红树林放线菌产抗菌活性物质的分离纯化研究

对红树林放线菌产生的抑菌活性物质进行了分离提取，采用的方法为有机溶剂萃取法、酸提取法、离子交换柱层析、大孔吸附树脂柱层析等，获得了两个具有抑菌活性的组分，经HPLC分析两组分均为纯物质，初步确定为核苷类抗生素。     

仿刺参水溶性海参皂苷的分离纯化及其抑瘤活性研究

为了获得具有显著抑瘤活性的水溶性海参皂苷样品, 利用大孔树脂柱、硅胶柱和葡聚糖凝胶柱对水溶性海参皂苷进行了分离纯化, 并对其体内外抑瘤活性和诱导肿瘤细胞凋亡进行了检测。研究结果显示, 大孔树脂柱的70%乙醇洗脱组分以及硅胶柱色谱的部分纯化组分 (pSC-2和pSC-3) 对HeLa细胞、A-549肺癌细胞、SGC-7901胃癌细胞和Bel-7402肝癌细胞均具有显著的抑瘤活性; 经过葡聚糖凝胶柱色谱, 获得了纯度均在99.6%以上、具有三萜类皂苷性质的SC-2和SC-3纯化样品, 发现SC-2纯化样品不仅能浓度和时间依赖性地抑制HeLa细胞的体外增殖, 还能剂量依赖性地抑制S180实体瘤的体内生长, 提高荷瘤小鼠的胸腺指数和脾指数。细胞凋亡检测结果显示, SC-2纯化样品可剂量依赖性地诱导HeLa细胞凋亡, SC-2纯化样品 (10和50 mg·L^-1) 处理12 h的HeLa细胞均出现了DNA片段化。可见, 水溶性海参皂苷SC-2纯化样品具有显著的抑瘤活性, 其机制可能是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡来实现的。     

白英总皂苷的抗炎活性研究

目的:观察白英总皂苷的抗炎活性。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用200 μmol·L^-1H₂O₂损伤细胞;培养小鼠单核/巨噬细胞(RAW 264.7),用脂多糖(LPS)诱导;抽签法随机分成正常组、模型组、阳性对照组、白英总皂苷低、中、高剂量组。给药后,继续培养,应用CCK-8法观察细胞存活率;饲养SD大鼠,抽签法随机分为正常组、模型组、阳性对照组、白英总皂苷低、中、高剂量组,观察白英总皂苷对角叉菜胶诱导大鼠急性踝关节肿胀度的影响,测定前列腺素E₂(PGE₂)、环氧化物水解酶-2(COX-2)含量。结果:白英总皂苷中剂量对H₂O₂损伤的HUVEC细胞的影响以及高剂量组对LPS诱导的巨噬细胞RAW 264.7的影响,均和阳性对照组相当,无统计学差异(P>0.05);中、高剂量白英总皂苷能够明显降低大鼠急性踝关节肿胀度,降低大鼠足趾渗出液中PGE₂、血清中COX-2含量,且和模型组差别有统计学意义(P<0.01)。结论:白英总皂苷具有明显的抗炎作用,有必要进一步深入研究其药效及作用机制。     

革皮氏海参皂苷抑制血管新生作用

目的以革皮氏海参中分离得到的三萜皂苷ho-lothurin A1(HA)和24-dehydroechinoside A(DA)为研究对象,比较研究其抗血管新生的作用。方法采用MTT法和AO/EB染色法检测不同剂量HA和DA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响;采用小管形成实验观察HA和DA对HUVEC分化形成小管能力的影响;细胞黏附实验比较研究HA和DA对HUVEC与肝癌细胞HepG2的黏附能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管新生模型,观察HA和DA抑制CAM血管新生的情况。结果 HA和DA均具有抑制HUVEC增殖的活性(48 h的IC50值分别为4.80、3.82μmol.L-1),并能促进内皮细胞的凋亡;在体外能抑制内皮细胞小管形成,可抑制HUVEC与HepG2细胞间(P<0.01)的黏附,能使CAM新生血管明显减少,其中DA抑制血管新生活性优于HA。结论海参皂苷HA和DA具有抑制血管新生的作用,其活性与其结构相关。     

大孔吸附树脂对黄芪总皂苷分离纯化的研究

目的寻找较好的黄芪总皂甙分离纯化方法。方法采用大孔吸附树脂AB-8和HPD400进行吸附、解吸,用比色法进行含量测定。结果 AB-8树脂的收率和纯度为47.64％和74.79％,HPD400树脂的收率纯度为50.83％和75.62％。结论 HPD400树脂的黄芪总皂苷有较好的纯化效果     

