人参皂苷Rg1通过抗氧化应激保护冈田酸诱导的PC12细胞损伤

目的体外细胞水平研究人参皂苷Rg1在冈田酸(Okadaic Acid,OKA)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样神经毒性模型中的保护作用,并初步探索其作用机制。方法选用PC12细胞模拟神经元,采用OKA造模的同时给予Rg1(1、5、10μmol·L~(-1)-),选用褪黑素(Melatonin,Melat)10μmol·L~(-1)-作为阳性对照。分别采用MTT、LDH法检测细胞存活率及死亡率,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用DCFH-DA荧光探针法检测胞内ROS的堆积,并用试剂盒检测细胞内一系列抗氧化酶活性的变化。结果与对照组相比,OKA组细胞存活率明显降低、死亡率明显增加,细胞早期凋亡数量明显增多(P<0.01);氧化应激相关指标检测发现,OKA组胞内ROS堆积明显增多(P<0.01),总抗氧化能力(ABTS)明显降低(P<0.01),过氧化物酶(Catalase,CAT)(P<0.01),超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性都明显降低(P<0.05),GSSG/GSH比率明显升高(P<0.01)。与模型组相比,Rg1不同剂量组均能显著提高OKA模型中PC12细胞的存活率,降低细胞死亡率,并抑制胞内ROS水平、提高抗氧化酶活力增强抗氧化能力。结论人参皂苷Rg1在OKA诱导的AD样病理模型中可以通过抗氧化应激作用发挥抗细胞死亡、保护神经细胞的作用。     

NMP4/CIZ基因与成骨细胞功能调节

成骨细胞黏附于细胞外基质,调节细胞外环境,同样成骨细胞的正常结构和功能亦有赖于细胞外基质的调节作用.基质-细胞间相互作用是由细胞黏附分子介导的.黏附分子多位于黏着斑部位,细胞外基质来源信号可通过此黏附装置传递至细胞内部,调节细胞的基因转录.因此,位于黏着斑部位,同时调节核内基因转录的分子很可能参与细胞功能及细胞外基质调节.NMP4/CIZ存在于黏着斑部位,调节成骨细胞功能、成骨细胞表型相关基因及骨基质金属蛋白酶基因表达,对NMP4/CIZ的研究或许能使我们对成骨细胞与细胞外基质间的相互作用有一全新的认识,现就NMP4/CIZ的基因结构、功能及表达调控的分子机制综述如下.     

白藜芦醇抑制结肠癌细胞系HT-29体外增殖作用的研究

目的通过观察白藜芦醇对结肠癌细胞系HT-29增殖的影响并检测程序性细胞死亡4蛋白表达水平,探讨白藜芦醇的抗结肠癌增殖作用及部分相关机制。方法 HT-29细胞经不同浓度白藜芦醇作用后,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况,Western blot法检测程序性细胞死亡4蛋白表达水平变化。结果不同浓度的白藜芦醇对HT-29细胞的增殖有抑制作用,并且呈现出一定的剂量依赖性(P<0.01),白藜芦醇改变细胞周期分布,细胞周期阻滞在S期,同时诱导HT-29细胞凋亡,试验组与空白对照组相比,S期细胞比例及凋亡率明显增高(P<0.05),细胞周期被阻滞,增殖抑制。白藜芦醇处理后HT-29细胞程序性细胞死亡4蛋白表达水平上调,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇能够显著抑制HT-29细胞株的增殖,细胞周期阻滞于S期,诱导肿瘤细胞凋亡,其肿瘤抑制作用可能与程序性细胞死亡4蛋白表达上调有关。     

