阿魏酸钠对TNF-α致内皮细胞一氧化氮分泌的影响

为探讨阿魏酸钠对肿瘤坏死因子 (TNF-α)致血管内皮细胞一氧化氮 (NO)分泌的影响及可能机制 ,通过测定细胞培养液中 NO分泌量及免疫组化技术检测内皮细胞 NF-k B的表达来观察阿魏酸对 TNF-α致培养内皮细胞一氧化氮分泌的影响。结果显示 ,TNF-α能使内皮细胞培养液中 NO含量及内皮细胞 NF-k B表达增高 ;阿魏酸钠与 TNF-α共同作用后细胞培养液中 NO含量及内皮细胞 NF-k B表达降低。提示阿魏酸钠可显著减轻 TNF-α致内皮细胞 NO分泌量的增加 ,其机理可能是通过抑制内皮细胞 NF-KB的活化而阻断诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)基因的表达有关。     

碱性成纤维细胞生长因子与转化生长因子β1在类风湿关节炎滑膜组织中的表达

目的 了解类风湿关节炎(RA)滑膜组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与转化生长因子β1(TGF—β1)的表达分布情况，探讨其与RA发病机制的关系。方法 应用免疫组织化学SABC法对24例RA及4例正常滑膜组织中bFGF、TGF—β1的表达分布情况进行观察分析。结果 21／24例RA滑膜组织衬里层的巨噬细胞样细胞、成纤维细胞、浸润的炎症细胞与血管内皮细胞、细胞间质可见bFGF的表达分布，并且巨噬细胞样细胞、成纤维细胞、浸润的炎症细胞的阳性程度强于血管内皮细胞、细胞间质。22／24例RA滑膜组织衬里层与衬里下层的成纤维细胞、巨噬细胞样细胞、血管内皮细胞均见TGF-β1的阳性表达分布。两者比较，阳性细胞的染色程度、染色细胞数与分布范围大致相等。4例正常滑膜组织中bFGF、TGF—β1的表达分布均为阴性。结论 RA滑膜组织中bFGF、TGF—β1的表达分布均较正常增多且表达程度大致相等，两者协同作用，参与了RA病理过程的滑膜衬里层增生、炎症细胞浸润、血管增殖与滑膜血管翳的形成及对骨与软骨的破坏。     

胃溃疡患者胃黏膜不同生长因子表达的观察

目的同步观察胃溃疡患者愈合过程中胃黏膜表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、转化生长因子β1（TGFβ1）、血管内皮生长因子（VEGF）的表达规律.方法采用免疫组化方法,观察正常胃黏膜（20例）、胃溃疡活动期（GA组30例）、愈合期（GH组30例）、瘢痕期（GS组30例）胃黏膜EGF、bFGF、TGFβ1、VEGF的表达和图像半定量分析.结果 EGF、bFGF、TGFβ1、VEGF在正常胃黏膜呈弱阳性表达,在胃溃疡活动期呈阳性表达,在愈合期和瘢痕期呈强阳性表达;GH、GS与GA比较差异有统计学意义.结论胃溃疡愈合过程中,胃黏膜EGF、bFGF、TGFβ1、VEGF的表达由弱到强,与胃黏膜的修复密切相关.     

骨质疏松性骨损伤愈合过程中细胞生长因子的动态表达

目的:从分子水平上探讨细胞生长因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在骨质疏松大鼠骨损伤愈合过程中的表达水平及其相互作用.方法:3月龄雌性大鼠64只,以去卵巢方法建立骨质疏松大鼠模型,分为骨质疏松组(OVX组)32只和假手术组(SX组)32只.运用实时荧光定量PCR检测TGF-β1、bFGF在OVX和SX组大鼠骨组织中的表达水平.结果:(1)OVX组和SX组组内骨损伤后不同时间点TGF-β1、bFGF表达水平的差别具有统计学意义(P<0.01).5d开始逐渐升高,15 d时达到高峰,30d时同落到低水平.(2)OVX组TGF-β1、bFGF mRNA的表达水平均低于同时期SX组的水平.结论:TGF-β1、bFGF在骨损伤后存在约4周的周期性表达,并且于骨质疏松性骨损伤处表达减少,这是其愈合质量下降的重要因素.TGF-β1、bFGF的表达趋势类似,提示它们之间可能存在某种协同作用.     

