绿原酸抑制巨噬细胞激活的机制研究

目的 观察绿原酸对脂多糖（LPS）致巨噬细胞激活的影响，并探讨骨髓细胞2表达的触发受体（TREM2）蛋白在其中的作用。方法 为筛选LPS造模浓度，分别以1、10、100 ng/mL的LPS培养细胞24 h，检测细胞培养上清液中白细胞介素6(IL-6)水平和细胞中诱导型一氧化氮合酶（i NOS）蛋白表达水平。为筛选绿原酸给药浓度，将细胞分为Control组、LPS处理组和3个不同浓度绿原酸（0.01、0.1、1μmol/L）干预组，检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β水平和细胞中iNOS、TREM2蛋白表达水平以及细胞活力。为观察TREM2在绿原酸抑制巨噬细胞激活中的作用，采用TREM2小干扰RNA(TREM2-siRNA)干扰细胞TREM2蛋白表达，将细胞分为Control组、LPS处理组、绿原酸+LPS组、TREM2-siRNA+绿原酸+LPS组和乱序-siRNA(SCsiRNA)+绿原酸+LPS组，在含有上述药物的培养基/空白培养基中孵育24 h后，检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β水平以及细胞中TREM2、iNOS和核因子κB p65(NF-κB ...     

茶多酚通过调控XB130对LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响

摘要：目的:研究茶多酚（TP）对肺炎小鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响及潜在作用机制。方法:用脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S 12h建立小鼠肺泡巨噬细胞炎症模型。将MH-S细胞分为对照组（LPS处理）和TP组（LPS+TP处理）、pcDNA3.1-NC组（转染pcDNA3.1-NC+LPS处理）、pcDNA3.1-XB130组（转染pcDNA3.1-XB130+LPS处理）、si-NC组（转染si-NC+LPS处理）、si-XB130组（转染si-XB130+LPS处理）、TP+si-NC组（转染si-NC+LPS+TP处理）和TP+si-XB130组（转染si-XB130组+LPS+TP处理）,qRT-PCR检测XB130 mRNA表达,Western blot检测XB130表达以及白细胞介素6（IL-6）、IL-1β和肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌。结果:与对照组相比,TP组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著降低（P<0.05）,XB130 mRNA和蛋白表达显著升高（P<0.05）。与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-XB130组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著降低,XB130蛋白表达显著升高（P<0.05）。与si-NC组比较,si-XB130组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著升高,XB130蛋白表达显著降低（P<0.05）。与TP+si-NC组比较,TP+si-XB130组MH-S细胞IL-6、IL-1β、TNF-α分泌量显著升高,XB130 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）。结论:茶多酚可降低LPS诱导的小鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达水平,其机制与上调XB130表达有关。     

脂质微泡介导转染MIF siRNA对小鼠急性肺损伤的保护作用

目的：通过探讨超声微泡基因转染系统转染MIF siRNA对小鼠急性肺损伤的保护作用,评价超声微泡基因转染系统的有效性。方法：以脂多糖（LPS）诱导小鼠建立急性肺损伤动物模型,随机分成4组：正常对照组（Con）、LPS刺激组（LPS）、LPS＋PC＋MIF siRNA治疗组（PC＋MIF siRNA）、LPS＋WP＋MIF siRNA治疗组（WP＋MIF siRNA）;通过超声微泡基因转染系统转染MIF siRNA,运用EMSA、Western-Blot、ELISA和相关病理检测技术,观察小鼠肺组织NF-κB/IκB-α表达、炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6水平,及肺组织湿干重比和炎症病理病变,探讨MIF siRNA对小鼠急性肺损伤的保护作用。结果：WP＋MIF siRNA治疗组通过上调肺组织细胞浆中IκB-α表达,对LPS刺激激活的细胞核NF-κB有明显抑制作用、从而抑制炎症介质TNF-α、IL-1β、IL-6释放,减轻小鼠肺组织病理损伤。但PC＋MIF siRNA治疗组对LPS刺激导致的小鼠肺损伤无任何改善的治疗作用。结论：脂质微泡/PEI-Chol介导的基因转染系统能有效转染MIF siRNA,对LPS介导的小鼠急性肺损伤具有一定的保护作用。     

黑灵芝多糖对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响

目的研究黑灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法用不同浓度的黑灵芝多糖作用于正常的和LPS活化的腹腔巨噬细胞;测定巨噬细胞代谢MTT活力;Griess法测定NO的产生;ELISA法检测巨噬细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的分泌水平。结果黑灵芝多糖对细胞代谢MTT活力有增强作用;在20～160mg·L-1范围内,多糖呈剂量依赖性地促进正常的巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-1β,增强免疫;而巨噬细胞经LPS激活后,与LPS组比较,多糖不同程度地抑制NO、TNF-α、IL-1β的过量分泌。结论黑灵芝多糖能有效地增强小鼠腹腔巨噬细胞的免疫,可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的诱导作用。     