对氨基水杨酸钠对铅诱导体外培养PC12细胞凋亡的影响

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对铅诱导PC12细胞凋亡的影响。方法 PC12细胞培养至其对数生长期后,正常对照组和正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组细胞于正常培养液中培养24 h后弃培养液,前者加入正常培养液、后者加入PAS-Na继续培养24 h。醋酸铅模型组及醋酸铅+PAS-Na 20,100和500μmol·L~(-1)组先与醋酸铅(终浓度10μmol·L~(-1))共培养24 h后弃培养液,再加入相应浓度PAS-Na继续培养24 h。用MTT法测定细胞存活率,试剂盒方法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342荧光染色检测凋亡率,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测PC12细胞早期凋亡率,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和P53蛋白水平。结果与正常对照组比较,醋酸铅模型组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡形态变化典型,细胞早期凋亡率增高(P<0.05),细胞内GSH含量降低(P<0.01),P53蛋白水平升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01);正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组上述指标未见明显变化。与醋酸铅模型组比较,醋酸铅+PAS-Na组细胞存活率增高(P<0.05),细胞凋亡率和早期凋亡率均降低(P<0.05),细胞内GSH含量增高(P<0.01),P53蛋白水平和Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05)。结论 PAS-Na对铅致PC12细胞凋亡有一定的拮抗作用,其机制可能与PAS-Na抗脂质过氧化损伤和降低Bax/Bcl-2比值有关。     

五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制研究

目的研究五味子乙素对缺血诱导人牙髓细胞的影响及作用机制。方法采用不同浓度的五味子乙素分别处理细胞24、48、72 h后,观察牙髓细胞形态并用波形蛋白染色和角蛋白染色鉴定细胞,检测细胞增殖率和细胞凋亡情况,荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测牙髓细胞中碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、丝氨酸蛋白酶(HtrA1)、转化生长因子(TGF)-β1 mRNA的表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测牙髓细胞中局部黏着斑激酶(FAK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKT)的表达。结果化学染色鉴定结果发现,传代后的细胞波形蛋白染色结果显示阳性,角蛋白染色结果显示阴性,说明此细胞来源于中胚层,具有牙髓细胞的生物学特性;随着五味子乙素浓度的增加牙髓细胞的增殖率呈现上升趋势(P<0.01),而牙髓细胞凋亡率明显下降(P<0.01),且与药物浓度和时间呈现一定的依赖性;不同浓度五味子乙素处理牙髓细胞后,细胞中的ALP、DSPP、TGF-β1 mRNA相对表达量以及FAK、ERK、AKT的表达均高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论五味子乙素可以促进牙髓细胞增殖并抑制其凋亡,这一效应可能是通过FAK、ERK、AKT信号通路实现的。     

姜黄素对机械牵张引发的Ⅱ型肺泡上皮细胞ezrin/Akt通路及炎性因子的影响

目的探讨姜黄素对机械牵张引发的Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT-Ⅱ细胞)ezrin/Akt通路及炎性因子的影响及其作用机制。方法原代培养大鼠AT-Ⅱ细胞,采用Western blot及ELISA方法检测AT-Ⅱ细胞在20%机械牵张力刺激4、8、16、24、48 h时p-ezrin、ezrin、p-Akt和Akt蛋白表达及炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6分泌的动态变化;并且进一步分析不同浓度姜黄素(10、20、30μmol/L)对ezrin/Akt通路蛋白及炎性因子水平的影响。结果机械牵张干预后,AT-Ⅱ细胞p-ezrin、p-Akt蛋白表达水平明显增高,且在4～16 h范围内表达水平持续增高,而ezrin、Akt蛋白表达无明显变化;AT-Ⅱ细胞TNF-α、IL-1β及IL-6分泌量在机械牵张刺激8 h内无明显变化,之后随刺激时间延长明显升高。在机械牵张刺激下,不同剂量姜黄素能够不同程度抑制p-ezrin、p-Akt蛋白表达及减少TNF-α、IL-1β及IL-6分泌。结论姜黄素对机械所致肺损伤有保护作用,其作用可能与抑制ezrin/Akt信号传导、调节炎性因子释放有关。     

