一种更新的检测DNA交联的尝试

ＤＮＡ交联是外来化学物作用于ＤＮＡ所致的重要遗传损伤 ,与其他类型ＤＮＡ损伤相比 ,ＤＮＡ交联较难修复或易于发生易错修复 ,在细胞周期中维持时间较长。当ＤＮＡ复制时 ,一些重要的基因容易丢失 ,且经常发生染色体断裂 ,甚至致死性突变[1 ,2 ] 。故筛检环境化学物的ＤＮＡ交联性损伤具有极其重要的意义。然而 ,由于检测方法的局限 ,极大地制约了其应用。近年来 ,国内外偶有将彗星试验 (Ｃｏｍｅｔａｓｓａｙ)用于检测ＤＮＡ交联的报道[3,4 ] ,但很不系统和全面。本室在深入挖掘彗星试验的应用前景时 ,首次探讨了通过增加电压或延长电泳…     

彗星试验检测DNA交联及其修复效应的研究

ＤＮＡ交联一般分为ＤＮＡ 蛋白质交联 (ＤＮＡ ｐｒｏｔｅｉｎｃｒｏｓｓｌｉｎｋｓ,ＤＰＣ)和ＤＮＡ ＤＮＡ交联 (ＤＮＡ ＤＮＡｃｒｏｓｓｌｉｎｋｓ,ＤＤＣ)两类 ,它们都是环境污染物和化学致癌物引起的生物大分子物质发生遗传损害的结果。与其他类型ＤＮＡ损伤相比 (如ＤＮＡ链断裂 ) ,ＤＮＡ交联较难修复或易于发生易错修复 ,在细胞周期中维持时间较长。当ＤＮＡ复制时 ,一些重要的基因容易丢失 ,且经常发生染色体断裂 ,甚至致死性突变[1 ,2 ] 。故筛检环境化学物的ＤＮＡ交联性损伤和观察其修复效应具有极其重要的意义。然而 ,由于检…     

RDPCR技术检测p53基因DNA损伤的研究

目前可资利用的检测特定基因ＤＮＡ损伤的手段较少。连接介导聚合酶链反应 (ｌｉｇａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄｐｏｌｙ ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＬＭＰＣＲ)技术由于其灵敏度高和特异性强等优点 ,在研究ＤＮＡ加合物和氧化损伤等方面有较多报道[1～ 3] ,我们也成功地将其应用于检测ＤＮＡ链断裂[4 ] 。但该技术需用酶或化学方法处理在碱基修饰位点把ＤＮＡ链人为切断 ,限制了其应用[5] 。Ｇｒｉｍａｌｄｉ等[6 ] 改进设计的单链连接ＰＣＲ (ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｌｉｇａｔｉｏｎＰＣＲ ,ＳＬＰＣＲ)技术 ,虽然克服…     

溴乙锭荧光法测定环境污染物的 DNA 交联作用

溴乙锭荧光法测定环境污染物的ＤＮＡ交联作用尹立红浦跃朴杨薇（南京铁道医学院预防医学系，南京２１０００９）ＤＮＡ交联溴乙锭荧光分析法（ＥＦＡ）是一种灵敏，快速，简便检测ＤＮＡ交联作用的方法，已被广泛用于化学物质ＤＮＡ损伤机制的研究．该方法是基于双链间交...     

建立非放射性连接介导PCR技术检测p53基因链断裂

ＤＮＡ链断裂是一种严重的ＤＮＡ损伤。它可引起基因突变 ,ＤＮＡ重排 ,染色体结构异常乃至细胞死亡等。在常用的检测方法中 ,单细胞凝胶电泳技术具有灵敏、快速、简便、直观等优点 ,本室曾作过系统研究[1 ] 。但是 ,和其他常用方法一样 ,该技术也不能检测特定基因的ＤＮＡ链断裂。而一些重要的基因如癌基因和抑癌基因的ＤＮＡ损伤与致突变 致癌效应的关系非常密切 ,因此检测这些基因的ＤＮＡ链断裂可能更有利于阐明链断裂剂的作用特点和机制 ,具有更加重要的意义。国外有人利用连接介导聚合酶链反应 (Ｌｉｇａｔｉｏｎ ＭｅｄｉａｔｅｄＰ…     

