己酮可可碱对高糖培养的系膜细胞增殖及结缔组织生长因子表达的作用

目的　研究己酮可可碱 (PTX)对高糖培养的系膜细胞增殖及结缔组织生长因子 (CTGF)蛋白表达的作用。方法　以大鼠系膜细胞 (MCs)为受试对象 ,将MCs分为 4组 :①正常对照组NG(5mmol·L-1,D 葡萄糖 ) ,②高糖组HG(30mmol·L-1,D 葡萄糖 ) ,③高糖 +0 36mmol·L-1PTX组 ,④高糖 +1 0 8mmol·L-1PTX组。分别刺激 72h后 ,用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖情况 ,用Westernblot法测定细胞内CTGF蛋白表达。结果　作用 72h ,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内CTGF蛋白表达。不同浓度的PTX均能抑制高糖诱导的细胞增生 ,并抑制CTGF蛋白表达增加。结论　PTX能抑制高糖诱导的MCs增殖 ,并下调CTGF蛋白表达 ,提示PTX可能通过阻抑CTGF表达减少细胞外基质 (ECM)积聚 ,延缓糖尿病肾病 (DN)中肾小球肥大及肾小球硬化的进展 ,从一个新的角度证明了PTX对DN肾脏的保护作用。     

螺内酯对高糖及醛固酮诱导的肾小球系膜细胞CTGF表达的影响

目的通过研究螺内酯(SPI)对高糖(HG)和醛固酮(ALD)刺激的体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MsC)结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达的影响,探讨SPI的肾脏保护机制。方法将大鼠MsC分为:A组,正常对照组(5.6 mmol.L-1)、B组,高糖组(30 mmol.L-1)、C组,HG+SPI干预组(10-9,10-8,10-7mol.L-1)、D组,ALD组(5.6 mmol.L-1葡萄糖+10-7mol.L-1ALD)、E组,ALD+SPI干预组(10-9,10-8,10-7mol.L-1)。酶联免疫法检测上清液中CTGF蛋白的含量,RT-RCR法检测MsC CTGFmRNA表达。结果①正常糖浓度的培养基中可测到MsCCTGF mRNA和蛋白表达;②与A组比较,B组和D组MsCCTGF mRNA表达和上清液CTGF水平明显升高,差异有显著性;③与B组比较,C组中经10-8,10-7mol.L-1SPI干预MsC CTGF mRNA表达和上清液CTGF水平明显降低,P<0.05,但10-9mol.L-1SPI干预MsC CTGF mRNA表达和上清液CTGF水平无变化,P>0.05;④与D组比较,E组MsCCTGFmRNA表达和上清液CTGF水平明显降低,P<0.05。结论 SPI可抑制HG和ALD刺激的大鼠MsC CTGFmRNA表达和蛋白合成,该作用可能是其抗纤维化和防治肾损害的机制之一。     

高糖对人肾小球系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体家族表达的影响

目的研究高糖作用下人肾小球系膜细胞(HMC)中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)家族的表达及转录活性的变化,探讨PPAR介导的信号转导途径在糖尿病性肾病发生发展中的作用。方法使用3层滤网法分离HMC,3～7代细胞用于实验。HMC分为正常对照组(5mmol.L-1葡萄糖,NG)、渗透浓度对照组(5mmo.lL-1葡萄糖+25mmol.L-1甘露醇,MG)和高糖组(30mmol.L-1葡萄糖,HG)。mRNA水平及蛋白水平的检测分别采用实时定量PCR和蛋白印迹法。结果NG组HMC中PPARα,PPARγ及PPARδ mRNA均有表达,PPARγ蛋白亦有表达。MG组上述mRNA表达无明显变化。高糖刺激后,PPARα mRNA表达明显高于MG组,PPARγ和PPARδmRNA表达减少,PPARγ蛋白表达亦明显降低,PPARγ激活的基因adipophilin的表达亦减少。结论高糖能上调PPARα基因的表达,抑制PPARγ和PPARδ基因表达,并降低PPARγ的转录活性,提示高糖可能通过PPAR介导的信号转导途径在糖尿病性肾病的发生发展中发挥重要作用。     

