高糖下视网膜Müller细胞生长活性的变化

目的 测量Müller细胞不同程度的高糖培养条件下生长活性的变化,推测Müller细胞在糖尿病性视网膜病变进展中的活性变化。方法 通过组织块贴壁培养法进行视网膜Müller细胞体外培养,MTT法测定其在不同程度的高糖及作用时间下的活性OD值。结果 高糖组Müller细胞培养时间为1d时表现生长增强;培养时间延长到3d以上,高糖组内见Müller细胞折光增加,随培养时间及浓度不同程度加强,其OD值逐渐呈下降趋势。结论 视网膜Müller细胞在高糖作用下其生长受到显著的抑制。     

胰岛素对兔视网膜Müller细胞生长活性的影响

目的通过观察不同浓度的胰岛素对视网膜Müller细胞生长活性的影响,探讨其在眼底病变中所起的作用。方法运用组织块贴壁培养法培养兔视网膜Müller细胞,利用MTT法测定其在不同浓度胰岛素及作用时间下培养板中各孔的光吸收值。结果当高浓度胰岛素作用时间≥3 d,光吸收(OD)值均明显下降,并随着浓度的增高及作用时间的延长而进一步减小。结论当高浓度胰岛素作用达到一定时间时,对兔视网膜Müller细胞生长活性起着显著的抑制作用。     

正常大鼠视网膜苗勒（Müller）细胞的形态学结构特点

目的观察正常大鼠视网膜Müller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别,从形态学方面探索Müller细胞的生理功能。方法应用透射电镜技术观察正常大鼠视网膜Müller细胞形态结构。结果电镜下视网膜Müller细胞的胞体发出放射状突起,这些坚韧的突起纵贯视网膜全层,几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。结论Müller细胞不仅是视网膜的支架,而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。     

rhEPO对高糖状态下大鼠Müller细胞凋亡及对Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant hu-man erythropoietin,rhEPO)对高浓度葡萄糖作用下体外培养大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对Bcl-2和Bax表达的影响。方法提取大鼠视网膜神经细胞及胶质细胞进行混合培养,反复胰酶消化法提纯Müller细胞,随机分为空白组,高糖组及不同浓度rhEPO干预组,培养48 h后应用TUNEL法检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果 TUNEL法检测显示空白组见少量凋亡阳性细胞,高糖组阳性细胞明显增多(P<0.05),各rhEPO干预组同高糖组相比凋亡细胞明显减少(P<0.05)。酶联免疫吸附法见高糖组Bcl-2蛋白的表达降低而Bax蛋白表达增高,与对照组相比活性下降,而各浓度rhEPO干预组与高糖组相比细胞活力明显增强,Bcl-2蛋白的表达增加(P<0.05),Bax蛋白的表达降低(P<0.05)。结论高糖能够引发大鼠视网膜Müller细胞发生凋亡,而rhEPO能减少体外培养高浓度葡萄糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的凋亡,并能明显增强Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。提示上调Bcl-2及下调Bax蛋白的表达可能是rhEPO对视网膜Müller细胞抗凋亡保护作用的机制之一。     

高糖培养大鼠Müller细胞中红景天苷对炎症反应和细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨高糖培养大鼠Müller系(retinal Mtller cell line,rMC-1)细胞中红景天苷(salidroside,SAL)对炎症反应和细胞凋亡的抑制作用.方法 用高糖(35.5 mmol·L-1)培养rMC-1细胞,CCK8法检测不同浓度红景天苷对高糖环境下rMC-1细胞活力的影响,ELISA...     

神经胶质成熟因子-β诱导糖尿病大鼠视网膜Müller细胞炎症反应的机制研究

目的 研究神经胶质成熟因子-β(GMFB)对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞活化的作用及相关机制。方法SPF级雄性SD大鼠60只,采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ,55 mg/kg)制备糖尿病模型后分为STZ组、STZ+AAVGMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组,每组15只。另取15只正常大鼠作为CON组。STZ+AAV-GMFB组和STZ+AAV-GMFB+K252a组大鼠于成模8周后玻璃体腔单次注射AAV-GMFB腺病毒载体5μL。STZ+AAV-GMFB+K252a组在注射腺病毒基础上给予腹腔注射25μg/（kg·d）的K252a。12周后,免疫荧光检测GMFB在Müller细胞中的表达,免疫组织化学染色检测视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,酶联免疫吸附试验检测视网膜炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达,Western blot检测GMFB、脑源性神经营养因子（BDNF）及磷酸化酪氨酸激酶受体B(p-TrkB)蛋白相对表达水平。HE染色检测视网膜病理改变。结果 GMFB在Müller细胞中大量表达。与CON组比较,S...     

