N-杂环取代苯并呋喃衍生物的合成及抗肿瘤活性

为了寻找具有抗肿瘤活性的新型分子,以苯并呋喃为基础,在分子中引入N-杂环片段进行优势结构重组。以水杨醛与2-溴-4′-氟苯乙酮为原料,经取代、缩合反应后,与N-杂环化合物反应,合成10个新型N-杂环取代的苯并呋喃衍生物(2a~2j),其结构经¹H NMR、¹³C NMR和HRMS确证。采用MTT法初步测试了目标化合物体外抗肿瘤(HeLa,A549和H1975)活性,结果表明化合物2a、2f和2j均表现出较好的抑制活性,值得进一步深入研究。     

N-脂肪酰-N-三甲基壳聚糖的合成及其对蛇床子素的增溶作用

目的 合成2类两亲性壳聚糖（chitosan,CS）衍生物,自组装成聚合物胶束作为难溶性药物的新型递药载体。方法 先将CS与碘甲烷反应生成N-三甲基壳聚糖（trimethyl chitosan,TMC）,然后在TMC的氨基上引入长链脂肪酸（软脂酸和癸酸）,合成了两亲性的N-脂肪酰-N-三甲基壳聚糖（N-fatty acyl-N-Trimethyl chitosan,FA-TMC）衍生物。通过FT-IR、¹H-NMR和元素分析法,对衍生物的分子结构和N-位取代度进行表征,同时以疏水性药物蛇床子素（osthole,OST）为模型,探讨其胶束增溶特性。结果 实验合成了2类6种不同的新型CS衍生物,分析显示季胺化程度和脂肪酰基接枝率对FA-TMC的胶束性质有较大的影响;对于超声法制备的OST载药胶束,季胺化程度为62.00%、软脂酰基接枝率为13.37%的N-软脂酰-N-三甲基壳聚糖（N-palmitoyl-N-trimethyl chitosan,PA-TMC）和季胺化程度为43.06%、癸酰基接枝率为22.00%的N-癸酰-N-三甲基壳聚糖（N-caprinoyl-N-trimethyl chitosan,CA-TMC）的包封率分别为76.67%、79.11%,载药量分别为19.01%、19.08%,可使OST在水中的溶解度提高两个数量级。结论 FA-TMC是一种具有潜在应用价值的增溶载体,其在水中能自组装形成胶束,并对OST有明显的增溶作用,为OST制剂深入研究与应用奠定了基础。     

罗氟司特N-氧化物的合成与晶型研究

对罗氟司特在体内的活性代谢物罗氟司特N-氧化物的合成进行了工艺改进,总收率为19%。通过X线粉末衍射、红外光谱、差示扫描量热分析及元素分析等方法确定了罗氟司特N-氧化物的晶型物Ⅰ和晶型物Ⅱ,并测定了一水合晶型物Ⅱ的X线单晶衍射结构。     

多重响应的单分散聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-丙烯酸)纳米水凝胶的制备及性能表征

以N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)与丙烯酸(AA)为单体,在水相中通过乳液聚合法制得具有温度、pH双重响应的单分散聚(N-异丙基丙烯酰胺-co-丙烯酸)(P(NIPAM-co-AA))纳米水凝胶。利用动态光散射仪(DLS)、原子力显微镜(AFM)和傅里叶红外光谱仪(FT-IR)对纳米水凝胶的尺寸、形貌和化学组成进行了表征,讨论了单体含量和乳化剂含量对凝胶粒径和多分散指数(PDI)的影响,同时探究了纳米水凝胶的温敏性和pH敏感性。结果表明:当AA为单体总物质的量分数的20%、乳化剂用量为0.05 g时,制得的球形纳米水凝胶形态均匀规整,水合直径为403 nm,PDI仅为0.033,且对温度和pH具有双重敏感,尤其在pH为4~6时,响应极为明显。     

