列化学转化，合成了新的核苷类化合物β-L-D4A，并初步探索其体外抗HBV作用。方法合成β-L-D4A，用红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证目标化合物的结构，以2.2.15细胞(HepG2细胞进行HBV基因组转染后所得)培养为基础，Southern印迹法检测不同浓度化合物体外抑制HNV DNA复制作用，并求出50%抑制的药物浓度，即EC₅₀。以四噻唑蓝(MTT)比色分析法检测不同浓度药物的细胞毒性，求出IC₅₀。结果化合物β-L-D4A经红外光谱、核磁共振氢谱和质谱确证；2.2.15细胞培养上清液病毒DNA的Southern印迹、自显影结果显示病毒的抑制呈明显的浓度依赖性，计算出EC₅₀为0.2 μmol·L^-1，胞内DNA的Southern印迹、自显影显示类似的结果；细胞毒性实验显示IC₅₀为200 μmol·L^-1。结论体外实验显示β-L-D4A具有明显的抑制病毒DNA复制作用，且无明显的细胞毒性，TI值为1 000，高于临床用Lamivudine (750)，有望开发为临床抗HBV用药。     

红景天苷减轻叠氮钠诱导线粒体损伤的作用

目的观察红景天苷对呼吸链复合体IV抑制剂叠氮钠(NaN₃)诱导的线粒体损伤的保护作用，探讨其在防治神经退行性疾病中可能的作用机制。方法将叠氮钠与人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y共同孵育，MTT法测定细胞存活力，JC-1法检测线粒体膜电位变化。刃天青法检测大鼠脑线粒体功能。结果64 mmol·L^-1叠氮钠与SH-SY5Y共同孵育4 h后，细胞存活率明显下降，线粒体膜电位下降。预先加入红景天苷能明显提高细胞存活率，维持线粒体膜电位。650 μmol·L^-1叠氮钠能使大鼠脑线粒体功能下降，预先加入红景天苷能明显改善线粒体功能。结论红景天苷能够减轻叠氮钠(NaN₃)诱导的线粒体损伤，能够改善线粒体功能，这可能是其抗老年痴呆的机制之一。     

丹红注射液对小鼠感染HCMV肝炎的干预研究

目的：研究丹红注射液对小鼠感染人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)病毒性肝炎的干预机制,为临床治疗HCMV提供理论依据。方法：Balb／c 品系小鼠80只,随机分对照组、模型组、丹红A、B、C组,丹红A、B、C组经腹腔注射丹红注射液(0.5 mg/10 g.d、1 mg/10 g.d、2 mg/10 g.d)进行干预,对照组、模型组用细胞维持液DMEM干预治疗。28天(d)后检测肝微粒体细胞色素P₄₅₀ 亚型酶[CYP2E1、CYPIA2、CYP3A4、CYP2D6、CYP2C9]活性。尾静脉采血放免法检测小鼠血清肝纤维化血清学指标[IV型胶原(cIV)、层黏连蛋白(LN)、转化生长因子-β_l(TGF-β_l)、透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PC-III)],小鼠肝功能五项[谷草转氨酶(AST)、胆汁酸(TBA)、总胆红素(STB) 、谷氨酰转移酶(GGT)、谷丙转氨酶(ALT)]。结果：与模型组比较,丹红B、C组治疗28d后,P₄₅₀ 亚型酶CYPIA2、CYP3A4酶活性、血清肝纤维化血清学指标cIV、TGF-β_l、PC-III及肝功能AST、ALT均有不同程度降低(P <0.05),差异均有统计学意义。丹红A组无统计学意义,B、C组组间比较(P ﹥0.05)。结论：丹红注射液具有活血化淤的药理特性,可抑制小鼠P₄₅₀ 亚型酶活性,降低药物代谢时对肝脏的毒性,并通过降低TGF-β_l而促进肝功能恢复,对小鼠感染,HCMV病性肝炎有明确的治疗作用。     

