松茸不同提取部位的体外抗肿瘤作用

摘 要 目的： 研究松茸不同提取部位的体外抗肿瘤活性。 方法: 采用MTT法测定松茸乙醇提取物各部位及多糖部位对HepG-2细胞、Hela细胞和MCF-7细胞的抑制作用;采用流式细胞术检测多糖部位诱导HepG-2细胞和Hela细胞凋亡的作用。结果:松茸多糖部位体外对3种肿瘤细胞的IC₅₀分别为53.77μg·ml^-1(HepG-2)、40.04 μg·ml^-1(Hela)、100.65 μg·ml^-1(MCF-7),抑制作用均优于其他各部位,且对HepG-2细胞和Hela细胞抑制作用呈现良好的时间与浓度依赖性;松茸多糖部位能诱导HepG-2细胞和Hela细胞凋亡。结论: 松茸多糖部位能显著抑制HepG-2和Hela等肿瘤细胞的生长,具有诱导凋亡的作用,为松茸抗肿瘤的主要活性部位。     

商陆多糖Ⅰ联合白细胞介素2对小鼠脾细胞杀瘤活性的影响

商陆多糖Ⅰ(PAP-I),0.3～3μg·ml^-1和小鼠脾细胞培养3～5d可显著增强其杀伤P815肿瘤细胞活性及IL-2(250～500IU·ml^-1)诱导的LAK细胞活性,最适浓度为1μg·ml^-1。PAP-I及IL-2和脾细胞培养的上清液对P815肿瘤细胞无细胞毒作用,但能增强脾细胞及LAK细胞杀瘤活性。PAP-I,5,10及50mg·kg-1,ip可增强脾细胞杀伤P₈₁₅和L₉₂₉细胞的活性及IL-2诱导的LAK细胞活性。     

达那唑胶囊人体生物等效性研究

目的 研究达那唑胶囊的人体生物等效性与药动学。方法 18名健康女性志愿者单剂量随机交叉口服达那唑胶囊的受试制剂和参比制剂200mg,用HPLC法测定血浆中达那唑浓度。结果 口服达那唑胶囊的受试制剂和参比制剂的药动学参数:t_1/2(消除半衰期)分别为(8.73±3.33)h和(8.04±4.19)h;达峰时间分别为(3.5±1.3)h和(3.7±1.7)h;达峰浓度分别为(112.40±67.34)ng·ml^-1和(124.79±73.91)ng·ml^-1;AUC_0-24分别为(976.54±633.6)ng·h·ml^-1和(946.64±605.85)ng·h·ml^-1;AUC_0-∞分别为(1189.22±692.75)ng·h·ml^-1和(1118.5±637.11)ng·h·ml^-1;达那唑胶囊的相对生物利用度F为(104.4±17.9)%。对参数经统计学处理,两种制剂的药代动学参数相近。结论 两种达那唑胶囊具有生物等效性。     

紫外分光光度法测定复方盐酸利多卡因注射液的含量

目的 建立紫外分光光度法测定复方盐酸利多卡因注射液中盐酸利多卡因和薄荷脑的含量。方法 盐酸利多卡因采用以水为空白,检测波长为261 nm。薄荷脑采用以阴性对照液加显色剂为空白,检测波长为507 nm。结果 盐酸利多卡因在200μg·ml^-1～450μg·ml^-1浓度范围内,呈良好线性关系;平均回收率为102.1%,RSD为1.80%(n=9)。薄荷脑在1.6μg·ml^-1～6.4μg·ml^-1浓度范围内,呈良好线性关系;平均回收率为98.5%,RSD为1.70%(n=9)。结论 本方法简便、快捷、准确、可靠。     

