通过获得链霉素抗性基因(str)突变株筛选梅岭霉素高产菌株

本文通过链霉素对梅岭霉素（meilingmycin）产生菌南昌链霉菌NS－41－80菌株孢子致死浓度的测定，采用诱变剂EMS四种不同诱变剂量对菌株的孢子进行诱变处理，诱变处理的孢子涂布在含链霉素致死浓度的高氏平板上，获得了大量的链霉素抗性基因（str）突变株。然后从链霉素抗性基因突变株进一步筛选到梅岭霉素高产菌株80－5．11－221，在摇瓶条件下，只产梅岭霉素不产南昌霉素，梅岭霉素活性效价达1500μg/ml，比出发菌株NS－41－80的摇瓶发酵效价855μg/ml提高了77．9％，该菌株连续传代六代进行摇瓶发酵，其F2代和F3代梅岭霉素发酵效价稳定，F4代至F6代随着传代数增加，其梅岭霉素发酵效价急速下降。通过EMS诱变剂量分别与抗药性突变率和链霉素抗性基因突变株产梅岭霉素产量的产势统计分析表明，菌株抗药性突变与产抗生素突变密切相关，产抗生素突变的EMS诱变剂量高于链霉素抗性基因突变诱变剂量。在0．03mol/L的EMS剂量作用下，菌株致死率为99．43％，而抗药性突变率为0．0440％，建立了梅岭霉素产生菌链霉素抗性基因突变筛选方法，为南昌链霉菌高产菌种选育研究作了有益的尝试，并有助于其它链霉菌属的抗生素产生菌育种研究。     

文摘

16-21 溴乙啶处理无活性链霉菌诱导抗生素的产生 抗生素产生菌经过原子质融合,可以得到新的菌落,它能产生与原株产抗生素结构不同的抗菌化合物,无活性链霉菌的原生质体再生同样可以诱导产生抗生素。本研究旨在探讨采用溴乙啶插入诱变剂处理无活性链霉菌产生抗生素的可能性。无活性链霉菌孢     

多因素复合诱变选育克拉维酸高产菌株

采用多因素连续复合诱变的方法,对克拉维酸产生菌带小棒链霉菌(Streptomyces clavuligerus)进行系列诱变,以抗生素抗性作为理性筛选标记,从含青霉素35 μg/ml的琼脂平板上筛选到青霉素抗性突变株YT-201-57#,在摇瓶实验中,对青霉素的抗性由8μg/ml提高到45 μg/ml,克拉维酸产景较出发菌株提高10.3%,且高产遗传特性经5次传代仍稳定.     

原生质体诱变及高通量筛选选育链霉素高产菌株

目的 通过诱变和筛选方法的研究，提高灰色链霉菌(Streptomyces griseus)生产链霉素的水平。方法 优化灰色链霉 菌的原生质体的生成和再生条件，并对得到的原生质体进行紫外诱变，然后利用微孔板高通量方式对获得菌株进行筛选。结果 经过诱变选育获得一株菌NP-11703，其链霉素产量在100L罐上比出发菌株提高了21.8%。结论 用紫外诱变原生质体，可以有 效提高灰色链霉菌产链霉素的能力。结合高通量筛选模型的应用，可大大加快高产菌株的筛选效率。     

N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对麦迪霉素产生菌诱变作用的研究

近年来微生物遗传变异的研究进展甚快,而在获得产量高、性质优良的抗生素产生菌的选育工作中,仍以诱变育种为主。本试验选用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍为诱变剂,考查了它对我所1974年自土壤中筛选所得的麦迪霉素产生菌—生米卡链霉菌四川变种(S.mycarofaciens var.Sichuanensisn Yan)113菌株的诱变作用。试验中研究了在不同pH与不同时间作用下,诱变剂对生米卡链霉菌的致死、表型、抗菌活力、生理缺陷等变异作用,观察了它们彼此间的相关性。     