正常大鼠视网膜苗勒（M&#252;ller）细胞的形态学结构特点

目的观察正常大鼠视网膜M&#252;ller细胞的形态特征及其与神经细胞之间的区别,从形态学方面探索M&#252;ller细胞的生理功能。方法应用透射电镜技术观察正常大鼠视网膜M&#252;ller细胞形态结构。结果电镜下视网膜M&#252;ller细胞的胞体发出放射状突起,这些坚韧的突起纵贯视网膜全层,几乎占据了神经细胞所没有占据的空间。结论M&#252;ller细胞不仅是视网膜的支架,而且是神经节细胞能量的重要来源、是维持视网膜内环境的稳定及保护神经突触传递的重要的神经胶质细胞。     

检测细胞活性的MTT方法

测量细胞活性的方法对实验结果的解释有很重要的影响［1］。在细胞毒性试验、测量促细胞增殖因子的活性、检测冷冻及放射等因素对细胞的影响等方面，细胞活性的判断是至关重要的。测定细胞活性有多种方法。总结起来可分为四类：1．细胞膜完整性测定方法（如胎酚蓝拒酚染法，51Cr释放法，LDH释放法）。2．细胞功能测定方法（如ATP、ADP水平测定法，3H－TdR参入法）。3．细胞形态测定法（如细胞容积、细胞器测定）。4．细胞增殖能力测定方法（如集落形成测定法、生长率测定）[1]。多种方法虽然能对细胞活性作出不同程度的判断，但也存在…     

细胞活性MTT法定量分析中的异速生长代谢动力学

目的：分析细胞活性噻唑蓝比色法（MTT）法）定量分析中细胞代谢MTT的特殊动力学特点，建立适于临床应用的分析方法。方法：以传统的MTT法为基础，以MTT浓度、反应时间（t)及细胞数（X）为主要研究参数，观察4种肿瘤细胞系（Hep-G2等）在体外对MTT的代谢特点。采用一级代谢动力学方程【Pt=Qo[1-exp(-kt)]】为分析MTT总量（Q0）与其代谢产物甲Zhuan(Pt)关系的基本模型，采用逻辑斯谛方程【Pi=e^a βxi/(1 e^a βxi)】分析呈S－型曲线的细胞死亡率（Pi)，采用异速生长方程【Y=KX^b】表达细胞代谢活性（Y）与每孔细胞数（X）间的关系，以逐步分析MTT代谢中各项因素之间的相互作用和内在联系。结果：根据光学原理，在MTT法中吸光度（At)与甲Ahuan的量（Pt)成正比，MTT初始总量（Q0）全部代谢成甲Zhuan相当的吸光度为极限吸光度（Amax)，按本试验条件MTT50μg／孔径相当于4．0。At对反应时间（t)和Amax呈有限依赖性，提示MTT的代谢不遵从典型的一级代谢动力学规律。MTT的细胞毒性所致细胞渐进性死亡呈S－型曲线，遵从logistic模型的规律。细胞代谢MTT的能力与细胞密度成负相关，遵从异速生长规律，4种细胞系代谢MTT能力的异速生长指数b均介于0．5－0．75之间。以上3种现象各项参数之间存在内在的联系，可用平衡细胞方程（BCEq)【At=Amax{1-exp[-KX^bf(t)]}】表示，式中K为一常数，f(t)为时间函数。结论：体外细胞MTT的代谢遵从特殊的异速生长动力学规律，BCEq是对细胞代谢MTT规律的三维解析，可用三维三步MTT法进行比较准确的细胞定量分析。     