大鼠尿中人参皂苷Rd及其代谢物的LC-MS研究

目的探讨人参皂苷Rd在大鼠体内的代谢产物及转化途径。方法选择SD大鼠6只，单剂量口服和静脉给予人参皂苷Rd，分段收集给药前和给药后0～24 h尿样，将尿样分时段合并后采用旋转薄膜蒸发浓缩，以固相萃取小柱纯化处理，采用高效液相色谱-串联飞行时间质谱进行检测。结果通过比较给药前后的TOF总离子流图，对尿中推测的代谢物和标准物质的出峰时间及相关化合物选择离子扫描二级质谱图进行了比较分析，结果在尿中发现了7种代谢产物，系统分析了这些代谢产物的代谢转化规律及可能结构。结论大鼠尿中人参皂苷Rd的主要转化途径为氧化、水解、结合及异构化代谢反应。     

三氧化二砷对人脐静脉内皮细胞作用的研究

目的以人脐静脉内皮细胞作为血管新生内皮细胞的模拟物,通过研究As2O3对人脐静脉内皮细胞的影响,探讨As2O3的抗血管新生作用机制。方法分离和培养人脐静脉内皮细胞,以不同浓度和时间的As2O3和VEGF作用于脐静脉内皮细胞,应用流式细胞技术测定As2O3和VEGF对脐静脉内皮细胞增殖、细胞凋亡和癌基因bcl-2表达的影响。结果As2O3以时间和剂量依赖的方式抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制癌基因bcl-2表达,而VEGF可拮抗As2O3的部分作用。结论As2O3可以通过直接作用于内皮细胞而抑制血管新生。     

魟鱼软骨多糖抗血管形成的实验研究

目的:探讨魟鱼软骨多糖(RCG)对血管形成的作用。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,采用MTT法检测不同浓度RCG对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;缝线诱导大鼠角膜新生血管,通过计算新生血管面积评价不同浓度RCG对大鼠角膜新生血管的作用;建立小鼠Lewis肺癌模型,观察不同浓度RCG作用后肿瘤生长情况,计算原发瘤抑制率,免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果:RCG可明显抑制人脐静脉内皮细胞的体外增殖,IC50为62.93mg.mL-1;与生理盐水组比较,应用不同浓度RCG后新生血管面积明显减少(P<0.01),原发瘤抑制率呈浓度依赖性,MVD值降低(P<0.01)。结论:RCG对实验动物具有良好的抗血管生成活性。     

分离纯化重组水蛭素Ⅲ工艺的优化研究及重组水蛭素Ⅲ的分子鉴定

目的优化分离纯化大肠杆菌发酵液中重组水蛭素Ⅲ的工艺并对所纯化产物进行分子鉴定. 方法通过三步纯化步骤,即大孔树脂层析、DEAE纤维素DE52层析和反相高效液相色谱层析,分离纯化发酵液中的重组水蛭素Ⅲ,优化纯化条件.通过SDS-PAGE和分析型反相高效液相色谱对重组水蛭素Ⅲ的纯度进行鉴定.以质谱对重组水蛭素Ⅲ的分子量进行鉴定.通过肽图的测定来鉴定重组水蛭素Ⅲ的结构. 结果通过优化后的分离纯化步骤得到了纯度为95.4786%的纯品,总产率为39%.得到的产物分子量为6 913.32 ± 6.55 Da,与重组水蛭素Ⅲ分子量的理论值相符,其结构亦与理论值一致. 结论优化后的分离纯化步骤可以有效地用于大肠杆菌发酵液中重组水蛭素Ⅲ的大规模分离纯化.所得的高纯度产物确为基因重组水蛭素Ⅲ.     

瓜子金总皂苷的含量测定及其纯化工艺研究

目的:建立瓜子金总皂苷含量测定的方法学,研究瓜子金中总皂苷的纯化工艺。方法:采用紫外分光光度法测定瓜子金中总皂苷含量,考察大孔树脂吸附、富集、纯化瓜子金总皂苷工艺。结果:瓜子金总皂苷在测定范围内均显示较好的线性关系(r=0.999 7);精密度、重复性、稳定性试验中RSD值均小于3.00%;加样回收率平均值为99.51%。大孔树脂纯化试验结果表明,70%乙醇洗脱部位总皂苷含量达71.53%。结论:本研究所建立的方法快速、准确,可测定瓜子金总皂苷的含量;大孔树脂可有效富集、纯化总皂苷,为远志属药用植物瓜子金资源的综合利用提供理论支撑。     

