大蒜素在Caco-2细胞模型转运特征的研究

目的研究大蒜素在Caco-2细胞的转运特征。方法应用Caco-2细胞模型考察转运时间、药物浓度时大蒜素吸收的影响,采用高效液相色谱法测定大蒜素浓度,计算其表观渗透系（Papp）。结果随着浓度增加和时间延长,大蒜素累积通透量逐渐增加;大蒜素的Papp在2个方向比值[Papp（BL→AP）,Papp（AP→BL）]为1．80,存在方向性差异。结论大蒜素的转运属于双向转运,且吸收良好。     

左旋紫草素肠道转运及Caco-2细胞转运特性

目的研究左旋紫草素肠道及Caco-2细胞转运特征及其机制。方法应用翻转肠囊法和Caco-2细胞模型考察时间、浓度对左旋紫草素转运吸收特性的影响,应用P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对左旋紫草素转运吸收机制进行研究,采用HPLC法测定左旋紫草素的浓度,计算其表观渗透系数(Papp)。结果在Caco-2细胞模型,随浓度增加和时间延长,左旋紫草素的累积转运量逐渐增加;加用维拉帕米后,使AP侧到BL侧的表观渗透系数Papp(AP→BL)显著增加,而从BL侧到AP侧的表观渗透系数Papp(BL→AP)显著降低。在翻转肠囊模型,100μmol·L-1左旋紫草素中加入维拉帕米后Papp显著增加。结论左旋紫草素的转运存在被动转运和主动转运2种形式,P糖蛋白参与主动转运过程;该药经肠道吸收中等,加入维拉帕米可能促进吸收。     

白花前胡丁素在人结肠腺癌细胞系细胞模型上的吸收转运特征研究

目的研究白花前胡丁素在人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞模型上的转运特征。方法利用Caco-2单层细胞模型研究白花前胡丁素的双向转运,采用高效液相色谱(HPLC)法测定药物的转运量,计算其表观渗透系数(Papp),并考察时间和药物质量浓度对其转运的影响。结果白花前胡丁素在Caco-2细胞模型上的双向转运量在120min内均随时间与浓度的增加而增大,其从肠腔侧(AP)向基底侧(BL)和从BL向AP的Papp介于2.0×10-6cm/s～5.0×10-6cm/s,Papp(BL-AP)/Papp(AP-BL)<1.5。结论白花前胡丁素为吸收较差的药物,主要以被动扩散方式经肠道吸收。     

千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制研究

目的研究千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收机制。方法 MTT实验考察千层纸素A在Caco-2细胞中的安全浓度范围,再利用Caco-2细胞单层模型研究千层纸素A的双向转运机制,以转运量及表观渗透系数(Papp)为指标,考察时间、浓度、pH和P-gp抑制药维拉帕米对其吸收的影响。结果千层纸素A在Caco-2细胞模型中的转运与时间和浓度呈正相关;并受pH值影响,P-gp抑制药维拉帕米对其转运无影响,从单层细胞层顶端(AP)到基底端(BL)的转运与基底端到顶端的转运大致相同。结论千层纸素A在Caco-2细胞模型中的吸收是被动转运。     

根皮苷和3-羟基根皮苷在Caco-2细胞单层模型中的转运与吸收研究

目的:研究根皮苷和3-羟基根皮苷在人克隆结肠腺癌细胞(Caco-2细胞)单层模型中的转运与吸收。方法:采用高效液相色谱法,以表观渗透系数(Papp)为指标,分别考察50、100、200μmol/L的根皮苷和3-羟基根皮苷在Caco-2细胞单层模型中的双向(AP→BL、BL→AP)转运;并通过两药配伍同时混合转运与两药单独转运比较,考察两药转运的相互作用。结果:随着浓度的增加,根皮苷AP→BL和BL→AP的Papp均有一定的上升趋势;3-羟基根皮苷AP→BL的Papp有下降趋势,BL→AP的Papp却略有上升趋势。与单独转运比较,混合转运中根皮苷和3-羟基根皮苷的转运量和Papp均明显下降(P<0.05)。结论:根皮苷和3-羟基根皮苷在Caco-2细胞单层模型的吸收状况良好,两药配伍转运时存在竞争性抑制。     

