甘草酸协同麻黄碱的平喘作用机制研究

目的：探讨甘草酸协同麻黄碱的平喘作用机制。方法：利用基于CHO细胞的β2肾上腺素受体（β2-AR）激动药活性评价体系,豚鼠离体气管收缩和组胺引喘的活体动物模型观察甘草酸和麻黄碱联用的协同平喘效果。结果：甘草酸自身不能引起离体气管平滑肌舒张,平喘效果也不显著,但与麻黄碱联用可以通过提高β2-AR的激动效果,明显增强平喘效果。结论：甘草酸通过调节β2-AR信号通路增强麻黄碱的作用效果,两者联用有良好的协同作用。     

甘草酸对大鼠空肠收缩作用的研究

目的分析甘草酸对胃肠收缩的作用。方法制作大鼠离体空肠标本,记录不同浓度的甘草酸对大鼠离体空肠平滑肌正常收缩的影响。结果甘草酸剂量依赖性地促进了大鼠离体空肠的平滑肌收缩;甘草酸对肠平滑肌的兴奋作用可分别被M受体阻断药阿托品及钙通道阻滞剂维拉帕米阻断。讨论甘草酸明显促进大鼠离体空肠平滑肌收缩作用,呈剂量依赖性;在4种不同低收缩状态下,其兴奋作用仍然存在。     

甘草酸苷作用机制的研究进展

甘草酸苷是甘草的主要活性成分,多用于治疗各种原因所致的肝细胞损伤,同时也经验性地用于急、慢性炎症和免疫性疾病的辅助治疗。目前,已知甘草酸苷具有非特异性的细胞膜保护作用,可抑制补体激活和下调多种炎症因子水平等。近年来,随着对甘草酸苷作用机制的深入研究,发现甘草酸苷可以改善线粒体和内质网应激状态,直接与HMGB1结合下调多种炎症因子的水平,进而减轻细胞损伤和凋亡,并能通过对T细胞亚群及树突状细胞的调节起到平衡机体免疫功能的作用。本文就近年来甘草酸苷作用机制的研究进展进行综述。     

基于基因芯片技术探讨脑缺血病理分子基础及其药物作用机制的研究进展

基因组学是随分子生物学发展应运而生的一门重要学科，是从整体水平对基因组高通量、高集成、高平行性、微型化和自动化的综合分析。脑卒中是危害人类健康的重要脑血管疾病之一。应用基因芯片技术对脑卒中进行研究，不仅可在基因水平上揭示疾病的本质，还有助于全面探讨脑卒中的病理分子机制，发现药物治疗靶点，开发治疗新药。本文以基因芯片技术运用于实验性脑缺血的体内研究成果为重点，并结合本实验室的工作探讨脑缺血病理分子基础及其药物作用机制的研究进展。     

甘草酸二铵抗抑郁作用机制的研究进展

抑郁症是一种广泛分布的严重精神病。全世界的患病率大约为17%,且持逐年增长趋势。抑郁症不仅影响人们在工作、学习和日常生活中的表现,也严重影响了生活满意度和幸福感。现代药理研究表明甘草具有抗抑郁作用。甘草酸二铵是甘草中主要有效成分甘草酸的铵盐,是已上市药品,是一种活性较强的治疗慢性肝炎药,具有较强的抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的作用。甘草酸二铵通过减少氧化应激引起的细胞损伤、减少细胞凋亡的发生、改善炎症因子水平、抑制丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、降低转化生长因子水平发挥抗抑郁作用。     

利用基因芯片技术研究一氧化碳对小鼠脑基因表达的影响

目的　研究 2 5mmol·L- 1一氧化碳小鼠吸入染毒 72h后 ,对小鼠大脑和小脑基因表达的影响。方法　 6 0只成年雄性昆明种小鼠随机分为对照组和染毒组 ,30只 /组。采用上海博星基因芯片有限公司提供的MGEC 4 0S表达谱芯片检测差异表达基因。结果　与对照组比 ,染毒组表达差异在 2倍以上的基因大脑和小脑共 12 7个 ,大脑为 4 8条 ,小脑为 79条。其中 ,大脑差异表达下调的有 13条 ,表达上调的有 35条 ,分别占 2 7%和 73% ;小脑差异表达下调的有 4 3条 ,表达上调的有 36条 ,分别占 5 4%和4 6 %。大脑和小脑共同表达的基因有 31条 ,其中 ,1条为表达下调 ,30条为表达上调 ,分别占到了 3%和97%。结论　一氧化碳可以影响到小鼠脑中多种基因的表达 ,主要影响的基因类别包括蛋白质翻译合成基因、细胞周期调控基因、细胞生长基因、免疫调节类基因等     

