耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶基因检测及其与整合子的关系研究

目的 了解临床分离铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征;调查金属β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌的流行状况和基因型以及与整合子之间的关系.方法 收集广东省4家三甲医院临床分离的铜绿假单胞菌,采用K-B纸片扩散法进行药敏试验;双纸片协同法和增效法筛选金属β-内酰胺酶表型阳性菌株;设计合成金属β-内酰胺酶和整合子的引物序列进行PCR扩增和测序分析,检测金属β-内酰胺酶基因型并分析其与整合子之间的关系.结果 287株铜绿假单胞菌对11种抗生素的耐药率分别为:亚胺培南(33.80％),美罗培南(33.45％)、头孢他啶(27.87％)、头孢吡肟(36.24％)、庆大霉素(45.30％)、阿米卡星(36.94％)、环丙沙星(33.10％)、左氧氟沙星(37.63％)、氨曲南(47.39％)、哌拉西林(35.19％)、哌拉西林/三唑巴坦(28.57％);多重耐药菌占34.84％(100/287),泛耐药菌株占9.41％(27/287);共有9株铜绿假单胞菌呈金属β-内酰胺酶表型阳性,其中2株产IMP-9型MBL,1株产IMP-25型MBL,4株产VIM-2型MBL;有8株金属β-内酰胺酶表型阳性菌株携带了Ⅰ类整合子,但只有2株成功扩出可变区,其中1株携带了IMP-9基因.结论 铜绿假单胞菌耐药情况严重,本地区铜绿假单胞菌中MBLs的基因型以IMP-9、IMP-25和VIM-2为主;MBLs的基因环境较为复杂,部分MBLs为整合子所携带.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究

目的:研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IMPRPa)β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的存在情况。方法:对60株临床分离的IMPRPa,采用聚合酶链(PCR)方法检测β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因IMP、VIM、OprD2,并对部分IMP、VIM基因的PCR扩增产物进行序列分析。结果:60株受试菌中,β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因检测阳性为:IMP7株,VIM18株,有3株菌同时携带IMP、VIM基因,IMP、VIM基因序列分析为IMP-1型和VIM-2型,OprD2基因缺失29株。结论:OprD2蛋白通道缺失和产金属β-内酰胺酶是IMPRPa耐亚胺培南的主要机制。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属酶基因blaIMP-1、blaVIM的检测

金属酶是一种含金属的β-内酰胺酶，能水解包括碳青酶烯抗生素在内的绝大多数β-内酰胺类抗生素，也是碳青霉烯类抗生素耐药的重要机制之一。铜绿假单胞菌所产生的金属酶主要为获得性金属酶，分为两类：一类为IMP型金属酶，分为IMP-1-8型，以IMP-1型常见；一类为VIM型金属酶分为VIM-1-3型，各型问具有高度同源性。了解我市铜绿假单胞菌产酶情况。将有助于抗生素的合理使用及对耐药铜绿假单孢菌的流行进行有效的控制。     

铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子及携带的耐药基因研究

目的 了解整合子在广州地区铜绿假单胞菌中的分布状况及其主要类型,研究Ⅰ类整合子的结构特征并探讨其与细菌多重耐药之间的相关性.方法 采用PCR检测3类整合子整合酶的编码基因,并扩增整合子的可变区,运用DNA测序技术分析整合子可变区的耐药基因及其排列顺序,利用生物信息学的方法对检测到的可变区基因序列进行比对分析.结果 在20株产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌中,15株检测到Ⅰ类整合子,未检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合子,其中一株铜绿假单胞菌整合子全长序列含有Ⅰ类整合子整合酶、Aac A4氨基糖甙乙酰转移酶、IMP-25金属β-内酰胺酶、OXA-30 β-内酰胺酶和Cat B3氯霉素乙酰转移酶的编码基因及其相应的基因重组位点,GenBank登录号为EU588392,其中IMP-25为一个新的金属β-内酰胺酶亚型.结论 广州地区铜绿假单胞菌中存在的整合子类型是Ⅰ类整合子,并且该整合子可变区携带多种耐药基因盒,其中一个是金属β-内酰胺酶新亚型IMP-25,在分子水平上阐述了I类整合子参与铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性和多重耐药性.     