氟伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞CTGF mRNA的影响及其作用机制的研究

目的探讨高糖状态下肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子（CTGF）mRNA的表达以及HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀对其的影响及作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验分为4组：低糖组（LG组,5.5 mmol/L葡萄糖）;低糖＋甘露醇组（LG＋M组,5.5 mmol/L葡萄糖＋24.5 mmol/L甘露醇）;高糖组（HG组,30 mmol/L葡萄糖）;高糖＋氟伐他汀组（HG＋Flu组,30 mmol/L葡萄糖＋10μmol/L氟伐他汀）。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测CTGF和纤维粘连蛋白（FN）mRNA的表达,Western印迹检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）及其下游因子cAMP反应元件结合蛋白1（p-CREB1）。结果与LG＋M组相比,HG组系膜细胞增殖明显,p-p38 MAPK、p-CREB1表达明显上调,CTGF和FN mRNA的表达增加。与HG组比较,HG＋Flu组可抑制系膜细胞增殖,p-p38 MAPK、p-CREB1的表达明显下调,CTGF和FN mRNA的表达降低。结论高糖状态下肾小球系膜细胞CTGF mRNA表达增强,p-p38 MAPK和p-CREB1表达明显升高,氟伐他汀抑制肾小球系膜细胞CTGF mRNA和细胞外基质的分泌可能部分是通过影响p38 MAPK及其下游核因子CREB1的激活而实现。     

白花丹提取物对高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化及miR-155/SOSC1轴的影响

摘要：目的:探讨白花丹提取物对高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化及mir-155/SOSC1轴的影响。方法:设大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1对照组（不含D-葡萄糖）、高糖组(25 mmol·L-1D-葡萄糖)、白花丹提取物低、中、高剂量组(25 mmol·L-1D-葡萄糖并分别加入白花丹提取物,使白花丹提取物终浓度为10.0,100.0,1 000.0μg·ml-1),以上各组置于CO2培养箱（37℃、5%CO2、2%O2、93%N2）,各组每孔设6个平行样,培养72 h。各组细胞培养结束后,MTT法测定各组细胞活力,膜联蛋白VFITC/PI染色测定各组细胞凋亡水平,流式细胞仪分析各组细胞周期水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法及免疫印迹（Western-Blot）法测定mir-155、SOSC1基因及SOSC1蛋白水平。结果:高糖组吸光度（A）值、存活率水平、G1期、mir-155、SOSC1 mRNA、SOSC1蛋白表达水平显著高于对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著低于对照组（P<0.05）;白花丹提取物各剂量组A值、存活率水平、G1期、mir-155、SOSC1 mRNA、SOSC1蛋白表达水平显著低于高糖组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于高糖组（P<0.05）;随着白花丹提取物剂量逐渐增加,白花丹提取物各剂量组A值、存活率、G1期、mir-155、SOSC1 mRNA、SOSC1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高（P<0.05）。结论:白花丹提取物能抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化,其机制与白花丹提取物通过抑制mir-155/SOSC1/NLRP3炎症途径的激活有关。     

NS-398对高糖诱导的系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

［摘要］目的研究选择性环氧化酶 2抑制药NS 398对高糖诱导的系膜细胞刺激结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。 方法20 μmol&#8226;L-1 NS 398加入30 mmol&#8226;L-1高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中，分别培养0，12，24，48，72 h，应用逆转录聚合酶链反应的方法评价CTGF mRNA的表达改变，应用免疫细胞化学方法评价CTGF蛋白的表达水平。结果未加高糖刺激的肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平较低，高糖刺激后肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白表达水平增加，6 h活性已渐增高，12 h达高峰，18 h开始下降，24 h降至较低水平。用NS 398干预30 min后再用30 mmol&#8226;L-1高糖刺激，未见 CTGF mRNA和蛋白表达水平增加（P＞0.05）。 结论高糖能上调肾小球系膜细胞CTGF mRNA和蛋白的表达，NS 398能抑制高糖诱导系膜细胞CTGF的表达。     