甘草酸对大鼠胰腺纤维化的干预作用及其机制

目的　观察甘草酸对大鼠实验性胰腺纤维化的干预作用及其可能机制。方法　♂SD大鼠 ,应用胆胰管内注射2 %三硝基苯磺酸 (TNBS)诱导胰腺纤维化 ,甘草酸干预组(n =10 )在制模后 3d尾静脉注射甘草酸 ,剂量为 8mg·kg- 1体重 ,每天 1次 ,持续 4wk ,同时设立对照组 (n =8)。 4wk后处死动物抽取血液 ,分别采用酶动力法和放射免疫法检测血清淀粉酶和透明质酸 ;部分胰腺组织常规石蜡包埋切片 ,HE染色评定炎症反应的程度 ,改良V G染色观察胶原纤维 ,硫堇染色观察肥大细胞 ,TGF β1、α SMA和Ⅰ型胶原采用免疫组织化学染色 ;部分胰腺组织冻存于液氮 ,用于Westernblot检测α SMA的表达。结果　甘草酸干预组血清淀粉酶和透明质酸与对照组相比未见明显的差异 ;肥大细胞的数量和慢性脱颗粒较对照组明显减少 ;α SMA蛋白的表达明显较对照组下调 ;腺泡细胞炎症反应和纤维化程度较对照组明显减轻 ;胶原纤维染色显示 ,干预组小叶内明显减少 ;免疫组化染色显示TGF β1和Ⅰ型胶原表达较对照组下调。结论　甘草酸可能通过抑制肥大细胞的聚集活化和保护腺泡细胞膜的稳定 ,减少腺泡细胞的破坏 ,抑制胰腺星状细胞的活化增殖达到控制纤维化的发生     

甘草酸的抗肿瘤作用

发现甘草酸（glycyrrhizin,即glycyrrhizicacid）的抗肿瘤作用始于20世纪50年代末至60年代初,然而直到20世纪90年代后才有了很大进展。本文对20世纪90年代以来的有关研究进展作一综述。     

双波长-高效液相色谱法同时测定镇咳宁糖浆中盐酸麻黄碱、甘草苷、甘草酸的含量

目的建立同时测定镇咳宁糖浆中盐酸麻黄碱、甘草苷和甘草酸含量的方法。方法色谱柱:Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-体积分数为0.1%磷酸溶液梯度洗脱;检测波长:205 nm(盐酸麻黄碱)、237 nm(甘草苷与甘草酸);流速:1.0 mL.min-1。结果盐酸麻黄碱、甘草苷、甘草酸质量浓度分别在6.222～414.8 mg.L-1、2.335～116.7 mg.L-1、12.45～415.0 mg.L-1内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均为0.999 9,平均回收率分别为98.92%、103.0%和98.24%。结论本方法操作简便,结果可靠,可作为镇咳宁糖浆的质量控制方法。     

甘草酸对血清和组织胺诱发的大鼠气道平滑肌细胞增生的影响

目的　观察甘草酸对血清和组织胺诱发的大鼠气道平滑肌细胞 (ASMC)增生的影响。方法　MTT法、细胞计数法和流式细胞术检测体外培养的ASMC的光密度、细胞数和细胞周期。结果　①在含 10 0g·L-1FCS的培养液中加入 6×10 -5mol·L-1的甘草酸可使A570 的增速增加 ,而加入 384×10 -5mol·L-1和 15 36× 10 -5mol·L-1却使A570 的增速减慢 ;在含 10 -2 mol·L-1组织胺的培养液中加入甘草酸使A5 70的增速减慢 ,浓度越大作用越明显。②在含 10 0g·L-1FCS的培养液中加入 6× 10 -5mol·L-1的甘草酸可促进细胞增生 ,而加入 384× 10 -5mol·L-1和 15 36× 10 -5mol·L-1则抑制细胞增生 ;在含 10 -2 mol·L-1组织胺的培养液中加入甘草酸 ,细胞增生受到抑制 ,浓度越大作用越明显。③在 10 0g·L-1FCS或 10 -2 mol·L-1的组织胺中培养 96h ,随着甘草酸浓度的增加 ,G1期细胞数增多 ,S期和G2 +M期细胞数减少。结论　①对FCS刺激引起的ASMC增生 ,低浓度甘草酸有促进作用 ,高浓度有抑制作用。②对组织胺刺激引起的ASMC增生 ,低浓度和高浓度甘草酸都有抑制作用     