厄贝沙坦抑制大鼠平滑肌细胞AT1R及其下游信号通路

目的本研究目的是利用厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预平滑肌细胞,阐明血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(ARB)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达及其下游信号通路的影响。方法利用Western Blot技术,研究厄贝沙坦、血管紧张素Ⅱ干预平滑肌细胞后对细胞AT1受体蛋白表达及其下游信号通路-细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和信号转导子和转录激活子3(STAT3)蛋白磷酸化水平的影响。结果研究发现厄贝沙坦能显著地抑制AngⅡ诱导的AT1受体蛋白表达(0.208±0.022 vs 0.997±0.131,P<0.01)及下游信号通路中的ERK1/2蛋白磷酸化(0.055±0.007 vs 0.103±0.020,P<0.01)、STAT3蛋白磷酸化(0.162±0.010 vs 0.758±0.054,P<0.01)。结论这些研究结果表明厄贝沙坦抑制AT1R和下游的ERK1/2及STAT3信号通路,从而抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖等,发挥控制血压、防治心脑血管疾病作用。     

乌司他丁对鼠在体肺缺血-再灌注损伤中炎症反应的作用

目的 探讨乌司他丁(Ulinastatin,U)对大鼠在体肺缺血-再灌注损伤中炎症反应的影响.方法 SD大鼠36只随机分成6组:①假手术组.②单纯缺血0.5 h组.③缺血-再灌注0.5 h组.④缺血-再灌注2 h组.⑤缺血-再灌注0.5 h+U治疗组.⑥缺血-再灌注2 h+U治疗组.测定各组肺组织中白介素-10(IL-10)及血浆可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的水平,测定肺组织的通透性(125I标记牛血清白蛋白的漏出量表示).结果 肺缺血-再灌注损伤组肺组织中sICAM-1水平明显高于假手术组和缺血组(P<0.01),IL-10水平亦明显高于假手术组(P<0.01),肺组织的通透性比假手术组和缺血组明显升高(P<0.01),组织损伤明显.应用U后,血浆sICAM-1水平明显低于相应缺血再灌注各时间点(P<0.01),而IL-10水平亦明显高于相应缺血再灌注各时间点(P<0.01),肺组织的通透性明显低于缺血-再灌注损伤组(P<0.01).结论 U可能通过抑制炎症反应从而减轻肺缺血-再灌注损伤.     

三七总皂苷通过线粒体途径抑制顺铂诱导的大鼠肾细胞凋亡

目的探讨三七总皂苷(PNS)通过线粒体途径对顺铂肾损伤大鼠肾组织细胞凋亡的影响。方法将36只♂SD大鼠随机分为空白对照组、顺铂模型组、顺铂+PNS组;在给药8 d后,检测大鼠血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和尿β-N-乙酰胺基葡萄糖苷酶(NAG)水平。采用HE染色观察病理变化,利用透射电子显微镜观察大鼠肾脏线粒体形态,采用原位末端缺口标记法(TUNEL染色)检测肾细胞凋亡情况,通过免疫组化SP法检测凋亡相关蛋白Bax、caspase-9的表达,并采用Western blot检测Bcl-2蛋白的表达情况。结果与空白对照组比较,顺铂模型组大鼠血清Cr、BUN和尿NAG水平明显升高(P<0.01),肾小管上皮细胞线粒体损伤严重,肾组织的细胞凋亡率明显增加(P<0.01),肾组织Bax、caspase-9及Bcl-2表达均明显增强(P<0.01);与顺铂模型组比较,顺铂+PNS组血清Cr、BUN和尿NAG水平明显降低(P<0.01),肾小管上皮细胞线粒体损害明显改善,肾组织细胞凋亡率和Bax、caspase-9表达水平均明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达则明显增强(P<0.01)。结论 PNS可能通过增加抑凋亡蛋白Bcl-2表达,减少促凋亡蛋白Bax和凋亡相关蛋白caspase-9的表达来调节细胞凋亡,从而发挥保护顺铂肾损害的作用。     