A pair of isomeric saponins with cytotoxicity from Albizzia julibrissin

Two new saponins have been isolated from the stem barks of Albizzia julibrissin Durazz, and their structures identified as 3-O-[β-d-xylopyranosyl-(1 → 2)-β-d-fucopyranosyl-(1 → 6)-β-d-2-deoxy-2-acetoamidoglucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2- trans -2-hydroxymethyl-6-methyl-6-O-[4-O-((6S )-2- trans -2-hydroxymethyl-6-hydroxy-6-methyl-2,7-octadienoyl)-β-d-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl}-acacic acid-28-O-β-d-glucopyranosyl-(1 → 3)-[α-l-arabinofuranosyl-(1 → 4)]-α-l-rhamnopyranosyl-(1 → 2)-β-d-glucopyranosyl ester (1) and 3-O-[β-d-xylopyranosyl-(1 → 2)-β-d-fucopyranosyl-(1 → 6)-β-d-2-deoxy-2-acetoamidoglucopyranosyl]-21-O-{(6S)-2-trans-2-hydroxymethyl-6-methyl-6-O-[3-O-((6S)-2-trans-2-hydroxymethyl-6-hydroxy-6-methyl-2,7-octadienoyl)-β-d-quinovopyranosyl]-2,7-octadienoyl}acacic acid 28-O-β-d-glucopyranosyl-(1 → 3)-[α-l-arabinofuranosyl-(1 → 4)]-α-l-rhamnopyranosyl-(1 → 2)-β-d-glucopyranosyl ester (2), based on chemical and spectral evidences, named as julibroside J₁₉ and julibroside J₁₈, respectively. Both compounds show significant inhibition action against HeLa, Bel-7402 and MDA-MB-435 cancer cell lines in vitro.     

FK-520分离纯化工艺的研究

目的开发出一种FK-520分离纯化方法。方法本研究主要采用薄层层析-硅胶柱层析法考察了不同展开剂的层析效果,以洗脱液的平均含量和收率作为评价指标,考察了流速和进样量对层析分离的影响。结果实验结果表明,硅胶柱层析方法,结合以萃取和结晶工艺,可以从FK-520发酵液中分离纯化出高纯度的FK-520。硅胶柱层析分离FK-520的最佳操作条件为:洗脱剂乙酸乙酯-石油醚(80:20),洗脱剂流速300m L/h,上样量10mg/m L柱体积。洗脱液脱色结晶后,FK-520纯度达到95%以上,收率超过80%。结论建立了一种新的FK-520分离纯化方法,该方法简单、易行,为该品种工业化生产提供一定的技术参考。     

大孔树脂富集、纯化仙茅总皂苷

目的研究大孔树脂富集、纯化仙茅总皂苷的工艺条件及参数。方法以仙茅总皂苷的洗脱率为指标,考察大孔树脂富集、纯化仙茅总皂苷的吸附性能和洗脱参数。结果仙茅提取液17.1ml(2.48mg.ml-1)上大孔树脂柱(15mm×90mm,干重2.54g),用蒸馏水100ml、50%乙醇50ml依次洗脱,仙茅总皂苷富集于50%乙醇洗脱液部分,且除杂质能力强。结论通过大孔树脂富集与纯化后,仙茅总皂苷洗脱率在96%以上。所用方法可较好地纯化仙茅总皂苷。     

大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱的研究

目的:研究用大孔吸附树脂分离纯化钩吻总生物碱中主要成分的方法和工艺条件。方法:采用不同型号的HPD系列大孔吸附树脂对钩吻总生物碱进行提取纯化,以高效液相色谱法检测钩吻总生物碱中主要成分的峰面积为指标,考察最佳工艺和参数条件。结果:HPD-500、HPD-600、HPD-800型大孔吸附树脂对钩吻总生物碱提取效果好,并得到HPD-800的最佳工艺和参数条件。结论:采用HPD-800型大孔吸附树脂及不同浓度乙醇洗脱的方法,可用于钩吻总生物碱的提取纯化。     

闪式硅胶柱色谱法分离纯化高纯度厚朴总酚的研究

目的 研究应用闪式硅胶柱色谱法从厚朴总提物中分离纯化高纯度厚朴总酚的工艺。方法 以厚朴总酚的质量分数和收率为指标,采用闪式硅胶柱色谱法从样品前处理方法、硅胶用量、洗脱溶剂、体积流量方面,优选厚朴总酚的最佳纯化工艺。结果 厚朴酚、和厚朴酚在1～100 μg/mL线性关系良好（r=0.999 9）。厚朴酚、和厚朴酚的t_R值分别为9.585、6.483 min。最佳工艺为：厚朴60%乙醇提取物,用10倍量的硅胶进行装柱,以石油醚-醋酸乙酯（10：1～10：3）作为梯度洗脱溶剂,体积流量选择5 mL/min。结论 与传统工艺相比,采用闪式硅胶柱色谱法以厚朴总提物为原料,能够快速、高效纯化得到质量分数>99.5%厚朴总酚。     