HPLC-CAD法同时测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B的含量

摘 要 目的：建立HPLC CAD法测定硫酸卡那霉素注射液中卡那霉素和卡那霉素B含量的方法。方法: 采用Boston Green ODS C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以0.2 mol·L-1三氟醋酸溶液 甲醇（95 ∶〖KG-*2〗5）作为流动相,流速:1.0 ml·min^-1,柱温:30℃,喷雾温度:55℃,喷雾压力:56.4 psi。结果:卡那霉素在0.385~38.500 μg·ml^-1之间呈现良好的线性关系（r=0.999 9）,检出限为0.075μg·ml^-1,定量限为0.154 μg·ml^-1,回收率为100.97%（n=9）。卡那霉素B在0.374~37.400 μg·ml^-1之间呈现良好的线性关系（r=1.000 0）,检出限为0.075 μg·ml^-1,定量限为0.150 μg·ml^-1,回收率为100.44%（n=9）。结论:建立的HPLC CAD测定卡那霉素和卡那霉素B含量的方法检出限低,操作简单准确,可以有效控制硫酸卡那霉素注射液的质量。     

星点设计-效应面法优化白鲜皮多糖硫酸酯化工艺及抗氧化活性

目的 利用星点设计-效应面法优化白鲜皮多糖（Dictamnus dasycarpus polysaccharide,DDP）硫酸酯化工艺,考察DDP修饰前后结构特征及抗氧化活性。方法 采用氯磺酸-吡啶法,以酯化试剂比例、酯化试剂与多糖溶液比例、反应温度、反应时间为自变量,硫酸根取代度（degree of substitution,DS）为因变量,对自变量各水平进行多元回归拟合,利用效应面法筛选最佳工艺并进行预测分析;采用红外光谱及扫描电镜观察其结构特点。测定硫酸酯化白鲜皮多糖（sulfated polysaccharides from Dictamnus dasycarpus,SDDP）对DPPH、OH·、O₂^-·清除能力,考察其抗氧化活性。结果 最佳工艺条件为酯化试剂比例1：4,酯化试剂与多糖溶液比例1：1,反应温度73℃,反应时间5 h。红外光谱显示SDDP在820 cm^-1和1 254 cm^-1附近出现C-O-S和S=O硫酸基特征吸收峰,表明DDP修饰成功;扫描电镜显示SDDP表面粗糙,排列紧密,且块状体积明显小于DDP;DDP和SDDP都有清除DPPH、OH·和O₂^-·能力,且SDDP对DPPH、OH·和O₂^-·清除率强于DDP。结论 星点设计-效应面法优化DDP硫酸酯化工艺方法简便且预测性良好,DDP经硫酸酯化后,抗氧化活性有所提高。     

人参皂甙Rh2体外对小鼠黑色素瘤细胞的分化诱导作用

体外实验证明人参皂甙Rh₂在10μg·ml^-1的浓度下能明显抑制B₁₆细胞的生长,并呈浓度依赖性,其IC₅₀为4.1μg·ml^-1。Rh₂在10μg·ml^-1浓度下对B₁₆细胞有较强的分化诱导作用,表现为黑色素生成能力明显增加;形态向上皮样细胞分化;细胞呈网状结构;黑色素颗粒增多,生长变缓慢。细胞动力学研究结果表明,Rh₂可使B₁₆细胞阻断在G₁期。提示Rh₂对B₁₆细胞具有分化诱导作用。     

高效液相色谱法同时测定动物血浆中萘哌地尔及其主要代谢产物浓度

为研究大鼠口服萘哌地尔的药代动力学规律,建立了同时测定萘哌地尔及其去甲基代谢产物浓度的高效液相色谱法。以甲醇、乙腈以及0.02mol·L^-1磷酸二氢钾溶液为流动相,RP-C₁₈为固定相,普萘洛尔作内标,紫外定量波长240nm。此条件下内标物、去甲基物和原药的保留时间分别为6.2,7.6和10.3min;绝对回收率分别为97.4%,86.6%和86.1%。去甲基物和原药在10～800ng·ml^-1血浆浓度范围内线性关系良好,γ=0.9998,最低检测浓度分别为8ng·ml^-1和5ng·ml^-1;日内和日间的相对标准偏差(RSD)均分别小于6.3%和11.6%(n=5)。并用此法研究了大鼠单次口服萘哌地尔后两者的药时规律。     

