金粉蕨素对脂质过氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的 :探讨金粉蕨素对脂质过氧化损伤人内皮细胞株 (ECV30 4 )的保护作用及其可能的分子作用机制。方法 :在铜离子诱发的低密度脂蛋白氧化修饰的基础上 ,建立内皮细胞 (endothelialcell ,EC)的脂质过氧化损伤模型 ;采用MTT比色法、硝酸还原酶法等方法 ,测定不同浓度金粉蕨素 (1.0、5 .0、10 .0 μmol·L-1)对EC生长抑制率、硫代巴比妥反应物 (thiobarbituricacid reactivesubstances ,TBARS)、LDH及NO含量的影响。结果 :氧化修饰低密度脂蛋白 (oxidativelymodifiedlowdensitylipoprotein ,ox LDL)作用 2 4h后 ,对EC的生长增殖有明显的抑制作用 ,细胞培养液中TBARS、LDH水平显著升高 ,NO含量降价 ;而不同浓度金粉蕨素与oxLDL共同孵育2 4h ,呈剂量依赖性对抗oxLDL对EC的损伤 ,并促进EC增殖 ,同时使培养液中TBARS、LDH含量降低 ,NO含量回升。结论 :脂质过氧化能直接损伤内皮细胞 ,金粉蕨素对脂质过氧化损伤的内皮细胞有保护作用     

氨基胍改善高果糖对大鼠主动脉内皮依赖性舒张功能损伤的保护作用及机制

目的探讨氨基胍对高果糖致大鼠离体胸主动脉环内皮依赖性舒张反应损伤的保护作用及机制。方法用离体血管环灌流装置,观察不同浓度氨基胍对高果糖引起血管内皮依赖性舒张反应损伤的保护作用;并分析血管壁中NO含量以及eNOS、Akt和ERK1/2蛋白磷酸化的表达。结果高果糖抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张,降低血管壁中NO的含量和eNOS活性,并促进ERK1/2磷酸化水平上调,但对Akt磷酸化无显著影响;用氨基胍与高果糖共同孵育后,明显改善高果糖对内皮依赖性舒张反应的损伤并恢复血管壁NO含量和eNOS活性,同时降低ERK1/2磷酸化水平。结论氨基胍能改善高果糖对离体胸主动脉环内皮依赖舒张反应的损伤作用。其保护机制与抑制ERK1/2磷酸化和恢复eNOS活性有关,而与AKT磷酸化活性无关。     

金粉蕨素拮抗血管内皮细胞氧化应激损伤及机制

目的 :研究金粉蕨素 (onychin ,Ony)对血管内皮细胞氧化应激损伤的影响及可能机制。方法 :培养人脐静脉血管内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,经Ony处理后 ,用过氧化氢 (H2 O2 )对其损伤 ;用MTT比色法和乳酸脱氢酶测定法分别检测损伤组和处理组细胞增殖活性和功能状态 ;用Western Blot法检测磷酸化ERK1 2和p38、P90RSK蛋白的表达。结果 :不同浓度的Ony(0 .3、1、3、10 μmol·L-1)促进H2 O2 损伤的内皮细胞增殖 ,减少LDH释放 ,并呈浓度依赖性。Ony(3μmol·L-1)抑制H2 O2 诱导的磷酸化p38表达 ,30min时最明显 ,但并不影响H2 O2 对ERK的激活以及ERK下游蛋白激酶P90RSK的表达。而阳性对照药genistein虽可增加内皮细胞增殖活性和减少功能损伤 ,但明显抑制H2 O2 诱导的磷酸化ERK表达及其下游蛋白激酶P90RSK。结论 :Ony拮抗血管内皮细胞氧化应激损伤可能与抑制p38磷酸化有关。     

银杏黄酮苷对氧化损伤内皮细胞产生NO、eNOS和ICAM-1的影响

目的观察银杏黄酮苷对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）产生NO、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和人可溶性细胞间黏附分子（ICAM-1）的影响。方法体外培养HUVEC,传至3代后,以不同浓度的银杏黄酮苷分别作用于HUVEC,然后进行氧化损伤处理。以硝酸还原酶法测定培养液上清中的NO水平,免疫细胞化学法检测内皮细胞eNOS的表达,ELISA法测定细胞培养液中ICAM-1的含量。结果HUVEC在氧化损伤（H2O2100μmol/L,2h）后产生NO的量显著减少（P〈0.01）,eNOS表达下调,ICAM-1表达上调;银杏黄酮苷可以剂量依赖性的增加内皮细胞NO生成量,上调eNOS的表达,下调ICAM-1表达。结论银杏黄酮苷可能通过增加HUVEC eNOS的表达增加N0的释放、抑制ICAM-1的表达等机制对内皮细胞起保护作用。     