去甲斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒的制备及其特性研究

目的 合成N-乳糖酰壳聚糖作为肝靶向载体,制备去甲斑蝥素纳米粒。方法 通过碳二亚胺缩合法制备N-乳糖酰壳聚糖,并以之为载体,采用离子诱导法制备去甲斑蝥素N-乳糖酰壳聚糖纳米粒。以粒径分布、包封率、载药量为综合指标,正交试验设计优化载药纳米粒的制备工艺,并考察其体外释放特性。结果 合成的N-乳糖酰壳聚糖的取代度为8.92%。优化工艺制备的N-乳糖酰壳聚糖载药纳米外观圆整,平均粒径(118.7±8.84) nm,包封率(57.92±0.40)%,载药量(10.38±0.06)%,其体外释药遵循Higuchi方程。结论 半乳糖修饰壳聚糖载药纳米粒具有良好的缓释特性。     

N-酰化壳聚糖的合成及其修饰多西他赛脂质体的体外性质研究

目的： 合成N-酰化壳聚糖并用其修饰多西他赛脂质体以期延缓药物的释放。方法： 用合成的长链脂肪酸酰化的壳聚糖修饰脂质体,体外血浆释放实验比较脂质体修饰前后的释放性质。结果： 合成了正己酰（C₆）、月桂酰（C_12）和棕榈酰（C₁₆）3种N-酰化壳聚糖。普通脂质体于24 h内释药70%,而N-酰化壳聚糖修饰的脂质体24 h仅释药39%。结论： 用N-酰化壳聚糖修饰脂质体可以减缓释药,具有缓释作用。     

1,6-O,O-二酰基大花旋覆花内酯衍生物的合成及其抑制NO生成活性

以从旋覆花中提取分离得到的1-O-乙酰基大花旋覆花内酯(ABL)为原料,经酯化反应或还原反应制备了8个1,6-O,O-二酰基大花旋覆花内酯(OABL)衍生物(化合物1~8),并测定其对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞一氧化氮(NO)生成的抑制作用,评价其抗炎活性。结果表明,化合物5~8具有良好的抑制NO生成活性(IC₅₀<2 μmol/L),其活性水平较先导化合物OABL显著提高。     

小剂量右美托咪定缓解大鼠慢性疼痛相关抑郁样行为及对前额叶皮质N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基的影响

目的 观察小剂量右美托咪定对慢性疼痛大鼠抑郁样行为及前额叶皮质（PFC）N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）的影响。方法 将22只成年大鼠随机分为假手术组（Sham组,n=6）、保留性神经损伤组（SNI组,n=6）、保留性神经损伤+生理盐水组（SNI+NS组,n=5）和保留性神经损伤+右美托咪定组（SNI+DEX组,n=5）。SNI+NS组及SNI+DEX组在建模后第8~14天腹腔注射等体积生理盐水或小剂量DEX（20 μg/kg）。采用von Frey纤维评估大鼠疼痛缩足阈值（PWT）,强迫游泳实验（FST）评估大鼠抑郁样行为,蛋白质印迹法检测大鼠PFC中NR2B蛋白的表达。结果 与Sham组相比,SNI组大鼠术后第1、3、7、14天PWT降低,术后第15天FST中右腿不动时间延长、PFC中NR2B蛋白表达降低,差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.01,P<0.05）。与SNI+NS组相比,SNI+DEX组大鼠术后第1~14天PWT无明显变化（P>0.05）,术后第15天FST中右腿不动时间缩短、PFC中NR2B蛋白表达增加（P<0.01、P<0.05）。结论 腹腔内注射小剂量DEX可缓解大鼠慢性疼痛相关的抑郁样行为,其机制可能与PFC中NR2B蛋白的增加有关。     