二甲双胍缓释片人体药代动力学及其相对生物利用度

目的 研究国产盐酸二甲双胍缓释片在人体药代动力学行为并与普通片进行等效性评价比较,并估算其药代动力学参数。方法 20名受试者分两组交叉服用缓释片和普通片,用RP-HPLC法测定血浆中药物浓度,并估算相应的药动学参数。结果 单剂量口服1000mg缓释片和普通片后估算的AUC_0-24分别为11.95±2.62μg·h^-1·ml^-1和10.72±2.23μg·h^-1·ml^-1;C_max分别为1.50±0.22μg·ml^-1和2.34±0.30μg·ml^-1;T_max分别为3.38±0.8h和1.61±0.32h;t_1/2分别为4.94±0.47h和3.20±0.38h;多剂量1000mg·d^-1时AUC_ss分别为15.04±3.01μg·h^-1·ml^-1和14.51±2.69μg·h^-1·ml^-1;C_max分别为1.68±0.25μg·ml^-1和1.60±0.26μg·ml^-1;C_min分别为0.15±0.03μg·ml^-1和0.12±0.04μg·ml^-1;Cav分别为0.62±0.13μg·ml^-1和0.61±0.11μg·ml^-1;T_max分别为3.61±0.60h和1.88±0.38h;AUC_0-24和AUC_ss经对数转换后方差分析和双单侧t检验，显示两制剂吸收程度生物等效。结论受试制剂和参比制剂吸收程度生物等效，但具有缓释特性。盐酸二甲双胍缓释片的相对生物利用度单剂量时为（111.5±8.3）%，多剂量时为（103.6±9.2）%。     

替米沙坦对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的影响

摘 要 目的： 考察替米沙坦对体外培养的人脐带动脉平滑肌细胞（HUASMCs）增殖的抑制作用及对白细胞介素 6（IL-6）表达的影响。方法: 组织块贴壁法,HUASMCs原代培养,传3代细胞实验。MTT比色法检测同一浓度替米沙坦（50 μg·ml^-1）在不同作用时间（3～96 h）和不同浓度替米沙坦（0.5～500 μg·ml^-1）在同一作用时间（48 h）,对HUASMCs增殖的抑制作用。RT PCR和ELISA法检测低、中、高3种浓度的替米沙坦（1,10,100 μg·ml^-1）对HUASMCs表达IL-6 mRNA和因子的影响。结果: 不同作用时间的替米沙坦（50 μg·ml^-1）对HUASMCs的增殖有抑制作用(P<0.05),作用时间为48 h时,抑制作用最强,抑制率为（29.12±2.89）%。其后的作用时间72 h和96 h的抑制作用与48 h比无显著变化（P>0.05）。不同浓度的替米沙坦对HUASMCs增殖有抑制作用(P<0.05),当浓度为100 μg·ml^-1时,抑制作用最强,抑制率为（41.46±3.36）%。其后各浓度的抑制作用与100 μg·ml^-1比无显著变化（P>0.05）。低、中、高3种浓度的替米沙坦对HUASMCs表达的IL-6 mRNA和IL-6 含量均有抑制作用(P<0.05),并呈浓度依赖性(P<0.05)。结论: 替米沙坦抑制体外培养的HUASMCs增殖,对HUASMCs表达的IL-6 mRNA和因子分泌均有抑制作用。     

新型gc2hsqcse二维核磁共振技术在绿藻硫酸多糖Ls25结构解析中的应用△

目的 采用新型gc2hsqcse二维核磁共振技术对绿藻硫酸多糖Ls25进行结构解析。方法 对从绿藻中分离纯化得到的硫酸多糖Ls25进行理化性质分析,并通过红外光谱、甲基化分析以及核磁共振₁H-NMR、₁H-PRESET、₁₃C-NMR、₁H-₁H COSY、₁H- ₁₃C HSQC、₁H- ₁₃C gc2hsqcse和₁H- ₁₃C HMBC对其进行结构表征。对传统HSQC和新型gc2hsqcse核磁共振技术采用相同采集时间、驰预时间和扫描次数等,gc2hsqcse在脉冲序列中加入宽带反转脉冲。结果 硫酸多糖Ls25的分子量为64.2 kDa,硫酸基含量为29.7 %,其主要由鼠李糖(91.95 %)组成,含有少量葡萄糖醛酸和木糖。在核磁共振分析中二维HSQC谱图中信号缺失严重,采用宽带反转脉冲gc2hsqcse,得到了在HSQC谱图中缺失的糖基A、B、C和D等信号。结合甲基化分析及其它一维和二维核磁共振谱图分析,完成糖基信号的全归属,最终确定Ls25的结构特征。 结论 采用新型gc2hsqcse二维核磁共振测试技术,解决了硫酸多糖在二维HSQC谱图中的信号缺失问题,为硫酸多糖的结构解析带来了新技术新方法。     