康复新液促进小鼠压疮创面愈合机制的研究

目的 探讨康复新液对小鼠压疮创面促进愈合的作用及机制.方法 根据缺血-再灌注损伤机制,通过体外磁片加压法制备小鼠早期压疮模型,观察康复新液对小鼠压疮愈合的影响和组织病理学改变,通过免疫组织化学法从碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子(TGF-β)、表皮细胞生长因子(EGF)的蛋白表达方面研究康复新液的作用机理.结果 康复新液对小鼠压疮具有一定的促愈作用,可促进肉芽组织生长、血管新生、坏死组织、炎性物质的清除,较高剂量的康复新液可上调bFGF、TGF-β、EGF的蛋白表达,较低剂量的康复新液亦可促进bFGF的蛋白表达.结论 康复新液对模型小鼠早期压疮创面促愈和修复的作用机制可能与促进bFGF蛋白的表达相关,对TGF-β及EGF蛋白表达的上调可能也发挥了协同作用.     

白藜芦醇对高脂处理人脐静脉内皮细胞SIRT1表达、eNOS活性及NO分泌的影响

目的:探讨白藜芦醇对高脂处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)组蛋白去乙酰化酶1(SIRT1)表达、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性及一氧化氮(NO)分泌的影响。方法:将HUVEC分为正常对照组、高脂组及高脂+白藜芦醇预处理组,培养24h后采用逆转录-聚合酶链反应法及Western印迹法分别检测培养细胞中SIRT1的mRNA及蛋白表达水平;分别以硝酸还原酶法、化学比色法检测培养液中的NO分泌量和eNOS活性。结果:与高脂组比较,白藜芦醇可增强SIRT1的mRNA及蛋白表达水平,升高NO分泌量及增强eNOS活性(P<0.05)。结论:白藜芦醇可能通过增强SIRT1表达及促进NO分泌而具有保护内皮细胞免受高脂损伤的作用。     

白藜芦醇调控长链非编码RNA MALAT1抗动脉粥样硬化

目的探讨白藜芦醇(Rev)对动脉粥样硬化(AS)的保护作用,阐明Rev对lncRNA MALAT1调控及MALAT1在AS中的表达与作用。方法 ApoE~(-/-)小鼠随机分成2组:高脂饮食(HFD)处理组;HFD同时给予Rev组,16周建立AS模型。采用HE染色检测小鼠主动脉斑块面积;电镜检测泡沫细胞的形成;采用实时定量PCR检测动脉斑块中MALAT1表达水平,以及Rev对MALAT1的影响。体外实验,检测Rev对MALAT1、IL-6、IL-1β、TNF-α的影响;MALAT1对炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的影响;游离胆固醇(FC)对MALAT1表达的影响。结果 Rev处理组明显缩小动脉斑块,并减少泡沫细胞的形成。MALAT1在动脉斑块中表达量降低,并且Rev可以明显逆转MALAT1的表达。此外, Rev可剂量依赖性降低IL-6、IL-1β、TNF-α表达。敲减MALAT1能促进炎症因子IL-6和TNF-α的表达。FC可使MALAT1的表达降低。结论 Rev可能通过调控MALAT1,进而调控炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达,发挥抗AS作用。     

妊娠相关血浆蛋白A在动脉粥样硬化不同阶段变化的研究

动脉粥样硬化(AS)是一种对慢性损伤做出的复杂的炎症反应,涉及数种细胞及相关的细胞因子、生长因子及酶系统.研究显示妊娠相关血浆蛋白A(PAPP-A)参与损伤反应和血管的修复过程及AS损伤的进展,并与斑块的不稳定性和破裂密切相关[1].本研究通过观察正常、AS初期[颈动脉内膜-中膜厚度(IMT)增厚]和AS损伤进展期(斑块形成期)PAPP-A表达的变化,进一步探讨PAPP-A与AS的关系.     