N-(4-咪唑甲基)-羟乙基壳聚糖自组装胶束载槲皮素的研究

为了提高天然黄酮类化合物槲皮素的水溶性,将天然高分子材料壳聚糖进行两亲性衍生化制成N-(4-咪唑甲基)-羟乙基壳聚糖(MHC),作为槲皮素自组装聚合物胶束载体,并采用¹H NMR、元素分析法、芘荧光光谱法等进行了表征;同时采用单因素考察法进行了MHC-槲皮素胶束的工艺优化。结果表明,载体浓度为0.67%、槲皮素与MHC质量比为1∶10时可以获得粒径为(99.21±1.71)nm,Zeta电位为+(20.01±0.72)mV,载药量为(5.42±0.32)%的聚合物胶束;其体外释药曲线符合Higuchi方程Q=0.110 1t^1/2-0.064。槲皮素胶束和槲皮素溶液剂静脉注射给药后,在大鼠体内平均滞留时间分别是21.42和0.30 h,AUC_0-t分别为57.49和2.50 μg·h/mL,表明采用MHC为载体材料的槲皮素自组装胶束具有较好的增溶、缓释以及提高生物利用度的作用,可作为槲皮素等抗肿瘤药物的载体。     

金露梅提取物对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶的抑制作用

通过α-淀粉酶抑制剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂和醛糖还原酶抑制剂体外筛选模型,研究金露梅水提物及95%甲醇提取石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位和水层部位对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶的抑制活性作用;通过糖耐量实验测定金露梅提取物对小鼠餐后血糖的影响。结果显示,金露梅水提物及95%甲醇提取石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位对α-淀粉酶的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为0.432、1.193、0.507 mg/mL;对α-葡萄糖苷酶的IC₅₀分别为0.164、0.768、0.466 mg/mL;对醛糖还原酶的IC₅₀分别为0.742、2.158、1.098 mg/mL。结果表明,金露梅水提物和金露梅乙酸乙酯萃取部位对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶和醛糖还原酶的抑制活性较高。同时,金露梅水提物与乙酸乙酯萃取部位均能显著降低小鼠的餐后血糖水平。     

灵芝孢子油体外抗肿瘤活性比较研究

探讨灵芝孢子油对于不同肿瘤细胞的抗肿瘤活性差异,选取人肝癌细胞(HepG2)、人非小细胞肺癌细胞(A549)、人结肠癌细胞(HCT116)为待检测肿瘤细胞株,采用MTT法进行细胞活力检测,Western blot法检测NF-κB信号通路激活程度,Caspase-3活性检测法检测Caspase-3酶活性来对灵芝孢子油的抗肿瘤活性机制进行初步探讨,并对3种肿瘤细胞的抗肿瘤活性进行比较。经MTT细胞活力实验验证,发现灵芝孢子油对3种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,其抑制强度依次为A549细胞、HepG2细胞、HCT116细胞;Western blot检测结果显示,灵芝孢子油能促进NF-κB通路的激活,3种肿瘤细胞比较下,A549细胞NF-κB信号通路激活程度最强,其次为HepG2细胞,对HCT116细胞作用最弱;Caspase-3活性检测结果显示,灵芝孢子油能激活Caspase-3依赖的凋亡相关途径,其中对A549细胞Caspase-3酶激活程度最强,对HepG2细胞作用较强,对HCT116细胞作用最弱。因此,本研究发现,灵芝孢子油对3种肿瘤细胞的生长均具有一定抑制作用,其抗肿瘤活性呈时间剂量依赖性,其机制可能与激活NF-κB通路与Caspase-3凋亡途径加速肿瘤细胞凋亡坏死相关。3种肿瘤细胞生长抑制实验结果显示,灵芝孢子油对A549细胞的抗肿瘤活性最明显,其次为HepG2细胞,对HCT116细胞的抗肿瘤活性最弱。     