HPLC考察白头翁汤4种标志成分在Caco-2细胞模型的转运特征

目的研究白头翁汤中标志成分秦皮甲素、秦皮乙素、小檗碱、白头翁皂苷B4在Caco-2细胞模型的转运特征及其机制。方法通过HPLC建立白头翁汤指纹图谱以及4种标志成分的同时定量分析方法,随后以Caco-2细胞模型和p-gP抑制剂维拉帕米考察复方标志成分的双向转运机制,通过HPLC检测药物浓度计算其表观渗透系数（Papp）。结果①秦皮甲素在顶端（AP）和底端（BL）双向转运大致相同,为被动转运机制;②秦皮乙素在AP侧转运大于BL侧,维拉帕米可抑制AP侧向BL侧转运,为主动转运机制;③小檗碱在AP侧和BL侧转运大致相同,对于BL-AP侧外排Papp值显著低于单体的文献报道值,在复方中可能存在化学成分抑制小檗碱BL侧向AP侧外流载体,促使外流减少,增加小檗碱的摄取;④白头翁皂苷B4紫外响应弱,未能检测出。结论白头翁汤中秦皮甲素、秦皮乙素、小檗碱可通过HPLC考察其在Caco-2细胞模型的转运特征。     

Caco-2细胞对酸枣仁皂苷A的跨膜转运

目的研究酸枣仁皂苷A（Jujuboside A,JuA）在Caco-2细胞的跨膜转运特性。方法采用体外培养的Caco-2细胞单层模型,考察时间、介质pH值、药物浓度、抑制剂对JuA在Caco-2细胞上转运的影响。结果 Caco-2细胞转运JuA呈时间及浓度依赖性;在pH为5.0～8.0范围内,Caco-2细胞对JuA的转运不受pH值的影响;P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）抑制剂维拉帕米（Verapamil,Ver）对Caco-2细胞转运JuA无影响;线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮化钠（Sodium azide）对Caco-2细胞转运JuA有抑制作用;JuA的AP-BL侧的Papp与BL-AP侧的Papp的两组均数比较无统计学意义。结论 JuA不是P-gp的底物,其跨膜转运是被动转运与主动转运共同参与的过程。     

P-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱跨膜转运的影响

目的 研究Caco-2细胞模型中P-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱跨膜转运的影响.方法 采用HPLC法测定转运液中蝙蝠葛碱的含量;采用Caco-2细胞模型双向转运实验,考察不同浓度维拉帕米、环孢素A和醋酸地塞米松3种p-糖蛋白抑制剂对蝙蝠葛碱跨膜转运的影响.结果 加入3种P-糖蛋白抑制剂后,蝙蝠葛碱的Papp(A-B)均有一定程度增加,而Papp(B-A)均有显著降低(P＜0.05),即均抑制了蝙蝠葛碱的外排转运.结论 外排转运体P-糖蛋白对蝙蝠葛碱有外排作用,蝙蝠葛碱可能为P-糖蛋白底物.     

Caco-2细胞对负载维生素D_3的纳米粒的摄入研究

目的研究Caco-2细胞对负载维生素D3的、FITC标记的自组装海藻酸钠纳米粒(sSAN-VD3-FITC)的摄取及其影响因素,分析其通过Caco-2细胞吸收模型的跨膜转运特点。方法①采用激光共聚焦显微镜检测sSAN-VD3-FITC的摄取,分析作用时间的影响;②采用Caco-2细胞模型研究其跨膜转运,检测接受液的荧光强度,观察其转运特点。计算表观渗透系数(Papp),分析作用时间对转运的影响。结果①sSAN-VD3-FITC作用1 h后细胞质内出现荧光颗粒,4 h后荧光强度增强。②转运接受液的荧光强度、累积转运量较空白对照组均明显升高(P<0.05),均存在时间依赖性(P<0.05)。Papp较稳定,但随作用时间的延长逐渐减小。结论 sSAN-VD3可被Caco-2细胞摄取,并受作用时间的影响;可通过Caco-2细胞模型进行跨膜转运,并存在时间依赖性,表明其可经胃肠道给药吸收入血。     