扇贝裙边糖胺聚糖对OX-LDL致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的　研究扇贝裙边提取物糖胺聚糖 (SS GAG)对血管内皮细胞的保护作用 ,进而探讨其抗动脉粥样硬化 (AS)作用机制。方法　本研究采用氧化低密度脂蛋白 (OX LDL)建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株 (HUVEC ,CRL 2 4 80 )损伤模型 ,用MTT法和化学方法分别从细胞和分子水平观察SS GAG对血管内皮细胞增殖活性及细胞内一氧化氮 (NO)水平和内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)活性的影响。结果　OX LDL能明显抑制血管内皮细胞的增殖活性 (P <0 0 1) ,降低血管内皮细胞内NO水平及eNOS的活性 (P <0 0 1) ;用SS GAG(终浓度为 5 0 ,10 0 ,2 0 0mg·L-1)预处理后 ,能逆转上述效应 (P <0 0 1)。结论　OX LDL抑制血管内皮细胞的增殖 ,降低内皮型eNOS的活性 ,减少细胞内NO的生成 ;SS GAG对血管内皮细胞的脂质过氧化物损伤有保护作用。     

艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤及一氧化氮合酶-一氧化氮的影响

目的:研究艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及一氧化氮合酶-一氧化氮(NOS-NO)的影响。方法:体外传代培养人脐静脉内皮细胞,给予0.1μg·mL-1和0.01μg·mL-1艳山姜挥发油孵育24h后,加入100μg·mL-1 ox-LDL作用24h诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型,倒置相差显微镜及吉姆萨染色观察细胞形态学变化,比色法分析细胞培养液NO的含量与细胞裂解液NOS分型活力。结果:Ox-LDL与人脐静脉内皮细胞作用24h后,细胞胞膜皱缩,细胞数目减少,tNOS与eNOS活力显著降低,培养液NO含量降低。艳山姜挥发油显著改善细胞形态学变化,提高细胞tNOS与eNOS活力及培养液中NO含量。模型组与艳山姜挥发油组均对iNOS未见显著影响。结论:艳山姜挥发油对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤具有保护作用,其保护作用与改善eNOS活力,提高NO水平相关。     

红景天苷对小牛胸主动脉内皮细胞的保护作用

目的:探讨红景天苷对小牛胸主动脉内皮细胞过氧化损伤﹑缺氧/复氧损伤的作用及其机制.方法:体外培养原代小牛胸主动脉内皮细胞,观察红景天苷对正常细胞增殖的作用及cNOS活性;用H2O2和Na2S2O4分别复制过氧化损伤模型和复制缺氧/复氧损伤模型,测定细胞活性(MTT法),并测量LDH、NO、SOD和MDA含量.结果:红景天苷明显促进正常内皮细胞增殖,给药后24小时作用明显,增加细胞裂解液中cNOS活性;在氧化损伤模型和缺氧/复氧损伤模型中,红景天苷明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性和NO的释放,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量.结论:红景天苷能促进正常内皮细胞增殖,对缺氧/复氧损伤、过氧化损伤内皮细胞均有一定的保护作用.     

芍药苷对缺氧损伤内皮细胞产生NO、eNOS和细胞粘附分子的影响

目的:观察芍药苷对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)产生一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和细胞粘附分子(ICAM-1、VCAM-1)的影响。方法:体外培养HUVEC,传至3代后,以不同浓度的芍药苷分别作用于HUVEC,同时进行缺氧处理。以硝酸还原酶法测定培养液上清中的NO,免疫细胞化学法检测内皮细胞eNOS的表达,细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-1和VCAM-1的含量。结果:HUVEC在缺氧48h后产生NO的量显著减少(P<0.001),eNOS表达下调,而ICAM-1、VCAM-1表达上调;芍药苷可以剂量依赖性的增加内皮细胞NO生成量,上调eNOS的表达,下调ICAM-1、VCAM-1表达。结论:芍药苷可能通过增加HUVEC eNOS的表达增加NO的释放、抑制ICAM-1及VCAM-1的表达等途径对内皮细胞起保护作用。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