稀有放线菌的分离

放线菌是抗生素、酶及其抑制剂等有用生理活性物质的丰富产生菌。迄今世界上已发现的抗生素大约80％由放线菌产生,其中又以链霉菌属的菌株产生的最多。这归功于人们对链霉菌生理研究的深入并进一步对链霉菌的大量筛选工作的开展。与此同时,还发现非链霉菌的放线菌也能产生抗生素,其中小单孢菌产生的庆大霉素,诺卡菌产生的利福霉素,马杜拉放线菌产生的洋红霉素     

响应面法优化紫色链霉菌发酵液的发酵工艺及其抑菌活性研究

目的抗生素的滥用带来了很大的问题,分离并寻找新的具有抑菌活性的次生代谢产物的链霉菌是开发新型抗菌药物的主要手段。方法采用滤纸片法研究紫色链霉菌发酵液的抑菌活性,并通过响应面法优化其液体发酵产抑菌活性物质的发酵工艺。结果紫色链霉菌发酵液对细菌有较强的抑菌作用,而对真菌的抑菌作用较弱、对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,对白色葡萄球菌和禽巴杆菌有较强的抑菌作用,对沙门菌、大肠埃希菌和中华根霉有较弱的抑菌作用,对枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和黑曲霉没有抑菌效果。经响应面法优化后,紫色链霉菌液体发酵的最优工艺参数为葡萄糖+可溶性淀粉20.23g/L、蛋白胨2.54g/L、NaCl 0.76g/L、K_2HPO_4 0.99g/L。结论在此条件下,紫色链霉菌发酵液的抑菌圈直径为19.63mm,比优化前提高了18.9%。本研究为筛选新的天然抗菌活性物质提供了一定的理论基础。     

达托霉素生产菌(ATCC31568)的紫外诱变和抗生素抗性筛选

目的 建立一种提高达托霉素生产水平的方法.方法 以玫瑰孢链霉菌(ATCC31568)为出发菌株,利用紫外诱变结合抗生素抗性筛选以提升达托霉素生产水平.结果 通过对致死率和正突变率的考察,确定紫外诱变时间为45s,利福平和庆大霉素的合适筛选浓度分别为1.4μg/mL、1.0μg/mL,得到的突变株经摇瓶发酵后,采用高效液相色谱仪(HPLC)对最终发酵液进行检测.筛选到的突变株Ge-27最高产量达到79.44 mg/L,比原始菌株提高了42.2％.结论 采用紫外诱变结合抗生素抗性筛选得到了达托霉素合成水平提高的菌株.     

链霉菌702抗药性致死突变标志微波诱变筛选研究

目的 筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株.方法 分别以链霉菌702菌株为试验材料和以庆大霉素为敏感抗生素建立链霉菌702孢子致死突变标志的微波诱变筛选模型,通过微波对链霉菌702菌株孢子进行不同时间的诱变处理,将诱变处理后的孢予悬液涂布于含致死浓度的庆大霉素的PDA平板培养基上,获得抗庆大霉素突变株,分别挑取单个抗药性突变菌株进行摇瓶初筛和复筛.生物效价测定采用一剂量法.结果 微波处理30s对菌株的致死率可达70.53%,抗药性突变率高达23.13%,获得的抗药性突变株经过摇瓶初筛和复筛,获得高产突变株20-29-47菌株,产抗真菌活件物质的摇瓶发酵单位达到1478μg/ml,比出发菌株发酵单位986μg/ml提高T49.9%.结论 采用抗药性致死突变标志的微波诱变筛选模型可以获得产抗真菌活性物质的链霉菌702高产菌株.     

海洋放线菌NRPS基因的筛选

目的 建立快速、高效的NRPS基因筛选体系,从海洋微生物中筛选具有潜在合成多肽类次级代谢产物的活性菌株,为定向获得新的含氨基酸抗生素奠定基础.方法 采用选择性培养分离获得海洋放线菌,通过快速抗菌活性初筛,设计特异性引物利用PCR技术对初筛活性菌株进行NRPS基因筛选,进一步对阳性菌株进行16S rDNA排重.结果 利用建立的NRPS基因筛选体系对初筛具有抗菌活性的295株放线菌进行筛选,得到12株阳性菌株,分别属于小单孢菌属、链霉菌属和疣孢菌属.结论 利用PCR技术建立了快速、高效的NRPS基因筛选体系,为多肽类活性化合物的获得提供了基因学的依据.