Purification and Structural Characterization of Sulfated Polysaccharide from Sargassum myriocystum and its Efficacy in Scavenging Free Radicals

Sulfated polysaccharides from marine algae are one of the commercially beneficial compounds with a range of pharmaceutical and biomedical applications. They are testified to be effective against free radicals and related health complications. This study aims to determine the antioxidant potential of the sulfated polysaccharide from Sargassum myriocystum, followed by its purification and structural characterization. Amount of extract obtained was 5% from 10 g of plant material. The carbohydrate and sulfate content were found to be 31 and 0.34 mg/10 g of plant material, respectively. Total sulfated polysaccharide extract showed a good radical scavenging activity at lower concentrations. The active principle from the total sulfated polysaccharide was fractionated in anion exchange and gel filtration columns followed by structural characterization using Fourier transform infrared and nuclear magnetic resonance spectroscopy. Fraction 12 closely matched with the Fourier transform infrared and nuclear magnetic resonance spectra of fucoidan. Based on the results obtained, we conclude that sulfated polysaccharide from Sargassum myriocystum is identified as Fucoidan with potential radical scavenging activity compared to butylated hydroxyl toluene.     

海洋硫酸多糖对糖脂代谢及肠道菌群调节作用的研究进展

肥胖已经成为人类首要健康问题,海洋硫酸多糖对糖脂代谢及肠道菌群具有调节作用,因此在肥胖预防和缓解中展现出良好的应用前景。本文综述了海洋硫酸多糖的种类,并从糖脂代谢和肠道微生物群的角度总结了海洋硫酸多糖在肥胖预防和缓解中的作用机制,提出了海洋硫酸多糖未来的研究和发展方向,以及为海洋硫酸多糖的进一步研究及市场化应用提供参考。     

等电点除蛋白的pH值对螺旋藻酸性多糖硫酸基团含量的影响

考察等电点除蛋白对螺旋藻酸性多糖的硫酸根含量的影响。采用热碱水提取，乙醇沉淀，CPC络合得螺旋藻酸性多糖。硫酸苯酚法测定糖含量，聚丙烯酰胺凝胶电泳和氯化钡明胶法检查硫酸根，200～400nm紫外扫描及水解氨基酸检测蛋白。结果表明，不同酸化条件对螺旋藻酸性多糖的硫酸根含量有明显的影响，以pH值4．0去除蛋白效果最佳，硫酸根保留相对较多。     

A quantitative method to detect fucoidan in human plasma using a novel antibody

We have developed an antibody-based method to assess plasma uptake of a proprietary Undaria-derived fucoidan galactofucan sulfate (GFS(TM)) after oral ingestion by human volunteers. Fucoidans have high-molecular-weights but exert biological effects in experimental animals after oral intake. By using a novel antibody raised against sulfated polysaccharides, we carried out a competitive ELISA to quantitate GFS in plasma samples from healthy volunteers who ingested 3 g/day of whole Undaria containing 10% GFS fucoidan, purified 75% GFS fucoidan, or 3 g of a nonsulfated placebo polysaccharide over 12 days. Increased reactivity to the novel antibody, as measured against preingestion levels, was detected at all time points. Assuming the measured material to be intact GFS, the concentration detected (median) was 4.002 and 12.989 mg/l when 3 g of 10% or 75% pure fucoidan was ingested orally over a period of 12 days, respectively. High-molecular-weight fucoidan can be detected in plasma using an ELISA competitive assay based on a novel antibody to sulfated polysaccharides.     