海人酸致癎大鼠海马γ氨基丁酸及其转运体的动态变化研究

目的：研究海人酸(KA)致痫大鼠海马细胞外γ氨基丁酸(GABA)含量及其转运体mRNA表达水平的动态变化以及加巴喷丁干预对它们的影响，为临床上揭示复杂部分发作的发生、发展机制，开发新型抗癫痫药物提供理论依据。方法：海马CA3区注射微量KA建立大鼠复杂部分发作癫痫模型；采用高效液相色谱法测定癫痫大鼠海马细胞外GABA含量的动态变化；采用RT—PCR方法检测癫痫大鼠海马I型GABA转运体mRNA在不同时间点的表达；并用药物加巴喷丁(GBP)干预癫痫的发作，检测GBP对上述指标的影响。结果：给予KA后各时间点癫痫大鼠海马GABA浓度呈先低后高的增长趋势，24h内各组GABA浓度明显低于对照组，72h和7d组与对照组无明显差异，30天组明显高于对照组，GBP干预使大鼠海马细胞外GABA浓度增加；给予KA后2、6、12h，三组海马GAT-1mRNA表达明显升高，但有逐渐下降的趋势，24h恢复至正常水平，72h后显著下降。GBP可在一定程度上抑制GAT-1mRNA在大鼠海马的表达。结论：KA致痫大鼠急性癫痫发作传播和泛化的主要原因是脑组织中突触间隙GABA的显著减少。随后出现GABA能神经元抑制功能的代偿性增加，可能是机体内源性抗癫痫机制增强的的一种反应。     

国产和进口银杏叶片中萜类内酯的比较

目的 比较常用的国产与进口银杏叶片中所含萜类内酯,以保证临床用药的有效性。方法 采用Ultimate 3000高效液相色谱仪结合蒸发光散射检测器,Zorbax SB-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以正丙醇-四氢呋喃-水（1∶15∶84）为流动相,体积流量1.0 mL/min,漂移管温度115 ℃,压缩气体氮气体积流量为3.00 L/min,检测国产和进口2种银杏叶片各3批所含银杏内酯A、B、C和白果内酯的量,并计算内酯总量。结果/b> 2种银杏叶片每片所含银杏内酯A、B、C和白果内酯分别为（1.29±0.05）、（0.69±0.05）,（0.83±0.17）、（0.45±0.09）mg,（0.45±0.05）、（0.46±0.02）,（1.38±0.15）、（1.26±0.06）mg,内酯总量分别为（3.95±0.11）、（2.87±0.22）mg。结论 2种银杏叶片所含萜类内酯的量均符合中国药典的规定,其中二者所含银杏内酯C和白果内酯的量相似,但国产银杏叶片所含银杏内酯A、B的量以及内酯总量明显高于进口银杏叶片。     

含芳杂环取代的马蹄金素衍生物的设计、合成及抗乙肝病毒活性

以马蹄金素(MTS)为先导化合物,设计、合成了11个新的含芳杂环取代的马蹄金素衍生物,其结构经NMR、ESI-MS确认。采用HepG2 2.2.15细胞为乙肝病毒载体,评价目标化合物的抗HBV活性。结果表明,化合物7a［IC₅₀=2.94 μmol/L,选择指数(SI)=146.39］和9a(IC₅₀=2.21 μmol/L,SI>250)对HBV DNA复制的抑制活性高于先导化合物MTS(IC₅₀=11.16 μmol/L,SI=10.78),且具有更高的SI,提示该化合物在治疗HBV感染时具有更高的安全性,具有潜在的研究开发价值。     

庆大霉素生物合成基因genD1的研究

为研究genD1基因功能,在绛红色小单孢菌GK1101(ΔgenK)上构建genD1基因缺失工程菌并分析其代谢产物组分变化。首先构建用于genD1基因框内敲除的同源重组质粒pGD14,经接合转移导入绛红色小单孢菌GK1101,经影印筛选获得genD1缺失工程菌GD1989。再发酵并提取其代谢产物,采用质谱法等检测代谢产物。结果表明,工程菌GD1989不再合成庆大霉素C1a和C2b,主要积累庆大霉素A。对工程菌GD1989喂养庆大霉素X2的发酵产物经检测含有庆大霉素C1a、C2b和JI-20A。genD1基因失活导致庆大霉素生物合成代谢流中断,说明genD1基因负责加洛糖胺C-4″位的甲基化。     