高甘油三酯血清对人脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的:研究单纯高甘油三酯血清(HTGBS)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤作用。方法:体外培养HUVEC,观察不同浓度的HTGBS对血管内皮细胞活力(MTT法测吸光度A值)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性,丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的影响。运用WesternBlot和酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测各组细胞中血红素氧化酶-1(HO-1)蛋白的表达和细胞培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)的含量。结果:5%浓度的HTGBS对血管内皮细胞有明显的损伤作用,显著降低细胞活力、NO含量和SOD、NOS活性(P<0.01),显著升高血管内皮细胞中LDH、iNOS活性和MDA含量(P<0.01),并且5%HTGBS显著诱导细胞HO-1蛋白的表达并增加细胞培养液中CO的生成量(P<0.01)。结论:HTGBS体外诱导HUVEC氧化损伤,使细胞活力和抗氧化能力显著降低,增加其通透性及脂质过氧化程度,影响内皮细胞分泌功能并能诱导HO-1蛋白表达代偿性升高。     

阿托伐他汀对高糖培养人肾系膜细胞的作用

目的探讨阿托伐他汀对糖尿病肾病的保护作用及其机制。方法对高糖培养人肾系膜细胞进行阿托伐他汀干预试验,观察人肾系膜细胞增殖、肾上腺髓质素(AM)、转化生长因子β1(TGF β1)mRNA表达的影响,及细胞培养液中AM、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、TGF β1、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原含量的变化。结果阿托伐他汀对高糖培养下人肾系膜细胞的过度增殖,TGF β1、AngⅡ、AM、LN和Ⅳ型胶原合成、分泌增多的变化具有明显的抑制作用(P<0 01)。结论阿托伐他汀可抑制高糖刺激的肾系膜细胞增殖,通过抑制AngⅡ、TGF β1 的表达、分泌,降低基质蛋白生成和沉积,发挥其肾脏保护作用。在AngⅡ、TGF β1 的表达和分泌下降后,AM的表达和分泌也随之下降。     

Sodium ferulate inhibits atherosclerogenesis in hyperlipidemia rabbits

Previous studies showed that sodium ferulate, the effective component of Chinese herb, can inhibit platelet aggregation and decrease serum lipid. However, it is still unknown if sodium ferulate could prevent atherosclerogenesis. The experiments were designed to study its effects and mechanisms on atherosclerogenesis. Blood samples and thoracic aortas obtained from Japanese rabbits fed by high-lipid or high-lipid plus sodium ferulate forage were analyzed and compared. Simultaneously, vascular endothelial cells were cultured and treated by hyperlipidemic serum solely or plus sodium ferulate. Cellular ultrastructure, nitric oxide (NO) production, and cytokines expressions were studied and compared. In vivo experiment, aorta atherosclerotic plaque area of sodium ferulate-treated rabbits was much smaller than that of high-lipid-fed rabbits and serum triglyceride was correlated positively with the plaque area in both groups. In vitro, endothelial cells incubated with hyperlipidemic serum exhibited pronounced ultrastructural abnormalities, transforming growth factor beta1 expression and NO release were significantly decreased, while basic fibroblast growth factor expression was increased. Interestingly, the treatment group results clearly demonstrated that sodium ferulate was effective to protect cells from detrimental effects of hyperlipidemic serum and to help maintain normal NO and cytokines expressions. We concluded that sodium ferulate could inhibit rabbit aorta atherosclerogenesis, possibly through decreasing the serum lipid concentration and preventing vascular endothelial cells from the injury of hyperlipidemic serum.     

CE抑制剂对糖尿病大鼠早期肾脏肥大的抑制作用及机制

目的　研究ACE抑制剂对糖尿病大鼠早期肾脏肥大的抑制作用及机制。方法　大鼠随机分单侧肾切除对照组、糖尿病组及糖尿病苯那普利治疗组。应用Northern杂交检测各组肾皮质TGFβ1mRNA表达 ,Western杂交检测各组肾皮质TGFβ1和 p2 1CIP1蛋白表达 ,荧光分光光度法测定血浆、肾皮髓质ACE活性。结果　糖尿病大鼠 1wk后体重下降(P <0 0 5 )伴肾重 /体重增加 (P <0 0 5 ) ,血浆ACE活性有所下降而肾皮质ACE活性却有所上升。Northern杂交表明糖尿病组肾皮质TGFβ1mRNA表达比对照组增加 1 3倍 ,Western杂交表明糖尿病组肾皮质TGFβ1和p2 1CIP1蛋白表达增加 ;苯那普利治疗 1wk对糖尿病肾脏肥大有抑制作用 ,对血浆、肾皮髓质ACE活性抑制分别达 89 0 %、70 0 %与70 5 % ,对肾皮质TGFβ1mRNA及TGFβ1和p2 1CIP1蛋白表达抑制分别达 4 7 7%、4 9 5 %与 6 0 0 %。结论　ACE抑制剂对糖尿病肾脏肥大的抑制作用机制可能部分与抑制肾组织TGFβ1和p2 1CIP1蛋白表达有关     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质TGFβ_1及其受体表达的影响