Extraction of water-soluble polysaccharide and the antioxidant activity from Semen cassiae

Water-soluble polysaccharide was isolated from Semen cassiae using water for extraction and ethanol for deposition. The optimized conditions for polysaccharide isolation by orthogonal experiments were a sample to liquid ratio of 1:30 at 80°C for 3.5 hours; the yield of polysaccharide from Semen cassiae under these conditions was 5.46%. Different polysaccharides (SCPW-1, SCPW-2, SCPW-3, SCPW-4, SCPW-5, SCPS-1, SCPS-2) were obtained from the extract (i.e., crude polysaccharide) by DEAE-cellulose column chromatography. The polysaccharides obtained showed different structures by Fourier transform infrared therein the five elected from the seven kinds separated. The antioxidant activities of the extract were evaluated. The scavenging rates of the present extract on hydroxyl and superoxide were 43.32% and 64.97%, respectively, at a concentration of polysaccharide of 94.03 μg/mL, which was better than vitamin C at the same concentration. The scavenging rate of the present extract on 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl was 13.33% at a polysaccharide concentration of 94.03 μg/mL, which was less than vitamin C at the same concentration.     

蛹虫草菌丝体多糖与子实体多糖体外免疫调节活性的研究

目的 分析蛹虫草菌丝体多糖（mycelia polysaccharides of Cordyceps militaris,MPS）与蛹虫草子实体多糖（polysaccharides from fruiting body of Cordyceps militaris,FPS）的体外免疫活性。方法 以RAW264.7细胞株为受试对象,从细胞增殖、中性红吞噬能力、NO释放水平角度系统考察不同浓度的MPS与FPS的免疫调节活性,并分析其量化关系。结果 MPS与FPS均可明显促进RAW264.7细胞株的增殖、对中性红的吞噬能力和NO释放水平,且均呈现出浓度依赖性的特征。二者对RAW264.7细胞株增殖的促进作用无显著性差异,但在免疫调节最佳作用浓度方面却存在一定差异,MPS在100μg·mL^-1时表现出最好的细胞吞噬能力,而FPS在200μg·mL^-1时表现出最高的细胞吞噬能力。结论 MPS与FPS均具有显著的体外免疫活性。     

肺炎球菌无动物源性成分培养工艺及纯化新工艺探索

目的:比较无动物源性成分培养基和动物源性培养基培养肺炎球菌的差异;摸索不使用有机溶剂的肺炎球菌多糖纯化新工艺。方法:用无动物源性的原料替代肺炎发酵培养基中动物源性的成分,考察菌体密度和多糖收量的变化;采用柱层析纯化工艺收获肺炎球菌多糖,测定各阶段核酸、蛋白、多糖含量。结果:与疫苗生产所采用动物源性发酵培养基相比,无动物源性发酵培养基收获的1,7F,19A型菌体密度分别提高了1倍左右;发酵液中多糖含量分别提高了48%,50%和200%;多糖收量提高了30%～90%。纯化新工艺收获的17F,18C,19F精糖,核酸和蛋白的含量均远远低于企业的注册标准,HPLC检测多糖纯度分别为99.24%,98.92%和99.02%。结论:无动物源性成分发酵培养基适合于肺炎球菌生长,不仅增加了多糖产量,也提高疫苗的安全性;纯化新工艺能够收获合格的肺炎精制多糖。     

蒽酮硫酸法测定牛蒡利咽粥中多糖含量

目的：测定牛蒡利咽粥中多糖含量。方法：采用蒽酮-硫酸法,以葡萄糖为对照品,于625nm波长处测其吸光度,测定总多糖的含量。结果：葡萄糖质量浓度在0.02～0.14mg·mL-1范围内与吸收度呈良好的线性关系;平均回收率为99.90%,RSD=0.20%;测得的总多糖平均含量为21.69mg·g-1。结论：采用蒽酮-硫酸法测定牛蒡利咽粥中总多糖含量,快速准确,稳定性好,可作为该制剂总多糖含量测定方法。     

神香草总多糖的提取工艺研究

目的对维药神香草总多糖的最佳提取工艺进行研究。方法用正交试验法筛选最佳提取工艺,并用蒽酮-硫酸法测定多糖含量。结果最大吸收波长为620 nm,RSD=2.84%（n=3）,神香草总多糖的最佳提取工艺为：料液比1∶25,提取次数2次,提取时间1 h,醇沉浓度为80%。结论该方法简单、快速、重复性好,为从神香草中提取多糖提供了参考依据。