过氧化氢诱导人肝癌细胞BEL7402产生氧化应激细胞模型的建立

目的 研究过氧化氢(H₂O₂)构建体外人肝癌细胞BEL7402氧化应激模型的最佳作用浓度及时间。方法 采用噻唑蓝(MTT)染色法检测以10、100和1 000 μmol/L的H₂O₂处理0、2、4、6、8、10、12和24 h后BEL7402细胞的存活率;采用双氢罗丹明123(DHR123)探针法、单细胞凝胶电泳技术和分光光度法检测以100 μmol/L H₂O₂处理BEL7402细胞4 h后线粒体活性氧(ROS)含量、DNA损伤、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果 100 μmol/L H₂O₂处理BEL7402细胞4 h后,其存活率为(43.44±5.74)%,与10 μmol/L H₂O₂处理组(92.77±5.51)%相比,细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);ROS含量结果显示100 μmol/L H₂O₂处理BEL7402细胞40 min时其体内的ROS含量达到峰值,之后呈下降趋势;与健康对照组比较,100 μmol/L H₂O₂组OTM值升高(P<0.05),MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.01),SOD和GSH-Px活性均下降(P<0.05或P<0.01)。结论 100 μmol/L H₂O₂、预处理4 h,可成功构建BEL7402细胞体外氧化应激模型,可为通过氧化应激机制抗肝病新药的研发奠定基础。     

更昔洛韦和黄芪抗HCMV感染所致巨核系祖细胞增殖抑制的实验研究

目的:探讨人巨细胞病毒(HCMV)对脐血巨核系祖细胞(CFU鄄Mk)体外增殖的抑制作用及黄芪和更昔洛韦(GCV)对此的干预作用。方法:采用造血祖细胞体外半固体培养技术,培养、观察、计数HCMV鄄AD169感染的CFU鄄Mk集落产率、抑制率、提高率、集落峰值及集落维持时间;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV鄄AD169DNA;在1∶10感染组中分别加入黄芪或/和GCV,观察黄芪和GCV干预HCMV感染对CFU鄄Mk增殖的抑制作用。结果:HCMV鄄AD169感染组CFU鄄Mk集落产率与对照组比较明显减少(P<0.01),集落产率随病毒感染滴度的增高而减少,抑制率随病毒感染滴度的增高而逐渐增加;各组集落峰值出现时间无明显差异(P>0.05),但感染组集落维持时间明显短于对照组(P<0.01);用PCR在感染组集落细胞内检测到HCMV鄄AD169DNA;在1∶10感染组中加入黄芪或/和GCV后,CFU鄄Mk集落产率均明显提高,CFU鄄Mk增殖提高率分别为33.2%、38.9%、61.5%。结论:CFU鄄Mk是HCMV的宿主细胞之一,HCMV能直接感染CFU鄄Mk;在体外HCMV鄄AD169对CFU鄄Mk的增殖和集落形成有明显抑制作用;黄芪和GCV在体外有明显的抗HCMV活性,二者联合应用可产生协同的抗病毒作用。     

三尖杉酯类生物硷对小鼠白血病P388及L615蛋白质生物合成的影响

本文初步观察了四种三尖杉酯硷对³H-DL-亮氨酸、³H-L-门冬酰胺、¹⁴C-DL-苯丙氨酸掺入小鼠白血病P₃₈₈腹水细胞及L₆₁₅。脾组织蛋白质的作用。实验结果表明,在等毒性剂量(1/5 LD₅₀)下,一次腹腔(或静脉)给药,四种酯硷对P₃₈₈腹水细胞及L₆₁₅脾组织蛋白质生物合成抑制明显,作用较快,并具有相似的时间—反应曲线。一般在24小时基本恢复。     

Inhibitory effects of tricin derivative from Sasa albo-marginata on replication of human cytomegalovirus