茯苓多糖对高糖诱导乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及JAK1/STAT3通路影响

摘要：目的:探讨茯苓多糖对高糖诱导下乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及Janus激酶1/信号转导和转录激活因子3（JAK1/STAT3）通路的影响。方法:0,10,20,30,40,50,60 mmol·L-1的葡萄糖分别作用MCF-7细胞48h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各浓度葡萄糖对MCF-7细胞增殖的影响,筛选最佳的葡萄糖浓度。将MCF-7细胞随机分为5组:空白对照组（常规培养）、高糖作用组(40 mmol·L-1的葡萄糖作用48 h)、不同浓度茯苓多糖作用组(40 mmol·L-1的葡萄糖及60,120,240μg·ml-1茯苓多糖作用48 h),MTT法检测MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡率,RT-PCR检测各组MCF-7细胞JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5 mRNA表达,Western blot检测磷酸化酪氨酸蛋白激酶1（pJAK1）和磷酸化信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达。结果:各浓度葡萄糖均可促进MCF-7细胞增殖,一定浓度范围内呈现一定的剂量依赖效应,40 mmol·L-1的葡萄糖作用MCF-7细胞48h后,细胞增殖率显著增加,因此选择40 mmol·L-1的葡萄糖作用MCF-7细胞48 h作为诱导MCF-7细胞的最佳条件。与空白对照组相比,高糖作用组MCF-7细胞增殖抑制率显著降低（P<0.05）,JAK1、JAK2、JAK3、STAT1、STAT2、STAT3 mRNA表达、p-JAK1和p-STAT3蛋白表达均显著增加（P<0.05）。与高糖作用组相比,60、120、240μg·ml-1茯苓多糖作用组MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高（P<0.05）,JAK1和STAT3 mRNA、p-JAK1和p-STAT3蛋白表达显著降低（P<0.05）,且呈现一定的剂量依赖效应,其中240μg·ml-1的茯苓多糖作用效果较好。结论:茯苓多糖可能通过JAK1/STAT3途径抑制高糖诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖并促进其凋亡。     

普伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞P38促分裂原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨普伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(MC)p38促分裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号传导通路的影响。方法大鼠MC分别培养在正常糖5.5mmol·L-1(正常对照组),高糖25mmol·L-1(高糖组),葡萄糖25mmo.lL-1+p38MAPK特异性抑制剂SB203580(SB)10μmol.L-1,及葡萄糖25mmol·L-1+普伐他汀(PV)100μmol·L-1。ELISA法检测培养上清液Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)、纤连蛋白(FN)含量;Phospho-ELISA法检测胞浆及胞核内p38MAPK和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达;以及RT-PCR法检测p38MAPK mRNA的表达。结果与正常对照组比较,高糖组MC合成基质蛋白Col-Ⅳ,FN增多;胞浆及胞核内p-p38MAPK的表达增加。SB或PV干预能部分或完全逆转这一变化。与高糖组比较,SB干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(16.75±1.93)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.47±1.27)vs(12.01±0.85)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞浆及胞核内p-p38MAPK表达显著下调。PV干预后,上清液中Col-Ⅳ含量下降〔48h:(21.19±3.21)vs(14.97±3.04)μg·L-1,n=6,P<0.05〕、FN减少〔48h:(13.57±1.27)vs(11.99±0.98)μg·L-1,n=6,P<0.05〕;胞核内p-p38MAPK表达显著下调,但对胞浆内p-p38MAPK的表达则无显著影响。各组总p38MAPK蛋白水平及p38MAPK mRNA表达则没有明显改变。结论PV能够显著下调高糖培养的MC胞核内p38MAPK信号传导通路的活化,进而减少胞外基质合成,达到对糖尿病肾病的治疗作用。     