Triterpenoid saponins from the rhizomes of Anemone flaccida and their inhibitory activities on LPS-induced NO production in macrophage RAW264.7 cells

A new ursane-type triterpenoid saponin, flaccidoside IV (1), and three new oleanane-type triterpenoid saponins, flaccidosides V–VII (2–4), along with 17 known saponins (5–21), were isolated from the rhizomes of Anemone flaccida. The structures of the new triterpenoid saponins were determined based on spectroscopic analyses and chemical methods. All the isolated saponins were tested for their inhibitory activities on lipopolysaccharide-induced nitric oxide production in RAW264.7 macrophages, and several bisdesmosidic oleanane-type triterpenoid saponins (2, 7, and 10) showed significant inhibitory activities, which indicated they had potential anti-inflammatory activities under their noncytotoxic concentrations in vitro.     

龙爪槐叶和茎中挥发油的GC-MS分析及活性研究

目的 分析龙爪槐叶和茎挥发油中的化学成分,并考察挥发油的活性.方法 采用超临界CO2萃取龙爪槐叶和茎的挥发油,并用GC-MS法分析其化学成分;考察挥发油的体外抗菌及抗氧化活性.结果 从龙爪槐叶的挥发油中鉴定了49个化合物,主要有棕榈酸(7.86％)、亚油酸(5.80％)、4-乙烯基-2-甲氧基苯酚(5.32％)、4-乙基-2-甲氧基苯酚(5.20％)、Z-3-己烯-1-醇(5.11％)、叶绿醇(4.77％)和大马士酮(4.47％);从茎的挥发油中鉴定了31个化合物,主要有正己醇(5.92％)、3-烯丙基-6-甲氧基苯酚(4.63％)和3-甲基丁醛(4.12％).叶挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制作用较强,其最小抑菌浓度(MIC)分别为0.062、0.031 mg·mL-1,同时对DPPH自由基、亚硝酸盐、ABTS、超氧阴离子也有较强的清除作用.结论 龙爪槐叶的挥发油具有较强的抗菌、抗氧化活性,具开发利用价值.     

A comparative study on the effects of alpha-hexachlorocyclohexane and its metabolite beta-pentachlorocyclohexene on growth and monooxygenase activities in rat liver

The present study adds support to the hypothesis that β-pentachlorocyclohexene (β-PCH) is a primary intermediate in α-hexachlorocyclohexane (α-HCH)4 metabolism in the rat. Degradation of α-HCH to β-PCH was shown to occur in vitro and in vivo, partially by non-enzymic catalysis. β-PCH accumulated in liver and adipose tissue of α-HCH treated rats, which had received the glutathione-lowering agent diethyl maleate. β-PCH disappears from the body much more rapidly than the parent compound α-HCH: about 50 per cent of a single i.p. dose were degraded within 2.5 hr, while half-life of α-HCH is known to be approximately 130 hr. To maintain equimolar liver concentrations, β-PCH must be given in doses 100-fold higher than α-HCH. β-PCH and α-HCH were fed for a period of ten days at various dose levels to give steady-state liver concentrations. It was found that β-PCH has similar hepatic effects to α-HCH: both agents induced liver growth and a phenobarbital-type pattern of monooxygenase activities, as measured by the following substrates: aminopyrine, ethylmorphine, benzphetamine, 4-nitroanisole, aniline, benzo[α]pyrene, ethoxyresorufin and 2,5-diphenyl-oxazole. Threshold doses for these effects were 30–43 μmoles/kg/day for β-PCH and 1.0–1.7 μmoles/kg/day for α-HCH. However, on the basis of molar hepatic concentrations β-PCH was a more potent inducer than α-HCH (2–10 times). Threshold concentrations ranged from 0.4 to 0.6 nmoles β-PCH/g liver and from 0.7 to 1.5 nmoles α-HCH/g liver. β-PCH concentrations in livers of rats treated even with high doses of α-HCH were below the threshold for induction of liver growth and of monooxygenase increases. It is, therefore, highly unlikely that β-PCH is responsible for the effect of α-HCH on rat livers.