125~I－后标记检测DNA－蛋白质交联物的研究

１２５~Ｉ－后标记法是庄志雄等人（１９９４）提出的一种检测ＤＮＡ－蛋白质交联物（ＤＰＣｓ）的新技术，该法在检测离体ＣＨＯ细胞ＤＰＣｓ的实验中已显示出敏感、快速和简便的优点。本研究表明，１２５~Ｉ－后标记法不仅能有效地检出由紫外光和铬酸钾诱导的ＣＨＬ细胞ＤＰＣｓ，并能有效而敏感地检测由铬酸钾和氯化镍引起的大鼠不同组织特别是白细胞ＤＰＣｓ形成的情况，是一种敏感的和可考虑应用于人群调查的ＤＰＣｓ检测方法。     

单链连接PCR技术检测p53基因的DNA损伤

ＤＮＡ损伤 ,包括链断裂、氧化损伤和ＤＮＡ加合物等 ,是化学致癌过程中早期可检测的关键步骤[1] 。与肿瘤形成关系密切的原癌 抑癌基因 ,是致癌物重要的攻击靶 ,因此检则这些基因的ＤＮＡ损伤 ,对于研究致癌物的毒作用特点和分子机制 ,具有重要意义。然而 ,目前可资利用的检则特定基因ＤＮＡ损伤的手段较少。连接介导聚合酶链反应 (Ｌｉｇａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＬＭＰＣＲ)技术由于其灵敏度高、特导性强等优点 ,在研究ＤＮＡ加合物和氧化损伤等方面有较多报道[2 ,3 ] ,我们也成功…     

上下增减剂量法与Horn''s法测定LD50的研究

LD50 是评价受试物毒性分级的重要参数 ,传统的测定方法如寇氏法、Horn’s法使用动物较多 ,造成人力物力的浪费。上下增减剂量法 (Up and DownProcedure ,UDP)是一种方法简单、使用动物少的替代方法。该方法最早由Dixon和Mood提出[1,2 ] 。经济合作与发展组织 (OECD)经多次修订 ,于 2 0 0 1年正式采纳UDP法 (TG4 2 5 )以评价受试物的急性经口毒性[2 ] 。该方法包括限度试验和正式试验。试验时每次给 1只动物用1个剂量染毒 ,根据动物的死或活选择下一只动物的染毒剂量。经多次增加或降低剂量染毒后动物的结局 ,用最大似然法计算LD50…     

3种抗氧化剂对染尘大鼠DNA链断裂的影响

暴露于矽尘能导致以肺纤维化为主的全身性疾病。大量研究表明肺泡巨噬细胞 (ＡＭ)在抵御矽尘入侵的过程中起着十分重要的作用 ,矽尘可以损伤巨噬细胞膜、介导细胞凋亡等[1 ] ,但有关矽尘损伤ＡＭＤＮＡ的研究报道不多。单细胞凝胶电泳 (ＳＣＧＥ)技术是近年发展起来的一种高效、灵敏的检测ＤＮＡ链断裂的新技术。我们利用此技术检测染尘大鼠ＡＭ中ＤＮＡ链断裂 ,并探讨茶多酚 (ＴＰ)、维生素Ｃ、维生素Ｅ的保护作用。1　材料与方法1 1　茶多酚　浙江农业大学茶研所提供。1 2　石英粉尘　由中国预防医学科学院劳研所提供 ,ＳｉＯ2的含量大于 …     

硫芥对犬外周血淋巴细胞DNA损伤的作用

硫芥是典型的双功能烃化剂 ,进入体内后产生烃化作用 ,攻击的主要靶分子是ＤＮＡ。目前 ,单细胞凝胶电泳(ＳＣＧＥ)技术发展很快 ,国内、外将该法作为ＤＮＡ损伤检测的基本方法之一。先前我们用此法进行硫芥对人外周血淋巴细胞ＤＮＡ损伤的体外实验[1 ] ,本次选用犬外周血淋巴细胞 ,观察体内、外硫芥染毒后ＤＮＡ损伤的剂量效应与时间效应关系 ,为寻找研究硫芥细胞毒性作用及中毒早期敏感的检测方法提供实验依据。1　材料与方法1 1　主要仪器设备　奥林巴斯ＢＸ - 6 0显微镜、目测微尺(日本 )、电泳仪ＤＤＹ Ⅲ 6Ｂ、电泳槽ＤＤＹ Ⅲ 34Ａ…     