金粉蕨素抑制大鼠主动脉平滑肌增殖作用及机制

目的 :观察金粉蕨素对牛血清刺激的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,以终浓度为 10 %的新生牛血清 (NCS)作为刺激因素 ,用噻唑蓝 (MTT)比色法和细胞计数法观察细胞增殖状况 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用Westernblot实验测定蛋白表达。结果 :与 10 %牛血清组相比 ,不同浓度金粉蕨素组的MTT测定值与细胞数目均明显下降 (P <0 .0 5 ) ,其下降幅度呈浓度依赖性 ;10 μmol·L-1时达峰值 (P <0 .0 1) ;细胞周期分析显示 ,金粉蕨素组G1期百分比 (85 .1% )高于10 %牛血清组 (70 .0 % ) ,而S期比例 (4 .3% )低于10 %牛血清组 (16.4 % ) ;Westernblot结果显示给药组P ERK1 2蛋白表达明显低于同时间点牛血清组。结论 :金粉蕨素能阻止细胞周期由G0 G1期向S期推进 ,抑制血管平滑肌细胞增殖 ,此作用与其抑制ERK1 2磷酸化、影响MAPK ERK通路激活有关。     

Onychin inhibits proliferation of vascular smooth muscle cells by regulating cell cycle

AIM: To investigate the effects of onychin on the proliferation of cultured rat artery vascular smooth muscle cells (VSMCs) in the presence of 10% new-born calf serum (NCS). METHODS: Rat VSMCs were incubated with onychin 150 micromol/L or genistein 10 micromol/L in the presence of 10% NCS for 24 h. The proliferation of VSMCs was measured by cell counting and MTS/PMS colorimetric assays. Cell cycle progression was evaluated by flow cytometry. Retinoblastoma (Rb) phosphorylation, and expression of cyclin D1 and cyclin E were measured by Western blot assays. The tyrosine phosphorylation of ERK1/2 was examined by immunoprecipitation techniques using anti-phospho-tyrosine antibodies. RESULTS: The proliferation of VSMCs was accelerated significantly in the presence of 10% NCS. Onychin reduced the metabolic rate of MTS and the cell number of VSMCs in the presence of 10% NCS in a dose-dependent manner. Flow cytometry analysis revealed that the G1-phase fraction ratio in the onychin group was higher than that in the 10% NCS group (85.2% vs 70.0%, P<0.01), while the S-phase fraction ratio in the onychin group was lower than that in 10% NCS group (4.3% vs 16.4%, P<0.01). Western blot analysis showed that onychin inhibited Rb phosphorylation and reduced the expression of cyclin D1 and cyclin E. The effects of onychin on proliferation, the cell cycle and the expression of cyclins in VSMCs were similar to those of genistein, an inhibitor of tyrosine kinase. Furthermore immunoprecipitation studies showed that both onychin and genistein markedly inhibited the tyrosine phosphorylation of ERK1/2 induced by 10% NCS. CONCLUSION: Onychin inhibits the proliferation of VSMCs through G1 phase cell cycle arrest by decreasing the tyrosine phosphorylation of ERK1/2, and the expression of cyclin D1 and cyclin E, and sequentially inhibiting Rb phosphorylation.     

Oxymatrine improves palmitic acid-induced vascular endothelial cell injury through Akt-eNOS-NO signaling pathway北大核心CSCD

目的探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对棕榈酸(palmitic acid,PA)致血管内皮细胞损伤的改善作用及其机制。方法MTT法检测人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞内活性氧(ROS)水平以及细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及一氧化氮(NO)水平;Western blot法检测bcl-2、bax、caspase-3、Akt和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的蛋白表达。结果OMT对PA诱导的HUVECs细胞存活率下降和LDH水平升高有明显的抑制作用;降低细胞凋亡;上调bcl-2/bax蛋白比值及下调caspase-3蛋白表达;在细胞培养液中降低ROS和MDA水平而提高SOD、GSH-PX和NO水平;上调Akt和eNOS的磷酸化蛋白表达。结论OMT通过Akt-eNOS-NO信号通路改善PA诱导的血管内皮细胞损伤。     