3种非甾体抗炎药对大鼠骨关节炎关节软骨细胞IL-1β、TNF-α、IL-1α表达的影响

目的 研究厚朴Magnolia officinalis干燥叶中具血管活性作用部位的化学成分。方法 采用现代色谱技术对厚朴叶中具有血管活性部位乙醇提取物的氯仿萃取部位和正丁醇萃取部位进行分离和纯化,根据化合物谱学数据进行结构鉴定。结果 从厚朴叶中分离得到了16个化合物,分别鉴定为厚朴酚（1）、厚朴醛B（2）、台湾擦木酚（3）、丁香脂素（4）、4, 4′, 5-三羟基-1, 1′-双-2-丙烯基联苯（5）、落叶松脂素（6）、(7S, 8R) syringoylglycerol（7）、松柏苷（8）、苄基-β-D-阿洛糖苷（9）、阿福豆苷（10）、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷（11）、南酸枣苷（12）、5, 7-二羟基色原酮-7-O-β-D-葡萄糖苷（13）、erigeside C（14）、tachioside（15）、尿嘧啶苷（16）。结论 化合物5～8为首次从该植物中分离得到,其中化合物9～16为首次从该属植物中分离得到。     

结核分枝杆菌热休克蛋白65对ApoE基因敲除小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

研究结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)对ApoE^-/-小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。首先,将结核分枝杆菌HSP65蛋白免疫高脂饲喂ApoE^-/-小鼠,再采用ELISA检测小鼠血清中抗HSP65抗体的产生情况,流式细胞术检测血中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞(Treg)和CD4⁺IL-17⁺辅助性T细胞17(Th17)的数量,ELISA检测血清中IL-10、TGF-β1、IL-17和IL-21含量,生化分析仪检测血中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量,染色法计算动脉粥样硬化斑块面积。结果发现结核分枝杆菌HSP65蛋白诱导ApoE^-/-小鼠产生了高水平的抗HSP65抗体,Treg细胞及其分泌的IL-10和TGF-β1细胞因子数量明显减少,Th17细胞及其分泌的IL-17和IL-21细胞因子数量明显增加,TC、TG、HDL-C及LDL-C的含量未见改变,但动脉粥样硬化斑块的面积明显增加。由此可见结核分枝杆菌HSP65蛋白能够破坏ApoE^-/-小鼠Treg/Th17免疫平衡,促进动脉粥样硬化的发展。     

抑郁小鼠大脑GABA 及谷氨酸囊泡转运蛋白表达变化

目的：研究抑郁症发病中GABA及谷氨酸囊泡转运蛋白表达的变化。方法小鼠随机分为对照组和造模组,使用社会失败模型对对照组小鼠造模,之后将其分为对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组。将3组小鼠分别提取突触蛋白,并使用Western blot检测VGAT及VGLUT1表达丰度。结果对抑郁症敏感组小鼠与对照组小鼠相比,在接触区域的停留时间显著降低,且在角落区域的停留时间显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）;在前额叶皮层、海马中和对照组与对抑郁症不敏感组比较,对抑郁症敏感组VGLUT1及VGAT的表达水平显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）。对抑郁症不敏感组与对照组相比其VGAT及VGLUT1水平的表达差异均无统计学意义（P＞0．05）。在纹状体,虽然对抑郁症敏感组的小鼠VGAT及VGLUT1的表达水平均有增加（P＜0．05）,但是对抑郁症不敏感的小鼠这些蛋白表达也显著增加。结论在抑郁症发病中前额叶皮层及海马兴奋性与抑制性囊泡转运异常,这可能与抑郁症神经递质紊乱有关。