色素上皮衍生因子对高糖中小鼠视网膜毛细血管周细胞凋亡的影响

目的探讨外源性色素上皮衍生因子(PEDF)对体外高糖培养的小鼠视网膜毛细血管周细胞凋亡的影响。方法在体外培养的小鼠视网膜毛细血管周细胞无血清达氏修正依氏培养基(DMEM)中加入不同浓度葡萄糖(5.5、40、50 mmol/L),并加入浓度为1 g/L的PEDF 1μl,于4 d后检测不同糖浓度中小鼠视网膜毛细血管周细胞凋亡情况。结果未加PEDF组高糖浓度组与对照组相比,凋亡率差异有统计学意义(P<0.01),且糖浓度与周细胞凋亡率呈正相关(P<0.01)。加PEDF的糖浓度5.5 mmol/L组,周细胞凋亡率为(7.5±1.5)%,与未加PEDF的对照组(9.6±0.6)%差异无统计学意义(P=0.139)。未加PEDF高糖浓度组(40、50 mmol/L),呈现出典型的细胞凋亡特征,周细胞凋亡率为(34.8±4.6)%和(41.2±2.2)%。加PEDF高糖浓度组,周细胞凋亡率分别为(17.5±1.7)%和(19.5±3.7)%。2组相比,凋亡率差异有统计学意义(P<0.01)。结论外源性色素上皮衍生因子可有效抑制周细胞的凋亡,细胞凋亡是糖尿病视网膜病变中毛细血管周细胞早期丧失的一种方式。本研究为临床治疗糖尿病视网膜病变提供一定的理论依据。     

视网膜Müller细胞的胶质化激活在实验性青光眼大鼠模型中的作用——复旦大学神经生物学研究所杨雄里院士访谈录

正怎样把基础研究成果、技术与临床问题更紧密地结合起来?在京召开的第六届中国眼科学基础研究大会暨研究生导师论坛上,杨雄里院士开门见山地谈到了他近年来一直思考的这一问题和最大心愿。他所做的"慢性高眼压大鼠视网膜Müller细胞胶质化激活及其机制"的研究报告,反映了他和同事们在这方面所取得的一些成果。这一项目也包含了复旦大学神经生物学研究所研究人员(基础)和复旦大学附属眼耳鼻喉科医院孙兴怀院长(临床)共同合作的出色成果。     

褪黑激素对HeLa细胞生长的影响

目的　研究褪黑激素对体外培养的人宫颈癌 (HeLa)细胞活性的影响。方法　MTT测定褪黑激素的抗肿瘤活性 ;电镜观察药物对肿瘤细胞形态学的影响 ;流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞周期的影响。结果　高浓度 (2mmol·L- 1 )褪黑激素可抑制HeLa细胞的生长 ,使细胞倍增时间TD 延长 ,细胞杀伤率达 6 1 0 %。用此浓度作用 3天 ,可使S期细胞的比例减少 ,细胞形态学发生非特异性改变 ,有较多的坏死细胞和少量凋亡细胞。结论　高浓度褪黑激素抑制HeLa细胞增殖 ,可能与抑制细胞的S期有关     

多酚类化合物对MTT法测定细胞活性的影响

目的探讨多酚类化合物对MTT法测定细胞活性的影响.方法测定咖啡酸、咖啡酸苯酯、槲皮素、芦丁、橙皮苷和香叶木素等几种多酚类化合物在不同浓度条件下,对MTT法测定肝细胞活性的影响,并与3H-TdR测定结果进行比较.结果咖啡酸、咖啡酸苯酯、槲皮素、芦丁、橙皮苷剂量依赖地使MTT法测定细胞活性的结果偏高,结果与3H-TdR不一致.结论在研究多酚类化合物或含有多酚类化合物的中药对细胞活性影响时,需考虑其对MTT测定方法的影响,选用3H-TdR为佳.     