具有一种新blaIMP等位基因blaIMP—7的碳青霉烯耐药性铜绿假单胞菌引起加拿大医院内爆发

1995～ 1997年在加拿大几家医院出现碳青霉烯耐药性铜绿假单胞菌爆发 ,获得的铜绿假单胞菌临床分离株表现出对碳青霉烯类、氨基糖苷类、环丙沙星和头孢他啶的耐药性 ,而对哌拉西林敏感。通过对 bla IMP和 bla VIM的多聚酶链式反应分析 ,表明耐药菌株产生了一种新的整合子相关性金属β-内酰胺酶 ,但用标准bla IMP特异性引物不能扩增其耐药基因。尽管 bla IMP特异性引物最初是为扩增 bla IMP-1而设计 ,但也能用于扩增 bla IMP-2 、bla IMP-3 和 bla IMP-4。通过基因克隆和序列分析证实 ,该耐药基因编码一种 B组β-内酰胺酶 ,与已知…     

某三甲医院呼吸科铜绿假单胞菌耐药性及流行病学 10年间变化

目的 探讨成都医学院第一附属医院10年间呼吸科铜绿假单胞菌的耐药性和流行病学变化特征.方法 收集2007—2008年和2017—2018年间成都医学院第一附属医院呼吸科住院病人临床标本分离出的铜绿假单胞菌,采用琼脂平板倍比稀释法测定抗菌药物对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度,多位点序列分型分析菌株的基因型差异,PCR扩增测定菌株的碳青霉烯酶基因.结果 2007—2008年和2017—2018年间从呼吸科住院病人分别收集134株和85株铜绿假单胞菌,其检出率为4.3％和2.0％.2007—2008年间铜绿假单胞菌对抗菌药物普遍耐药,高于2017—2018年间菌株的耐药率(P<0.01).MLST结果 显示2007—2008年间菌株具有15个基因型,2017—2018年间菌株具有9个基因型,其中ST235、ST111和ST175为最流行的基因型,菌株的基因型10年间没有明显变化.2007—2008年间共有14株耐碳青霉烯铜绿假单胞菌携带金属β-内酰胺酶基因IMP-4,5株携带金属β-内酰胺酶基因VIM-2,而2017—2018年间仅2株菌携带IMP-4基因,无其他金属酶基因存在.结论 该院呼吸科铜绿假单胞菌耐药性具有明显下降的趋势,MLST基因型谱稳定遗传,且IMP和VIM仍是铜绿假单胞菌的一个重要耐药机制.     

双纸片增效试验筛查金属β-内酰胺酶

目的：建立简便的双纸片增效试验,筛查产金属β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌.方法：3组不同底物的双纸片增效试验检测金属β-内酰胺酶,比较其结果.结果：75株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌分别应用亚胺培南、头孢他啶、氨曲南和其EDTA复合纸片检出金属β-内酰胺酶阳性株分别为13,11,10株,阳性率分别为17.3%,14.7%和13.3%;联合应用3组底物,检出阳性株18株,阳性率为24.0%.结论：双纸片增效试验可作为金属β-内酰胺酶的初筛试验.     

259株铜绿假单胞菌耐药性及产金属β-内酰胺酶情况分析

目的:分析院内感染铜绿假单胞菌的药敏谱和金属β-内酰胺酶的产生情况.方法:对2009年度医院内感染铜绿假单胞菌259株,用VITEK 2 compact全自动微生物分析系统检测其对17种抗生素的药敏谱,用双纸片协同试验检测金属β-内酰胺酶.结果:铜绿假单胞繭对AMP、FTN、CTT、SAM等耐药率较高,对TOB、AMK、GEN、TZP等较敏感;金属β-内酰胺酶携带率为5.0%,产酶繭株耐药情况严重.结论:结合细菌药谱慎用碳青霉烯类,合理利用抗生素,对治愈铜绿假单胞菌引起的感染及控制产金属β-内酰胺酶菌株的流行具有重要意义.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶类型的研究