坎地沙坦对糖尿病肾病小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1表达的影响及意义

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(AT1)拮抗剂坎地沙坦(candesartan)对糖尿病肾病(D iabetic nephrop-athy,DN)小鼠血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)表达的影响及意义。方法采用链脲佐菌素(STZ)单次腹腔注射诱导小鼠糖尿病肾病(DN)模型。将正常C57BL/6小鼠随机分成3组,每组12只:正常对照组(N组)、糖尿病肾病组(D组)、Candesartan治疗组(DC组)。治疗8 wk后取肾组织,观察肾脏病理改变;半定量RT-PCR法检测各组肾皮质SGK1及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;W estern b lot检测各组肾皮质中SGK1及CTGF蛋白的表达。结果与N组相比,D组小鼠肾重/体重、24 h尿蛋白量,肾小球滤过率均明显增加;肾皮质中SGK1、CTGF mRNA及蛋白质的表达均明显升高。经Candesartan干预后(DC组),相应生化指标较D组有明显改善,SGK1、CTGF的表达水平较D组亦有明显下调。纤维化指标CTGF的表达与SGK1呈正相关。结论Candesartan可以延缓糖尿病肾病的肾脏纤维化过程,它对细胞内SGK1信号转导途径的抑制作用可能是其抗纤维化作用的主要环节,该作用与AngⅡ-AT1途径被阻断有关。     

法舒地尔对高糖培养的肾小管上皮细胞转分化的抑制作用

目的探讨法舒地尔对高糖培养人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响及可能作用机制。方法人肾小管上皮细胞同时加入葡萄糖60 mmol·L-1和法舒地尔20μmol·L-1。配体结合沉淀法检测葡萄糖60mmol·L-1作用0～24 h后细胞Rho A活性,免疫细胞化学技术检测上皮钙黏素表达,Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,ELISA法检测细胞培养上清液转化生长因子β1(TGF-β1)的含量。结果在一定时间范围内,高糖能刺激细胞Rho A分子活化;与正常对照组比较,葡萄糖60 mmol·L-1培养HK-2细胞72 h后上皮钙黏素表达明显减少(P<0.01),α-SMA表达明显增多(P<0.01),TGF-β1分泌增多(P<0.01),而葡萄糖5.5 mmol·L-1+甘露醇54.5 mmol·L-1高张组无明显差异。法舒地尔20μmol·L-1同步干预后,与高糖组比较,细胞上皮钙黏素表达明显增多〔(0.03±0.01)vs(0.08±0.02),P<0.05〕,α-SMA表达下降(P<0.05),48 h时TGF-β1分泌明显减少〔(128±11)vs(49±5)μg.g-1(P<0.05)〕。结论法舒地尔能抑制高糖培养的肾小管上皮细胞转分化,可能部分通过减少TGF-β1的分泌发挥作用。     

AMPK活化对INS-1细胞胰岛素释放的影响

目的研究AMPK活化对INS-1细胞胰岛素释放的作用及其可能机制。方法体外培养INS-1细胞株,观察不同浓度(0.2,0.5和1.0mmol·L-1)AICAR(AMPK激动剂)作用不同时相点(8,12和24h)对细胞内胰岛素含量及高糖刺激的胰岛素释放的影响;AICAR(0.5mmol·L-1)与Compound C(10μmol·L-1,AMPK阻断剂)单独或共同作用INS-1细胞8h,采用两种PCR(RT-PCR和实时定量PCR)方法检测PPARα基因转录水平的变化,免疫沉淀检测PPARα蛋白表达。结果与正常对照组比较,AICAR(0.2,0.5和1mmol·L-1)作用8,12和24h,均抑制INS-1细胞高糖刺激的胰岛素释放及细胞内胰岛素含量。同时,AICAR诱发的AMPK活化能增强PPARα mRNA和蛋白水平的表达。结论AICAR诱导的AMPK活化可能通过调节PPARα表达抑制INS-1细胞高糖刺激的胰岛素释放。     

AG490对肾小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在白介素-1β(interleukin-1βIL-1β)诱导的高糖培养的人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为高糖对照组(30mmol·L-1);高糖(30mmol·L-1)+IL-1β(5μg·L-1)组;高糖(30mmol·L-1)+IL-1β(5μg·L-1)+AG490(10μmol·L-1)组。分别于处理后24、48、72h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)水平。结果IL-1β能使高糖培养的人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β刺激的同时加入AG490干预能减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用,并使CK-18的表达回升。结论炎症因子IL-1β能促进高糖培养的HKC发生表型转化,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断IL-1β的该作用。     