通心络联合阿托伐他汀、阿司匹林对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变的影响

目的观察通心络与阿托伐他汀、阿司匹林联合应用对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响,为缺血性心脑血管病的防治提供一种优选方案。方法将ApoE-/-小鼠随机分为模型组(AS)、阿托伐他汀组(ATO)、阿司匹林组(ASP)、通心络组(TXL)、ATO联合ASP组(A+A)以及3药联用ATS低剂量组(ATS-L)、高剂量组(ATS-H),饲以高脂饲料同时灌胃给药,每组20只;另选20只同系C57BL/6J小鼠作为正常对照组(CON),饲以普通饲料;12周末HE染色观察血管病理形态变化,酶比色法、ELISA法检测血脂及血清高敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平,Western blot检测主动脉胞间黏附分子(ICAM-1)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的蛋白表达。结果 HE染色显示AS组动脉内皮剥脱,内皮下可见大量泡沫细胞和胆固醇结晶,斑块形成明显。血清TC、TG、LDL、hs-CRP水平较CON组均明显升高(P<0.01),HDL明显降低(P<0.01);主动脉ICAM-1、VCAM-1及MCP-1蛋白表达明显增多(P<0.01)。与模型组比较,各用药组均能不同程度的降低TC、TG、LDL、hs-CRP水平(P<0.05或P<0.01),下调主动脉ICAM-1、VCAM-1及MCP-1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),其中ATO、ASP、TXL 3组间上述各指标无明显差异(P>0.05);A+A及ATS-L组上述各指标水平均明显低于3药单用组(P<0.05或P<0.01),但均高于ATS-H组(P<0.05);ATS-H组血清HDL水平明显高于其他各用药组(P<0.05或P<0.01)。且三药联用ATS干预后动脉内皮完整,内皮下泡沫细胞明显减少,脂质斑块明显消退。结论通心络联合阿托伐他汀、阿司匹林不仅具有确切的调脂作用,而且能够协同抗炎,延缓AS脂质斑块的形成,其综合疗效明显优于三药单用及两西药联用,具有协同增效之优势。     

滴滴涕对人大肠癌DLD1细胞上皮间充质转化的影响

目的探究滴滴涕(DDT)对人结直肠腺癌上皮细胞(DLD1)上皮间充质转化的影响及机制。方法DLD1细胞用DDT 0.01,0.1,1.0,10.0和100.0 nmol·L~(-1)处理48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR法检测E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、波形蛋白和锌指转录因子Snail1的mRNA表达。Western蛋白质印迹法检测信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路主要蛋白STAT3和p-STAT3的蛋白水平。用STAT3抑制剂WP1066(5μmol·L~(-1))处理,通过Western印迹法和实时荧光定量PCR法检测其对DDT诱导的STAT3/Snail1信号通路中p-STAT3、STAT3的蛋白水平和上皮间充质转化关键因子E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白、波形蛋白和锌指转录因子Snail1的mRNA水平的影响。结果与正常对照组相比,DLD1细胞在DDT处理48 h后,细胞形态由卵圆形逐渐变为长梭形,E-钙黏着蛋白mRNA相对表达显著降低(P<0.01),为正常对照组的(42.4±2.8)%。N-钙黏着蛋白和波形蛋白mRNA相对表达显著提高(P<0.01),为正常对照组的1.91±0.1倍和(1.5±0.2)倍。STAT3信号通路蛋白STAT3和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.01),为正常对照组的2.1和1.8倍。锌指转录因子Snail1的mRNA相对表达显著升高(P<0.01),是正常对照组的(1.5±0.1)倍。STAT3抑制剂WP1066 5μmol·L~(-1)处理后,锌指转录因子Snail1 mRNA的表达明显下调(P<0.01),为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的(56.3±0.9)%,同时抑制DDT诱导的E-钙黏着蛋白mRNA表达升高(P<0.01),为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的2.5±0.1倍,N-钙黏着蛋白和波形蛋白mRNA表达降低(P<0.01),分别为DDT 1.0 nmol·L~(-1)处理组的(50.2±2.9)%和(61.6±6.1)%。结论 DDT可能通过STAT3/Snail1信号通路改变上皮间充质转化子E-钙黏着蛋白、N-钙黏着蛋白和波形蛋白的表达,进而促进大肠癌细胞上皮间充质转化。     

