透明质酸产生菌菌种诱变选育及发酵工艺研究

采用透明质酸酶缺陷型链球菌发酵生产透明质酸.从牛鼻粘膜分离兽疫链球菌,经诱变获得透明质酸酶缺陷型变异株Y-921.Y-921在含葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏及无机盐的发酵液中,pH7.0,37℃下发酵42h,得透明质酸4.5g/L,其分子量为1.9×10~6,蛋白质含量0.2%,这种高分子量透明质酸适用于化妆品.     

透明质酸产生菌菌种诱变选育及发酵工艺研究

从牛鼻粘膜分离兽疫链球菌，经诱变获得的透明质酸酶缺陷型变异株Ｙ－９２１，在含葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏及无机盐的发酵液中，于ｐＨ７．０、３７℃下发酵４２ｈ，得透明质酸４．５ｇ／Ｌ。其分子量为１．９×１０６ｄ，蛋白质含量０．２％，此种产品适用于化妆品。     

卑霉素高产菌株的选育

以绿色产色链霉菌（Streptomyces viridochromogenes）TN-27为出发菌株，采用紫外线诱变，并以链霉素作为筛选因子，获得一株遗传稳定且卑霉素发酵效价比出发菌株提高38．9％的菌株。对该菌株再采用微波（microwave，MV）诱变，以其自身代谢物卑霉素作为筛选因子时得到一株产量提高200％的菌株，传代结果显示，在传代的同时结合自然分离，可以保持稳定的产生抗生素特性。     

产抗生素角毛壳菌CH21的诱变育种

以角毛壳菌(Chaetomium cupreum)CH21的萌发孢子作为诱变材料,采用微波辐照和紫外线照射进行诱变处理,用辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici)作为测试菌株,结合PDA双层平板法初筛和管碟法复筛,选育高产抗生素的突变株.结果表明:最佳微波诱变条件为500W、2450MHz、15s,紫外诱变条件为15W、30cm、300s.对出发菌株CH21进行一轮微波诱变和一轮紫外诱变,筛选得到5株高产菌株,其中CH21-2-20抑菌圈直径最大,为20.20mm,较抑菌圈直径为12.50mm的出发菌株增大了62％.连续传代5次,CH21-2-20抑菌圈直径稳定在19.40～20.38mm.     

复合诱变选育乳链菌肽高产菌株

目的选育乳链菌肽高产菌株。方法以乳酸链球菌ATCC11454为出发菌株,采用紫外线、微波和亚硝酸钠对其进行复合诱变处理,并结合乳链菌肽抗性筛选选育出高产乳链菌肽的菌株。结果通过选育获得一株乳链菌肽的高产菌株Nis-123,乳链菌肽产量为5 250 U/mL,较出发菌株提高了4.3倍。传代实验证明该菌株遗传性稳定。结论紫外线、微波和亚硝酸钠复合诱变结合乳链菌肽抗性选育可以提高乳酸链球菌的产肽能力。     

利用微波诱变技术提高菌株B1抑菌活性的研究

目的研究微波辐射技术对具强抑菌活性的海洋微生物紫外突变株B1的诱变效应,并获得诱变处理的合适剂量。方法对处于对数生长期的菌悬液进行不同时间微波辐射处理,基于微生物诱变育种随机性,利用数理统计方法对诱变结果分析评估,并对筛选的高活性菌株进行传代。结果60s微波辐射为最适诱变剂量,在此处理上获得的1株高活性橙色菌株B1-413,其最小抑菌浓度(MIC)由亲代B1的125μl.mL-1,降低至突变株B1-413的32μl.mL-1,抑菌活性提高了近4倍,并经传代实验证实其抑菌活性稳定。结论菌株B1对微波辐射敏感,诱变效应明显。     

微波诱变头孢菌素C产生顶头孢霉菌的研究

本实验以头孢菌素C高产菌L32为出发菌株,通过微波诱变,得到变株L32-104,初复筛证明其发酵单位提高20%,且遗传性状非常稳定。该菌株在中试以及大生产中均获成功。实验表明微波诱变法操作简便、安全可靠、方法可行。     

链霉菌702抗药性致死突变标志微波诱变筛选研究

目的 筛选出产抗真菌活性物质的高产链霉菌702突变株.方法 分别以链霉菌702菌株为试验材料和以庆大霉素为敏感抗生素建立链霉菌702孢子致死突变标志的微波诱变筛选模型,通过微波对链霉菌702菌株孢子进行不同时间的诱变处理,将诱变处理后的孢予悬液涂布于含致死浓度的庆大霉素的PDA平板培养基上,获得抗庆大霉素突变株,分别挑取单个抗药性突变菌株进行摇瓶初筛和复筛.生物效价测定采用一剂量法.结果 微波处理30s对菌株的致死率可达70.53%,抗药性突变率高达23.13%,获得的抗药性突变株经过摇瓶初筛和复筛,获得高产突变株20-29-47菌株,产抗真菌活件物质的摇瓶发酵单位达到1478μg/ml,比出发菌株发酵单位986μg/ml提高T49.9%.结论 采用抗药性致死突变标志的微波诱变筛选模型可以获得产抗真菌活性物质的链霉菌702高产菌株.     

Lipstatin高产菌株筛选

以毒三素链霉菌XC-lp-2的变株OT-3为出发菌株,经UV和微波复合诱变处理,并在含豆油的平板上定向筛选耐豆油突变株,获得了高产突变株XC-lp-69,其lipstatin发酵效价达到911μg/ml,较出发菌株OT-3提高了71.6%。传代试验表明突变株XC-lp-69的高产遗传特性稳定。     

新一代必特螺旋霉素基因工程菌的微波诱变

本文探讨微波诱变对新一代必特螺旋霉素基因工程菌的育种效果.以经紫外诱变筛选的新一代必特螺旋霉素产生菌Streptomyces spiramyceticus NBT-U149为出发菌株进行微波诱变筛选.辐射分四种方式:培养皿加盖冷却;加盖不冷却;不加盖冷却;不加盖不冷却,辐射时间分别为10、20、30、40、50、60、80、100和120s.每次辐射5s后,冰上快速冷却20s再照射,并将照射时间累计.以不同的辐射时间设定为不同的微波处理剂量,计算致死率.结果 表明,必特菌株对微波敏感,微波辐射60s时致死率达到92.55%.微波诱变在以脉冲频率为2450MHz的800W家用微波炉条件下,其最佳作用方式为培养皿不加盖、冰上快速冷却,最佳辐射时间为50s.初筛摇瓶正突变率达到57.14%,复筛摇瓶发酵效价是出发菌株1.6倍以上的有10株,占初筛菌株的2%.最终筛选得到突变株Streptomyces spiramyceticus NBT-UM22,其必特螺旋霉素发酵产量是出发菌株的1.87倍,且组分比例无明显变化.