橙皮苷和辛弗林对胃平滑肌细胞的作用

目的　观察橙皮苷、辛弗林对游离的胃平滑肌细胞的作用。方法　利用Ⅱ胶原酶消化所得细胞悬液 ,用显微测微尺随机测量 2 5～ 5 0个细胞长轴长度。对比给药前后细胞收缩活动变化 ,细胞收缩活动变化以相对于对照细胞长度增加或缩小的百分数表示 ,负数表示收缩 ,正数表示松弛。结果　橙皮苷对胃平滑肌细胞没有明显影响。辛弗林对胃平滑肌细胞的松弛作用较迅速 ,6 0s内达到最高峰。在剂量为0 0 0 1～ 1g·L-1范围内 ,对胃平滑肌细胞的松弛有逐渐增强的作用 ,呈剂量 效应关系。辛弗林能拮抗乙酰胆碱的作用(P <0 0 5 ) ,有明显的拮抗肾上腺素、5 HT、氯化钡的作用(P <0 0 1)。能加强酚妥拉明的作用。结论　表明橙皮苷对胃肠运动没有作用。辛弗林对胃运动具有调节作用 ,主要通过平滑肌细胞膜上的乙酰胆碱受体、肾上腺素α受体、5 HT受体调节 ,以及对平滑肌细胞的直接作用。进一步肯定辛弗林为枳壳作用胃肠运动的有效成分之一。     

麻黄碱与总皂苷对豚鼠气管平滑肌松弛的协同作用

目的　探讨麻黄碱与总皂苷在平喘作用方面有无协同作用。方法　将麻黄碱与总皂苷分成麻黄碱 +总皂苷组、总皂苷组和麻黄碱组进行离体豚鼠气管平滑肌松弛作用强度比较。结果　麻黄碱 +总皂苷组直接松弛豚鼠离体气管平滑肌的作用强度是麻黄碱组的 3 5倍 (P <0 0 5 ) ,总皂苷组无作用 (P >0 0 5 )。麻黄碱 +总皂苷组对氨甲酰胆碱(carbamylcholine,CCH)引起气管平滑肌收缩反应的解痉强度与麻黄碱组相同 ,但两者都比总皂苷组强 (P <0 0 5 )。麻黄碱 +总皂苷、麻黄碱和总皂苷组预先处理气管平滑肌均呈浓度依赖抑制CCH收缩反应 ,三者之间的作用强度无差异。结论　总皂苷对麻黄碱在直接松弛气管平滑肌和抑制CCH引起的气管平滑肌收缩方面具有明显的协同作用 ,但在解痉方面的协同作用不明显     

多沙唑嗪抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨多沙唑嗪对人血管平滑肌细胞(VSMCS)增殖的抑制作用。方法将0.1、1、10、25μmol/L的多沙唑嗪(Doxazosin,Dox)作用于体外培养的VSMCS,采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在1、10、25μmol/L的Dox作用下,VSMCS的3H-TdR的掺入量分别为(983±58.7)cpm、(730±54.9)cpm、(500±64.1)cpm,显著低于对照组的(1270±96.5)cpm(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论多沙唑嗪能够抑制人VSMCS的增殖,对经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)后再狭窄可能有防治作用。     

雌激素对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :观察雌激素对血管平滑肌细胞 (SMC)凋亡的影响。方法 :以大鼠为对象 ,观察正常对照组、去卵巢组及去卵巢 +雌二醇治疗组大鼠血管平滑肌细胞凋亡的关系。结果 :雌二醇治疗组血管平滑肌细胞凋亡较去卵巢组相比明显减少(P>0 .0 5 ) ,与正常对照组比较差别无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :雌二醇对血管平滑肌细胞的凋亡有抑制作用 ,可能是其预防动脉粥样硬化的机制     