青蒿琥酯通过降低TLR4和TLR9mRNA表达保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠

目的：观察抗疟药青蒿琥酯对脓毒症模型小鼠的保护作用，探讨其保护作用可能的机制。方法：采用热灭活大肠杆菌建立脓毒症小鼠模型，观察青蒿琥酯对小鼠生存率的影响；采用ELISA法和鲎试剂动态浊度法在体研究青蒿琥酯对脓毒症小鼠血清TNF-α及内毒素水平的影响；采用小鼠腹腔巨噬细胞和RAW264．7细胞从离体水平观察青蒿琥酯对不同致炎因子LPS、CpG ODN和热灭活大肠杆菌诱导细胞因子TNF-α和IL-6释放的影响；采用生物传感器技术、流式细胞技术及RT-PCR分别研究青蒿琥酯与LPS和cpG ODN的直接结合、对细胞表面结合及内吞及TLR4和TLR9mRNA表达的影响。结果：青蒿琥酯对热灭活大肠杆菌脓毒症小鼠具有明显保护作用，可明显降低血清TNF-α及内毒素水平；青蒿琥酯在体外不能直接中和或结合LPS和cpGODN，但可抑制抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODNl826诱导的促炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放；青蒿琥酯对细胞内吞或表面结合没有影响，但可抑制热灭活大肠杆菌、LPS和CpG ODNl826诱导的RAW264．7细胞TLR4和TLR9 mRNA高表达。结论：青蒿琥酯可通过降低血清TNF-α释放及内毒素水平保护大肠杆菌脓毒症模型小鼠，其作用可能与降低TLR4和TLR9 mRNA表达有关。     

夏枯草提取物含药血清的体外抗炎活性研究

目的 研究夏枯草提取物含药血清的体外抗炎作用。方法 SD大鼠经灌胃连续给予夏枯草提取物,末次给药后,腹主动脉取血,收集含药血清。采用MTT法检测制备得到的含药血清对小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW 264.7）增殖度的影响。将RAW 264.7细胞分成阴性对照组,模型对照组和各提取物高、中、低剂量组。除阴性对照组外均给予1μg/mL的脂多糖（LPS）造成炎症模型,同时给予不同浓度、不同提取物的含药血清孵育24 h。采用ELISA法比较各组细胞上清液中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)含量。结果 夏枯草各提取物含药血清对RAW 264.7的增殖无影响。与模型对照组比较,高、中、低剂量的夏枯草氯仿提取物含药血清均能降低IL-6和NO含量（P<0.05）;与模型对照组比较,高、中剂量的夏枯草氯仿提取物含药血清还能降低IL-1β和TNF-α含量（P<0.05）。结论 夏枯草氯仿提取物含药血清能显著降低LPS诱导的炎症模型中炎性因子含量,有较好的抗炎作用。     

血吸虫虫卵抗原对巨噬细胞和肺动脉内皮细胞 IL-1β表达的影响

目的：探讨血吸虫虫卵抗原（SEA ）对巨噬细胞 RAW264．7和肺动脉内皮细胞（HPAECs）上清液中白细胞介素1β（IL‐1β）表达的影响。方法体外培养 RAW264．7细胞和HPAECs ,随机分为对照组（A组）、脂多糖＋SEA组（B组）和SEA组（C组）,采用 ELISA法检测细胞上清液中IL‐1β表达量。结果与 A 组相比,B组和 C 组细胞上清液中 IL‐1β的表达均上调（P＜0．05）;C组IL‐1β的表达低于B组（P＜0．05）。结论 SEA诱导巨噬细胞和 HPAECs上清液中IL‐1β的表达,提示SEA诱导的炎症可能参与血吸虫病相关性肺动脉高压的发生。     

二妙散对巨噬细胞分化的调控作用研究

目的 研究二妙散对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导巨噬细胞分化的影响。方法 噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法测定二妙散水煎液对细胞活力的影响;将LPS （100 ng·mL^-1）及不同浓度（0.1,1.0,10 mg·mL^-1）的二妙散水煎液共同作用RAW264.7细胞后,酶联免疫吸附法（enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA）检测上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素-10（interleukin 10,IL-10）的含量,实时荧光定量PCR （Real-timefluorescent quantitative PCR,qPCR）检测RAW264.7细胞中白介素-1β（Interleukin 1β,IL-1β）,IL-6的mRNA水平,Westernblot检测RAW264.7细胞NOS2的蛋白表达情况。结果 二妙散水煎液在0.01~100 mg·mL^-1内对RAW264.7细胞无明显毒性。与LPS诱导的模型组相比,二妙散水煎液能明显降低细胞上清液中TNF-α的含量（P<0.05）、升高IL-10的含量（P<0.05）,且可显著抑制RAW264.7细胞中M1分化标记物IL-1β、IL-6的mRNA水平（P<0.05）及NOS2的蛋白表达（P<0.05）。结论 二妙散可通过抑制巨噬细胞向M1促炎方向分化,从而发挥抗炎作用。     