多酚类化合物对MTT法测定细胞活性的影响

目的　探讨多酚类化合物对MTT法测定细胞活性的影响。方法　测定咖啡酸、咖啡酸苯酯、槲皮素、芦丁、橙皮苷和香叶木素等几种多酚类化合物在不同浓度条件下,对MTT法测定肝细胞活性的影响,并与³H-TdR测定结果进行比较。结果　咖啡酸、咖啡酸苯酯、槲皮素、芦丁、橙皮苷剂量依赖地使MTT法测定细胞活性的结果偏高,结果与²H-TdR不一致。结论　在研究多酚类化合物或含有多酚类化合物的中药对细胞活性影响时,需考虑其对MTT测定方法的影响,选用²H-TdR为佳     

表皮细胞抑素的体外生物活性

目的观测表皮细胞抑素对人皮肤角质形成细胞系(HaCaT细胞)和鸡胚表皮细胞的抑制作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)观察表皮细胞抑素对HaCaT和鸡胚表皮细胞增殖的抑制作用。结果HaCaT和鸡胚表皮细胞(1×105/ml)培养24h后,分别加入0·25mg/ml、0·125mg/ml、0·0625mg/ml的表皮细胞抑素100μl,48、72h后显示表皮细胞抑素显著的抑制了这两种细胞的生长,并呈量效关系。结论表皮细胞抑素能显著的抑制HaCaT细胞和鸡胚表皮细胞的生长,并呈量效关系。     

雪旺细胞体外培养和纯化的新方法

目的介绍雪旺细胞体外培养、纯化的新方法。方法用0．25％Ⅳ型皎原酶和0．03％胰蛋白酶消化出生3d的SD鼠臂层神经和坐骨神经组织块40min．再将组织块贴壁培养。然后采用组织块反复种植纯化法、低浓度胰酶快速消化和差速贴壁法对雪旺细胞进行纯化。结果雪旺细胞从组织块中“爬出”速度较直接组织贴壁培养方法快，且纯度可达98％以上，细胞所受到的外界因素影响也较少。结论先用酶消化后组织块贴壁培养雪旺细胞的方法和组织块反复种植纯化、低浓度胰酶快速消化和差速贴壁法综合运用是一种简便有效的细胞培养、纯化方法，值得进一步推广。     

商陆多糖Ⅰ联合白细胞介素2对小鼠脾细胞杀瘤活性的影响

商陆多糖Ⅰ（ＰＡＰ－Ｉ），０．３～３μｇ·ｍｌ－１和小鼠脾细胞培养３～５ｄ可显著增强其杀伤Ｐ８１５肿瘤细胞活性及ＩＬ－２（２５０～５００ＩＵ·ｍｌ－１）诱导的ＬＡＫ细胞活性，最适浓度为１μｇ·ｍｌ－１。ＰＡＰ－Ｉ及ＩＬ－２和脾细胞培养的上清液对Ｐ８１５肿瘤细胞无细胞毒作用，但能增强脾细胞及ＬＡＫ细胞杀瘤活性。ＰＡＰ－Ｉ，５，１０及５０ｍｇ·ｋｇ－１，ｉｐ可增强脾细胞杀伤Ｐ８１５和Ｌ９２９细胞的活性及ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞活性。     

商陆多糖Ⅰ联合白细胞介素2对小鼠脾细胞杀瘤活性的影响

商陆多糖Ⅰ(PAP-I),0.3～3μg·ml^-1和小鼠脾细胞培养3～5d可显著增强其杀伤P815肿瘤细胞活性及IL-2(250～500IU·ml^-1)诱导的LAK细胞活性,最适浓度为1μg·ml^-1。PAP-I及IL-2和脾细胞培养的上清液对P815肿瘤细胞无细胞毒作用,但能增强脾细胞及LAK细胞杀瘤活性。PAP-I,5,10及50mg·kg-1,ip可增强脾细胞杀伤P₈₁₅和L₉₂₉细胞的活性及IL-2诱导的LAK细胞活性。     

高糖状态对人牙龈成纤维细胞生物学活性的影响

目的探讨不同浓度葡萄糖对人牙龈成纤维细胞生物学活性的影响。方法将人牙龈成纤维细胞分别接种于5.5,8.8,10,15及20 mmol/L的葡萄糖溶液中培养72 h,观察人牙龈成纤维细胞的形态、增殖以及分泌Ⅰ型胶原的情况。结果当葡萄糖浓度为10 mmol/L以上时,人牙龈成纤维细胞的形态不规则,增殖受到抑制,Ⅰ型胶原分泌减少;随着葡萄糖浓度的增大,人牙龈成纤维细胞的生物学活性受影响愈明显。结论高浓度葡萄糖可以使人牙龈成纤维细胞的形态呈现不规则,并抑制其增殖及Ⅰ型胶原的分泌。