药物—DNA相互作用的序列特异性的研究进展

综述了测定与ＤＮＡ作用的药物的序列特异性的定性和定量方法。对于剪切ＤＮＡ或与ＤＮＡ共价结合的药物，可以通过它们在ＤＮＡ螺旋上留下的永久性痕迹来确定其序列特异性；对于与ＤＮＡ进行平衡结合的药物，足印迹法和转录法是比较好的实验方法。另外还有通过酶间接用于ＤＮＡ的药物的序列特异性的测定方法。     

DNA重组hGH的生物测定方法的探讨 Ⅰ．去垂体大鼠体重增加法

为用于ＤＮＡ重组ｈＧＨ的生物测定，本文探讨了未成年去垂体大鼠体重增加法。实验表明：牛生长激素ｂＧＨ在０．００４～０．５００ＩＵ／鼠、ｄ，人生长激素ｈＧＮ在０．０１５～０．１３５ＩＵ／鼠、ｄ剂量范围内ｌｏｇ剂量（Ｘ）与反应（Ｙ）呈直线关系。６０～８０ｇ去垂体大鼠，每天给药２次，连续给药４ｄ或６ｄ为最佳实验条件。通过多批进口和国产ＤＮＡ重组ｈＧＨ产品的生物测定，说明用该法检测ｒｈＧＨ是颇为实用的方法之一。     

DNA重组hGH的生物测定方法的探讨：Ⅱ.胫骨法

本文对ＤＮＡ重组ｈＧＨ的另一生物测定方法即未成年去垂体大鼠胫骨骨骺软骨增宽法进行了探讨，摸索了胫骨染色切片后软骨宽度测量方法。实验结果表明在一定剂量范围内ｌｏｇ剂量与胫骨反应呈直线关系，胫骨法（λ＝０．２８）比体重法（λ＝０．４５）更精密。通过对多批进口和国产ｒｈＧＨ产品用胫骨法进行生物测定，得出本法具有灵敏、精密、成功率高等优点。     

4种金属化合物对小鼠生殖细胞DNA损伤的研究

随着工业化的发展和矿资源的开发利用 ,重金属对环境的污染越来越严重。其中镉、铬、铅、汞是常见的环境和工业毒物 ,有关其遗传毒性的报道较多。研究已证明[1,2 ] :镉和铬是确定的人类致癌物 ,汞对真核细胞具有致裂作用 ,铅可诱发实验动物肾脏肿瘤 ,属人类可疑致癌物 ,但有关其是否能够直接诱导生殖细胞的ＤＮＡ损伤未见报道。彗星试验(Ｃｏｍｅｔａｓｓａｙ)是近年来发展起来的检测单个哺乳动物细胞ＤＮＡ链断裂的新技术 ,具有敏感、简便、所需样品少等优点 ,已广泛应用于毒理学[3] 。我们采用彗星试验检测了 4种金属化合物对雄性小鼠生殖…     

DNA依赖蛋白激酶在DNA双链断裂修复中的作用研究进展

ＤＮＡ双链断裂 (ＤＮＡｄｏｕｂｌｅ ｓｔｒａｎｄｂｒｅａｋ ,ＤＳＢ)是一种最严重的ＤＮＡ损伤 ,是基因突变 ,染色体断裂的主要原因之一 ,并对肿瘤发生、发展具有一定影响。修复ＤＳＢ主要是通过同源重组 (ｈｏｍｏｌｏｇｙｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ,ＨＲ)和非同源末端连接 (ｎｏｎ ｈｏｍｏｌｏｇｙｅｎｄｊｏｉｎｉｎｇ ,ＮＨＥＪ) 2条途径[1] 。ＤＮＡ依赖蛋白激酶 (ＤＮＡ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ ,ＤＮＡ ＰＫ)是完成ＮＨＥＪ修复的关键成分 ,其由一个 4 70× 10 3 的ＤＮＡ ＰＫｃｓ催化亚基和能启动ＮＨ…     