机械牵张对缺血缺氧心肌细胞微管的影响

目的:探讨机械牵张对缺血缺氧心肌细胞微管的影响.方法:建立离体培养的SD乳鼠心肌细胞机械牵张模型,施加无糖缺氧刺激因素模拟烧伤早期缺血缺氧损害,实验分为10%牵张组(S组)、缺血缺氧组(I组)及10%牵张+缺血缺氧组(IS组),分别在刺激前和后1、3、6、12小时4个时相点进行观察,采用免疫荧光染色观察微管的变化,并用免疫蛋白印迹检测β-tubulin含量变化.结果:3小时后S组微管呈现增强趋势,I组微管有明显破坏,可见大量断裂微管分布于核周,IS组微管破坏严重,无聚合状态微管存在,细胞完整性受损.刺激后S组β-tubulin含量逐渐增多,I组则减少,IS组减少显著.12小时后IS组与其他2组差异显著(P＜0.01).结论:机械牵张加重了缺血缺氧对心肌细胞微管的破坏,可能是"休克心"发生发展的重要原因之一.     

胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后神经细胞凋亡和超微结构的影响

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后神经细胞凋亡和超微结构的影响。方法成年健康♂Wistar大鼠60只,应用线栓法建立大鼠脑缺血模型,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(20 mg·kg-1)干预治疗,改良神经功能评分(m NSS)评价动物神经行为功能,氯化三苯基四氮唑染色观察脑梗死体积,HE染色和透射电镜观察脑组织病理和超微结构,原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组织化学和Western blot检测p-ERK1/2表达水平。结果大鼠脑缺血损伤后表现出神经功能障碍和脑梗死病灶,皮质区神经元和血脑屏障结构损伤较重,皮质区凋亡细胞数量和p-ERK1/2蛋白表达较对照组明显增多(P<0.05)。治疗组大鼠mN SS评分和脑梗死体积较模型组明显降低(P<0.05),皮质区神经元和血脑屏障损伤减轻,凋亡细胞与p-ERK1/2表达水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论胡黄连苷Ⅱ可能抑制神经细胞凋亡,改善缺血区脑组织的形态结构,促进大鼠神经行为功能恢复。     

地塞米松对哮喘模型大鼠肺组织病理变化和TGF-β1表达的影响

目的:探讨哮喘时肺组织炎症、中性粒细胞(PMN)、肺泡Ⅱ型(AT-Ⅱ)细胞等的病理改变和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达及地塞米松对其的影响.方法:建立哮喘大鼠模型,支气管肺泡灌洗液(BALF)行细胞计数,光镜、电镜观察肺组织病理改变,免疫组化法检测肺组织TGF-β1的表达.结果:BALF中A组细胞总数、EOS计数显著性高于C组(P<0.01),D组显著性高于C组但低于A组(均P<0.01).肺组织中A组PMN计数显著性高于C组(P<0.01),D组显著性高于A组(P<0.01).A组AT-Ⅱ细胞变性、坏死、崩解、板层体空泡化现象.TGF-β1的表达水平在A组显著性高于C组(P<0.01),D组显著性高于C组但低于A组(分另为P<0.01,0.05).结论:哮喘大鼠肺组织炎症细胞浸润、气道黏膜损伤、AT-Ⅱ细胞损伤、表达水平增加;地塞米松可减少上述病理改变,但对肺组织中PMN数目有增加作用,可能会加重对肺组织的损伤.     

