异鸟苷掺人的富鸟嘌呤寡核苷酸的合成

目的 改进异鸟苷单体的合成路线，合成异鸟苷掺入的富鸟嘌呤的寡核苷酸。方法 以6-O-苄基鸟嘌呤为原料，经环氧开环、催化氢化、水解还原制备异鸟苷，经多步反应后得到异鸟苷亚磷酰化产物，采用固相合成方法合成异鸟苷掺入的富含鸟嘌呤的寡核苷酸。结果 与结论经环氧开环能够区域选择性地得到N9取代的单一产物，收率提高到40％，并成功地合成了异鸟苷掺入的富含嘌呤十六聚寡核苷酸。本合成路线具有区域选择性强、路线简单、易操作、收率高等优点。     

抑制性寡核苷酸（CpG-N ODN）拮抗刺激性寡核苷酸（CpG-S ODN）的作用及其机制研究

目的：寻找有效的抑制性CpG ODN，并研究其对刺激CpG ODN（CpG-S ODN）1826诱导细胞分泌TNF-α的影响及其作用机制和对脓毒症小鼠的影响。方法：选用本室前期采用生物信息学技术合成的21种CpG ODN，筛选出对CpG-S ODN诱导hPBMC释放TNF-α具有抑制作用的CpG-N ODN；采用亲和传感技术观察该CpG-NODN与CpG-S ODN间的相互结合；采用流式细胞技术观察CpG-NODN对的影响；并采用RT-PCR技术和EMSA技术观察CpG-N ODN对CpG-S ODN诱导的hPBMC TLR9表达的影响以及NF-xB活化的影响。同时观察了CpG-N 0DN对脓毒症小鼠的保护作用，并检测小鼠血清TNF-α水平。结果：从前期合成的CpG ODN中成功的筛选出了能有效抑制CpG-S ODN诱导hPBMC释放TNF-α的CpG-N ODN，并发现当浓度比为3：5，4：5，和1：1时均能有效抑制CpG-S ODN对hPBMC的刺激活性，其中浓度比为1：1的CpG-N ODN对刺激性CpG-S ODN诱导hPBMC分泌TNF-α抑制作用最强，并呈一定时效关系；应用亲和传感技术可以看出CpG-SODN与CpG-NODN没有直接结合作用；同时CpG-NODN还可以明显抑制hPBMC表面结合和内化CpG-SODN，并抑制CpGSODN刺激的hPBMC TLR9 mRNA的表达及NF-xB的活化。同时CpG-N0DN还可有效的降低由于细菌DNA导致的小鼠死亡，并降低小鼠小鼠血清TNF-α水平。结论：成功筛选出有效的CpG-NODN，该CpG-NODN对CpG-SODN活化hPBMC具有抑制作用，这种抑制作用可能与影响hPBMC表面结合和内化CpG-SODN，抑制TLR9表达，进而抑制NF-xB的活化有关。同时该CpG-NODN对脓毒症小鼠的具有保护作用。     

反义寡核苷酸类药物的研究进展

反义寡核苷酸类药物通过与靶mRNA的相互作用调节目的基因的表达，它必须具备三个首要条件，即稳定性，选择性和通透靶向性，各种化学修饰包括第二代，第三代寡核苷酸明显增强了反义寡核苷酸的稳定性；靶序列选择方法的改进为其发挥高度选择性提供基础；各种靶向转运技术的应用大大增强了对作用部位的通透性和靶向性，这些方面的研究进展开阔了反义寡核苷酸类药物的应用领域。     

抗乙型肝炎病毒基因治疗的若干进展

随着分子生物学特别是基因工程技术的发展，抗乙型肝炎病毒基因治疗有较深入的研究，利用基因重组、转基因及反义核酸等技术，在细胞水平或通过动物实验阶段的研究，基因有关治疗在抗乙肝病毒、抑制乙肝病毒复制中的作用已被证实。本对转基因干扰素、DNA疫苗(DNA免疫)、反义寡核苷酸、三螺旋形成寡核苷酸(反基因寡核苷酸)、核酶有关抗乙型肝炎病毒基因治疗的研究进行综述。     

抗癌药与DNA相互作用的电喷雾质谱研究

为了进一步阐明抗癌药与DNA结合的序列选择性和结合本质，用电喷雾质谱方法研究了抗癌药与DNA的相互作用，这些药物包括小沟结合剂（偏端霉素A，DM和纺锤霉素，NP）和嵌入剂（米托蒽醌，MT）。DM与AT富有的DNA主要形成2∶1的特异性复合物，NP只形成1∶1的特异性复合物；MT倾向与GC富有的DNA特异性结合。另外，DM与带5个A/T碱基小沟长度的DNA几乎以2∶1结合，而与带3个A/T碱基的DNA未见结合，而NP与带4个A/T碱基的DNA结合能力最强。MT还与6-mer DNA形成了1∶1特异性复合物。竞争结合实验证明，DM和NP与AT富有的DNA的键合顺序为NP>DM。这些结果为深入研究抗癌药物的作用机制和改进目标药物结构提供了依据。     