LC-MS测定雷公藤甲素及其在Caco-2细胞上的转运特征

目的：建立体外模拟体内肠道细胞的Caco-2细胞Transwell模型,以此研究雷公藤甲素在Caco-2细胞模型上的跨膜转运特征。方法：采用聚酯碳酸酯膜连续培养Caco-2细胞21天,形成致密的单层细胞模型。然后对影响雷公藤甲素在Caco-2细胞模型上转运特征的因素包括浓度、时间及跨膜转运蛋白（P-糖蛋白,多药耐药蛋白,乳腺癌耐药蛋白）进行考察;同时采用LC-MS对溶液中的雷公藤甲素的含量进行测定。结果：雷公藤甲素主要以主动转运的方式进行吸收,且随着时间和药物浓度的增加,转运量明显增加。结论：雷公藤甲素在Caco-2细胞上转运存在一定的浓度及时间依赖性,且P-gp介导雷公藤甲素在Caco-2细胞上转运。     

Transport of thalidomide by the human intestinal caco-2 monolayers.

Studies in patients have indicated that the oral absorption of thalidomide is considerably variable at high doses (>200 mg/day). The aim of this study was to investigate the transport of racemic thalidomide using human colon cancer cell line (Caco-2) monolayers, which have been widely used to investigate drug permeability. A typical 21-day protocol was used to prepare Caco-2 monolayers. Thalidomide was determined by a validated high performance liquid chromatography method with ultraviolet detection. The integrity of Caco-2 monolayer was confirmed when the transepithelial electrical resistance (TEER) exceeded 300 Ohmz . cm2, and the leakage of 14C-manitol was <1% per hour. Uptake of thalidomide by Caco-2 cells was very limited (up to 2.1%). The transport of thalidomide appeared to be linear up to 1 hr. Our study indicated that the permeability coefficients (Papp) of thalidomide at 2.5-300 microM from the apical (AP) to basolateral (BL) and from BL to AP side was 2-6 x 10(-5) cm/sec, with a marked decrease in Papp values from AP to BL at increased thalidomide concentration. The transport of thalidomide was sodium-, temperature- and pH-dependent, as replacement of extracellular sodium chloride or reducing temperature and apical pH can result in significant decreases in the Papp values. Additional data indicated that transport of thalidomide is energy-dependent, as it was significantly (P < 0.05) inhibited by the ATP inhibitors, sodium azide and 2,4-dinitrophenol. In addition, DL-glutamic acid, cytidine, diprodomole, papaverine, quinidine, and cyclophosphamide significantly (P < 0.05) inhibited the transport of thalidomide, while the P-glycoprotein inhibitor verapamil and other nucleosides and nucleotides such as thymidine and guanine had no effect. These results indicated that thalidomide was rapidly transported by Caco-2 monolayers, and this might involve a saturable energy-dependent transporter.     

Caco-2细胞模型比较黄芩苷和黄芩苷滴丸在小肠的吸收

目的：比较黄芩苷和黄芩苷滴丸在小肠的吸收。方法：采用Caco-2细胞单层模型研究黄芩苷和黄芩苷滴丸由绒毛面到基底面的跨膜转运过程。通过测定黄芩苷和黄芩苷滴丸在Caco-2细胞模型的转运百分率及表观渗透系数（Papp）,比较二者的跨膜转运能力。结果：在细胞转运实验中,135min时,黄芩苷和黄芩苷滴丸的转运百分率分别为1.00%和6.25%,Papp分别为（0.664±0.103）×10-6cm·s-1和（4.462±1.10）×10-6cm·s-1,黄芩苷滴丸的Papp是黄芩苷的6倍。在跨膜转运180min内,黄芩苷滴丸的转运百分率与时间成正比。结论：将黄芩苷制成滴丸可能提高黄芩苷在小肠的吸收。     