目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其它抗菌药物的耐药性及其产金属β-内酰胺酶的类型。方法收集同济医院2004年1月-9月耐亚胺培南铜绿假单胞菌29株，琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）；通过改良Hodge试验、双纸片协同试验（DDST）、聚合酶链反应（PCR）、序列分析等方法分析金属β-内酰胺酶类型，紫外分光光度法测定金属β-内酰胺酶的活性。结果29株细菌均为多重耐药株。11种常用抗菌药物中，仅对哌拉西林／三唑巴坦和阿米卡星敏感率较高，分别为69．7％和60．6％。29株菌中有2株产VIM-2金属β内酰胺酶（6．9％）。结论本院耐亚胺培南铜绿假单胞菌流行主要为医院感染所致，且里多重耐药，有2株发现产VIM-2型金属β-内酰胺酶．     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

广州地区产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的再调查

目的 调查广州地区部分医院2007年10月到2008年11月的铜绿假单胞菌泛耐株,筛榆出其中产IMP-9金属酶的菌株并分析其同源性,对比2005-2007年初广州地区多家医院曾出现的产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的克隆株,分析近期广州地区是否还有该流行株的存在.方法 Q-PCR筛选产IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌,ERIC-PCR对产酶株进行同源性分析.结果 从2007年10月到2008年11月收集广州7家大型医院的269株铜绿假单胞菌泛耐株,共检测出携带IMP-9金属酶的铜绿假单胞菌10株,均来自同一医院.ERIC-PCR检测,10株均为同一基因型的克隆株,但与前期曾出现的产IMP-9金属酶克隆株无同源性.结论 产IMP-9金属酶铜绿假单胞菌的院内克隆传播仍然存在,而医院间的传播在本次调查中没有发现.因此,仍需继续加强对铜绿假单胞菌定植患者的监控和加强院内感染的管理控制.     

多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类相关耐药基因研究

目的 调查我院2005年临床分离多重耐药铜绿假单胞菌（PA）的耐药性分析并探讨其耐药基因的存在状况。方法对31株临床分离的铜绿假单胞菌用纸片扩散法检测其药敏表型，采用聚合酶链反应（PCR）法检测β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因，并与相关药敏表型比较。结果31株铜绿假单胞菌对16种抗菌药物的耐药率为48．4％～100％；β-内酰胺酶编码基因PER、VIM、CARB、IMP、TEM、OXA-10的检出率分别为6．4％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％，未检出GES、SHV、VER基因，31株外膜通道蛋白OprD2基因缺失，检出率为100％。结论本院多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药主要与外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关。     

马来西亚地区耐碳青霉烯铜绿假单胞菌产生的β—内酰胺酶IMP—7

铜绿假单胞菌是院内获得性感染的主要原因 ,广范的机会性感染不断增加 ,对抗生素的高度固有耐药性以及多药耐药的发展带来了严重的治疗问题。广谱β-内酰胺类如碳青霉烯是治疗铜绿假单胞菌感染的有效药物 ,亚洲、欧洲、加拿大均已有报道 ,但随着频繁使用导致了铜绿假单胞菌对碳青霉烯耐药的发展 ,耐药株产生了ＩＭＰ型金属 β -内酰胺酶 ,马来西亚药物中心报道对筛选的 5 0株耐碳青霉烯铜绿假单胞分离株的研究 ,并监测了金属 β -内酰胺酶的流行。由Ｓｅｎｄａ等的方法筛选ｂｌａＩＭＰ特异性引物的分离株 ,5 0株铜绿假单胞菌中仅有 1株 (Ｉ…     

我院临床分离的26株铜绿假单胞菌耐药性及其所产β-内酰胺酶的基因型分析

目的:了解我院临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及其所产β-内酰胺酶的基因型。方法:采用VITEK32型全自动细菌鉴定仪对临床分离的26株铜绿假单胞菌进行细菌鉴定,采用琼脂扩散法检测其对16种常用抗菌药物的耐药性,采用聚合酶链反应法对其进行基因检测,靶基因为TEM、SHV、OXA、PER、VEB、GES、CTX-M-1等7种β-内酰胺酶基因,然后对检测的阳性产物进行测序,并对照GenBankDNA序列数据库确定基因类型。结果:26株细菌均鉴定为铜绿假单胞菌,耐药性分析结果表明其对其中12种常用抗菌药物有不同程度的耐药性,通过基因对照确定26株铜绿假单胞菌所产的β-内酰胺酶均为TEM-1型基因。结论:本组26株铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶可能主要为TEM-1型基因,具有多重耐药性。     