丹皮酚对高脂血清损伤的人内皮细胞的保护作用(英文)

目的观察丹皮酚对高脂血清损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用,并探讨其作用机制。方法 20%高脂血清作用于HUVECs细胞24 h制备高脂血清损伤模型。丹皮酚组细胞加入20%高脂血清24 h后再分别加入丹皮酚124,247和495μmol.L-1。采用倒置显微镜观察HUVECs形态学变化;MTT法检测细胞存活率;用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)含量;用RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果与正常对照组相比,模型组中大部分细胞出现片状分离和脱落,然而丹皮酚干预后细胞形态趋于正常。丹皮酚能够显著提高细胞存活率(P<0.01)。经丹皮酚124,247和495μmol.L-1干预后,细胞存活率从模型组的(53.0±10.1)%依次升高至(68.4±9.1)%,(84.5±6.7)%,(98.1±7.5)%。丹皮酚能够显著提高NO含量和eNOS mRNA水平(P<0.01)。NO含量从模型组的(54±4)μmol.L-1依次升高至79±6,115±5和(136±6)μmol.L-1;eNOS mRNA的表达水平由模型组的0.215±0.060增加至0.451±0.045,0.563±0.013,0.704±0.068。结论丹皮酚可能通过上调高脂血清损伤人脐静脉内皮细胞eNOS的表达促进NO的合成,从而发挥其对高脂血清损伤内皮细胞的保护作用。     

高糖对原代人脐静脉内皮细胞的损伤作用及机制研究

目的 观察高浓度葡萄糖对原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)的损伤作用,并探讨其损伤机制.方法 分别用低浓度葡萄糖(LG组,5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖(HG组,35 mmol/L)培养基培养HUVECs 24、72、120 h,胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测高糖对HUVECs存活率影响,荧光探针检测细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、沉默信息调节因子1(silent mating type informationregulation 2 homolog 1,SIRT1)和一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 HG组处理72、120 h细胞存活率、Bcl-2均低于LG组,ROS水平、Bax和Bax/Bcl-2高于LG组,差异有统计学意义(P＜0.05).HG组处理HUVECs 24、72、120 hSIRT1和NO相对含量低于LG组,处理72、120 h eNOS低于LG组(P＜0.05).结论 高糖可使HUVECs存活率下降,增强细胞内氧化应激反应,提高Bax/Bcl-2比值,可能与抑制SIRT1-eNOS通路使NO生成减少有关.     

N-acetylcysteine attenuates TNF-alpha-induced human vascular endothelial cell apoptosis and restores eNOS expression

The circulatory inflammatory cytokine tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) is increased in pathological conditions, such as diabetes, which initiate or exacerbate vascular endothelial injury. Both nitric oxide (NO) and reactive oxygen species may play a dual role (i.e., inhibiting or promoting) in TNF-alpha-induced endothelial cell apoptosis. We investigated the effects of the antioxidant N-acetylcysteine on TNF-alpha-induced apoptosis in human vascular endothelial cell (cell line ECV304) apoptosis, NO production and lipid peroxidation. Cultured vascular endothelial cell (ECV304) were either not treated (control), or treated with TNF-alpha (40 ng/ml) alone or TNF-alpha in the presence of N-acetylcysteine at 30 mmol/l or 1 mmol/l, respectively, for 24 h. Cell viability was measured by MTT (3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay. Cell apoptosis was assessed by flow cytometry. TNF-alpha-induced endothelial cell apoptosis was associated with increased inducible NO synthase but reduced endothelial NO synthase (eNOS) protein expression. NO production and the levels of the lipid peroxidation product malondialdehyde were concomitantly increased. Treatment with NAC at 30 mmol/l restored eNOS expression and further increased NO production as compared to TNF-alpha alone, resulting in improved cell viability and reduced apoptosis. This was accompanied by increased superoxide dismutase activity, increased glutathione peroxidase production and reduced malondialdehyde levels. N-acetylcysteine at 1 mmol/l, however, did not have significant effects on TNF-alpha-induced endothelial cell apoptosis and cell viability despite it slightly enhanced glutathione peroxidase production. N-acetylcysteine attenuation of TNF-alpha-induced human vascular endothelial cell apoptosis is associated with the restoration of eNOS expression.