中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^-1、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^-10蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^-1 mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^-10表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。     

平炎舒消膏抗炎作用及其机制研究

目的 研究平炎舒消膏（PSO）的抗炎作用并初步探讨其作用机制。方法 采用小鼠腹腔毛细血管通透性模型、大鼠足肿胀模型及大鼠棉球肉芽肿模型,观察PSO的在体抗炎作用。采用酶联免疫吸附法（ELISA）和生物测定法,观察PSO对脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞（RAW264.7）释放的白细胞介素-1（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量及生物学活性的影响,探索PSO的抗炎作用机制。结果 体内实验中,PSO显著抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性升高,明显降低大鼠自身血所致足跖肿胀,减轻大鼠棉球肉芽肿。体外实验中,PSO浓度相关性地抑制LPS诱导的RAW264.7释放IL-1β及TNF-α,降低IL-1β对胸腺细胞的增殖效应及TNF-α对L-929细胞的杀伤作用。结论 平炎舒消膏可减轻各期炎症形成,其机制可能与抑制巨噬细胞释放炎性因子有关。     

姜黄素衍生物体外抗炎及防治小鼠脓毒症的研究

目的探讨姜黄素衍生物FM0901体外抗炎作用,及其对大肠埃希菌引起的细菌脓毒症小鼠的保护作用。方法①用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞,ELISA法测定FM0901对细胞分泌TNF-α、IL-6水平的变化硝酸还原酶法测定NO的变化;②小鼠尾静脉注射大肠杆菌建立脓毒血症模型,考察FM0901对小鼠血清中TNF-α、IL-6及NO的影响,观察小鼠的活动状态及生存率。结果①FM0901显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞的TNF-α、IL-6和NO释放,并具有明显的量效关系;②FM0901降低脓毒血症小鼠血清中TNF-α、IL-6和NO的含量,改善小鼠的状态,低剂量组提高大肠埃希菌感染小鼠的生存率。结论FM0901抑制RAW264.7细胞炎症介质释放,减轻脓毒症小鼠的炎症反应,提高其生存率。     

红景天苷对脂多糖诱导的支气管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨红景天苷对脂多糖（LPS）诱导的正常人支气管上皮细胞（NHBE）损伤的保护作用及机制。方法：培养NHBE细胞,调整其细胞的密度为每毫升含有1＆#215;104个,给予不同浓度的红景天苷（3.3、10、30μg·mL-1）作用24 h,MTT检测细胞的活力,观察红景天苷在正常的情况下对人支气管上皮细胞的影响。在此基础上,以终浓度为2μg·mL-1的LPS作用NHBE细胞6 h,诱导其损伤,然后给予红景天苷24 h,MTT检测细胞活力,收集上清液,ELISA试剂盒检测炎症因子IL-6（白介素-6）、IL-1β（白介素-1β）、TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的水平,收集细胞,用Western blot方法测定细胞中的蛋白NF-κB（核因子）、MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）的表达。结果：在正常条件下,红景天苷对人支气管上皮细胞的活力无影响,没有损伤作用。红景天苷可明显降低培养液中IL-6、IL-1β、TNF-α的水平（P〈0.01）,降低细胞中NF-κB、MAPK的表达（P〈0.01）。结论：红景天苷可以通过降低IL-6、 IL-1β、TNF-α的水平来减轻LPS诱导的NHBE细胞的损伤,减轻炎症反应。     

糖皮质激素对内毒素耐受的影响

目的应用地塞米松(dexamethasone,Dex)干预小鼠内毒素耐受的形成,研究糖皮质激素对内毒素耐受的影响。方法以昆明鼠为实验对象进行分组,ⅠA组为健康对照组,ⅠB组为单次直接致死剂量脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(2LD50=8 mg/kg)对照组,Ⅱ组为标准内毒素耐受组,ⅢA组为初始LPS刺激前高剂量Dex(10 mg/kg)干预组,ⅢB组为终末致死量LPS前高剂量Dex干预组,ⅣA组为初始LPS刺激前低剂量Dex(1mg/kg)干预组,ⅣB组为终末致死量LPS前低剂量Dex干预组。完成实验处置后3 h取血标本,应用ELISA方法检测血清TNF-α和IL-10水平。结果①ⅠA组TNF-α、IL-10水平极低,ⅠB组TNF-α、IL-10水平较ⅠA组显著增高(P<0.05,P<0.01),Ⅱ组TNF-α、IL-10水平较ⅠB组显著下降(P<0.05,P<0.01),但仍高于ⅠA组。②各Dex干预组TNF-α水平与Ⅱ组比较:ⅢA、ⅣA组TNF-α水平与Ⅱ组TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05),ⅢB、ⅣB组TNF-α水平低于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05)。③各Dex干预组IL-10水平与Ⅱ组比较:ⅢA、ⅣA组IL-10水平高于Ⅱ组,差异有统计学意义(P<0.05),ⅢB、ⅣB组IL-10水平与Ⅱ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论①LPS刺激可导致小鼠体内TNF-α水平、IL-10水平升高。内毒素耐受时,小鼠体内TNF-α、IL-10水平升高的程度明显降低。②终末LPS前一定时间内予以Dex干预可以促进内毒素耐受的形成,Dex剂量过高可能不会带来更多受益。③IL-10对内毒素耐受的形成可能不具有决定作用。     