The anti-human cytomegalovirus (HCMV) activity of tricin (4′,5,7-trihydroxy-3′,5′-dimethoxyflavone), a derivative from Sasa albo-marginata, was studied in the human embryonic fibroblast cell line MRC-5. In a plaque assay, tricin and ganciclovir (GCV) showed concentration-dependent inhibitory properties from 0.05 to 3.6 μM and 0.01 to 1.0 μM, respectively. Tricin had no virucidal effects on cell-free HCMV. Treatment with tricin 1 h before, or 1 h or 3 h after viral infection significantly suppressed HCMV replication. Moreover, tricin inhibited the expression of immediate early (IE) 2 mRNA and DNA polymerase (UL54) mRNA in HCMV-infected cells. Western blot analysis also demonstrated that tricin decreased the expression of IE antigen (especially IE2) and cyclooxygenase 2 (COX-2) expression in HCMV-infected cells. In the presence of tricin, prostaglandin E2 (PGE₂) accumulation by HCMV infection was completely inhibited. These results suggest that tricin is a novel compound with potential COX inhibitor-dependent anti-HCMV activity.     

Experimental study on the prevention and treatment of murine cytomegalovirus hepatitis by using allitridin

Allitridin (diallyl trisulfide), a main effective compound of Allium sativum (garlic), was previously shown to inhibit the expression of immediate-early antigens and viral proliferation of human cytomegalovirus (HCMV) in vitro. Here we have examined the prophylactic and therapeutic efficacy of allitridin in a non-lethal murine cytomegalovirus (MCMV) hepatitis in methylprednisolone-immunosuppressed BALB/c mice. Allitridin was administered at 25mg/kg per day (equal to the mean human dose) and 75 mg/kg per day in two regimens: prophylaxis plus therapy beginning at 2 days before infection and lasting for 18 days, and therapy lasting for 14 days initiated at 2 days after infection. Ganciclovir (GCV)-treated, infected, and non-infected mice served as controls. MCMV DNA load in the liver, plasma alanine aminotransferase (ALT) level and Knodell's histological activity index (HAI) score of liver section were evaluated. We found that MCMV DNA load was significantly decreased in all allitridin- and GCV-treated mice, compared with infected controls. Concomitantly, histopathological lesions in the liver and plasma ALT levels were reduced. Statistically, no significant differences were detected between the combined allitridin prophylaxis plus therapeutic and therapeutic groups regardless of dose and the GCV groups. Our results demonstrate the therapeutic efficacy of allitridin in mouse models with MCMV hepatitis.     

高氧对体外培养的人胚肺成纤维细胞的毒性作用

目的研究高氧对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)的毒性作用。方法将生长良好的HELF传代后,用无血清培养基培养24h,分别置于空气及体积分数90%O2的细胞培养箱中培养5d,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,化学比色法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果与空气对照组相比,在给予体积分数90%O22d时细胞上清液中LDH含量明显升高,SOD含量则明显减低(P<0.05),且随高氧暴露时间延长,呈现出明显的时间依赖关系(3～5d,P<0.01),细胞大量凋亡。结论体积分数90%O2对体外培养的HELF具有明显的细胞毒性作用,直接引起细胞损伤,加速其凋亡。     

甲基丙烯酸环氧丙酯体外诱导的人胚肺成纤维细胞DNA链断裂

甲基丙烯酸环氧丙酯（GMA）导致人胚肺成纤维细胞（HELFs）恶性转化及其潜在致癌机理尚未阐明. 本研究用0.5-5.0 mg·L^-1的GMA给体外培养的HELFs染毒2 h和12 h,或用5.0 mg·L^-1的GMA染毒15 min-24 h, 应用单细胞凝胶电泳技术（彗星试验）对GMA引起的HELFs DNA断裂作用进行了初步探讨. 琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测等方法观察了GMA对细胞凋亡的诱导作用. 结果表明, GMA可导致染毒细胞DNA发生剂量和时间依赖性链断裂. 用5.0 mg·L^-1的GMA染毒后仅1 h断裂作用即已显著, 并随染毒时间延长而递增, 至24 h时损伤最为严重. 但在同样条件下未观察到GMA对细胞凋亡的诱导作用. 结果提示GMA导致的非凋亡性DNA链断裂可能是其诱导HELFs恶性转化早期重要的遗传事件之一.     