ACE2通过下调AT1R和ERK1/2的磷酸化而抑制平滑肌细胞的增殖

目的 探讨血管紧张素转换酶2(ACE2)对血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和细胞外基质激酶(ERK)1/2磷酸化水平及细胞增殖的影响.方法 荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达;将载有ACE2基因慢病毒表达载体(Lentiviral-ACE2)以感染复数为10(MOI=10)感染平滑肌细胞不同时间(24、48、72、96 h);采用CCK-8法检测平滑肌细胞增殖;Western blot检测ACE2、AT1R及ERK1/2磷酸化水平.结果 目的 蛋白GFP表达量明显增加,慢病毒ACE2的表达量成时间依赖性增加,并且在96 h时蛋白表达量较对照组和空载体组明显升高,(1.22±0.06 vs 0.53±0.03和0.53±0.09,P<0.05,n=4);AngⅡ(10-7 mol·L-1)可以促进平滑肌细胞的增殖,ACE2能够抑制AngⅡ诱导的平滑肌细胞增殖(0.53±0.10 vs 0.68±0.03,P<0.05,n=5);AngⅡ(10-7 mol·L-1)作用平滑肌细胞12 h后AT1R明显上调,同时ACE2明显抑制AngⅡ诱导的AT1R的上调(0.34±0.01 vs 0.73±0.07,P<0.05,n=4); ACE2能够明显抑制AngⅡ诱导的ERK1/2的磷酸化水平 (0.43±0.06 vs 0.71±0.08,P<0.05,n=4).结论 ACE2可以通过下调AT1R和/及ERK1/2 的磷酸化水平而抑制平滑肌增殖,提示ACE2的过表达具有血管保护作用.     

三氟淫羊藿素对心肌缺血再灌注损伤大鼠Akt/mTOR信号通路及自噬相关蛋白水平的影响

目的研究三氟淫羊藿素(ICTF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)的治疗作用,并探讨其是否通过丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路调节自噬起作用。方法采用结扎左冠状动脉前降支45 min,再灌注60 min的方法制作MI/RI模型,雄性SD大鼠分为假手术组、MI/RI模型组、ICTF 0.5,1.0和2.0 mg·kg~(-1)组。标准肢体Ⅱ导联心电图监测T波和ST段变化,TTC染色测定心肌梗死面积,Western印迹法检测心肌组织中微管相关蛋白2/1轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)比值、Akt和mTOR蛋白磷酸化水平,免疫荧光检测心肌组织LC3蛋白表达水平。结果监测心电图发现,与假手术组相比,MI/RI模型组大鼠再灌注60 min时的T波(P<0.05)和ST段(P<0.01)明显升高;与模型组相比,ICTF 1.0 mg·kg~(-1)组的T波(P<0.05)和ST段(P<0.01)显著降低。TTC染色结果表明,模型组出现明显的心肌梗死灶(P<0.01),ICTF 1.0 mg·kg~(-1)组心肌梗死面积百分数显著降低(P<0.01)。Western印迹结果显示,与假手术组比较,模型组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高(P<0.01),Beclin~(-1)蛋白磷酸化水平升高(P<0.05),Akt(P<0.01)和m TOR(P<0.05)蛋白磷酸化水平降低;与模型组相比,ICTF 1.0 mg·kg~(-1)组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显降低(P<0.01),Beclin~(-1)(P<0.01)蛋白磷酸化水平降低,Akt和m TOR蛋白磷酸化水平升高(P<0.01)。免疫荧光结果表明,与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织中LC3蛋白表达增多(P<0.01);与模型组比较,ICTF 1.0 mg·kg~(-1)组表达减少(P<0.01)。结论 ICTF对大鼠MI/RI具有保护作用,其机制可能与调控Akt/m TOR信号通路抑制细胞过度自噬有关。     