探讨感染性休克大鼠血管内皮损伤与炎症相关因子的研究

目的：探讨感染性休克时循环内皮细胞（CEC）、血管性血友病因子（vWF）与炎症相关因子的变化及其相关性。方法将SD大鼠32只随机分为空白对照组（n=8只）与感染性休克组（n＝24只）。空白对照组注射生理盐水,感染性休克组注射内毒素（LPS,10mg/kg）诱导休克。对照组即刻采血,休克组制模后1h、2h、4h采血（n＝8只）。用流式细胞仪检测血液中CEC数量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血液中vWF、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的含量。结果①与对照组相比,感染性休克组CEC数量、vWF水平明显增加,血清TNF-α、IL-1β水平亦明显升高,差异均有显著性（P＜0.01）。②随着休克时间延长,CEC数量及vWF、TNF-α、IL-1β水平持续增加,且有显著性差异（P＜0.01）。③CEC数量与TNF-α、IL-1β水平呈显著正相关（r1＝0.998,P1＝0.002;r2＝0.974,P2＝0.026）,vWF含量与TNF-α、IL-1β水平亦呈显著正相关。结论感染性休克时,血管内皮受损,炎症相关因子可能起关键作用,CECs、vWF的变化与炎症引起的血管内皮损伤有关。     

复方甘草酸苷制剂对脂多糖诱导小鼠RAW264.7细胞分泌炎症因子的调节作用

目的:研究复方甘草酸苷片剂和注射剂对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的调节作用。方法:采用脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RWA264.7,建立体外炎症模型。取复方甘草酸苷片剂和注射剂,制备供试药液。分别通过,MTT、Griess和双抗体夹心ABC-ELISA等实验,测定在不同浓度的供试药液作用下RAW264.7细胞活力以及经脂多糖诱导后的RAW264.7细胞的一氧化氮、肿瘤坏死因子TNF-α及白介素IL-1β、-6和-10等炎症因子分泌量的变化。结果:复方甘草酸苷的2种制剂药液在0～300μmol.L-1浓度范围内对RAW264.7细胞活力无影响。复方甘草酸苷注射剂药液在75、150和300μmol.L-1浓度下对经脂多糖处理的RAW264.7细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为13.8%、40.4%和53.8%,并致细胞的TNF-α分泌量降低29.8%、41.5%和52.1%,IL-1β分泌量降低39.5%、55.6%和69.6%,IL-6分泌量降低18.3%、29.5%和39.1%,但IL-10分泌量却提高了8.2%、23.8%和30.8%;而复方甘草酸苷片药液在相同浓度下对同样细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为9.8%、27.1%和37.8%,致细胞的TNF-α分泌量降低16.6%、37.0%和48.4%,IL-1β分泌量降低28.1%、47.9%和57.9%,IL-6分泌量降低13.5%、19.9%和28.2%,IL-10分泌量提高了3.9%、14.8%和23.4%。复方甘草酸苷的2种制剂对细胞分泌炎症因子的调节作用与阳性对照药地塞米松相似,其中注射剂的作用强于片剂。结论:复方甘草酸苷可剂量依赖性地显著抑制脂多糖诱导小鼠RAW 264.7细胞产生促炎因子一氧化氮、TNF-α及IL-1β和-6并促进抗炎因子IL-10的表达,这可能为其抗炎作用机制。     

丹参多糖对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的探讨丹参多糖对卡介苗（BCG）和脂多糖（LPS）诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法尾静脉注射BCG和LPS诱导小鼠免疫性肝损伤,对比小鼠脏器系数,检测血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、一氧化氮（NO）的水平以及比较肝组织匀浆中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）的含量。结果丹参多糖可显著改善免疫性肝损伤小鼠的胸腺、肝脏、脾脏系数,降低血清中ALT、AST、NO的活性以及肝组织匀浆中TNF-α、IL-1β的含量。结论丹参多糖对免疫性肝损伤具有显著的保护作用。