SPDP偶联法制备双特异抗体

双特异抗体 (ＢＩＡＢ)的制备主要有三种方法 :化学偶联法、杂交瘤法和基因工程方法。其中 ,化学偶联法可快速、大量生产双特异抗体 ,这种抗体主要用于免疫检测。化学偶联法通常分为以下两类 ,一是将两种完整的抗体或其衍生物直接偶联 ,二是将两种不同的抗体解离后进行重新组合。自 1978年合成双功能偶联剂Ｎ 丁二酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫代 )丙酸脂 [Ｎ ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙ1 3 (2 ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ)ｐｒｏｐｉ ｏｎａｔｅ,ＳＰＤＰ]后 ,ＳＰＤＰ被广泛用于蛋白质的交联及ＢＩＡＢ的制备。本实验先参考Ｃａｒｌｓｓｉｏｎ等…     

平阳霉素对p53基因外显子7的链断裂作用研究

特定基因链断裂与肿瘤的发生发展 ,以及遗传性疾病等密切相关 ,其检测具有重要的毒理学理论和实践意义。最近 ,我们建立了非放射性连接介导聚合酶链反应 (ｌｉｇａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ ,ＬＭＰＣＲ)技术 ,以限制性内切酶消化基因组ＤＮＡ建立损伤模型 ,成功检测了ｐ5 3基因的链断裂[1 ] 。然而人类所接触的遗传毒物多为化学物质。如环境致癌因素中 80 %以上均为化学致癌物[2 ] ,且每年都有成百上千的新化合物出现 ,因此对化学断裂剂的检测尤为重要和实用。另一方面 ,在我们以前建立非…     

Methodological Studies on Genomic DNA Extraction and Purification from Plant Drug Materials

本文探讨了菊科９种植物和地胆草的４种对口商品药材基因组ＤＮＡ提取与纯化的原理、方法通过对３种常用植物基因组ＤＮＡ提取方法（ＣｓＣｌ梯度超速离心法、ＣＴＡＢＣｓＣｌ梯度超速离心法和ＣＴＡＢ微量提取法）的条件摸索在ＤＮＡ产率、纯度以及提取纯化过程中影响ＰＣＲ扩增因子方面进行比较，认为ＣＴＡＢ微量提取法是植物类药材基因组ＤＮＡ一种比较省时、有效、经济的提取方法     

三氯乙醛诱发小鼠及人淋巴细胞DNA损伤

三氯乙醛可导致小鼠肝脏肿瘤和具有一定的致突变性[1,2 ] 。然而人群的流行病学研究尚不能证明三氯乙醛暴露与人类任何一种类型的癌症之间的关系。1999年 1月国际癌症中心 (ＩＡＲＣ)最新公布的对人类致癌性总评价表上公布了三氯乙醛是对人类致癌性暂时无法分组的物质 ,对人类可能具有潜在的致癌危险性[3 ] 。有关三氯乙醛遗传毒性迄今尚无定论。我们应用单细胞凝胶电泳法 (ｓｉｎｇｌｅｃｅｌｌｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓａｓ ｓａｙ ,ＳＣＧＥ) ,观察了三氯乙醛急性染毒小鼠外周血有核细胞ＤＮＡ的损伤情况 ,并观察了三氯乙醛…     

电化学脱氧核糖核酸传感器进展

电化学ＤＮＡ传感器的发展在过去短短几年里倍受重视[1] 。它是一种全新的特定ＤＮＡ序列 (基因 )检测技术 ,它与通常的标记 (放射性同位素标记 ,荧光标记等 )探针技术相比 ,具有选择性好、灵敏度高、响应快、操作简便、价格低廉等特点 ,可望用于临床上基因疾病的快速检验 ,用于探讨各种因素引起ＤＮＡ损伤的程度和可能的突变机理 ,用于以ＤＮＡ为作用靶的药物研究。因此 ,虽然电化学ＤＮＡ传感器才有几年的历史 ,但已有了很大的进展。本文将对电化学ＤＮＡ传感器研究进展进行评述。1　电化学ＤＮＡ传感器原理电化学ＤＮＡ传感器是由一个支…