Antiviral activity of ganciclovir elaidic acid ester against herpesviruses

A fatty acid derivative of ganciclovir (GCV), elaidic acid ganciclovir (E-GCV), has been evaluated for its inhibitory activity against laboratory and clinical strains of herpes simplex type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2), varicella-zoster virus (VZV) and human cytomegalovirus (HCMV) in human embryonic lung fibroblasts. GCV, cidofovir, acyclovir (ACV), brivudin (BVDU) and foscarnet (PFA) were included as reference compounds. The viruses studied were wild-type, thymidine kinase-deficient (TK(-)) and PFA-resistant (PFA(r)) HSV strains. The IC(50) values obtained for E-GCV were 5- to 30-fold lower than those observed for GCV, the IC(50) value of E-GCV for HSV-1 strain KOS being 0.07 nM. A similarly increased activity of E-GCV (as compared to GCV) was noted for TK(-) and PFA(r) HSV-1 or HSV-2 strains. However, E-GCV did not exhibit superior activity over GCV to VZV or HCMV in vitro. The antiviral efficacy of E-GCV was also evaluated in vivo against intracerebral HSV-2 infection in NMRI mice. Animals were treated intraperitoneally or perorally with E-GCV, GCV or placebo once daily for 10 days, starting the day of infection. E-GCV compared to GCV at equimolar doses, proved markedly more efficacious than GCV in terms of reduction of mortality rate and delay of mean time of death. The elaidic acid ester of GCV should therefore be considered as a novel approach towards the treatment of HSV infections.     

全反式维A酸对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦旁观者效应增强作用及其机制

目的　通过研究全反式维A酸 (ATRA )对单纯疱疹病毒胸苷激酶基因结合更昔洛韦 (HSV tk/GCV)旁观者效应的增强作用及与Cx4 3表达的关系 ,为提高TK自杀基因的疗效及探索增强作用机制提供实验基础。方法　应用Polybrene转染、荧光定量RT PCR等技术 ,观察ATRA对宫颈癌细胞ME180 ,ME180 /TK转化细胞旁观者效应及诱导Cx4 3mRNA表达的作用。结果　ME180 ,ME180 /TK不同比例的混合细胞随ATRA浓度的增加而存活率降低。ME180 +ME180 /TK混合细胞的存活率随ME180 /TK细胞比例的增加而降低。在 2mg·L- 1更昔洛韦 (GCV)作用下 ,以 10 - 8mol·L- 1ATRA与不加ATRA (0mol·L- 1)的作用相比较 ,在ME180与ME180 /TK不同比例混合的各组中 ,细胞的存活率明显降低 (P <0 .0 5 )。并观察到10 - 8及 10 - 10 mol·L- 1ATRA对GCV旁观者效应的增强作用。RT PCR结果表明 ,经ATRA处理的ME180细胞 ,其Cx4 3mRNA的相对拷贝数比值增高约 1.84倍及 2 .6 5倍。结论　宫颈癌ME180细胞中 ,ATRA在10 - 8～ 10 - 10 mol·L- 1范围内 ,具有明显增强HSV tk/GCV旁观者效应的作用。其主要机制是通过ATRA在转录水平诱导Cx4 3mRNA表达上调 ,导致旁观者效应的增强。     