IFN-γ suppresses the high glucose-induced increase in TGF-β1 and CTGF synthesis in mesangial cells

Mesangial cells are the main source of renal interstitial fibrosis in diabetic nephropathy (DN). Interferon-γ (IFN-γ) is a key cytokine that may play a potential therapeutic role in reducing fibrosis. Here, we focus on the effects of IFN-γ on human mesangial cells (HMCs) treated with high glucose. This study shows that IFN-γ phosphorylates STAT1, suppresses HMC proliferation, and downregulates mRNA and protein levels of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and connective tissue growth factor (CTGF) in HMCs treated with high glucose. The regulation of P-STAT1 could change HMC proliferation and the expression of fibrotic cytokines TGF-β1 and CTGF in HMCs. These data indicate that IFN-γ could activate STAT1 to suppress the increase in TGF-β1 and CTGF synthesis in HMCs induced by high glucose. This paper may lead to new therapeutic treatments of DN.     

七氟烷通过P~(70S6K)/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1mRNA表达

目的探讨七氟烷(Sevoflurane)诱导神经元血红素氧合酶-1(HO-1)基因表达的信号转导通路。方法将培养7d的新生大鼠海马神经元随机分为4组:正常培养组(C组)、2%七氟烷组(S1组)、4%七氟烷组(S2组)和4%七氟烷+Rapamycin组(R组)。C组神经元按正常培养方法培养。S1组和S2组神经元分别给予2%或4%七氟烷处理60min后继续培养24h。R组在神经元给予4%七氟烷处理同时在培养液中加入Rapamycin使其终浓度为10nmol.L-1后同S2组处理。收集神经元进行HO-1mRNA和P70S6K、Nrf2、AP-1和HO-1蛋白表达的检测。结果S1组P70S6K和Nrf2蛋白表达增加(vsC组,P<0.01),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达增加(vsC组,P<0.01),AP-1蛋白表达变化不明显(vsC组,P>0.05)。S2组P70S6K和Nrf2蛋白表达增加(vsS1组,P<0.05),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达增加(vsS1组,P<0.05),AP-1蛋白表达变化不明显(vsS1组,P>0.05)。R组P70S6K和Nrf2蛋白表达减少(vsS2组,P<0.01),HO-1mRNA和HO-1蛋白表达减少(vsS2组,P<0.01),AP-1蛋白表达变化不明显(vsS2组,P>0.05)。结论Sevoflurane通过P70S6K/Nrf2信号通路诱导神经元HO-1mRNA表达。     

孕鼠大量酒精摄入对子代胰岛素敏感性及脂肪源性细胞因子的影响

目的观察孕期大量摄入酒精对子代成年期胰岛素敏感性影响并探讨其影响机制。方法6只SD孕鼠随机分为对照组和酒精组,酒精组以酒精灌胃(4g·kg-1·d-1)至分娩前。第16周龄子代鼠进行静脉葡萄糖耐量试验(IVGTT),RT-PCR检测脂肪组织瘦素、抵抗素及脂联素mRNA表达水平,放射免疫方法测血清瘦素、抵抗素及脂联素含量。结果出生时,酒精组新生鼠体重低于对照组(5.7g±0.1gvs6.9g±0.1g,P<0.01);16wk龄时,与对照组比较,酒精组子代16wk龄时,血糖曲线下面积增加(P<0.05)、8min时葡萄糖刺激的胰岛素分泌增加(P<0.01)、胰岛素敏感指数(SI)及葡萄糖耐量指数(KG)降低(P<0.01);脂肪组织中抵抗素mRNA表达及血清抵抗素水平增加(P<0.05),而脂肪组织中瘦素、脂联素mRNA表达及血清瘦素和脂联素水平均无变化。结论孕期大量饮酒可引起后代宫内发育迟缓,并导致其成年期发生胰岛素抵抗,其机制部分与脂肪组织抵抗素表达增加有关。