18株铜绿假单胞菌的耐药谱和ERIC-PCR分型

目的研究产金属β-内酰胺酶(MBL)的铜绿假单胞菌感染的菌株同源性和耐药谱。方法用纸片协同法筛选出产MBL铜绿假单胞菌株;琼脂扩散法检测MBL阳性株对10种抗菌药物的药敏结果;用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)方法确定菌株之间的同源性。结果纸片协同法试验检测到18株MBL阳性菌株,它们对头孢噻肟、头孢曲松、替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦和头孢他啶完全耐药,对10种抗菌药物呈现7种耐药模式;ERIC-PCR结果显示,18株MBL阳性株呈现4种基因型,15株为同一基因型。结论该院ICU内产MBL铜绿假单胞菌在2005年第二季度出现暴发流行。     

186株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检测及药敏分析

目的:了解铜绿假单胞菌对抗生素的耐药情况,为临床治疗提供依据。方法:收集临床不同感染部位标本中分离到的186株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定结果分析。结果:186株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐药5种以上的有72株,占38.7%,其中β-内酰胺酶阳性的60株,占32.4%,β-内酰胺酶阴性的有12株,占6.3%。结论:产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重,目前亚胺培南是治疗铜绿假单胞菌感染的首选药物,其次是丁胺卡那和头孢他啶。     

下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

目的探讨下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制。方法取下呼吸道标本临床分离的铜绿假单胞菌80株,经纸片扩散法（K-B法）检测耐药性。采用双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶,采用标准纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,采用酶提取物三维试验法检测头胞菌素酶（AmpC酶）,采用氰氯苯腙对主动外排泵出表型特征的影响检测细胞内主动外排泵出机制。结果80株临床分离菌株中48株对亚胺培南耐药,32株对亚胺培南敏感。48株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产β-金属酶6株,检出率12.5%;检出产ESBLs11株,AmpC酶8株,其中同时产AmpC酶和ESBLs共4株,检出率分别为22.9%、16.7%和8.3%;检出9株（18.8%）菌株存在细胞内主动外排泵出的耐药机制。结论产生金属β-内酰胺酶、ESBLs和AmpC酶以及存在细胞内主动外排泵出机制是我院下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因。     

儿童感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌耐药分析

目的:了解我院患儿感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的情况并分析其耐药性.方法:标本纯培养后采用法国梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定系统鉴定到种,协同法检测铜绿假单胞菌产生金属β-内酰胺酶的发生率,K-B法测定铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性.结果:分离的198株铜绿假单胞菌检出36株产金属β-内酰胺酶,占18.18%(36/198).产酶株对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星的耐药率较高(远远高于不产酶菌株),对阿米卡星的耐药率相对较低,对头孢哌酮/舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感.结论:产金属β-内酰胺酶是我院患儿感染的铜绿假单胞菌对碳青霉烯孢类抗菌药物耐药的机制之一,实验室重视对金属β-内酰胺酶的检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少细菌耐药性的传播.     

93株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检出情况及药敏分析

目的：了解铜绿假单胞菌对多种抗生素的耐药情况。为临床对由铜绿假单胞菌引起的感染的治疗提供依据．方法：对从临床不同感染部位标本中分离到的93株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定。并对检测结果进行分析．结果：93株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐5种以上的有36株。占38．7％。其中p内酰胺酶阳性的30株，占32．4％。β-内酰胺酶阴性的有6株。占6．3％。结论：产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重。目前治疗铜绿假单胞菌的感染可首选亚胺培南。其次为阿米卡星和头孢他啶。     

金属β-内酰胺酶基因及其传播机制的研究进展

金属β-内酰胺酶具有水解多种抗生素的能力,编码该酶的基因主要是获得性金属β-内酰胺酶基因,为可移动型基因,迄今已发现包括IMP,VIM型等多种基因型,而且新的基因型和亚型不断出现.金属p内酰胺酶基因在I类和III类整合子中发现,整合子是其发生水平传播的主要因子,最常见的水平传播方式由整合子通过接合作用完成,整合子及其金属β-内酰胺酶基因的广泛传播与质粒、转座子密切相关.SPM-1型基因可借助于可移动的共同区域(CR)发生转移.