M-CAT寡核苷酸重组体的构建

目的 构建重组体获取大量含多个M-CAT元件的寡核苷酸。方法 利用Eco．RI酶切点及BamHI和BglⅡ互补粘端的特点，将人工合成的M-CAT寡核苷酸插入质粒pUCl8构成含4个M-CAT元件的pUC-AB重组体。结果 通过α互补筛选阳性菌株，通过DNA测序鉴定插入的阱CAT寡核苷酸。结论 成功构建含多个M-CAT元件的寡核苷酸重组体。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因高效反义肽核酸序列筛选#br# 及其体外抗菌活性观察

目的 筛选出能与耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ftsZ基因紧密结合的反义肽核酸序列，评价其体外抗菌活性。方法 选用两种计算机软件(Mfold、RNA Structure 5.2)和斑点杂交筛选出最佳反义序列PNA，并连接穿膜肽(cell penetrating peptide, CCPs)形成肽-PNA(peptide-PNA, PPNA)，另设一条与最好序列有3个错配碱基的肽核酸序列作为对照，连接穿肽形成错配的肽肽 核酸(scrambled peptide-PNA, Scr PPNA)。将不同浓度的肽肽核酸处理MRSA后，间隔1h测定A600值同时做平板菌落计数，观测其 对细菌生长的抑制作用。结果 斑点杂交实验结果表明，计算机辅助软件设计的11条反义寡核苷酸序列中，有4条序列显示强弱 不同的杂交信号，第3号探针杂交信号最强，而1条正义序列没显示任何信号，PPNA在30和40μmol/L分别具有抑菌作用和杀菌 作用，并具有浓度依赖性，而Scr PPNA在高浓度时对细菌也无生长抑制作用，验证了肽核酸的特异性。结论 成功的筛选出一 条在体外对MRSA的生长有显著的影响的反义肽核酸序列，有望为抗MRSA感染患者提供新的治疗方案。     

异鸟苷掺入的富鸟嘌呤寡核苷酸的合成

目的改进异鸟苷单体的合成路线,合成异鸟苷掺入的富鸟嘌呤的寡核苷酸.方法以6-O-苄基鸟嘌呤为原料,经环氧开环、催化氢化、水解还原制备异鸟苷,经多步反应后得到异鸟苷亚磷酰化产物,采用固相合成方法合成异鸟苷掺入的富含鸟嘌呤的寡核苷酸.结果与结论经环氧开环能够区域选择性地得到N9取代的单一产物,收率提高到40%,并成功地合成了异鸟苷掺入的富含嘌呤十六聚寡核苷酸.本合成路线具有区域选择性强、路线简单、易操作、收率高等优点.     

转录因子NF-KB对血管成形术后血管狭窄和新生内膜形成的影响

目的探讨核转录因子NF-KB的反义和诱骗性寡核苷酸对大鼠颈动脉球囊损伤后血管增殖反应及相应细胞因子、细胞外信号调节激酶的影响。方法SD大鼠随机分为7组．每组分为6个时相点（6h，1，3，5，7，14d），每个时相点3只大鼠。制作血管球囊损伤模型.相应时间点处死动物，使用病理形态学、逆转录聚合酶链反应、免疫组化、Western blot等方法测定血管病理形态改变、单核细胞趋化因子（Monocytes chemotactic protein-1，MCP-1）的mRNA和蛋白质表达、NF-KB p65和细胞外信号调节激酶（Extra-cellular signal regulated kinase，ERK2）的蛋白质含量。结果 模型组、正义组、Scramble组血管内膜／中膜在d 5增加，14d达到高峰。反义组、诱骗组、反义组＋诱骗组干预后，血管内膜／中膜明显减小（P〈0．05），反义组＋诱骗组较反义组、诱骗组治疗效果不明显。MCP-1 mRNA表达在血管损伤后6h即可检测到，3、5、7d后持续表达增加，14d后表达降低，免疫组化显示MCP-1蛋白质表达在6个时相点均为阳性染色，14d达到高峰；反义组、诱骗组、反义组＋诱骗组治疗后，与模型组、正义组、Scramble组相比，MCP-1 mRNA表达和蛋白合成在各时相点均降低（P〈0．05）．Western blot检测核蛋白抽提物显示核因子NF-KB p65在血管损伤后6h有一定蛋白表达，1d后蛋白表达明显增加，至7d达高峰，14d后蛋白表达略降低。ERK2在血管损伤后1d蛋白表达开始增加，d7达到峰值．14d后与d7相比尤明显差异。反义组、诱骗组、反义组＋诱骗组干预后，各时相点蛋白质表达均较模型组、正义组、Scramble组减弱（P〈0．05）。结论转录因子NF-KB调控MCP-1、ERK2基因表达和蛋白质合成；球囊损伤后血管壁细胞增殖在不同时相点有动态变化；脂质体介导局部转染反义、诱骗性寡核苷酸可抑制NF-KB激活对下游基因的调控，两者联合作用效果较单独应用未表现出更明显的作用。     

手术后粘连性肠梗阻18例临床体会

目的：探讨粘连性肠梗阻形成的原因与防治措施。方法：对2000年1月～2008年10月间本院收治的因手术后造成的粘连性肠梗阻18例进行临床回顾性分析体会。结果：胆囊炎术后5例，阑尾炎术后10例，胃穿孔修补术后3例；18例中保守治疗成功14例，手术治疗成功3例，未成功自动出院1例。结论：粘连性肠梗阻首选保守治疗，其次选择手术治疗，增强活动有助于肠梗阻症状缓解。