茵陈水溶性提取物体外抗巨细胞病毒效应的实验研究

目的:探讨茵陈水溶性提取物溶液体外抗人巨细胞病毒(HCMVAD169)的效应。方法:采用细胞病变(CPE)抑制法观察茵陈水溶性提取物溶液对HCMVAD169毒株的抑制作用,使用MTT比色法检测细胞的损伤程度,并利用吸光度(A)值评价茵陈水溶性提取物溶液的抗HCMV的效应。结果:茵陈水溶性提取物溶液半数中毒浓度(TC50)为904.49mg·L-1,半数有效浓度(IC50)为195.11mg·L-1mg·L-1,治疗指数(TI)为4.64。茵陈水溶性提取物溶液具有抗HCMV的作用,且其作用随药物浓度的增高而增强。结论:体外实验证实,茵陈水溶性提取物是理想的抗HCMV中药。     

更昔洛韦治疗幼儿感染人巨细胞病毒的预后评估指标的探讨

【摘要】目的 探讨IE mRNA 和pp67 mRNA 在更昔洛韦治疗后的人巨细胞病毒（HCMV）感染患儿中的表达情况。方法 在接受更昔洛韦治疗前，治疗2 周和停药4 周时检测HCMV 患儿总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）；丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）及荧光定量PCR 的方法检测HCMV-DNA 拷贝数，IE mRNA 和 pp67 mRNA 的表达采用实时荧光定量PCR 法进行检测。结果 更昔洛韦治疗2 周后，患儿肝功能及血HCMVDNA 均较治疗前降低，停药4 周后TBIL、DBIL、ALT、ALP 及HCMV-DNA 拷贝数均较治疗前显著降低，但是与治疗 2 周比较差异无统计学意义。治疗后2 周，仍有12 例患儿血液中表达pp67 mRNA，表达量显著低于治疗前的pp67 mRNA 表达量，但检测不到患儿表达IE mRNA。停药4 周，pp67 mRNA 阳性表达的患儿数量显著低于治疗2 周的患儿数量，有3 例患儿表达微弱的IE mRNA。2 个基因的mRNA 表达量与治疗2 周比较差异无统计学意义。结论 在更昔洛韦治愈患儿，HCMV-DNA 检测呈现阴性时，应再进行病毒mRNA 检测，对RNA 表达阳性的患儿，应该加强随访与复查，预防病毒复发。     

Effective treatment of murine cytomegalovirus infections with methylenecyclopropane analogues of nucleosides.

A number of new nucleoside analogues with a Z- or E-methylenecyclopropane structure exhibited significant activity against human and murine cytomegaloviruses (HCMV, MCMV) in tissue culture that was generally comparable to, or greater than, 9-[(1-3-dihydroxy-2-propoxy)methyl]guanine (ganciclovir, GCV). Several of these analogues were chosen for further evaluation of therapeutic efficacy utilizing a MCMV infection. Intraperitoneal (i.p.) inoculation of 3-week-old Balb/c mice with 2.0 x 10(5) plaque forming units (pfu) of MCMV results in an acute, lethal infection with rapid virus replication in visceral and glandular tissue, thus, making it an ideal model for identifying compounds that have potential for use in humans. Synadenol (QYL-284A) and synguanol (QYL-438) were administered i.p. once daily for 5 days initiated 6, 24, or 48 h post-viral infection. Significant protection was demonstrated at 50 and 16.7 mg/kg compared to placebo, with efficacy comparable to GCV. When delivered orally once or twice daily at 100 mg/kg per day, QYL-438 was active, but less effective than GCV. In addition, 2-amino-6-methoxypurine analogue (QYL-941) was active at 60 mg/kg administered orally twice daily, comparable to GCV, while it's prodrug (QYL-972) was as effective as GCV at 40 mg/kg when delivered twice daily for 5 days. Additionally, analogue 2-amino-6-cyclopropylaminopurine (QYL-769) was found to be highly efficacious when given orally twice daily for 5 days. Mortality of 0% and 13% was observed at 60 and 20 mg/kg, respectively, which was similar to GCV. Oral treatment with QYL-769 or GCV reduced virus replication in target organs, but neither resulted in complete clearance of MCMV. These data indicate that these new analogues have activity comparable to GCV when given orally to mice and should be evaluated further to assess their potential for use in humans.