目的探讨苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ１及其受体表达的影响。方法大鼠随机分单侧肾切除组（Ｃ组）;糖尿病组（Ｄ组）及糖尿病苯那普利治疗组（１０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１,灌胃,ＤＢ组）,观察４ｗｋ后各组血糖、血胰岛素、血肌酐水平及体重、肾重和肾组织蛋白含量的变化,采用荧光分光光度法测定血浆及肾皮质、髓质ＡＣＥ活性。应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测各组肾皮质ＴＧＦβ１,１α（ＩＶ）前胶原及ＦＮｍＲＮＡ表达;Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检测各组肾皮质ＴＧＦβ１及细胞膜ＴβＲⅠ蛋白表达。结果苯那普利治疗４ｗｋ后能够明显缓解糖尿病大鼠高血糖、低胰岛素血症、血肌酐水平上升及体重下降、肾脏肥大。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交表明糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ１、１α（ＩＶ）前胶原及ＦＮｍＲＮＡ表达分别３．９４、４．２５及１．５０倍,Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交表明肾皮质ＴＧＦβ１及细胞膜ＴβＲⅠ蛋白表达分别上调３．１０、１．００倍,苯那普利治疗４ｗｋ后对它们均有明显抑制作用。另外,尽管糖尿病大鼠血浆ＡＣＥ活性明显下降,肾皮质ＡＣＥ活性却明显增加,苯那普利治疗后对血浆及肾皮质ＡＣＥ活性抑制分别达９２．００％和８８．７０％。结论苯那普利可抑制高血糖状态下肾皮质ＴＧ?     

DDPH对心肌肥厚大鼠PCNA,TGFβ_1,Collagen Ⅲ蛋白表达水平的影响

目的　研究PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ型在心肌组织的表达及DDPH的作用。方法　用部分狭窄腹主动脉方法 ,从术后第 4周开始 ,ig不同剂量的DDPH (2 5、5 0mg·kg-1·d-1)持续 8wk。用免疫组织化学方法检测PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ蛋白表达的变化。 结果　术后 12wk ,发现肥厚组心肌组织PCNA、TGFβ1、CollagenⅢ表达水平分别是对照组的 1 5、1 4和 2 4倍。而DDPH两个给药组蛋白表达水平明显低于肥厚组 ,但仍高于对照组。结论　DDPH对大鼠腹主动脉部分狭窄所致心肌肥厚PCNA、TGFβ1、Col lagenⅢ表达水平的增加有一定逆转作用。     

阿司匹林抑制兔腹主动脉粥样斑块破裂及MMP-2表达的研究

目的研究阿司匹林稳定粥样斑块的作用及其可能的作用机制。方法采用♂新西兰兔高脂饮食加腹主动脉内膜剥脱术制成高脂性动脉粥样硬化模型,然后给予阿司匹林5~20mg·kg-1治疗4wk,实验末诱发斑块破裂,运用图像分析方法测定斑块破裂处血栓形成的面积,利用光镜观察破裂斑块的形态学特征,采用免疫组化方法测定巨噬细胞的蛋白表达,原位杂交方法分别测定COX-2 mRNA和MMP-2 mRNA表达。结果阿司匹林5mg·kg-1和10mg·kg-1组可以抑制粥样斑块破裂处血栓的形成(P<0.01,P<0.05),且5mg·kg-1组的作用更明显;阿司匹林可以抑制斑块中泡沫细胞的形成和聚集,使纤维帽尤其是肩部区的结构保持得较为完整;阿司匹林5~10mg·kg-1可明显减少斑块内巨噬细胞数目(P<0.05),也能降低斑块中COX-2 mRNA的表达,且随着剂量的增加作用增强,在10~20mg·kg-1组的作用较为明显(P<0.05),还能明显降低粥样斑块中MMP-2 mRNA表达,但以阿司匹林5mg·kg-1组的作用较好(P<0.05)。结论阿司匹林可通过降低粥样斑块中MMP-2的表达增加动脉粥样斑块的稳定性。     

Amlodipine inhibits expression of matrix metalloproteinase-1 and its inhibitor in human vascular endothelial cells

Matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) may play an important role in the pathogenesis of atherosclerosis and atherosclerotic plaque rupture. We investigated the effect of the calcium channel blockers amlodipine and nifedipine on the expression of MMP-1 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) in endothelial cells (ECs). MMP-1 and TIMP-1 levels in conditioned media of human vascular ECs were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Collagenolytic activity was determined by fluorescence-labeled collagen digestion. The addition of interleukin-1beta (IL-1beta) increased MMP-1 levels in the culture media of ECs. Amlodipine, but not nifedipine, significantly decreased MMP-1 levels in IL-1beta-stimulated ECs. TIMP-1 levels also were significantly increased by IL-1beta, and its expression was slightly decreased by amlodipine, not by nifedipine. Amlodipine significantly inhibited collagenolytic activity in the culture media of IL-1beta-stimulated ECs, whereas nifedipine showed no significant effect on the activity. Our findings revealed that amlodipine, but not nifedipine, inhibits IL-1beta-induced MMP-1 expression in human ECs.     

阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用的影响

目的探讨MEK/ERK信号转导通路是否参与了阿魏酸钠(SF)对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用。方法以谷氨酸诱导大鼠皮层神经元凋亡为模型。采用Westernblot观察Bcl-2、caspase-3、磷酸化ERK1/2表达的改变。结果阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞caspase-3的表达,提高Bcl-2、磷酸化ERK1/2的表达。PD98059可以减弱SF的保护作用。结论 MEK/ERK1/2通路参与阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

皮质醇对人脐静脉内皮细胞迁移功能的影响及机制研究

目的 探讨皮质醇抑制血管新生的机制.方法 将体外培养G0/G1期的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为皮质醇组(无血清RPMI1640培养液中加入皮质醇)和对照组(仅用无血清RPMI1640培养液),细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞存活率,细胞迁移实验观察皮质醇对细胞迁移的影响,酶联免疫吸附法测定细胞中人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和基质细胞衍生因子1(SDF1)含量,蛋白质印迹法测定细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达.结果 皮质醇组细胞活力与对照组相比无明显差异;细胞迁移数目明显少于对照组,差异有统计学意义[ (618 ±117)个比(1200 ±57)个,P=0.00011];bFGF、SDF1与NO水平明均明显低于对照组[bFGF为(69.7 ±5.7) ng/L比(99.3±11.0) ng/L,P＜0.01;SDF1为(10.2 ±2.1)ng/L比(12.4 ±2.5)ng/L,P＜0.05;NO为(58.5±10.3)μmol/L比(97.3±6.2)μmol/L,P=0.03407].结论 皮质醇对HUVEC细胞活力无明显抑制作用,但可以明显抑制其迁移功能,并降低细胞中NO、bFGF、SDF1的含量,这可能是皮质醇抑制HUVEC迁移的作用机制.     

Beyond lipid-lowering: effects of statins on endothelial nitric oxide

Endothelial dysfunction is now recognised as an important process in the pathogenesis of atherosclerosis. Nitric oxide (NO) release by the endothelium regulates blood flow, inflammation and platelet aggregation, and consequently its disruption during endothelial dysfunction can decrease plaque stability and encourage the formation of atherosclerotic lesions and thrombi. Inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase (statins) are often utilised in the prevention of coronary heart disease due to their efficacy at lowering lipid levels. However, statins may also prevent atherosclerotic disease by non-lipid or pleiotropic effects, for example, improving endothelial function by promoting the production of NO. There are various mechanisms whereby statins may alter NO release, such as inhibiting the production of mevalonate and important isoprenoid intermediates, thereby preventing the isoprenylation of the small GTPase Rho, which negatively regulates the expression of endothelial nitric oxide synthase (eNOS). Furthermore, statins may also increase eNOS activity via post-translational activation of the phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase Akt (PI3 K/Akt) pathway and/or through an interaction with the molecular chaperone heat-shock protein 90 (HSP90). Data suggest that statins may vary in their efficacy for enhancing the release of NO, and the mechanisms dictating these differences are not yet clear. By increasing NO production, statins may interfere with atherosclerotic lesion development, stabilise plaque, inhibit platelet aggregation, improve blood flow and protect against ischaemia. Therefore, the ability of statins to improve endothelial function through the release of NO may partially account for their beneficial effects at reducing the incidence of cardiovascular events.