钾通道阻滞剂对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨电压依赖性延迟整流钾通道(K_V)、Ca²⁺激活钾通道(K_Ca)和ATP敏感性钾通道(K_ATP)对大鼠支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖的影响。 方法应用免疫细胞化学、MTT微量比色分析法及流式细胞术,观察K_V,K_Ca和K_ATP对培养中大鼠BSMC增殖的影响。结果K_V阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)显著促进大鼠BSMC增殖细胞核抗原的表达,提高BSMC吸光度值,使S+G₂M期细胞数显著增多,并显著提高基础状态下BSMC内Ca²⁺浓度,而K_Ca阻断剂四乙铵(TEA)和K_ATP阻断剂格列本脲(Glib)均无此效应。 结论大鼠BSMC K_V活性的抑制,可提高细胞内Ca²⁺浓度,促进细胞的增殖,而K_Ca和K_ATP对BSMC的增殖均无明显影响。     

半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察半胱氨酸(Cys)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响.方法 采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡.RT-PCR法检测bax mRNA的表达.结果 体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和10001μmol/L Cys的培养液中孵育24h后的吸光度(A)值均高于对照组(P<0.05),表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时.VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡.结论 浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡.     

Humic acid induces G1 phase arrest and apoptosis in cultured vascular smooth muscle cells

Humic acid (HA) in well water used by the inhabitants for drinking is one of the possible etiological factors for Blackfoot disease (BFD). In this study, the ability of HA to inhibit cell cycle progression and induce apoptosis in cultured smooth muscle cells (SMCs; A7r5) was investigated. Treatment of the SMCs at various HA concentrations (25-200 microg/mL) resulted in sequences of events marked by apoptosis, as shown by loss of cell viability, morphology change, and internucleosomal DNA fragmentation. HA-induced apoptotic cell death that is associated with loss of mitochondrial membrane potential (Delta Psi m), cytochrome c translocation, caspase-3, -8, and -9 activation, poly ADP-ribose polymerase (PARP) degradation, dysregulation of Bcl-2 and Bax, and upregulation of p53 and phospholyrated p53 (p-p53) in SMCs. Flow cytometry analysis demonstrated that HA blocked cell cycle progress in the G1 phase in SMCs. This blockade of cell cycle was associated with reduced amounts of cyclin D1, CDK4, cyclin E, CDK2, and hyperphosphorylated retinoblastoma protein (pRb) in a time-dependent manner. Apparent DNA strand breaks (DNA damage) were also detected in a dose-dependent manner using Single-cell gel electrophoresis assay (comet assay). Furthermore, HA induced dose-dependent elevation of reactive oxygen species (ROS) level in SMCs, and antioxidant vitamin C and Trolox effectively suppressed HA-induced DNA damage and dysregulation of Bcl-2/Bax. Our findings suggest that HA-induced DNA damage, cell cycle arrest, and apoptosis in SMCs may be an underlying mechanisms for the atherosclerosis and thrombosis observed in the BFD endemic region.     

吗啡对豚鼠支气管平滑肌Kv通道的影响

目的探讨吗啡对豚鼠支气管平滑肌(guinenpigbron-chialsmoothmuscle,GPBSM)Kv通道的影响。方法用全细胞膜片钳技术研究吗啡对急性分离GPBSMKv(电压依赖性延迟整流钾通道)活性的影响,用Westernblot和RT-PCR技术,通过图像分析系统和凝胶成像系统分析吗啡对体外培养GPBSM的Kv1·5mRNA及蛋白质表达的影响。结果吗啡能抑制急性分离GPBSM的Kv通道电流和抑制抑制培养GPBSMKv1·5mRNA及蛋白质的表达,吗啡受体阻断剂盐酸纳洛酮和PKC阻断剂Ro31-8220能明显阻止这种效应。结论吗啡收缩支气管平滑肌可能是活化支气管平滑肌细胞膜的PKC,从而抑制其cAMP介导的Kv通道电流活性,下调Kv1·5mRNA及蛋白质表达水平完成的。