利用人源Caco-2细胞单层模型研究罂粟碱、N-甲基四氢罂粟碱和头花千金藤碱在人肠道的吸收

研究罂粟碱(papaverine，PAP)、N-甲基四氢罂粟碱(laudanosine，LAU)和头花千金藤碱(cepharanthine，CEP)在人小肠的吸收。利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究PAP、LAU和CEP由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)、BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用HPLC-UV对上述3个生物碱进行定量分析，计算转运参数和表观渗透系数，并与易吸收性对照药普萘洛尔和难吸收性对照药阿替洛尔进行比较。PAP、LAU和CEP由AP侧到BL侧的表观渗透系数(P_app)分别为(3.524±0.223)×10^-5、(2.821±0.050)×10^-5和(6.524±0.052)×10^-5 cm·s^-1；由BL侧到AP侧的P_app分别为(5.095±0.508)×10^-5、(2.646±0.146)×10^-5和(5.495±0.036)×10^-5 cm·s^-1，与在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔基本一致。PAP、LAU和CEP的P_{app A→B}/P_{app B→A}分别为0.69、1.07和1.19；PAP外流是摄取的1.45倍。PAP、LAU和CEP可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内，属于良好吸收的药物。在三者的吸收转运过程中，油/水分配系数起着关键性的作用。PAP在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制。     

Influence of vitamin E tocopherol polyethylene glycol succinate 1000 on intestinal absorption of icariside II

In the present study, the Caco-2 monolayer model and a four-site rat intestinal perfusion model were used to investigate the effects of vitamin E tocopherol polyethylene glycol succinate 1000 (TPGS) on the intestinal absorption of icariside II. Icariside II was analyzed by ultra-performance liquid chromatography (UPLC). After that its apparent permeability coefficients (Papp) and effective permeability (P*(eff)) were calculated. In the Caco-2 cell model, Papp values from the apical (AP) to the basolateral (BL) of icariside II were increased and its efflux ratios were markedly reduced in the presence of TPGS. However, either 0.25 mg/mL or 0.5 mg/mL of TPGS had no significant difference in promoting the absorption of icariside II. In four-site rat intestinal perfusion model, P*(eff) of icariside II were significantly increased by 0.5 mg/mL of TPGS in ileum and colon. The results suggest that TPGS could promote the intestinal absorption of icariside II.     

人参皂苷Rb_3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征研究

目的:研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。方法:人参皂苷Rb3细胞样品经高速离心后取上清液,以乙腈-1mmo·lL-1甲酸铵水溶液(34∶66)为流动相,以人参皂苷Rg2为内标,采用电喷雾离子源(ESI),在负离子条件下以多重离子反应监测模式(MRM)检测。检测离子:m/z1077.7→m/z783.4(人参皂苷Rb3),m/z783.6→m/z475.1(人参皂苷Rg2)。测定透过Caco-2单细胞层的人参皂苷Rb3浓度并计算其表观渗透系数(Papp)。结果:人参皂苷Rb3的线性范围为50～2000ng·mL-1,日间、日内精密度均小于15%。Papp从基顶侧(AP)到基底侧(BL)为3.22×10-6cm·s-1,从BL侧到AP侧为6.0×10-6cm·s-1,其P(BL-AP)/P(AP-BL)比值为1.86。结论:本方法简单、灵敏度高,可用于研究人参皂苷Rb3在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征。     

以Caco-2细胞模型研究远志皂苷水解物的肠吸收特性

目的 通过研究远志皂苷水解物主要活性成分3,4,5-三甲氧基肉桂酸(TMCA)、对甲氧基肉桂酸(PMCA)和细叶远志皂苷(TF)的肠转运特性,预测其口服生物利用度.方法 利用Caco-2细胞模型,以及所建立的LC-MS/MS分析方法,研究上述3个成分在不同浓度下从顶侧(AP)到基底侧(BL)以及从BL到AP2个方向的转运特性.结果 TMCA和PMCA 2个酚酸化合物具有较好的膜通透性,在不同浓度下从AP到BL的表观渗透系数(Papp)均＞10×10-6cm·s-1,而三萜皂苷TF的通透性较差,Papp值均＜1×10-6cm· s-1.3个化合物的转运量均随浓度的增加而增加,但Papp值保持基本一致,且各自2个方向的Papp值无明显差异.结论 TMCA和PMCA具有良好的肠通透性,属吸收较好的化合物,而TF则通透性较差,口服吸收可能很有限;3个化合物均以被动扩散形式转运,且无外排转运机制.