法舒地尔治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠与其调节T细胞免疫应答有关

目的探讨法舒地尔对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果及作用机制。方法雌性C57BL/6小鼠,采用MOG_(35-55)多肽诱导建立慢性EAE模型,随机分为早期治疗组、晚期治疗组和EAE对照组。早期和晚期治疗组分别在免疫后第3日和疾病症状出现时,腹腔注射法舒地尔40 mg·kg~(-1)·d~(-1),观察各组小鼠体重变化和临床症状评分。免疫后第29日处死动物,取脊髓行HE染色和髓鞘染色;制备脾脏单个核细胞,应用流式细胞术检测T细胞亚群的变化;采用ELISA法观察细胞因子水平。结果法舒地尔治疗可推迟EAE发病时间(早期治疗,P<0.01),减轻临床症状(早期治疗,P<0.01;晚期治疗,P<0.05),减少炎性细胞浸润和髓鞘脱失(早期治疗,P<0.01;晚期治疗,P<0.05)。早期治疗组IL-17~+CD4~+T细胞比例显著低于EAE对照组(P<0.01),晚期治疗组IL-10~+CD4~+T细胞比例高于EAE对照组(P<0.01),同时早期和晚期治疗组IFN-γ~+CD4~+T细胞比例显著高于EAE对照组(均P<0.01)。此外,法舒地尔还可抑制MOG_(35-55)诱导的IL-17的分泌,促进IL-10的分泌。结论法舒地尔显示了治疗EAE的潜能,其机制可能与抑制Th17细胞分泌、促进Th2细胞表达有关。     

机械通气治疗重型颅脑损伤致呼吸衰竭

目的探讨重型颅脑损伤合并急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的诊治方法。方法回顾性分析42例重型颅脑损伤合并ARDS的诊治,并结合文献对重型颅脑损伤合并ARDS的病因、病理学、病理生理学基础、治疗措施及死亡率等进行分析。结果42例重型颅脑损伤合并ARDS的患者均早期行呼吸机辅助通气,28例呼吸功能恢复正常,15例死亡。抢救成功率66.67%。机械通气治疗后较治疗前PCO2、GCS评分、LIS评分及ALI等指数均有显著改变(P<0.01),临床生命体征亦有明显好转。结论重型颅脑损伤合并ARDS是重型颅脑损伤的严重并发症,死亡率极高。提高认识、早期诊断、早期治疗和早期进行机械通气是降低死亡率的关键。机械通气(PEEP)是治疗ARDS有效的通气方式。     

骨髓间充质干细胞移植促进大鼠脊髓损伤后行为功能恢复的研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植促进大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后行为功能恢复的机制并评价其疗效.方法:利用NYU Impactor-Ⅱ打击器制作大鼠TIO SCI模型,细胞移植预实验证实BMSCs在体内定植后,分别于损伤后3 d(Ⅱ组)和1周(Ⅲ组)移植在体外稳定传10代的BMSCs,以DMEM作为阴性对照(Ⅰ组),术后用BBB评分和脚印分析进行大鼠行为功能的评价.3个月后处死动物,取出损伤处脊髓做10 mm快速冰冻切片后,行HE,NF和ED1免疫组化染色,根据各组间阳性反应面积百分比进行比较.结果:BMSCs倍增周期约为2～3 d,术后第4周各组间BBB评分差异开始有统计学意义(P<0.05或P<0.01),术后第6周起Ⅱ组和Ⅲ组之间脚印分析结果差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). NF和ED1染色阳性反应面积百分比各组间差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:BMSCs可以改善脊髓损伤后局部的微环境,促进轴突的再生和大鼠运动功能的恢复.     

脂氧素A_4对颅脑损伤伴失血性休克心肌损伤保护作用的实验研究

目的观察脂氧素A4(LXA4)对颅脑损伤伴失血性休克(TBIS)大鼠心肌损伤的保护作用。方法Wistar大鼠36只,随机分成假手术组(C组)、TBIS模型组和LXA4治疗组,每组12只。对大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)进行检测;采用TTC染色法对心肌梗死区及心肌缺血区进行测定,计算心肌梗死面积;病理切片观察心肌炎性细胞浸润。结果与C组比较,TBIS组血清MDA、CK水平及心肌梗死面积明显升高(P<0.01),而SOD水平明显下降(P<0.01),心肌炎性细胞浸润增加;LXA4治疗组血清MDA、CK-MB水平及心肌梗死面积较TBIS组明显下降(P<0.01),而SOD水平明显升高(P<0.01),心肌炎性细胞浸润减少。结论 LXA4治疗可减轻TBIS大鼠心肌损伤,可能与其减轻脂质过氧化和自由基损伤有关。