单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

肾综合征出血热早期快速检验诊断的研究

<正> 本研究通过检测肾综合征出血热(HFRS)病人血清中抗体,评价IFAT(简称荧光抗体试验)在HFRS早期快速诊断中的实用意义,并对IFAT和辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(HRP—SPA)染色法的敏感性进行了比较。材料和方法一、血清1984—1985年冬春HFRS流行季节采自第四军医大学西京医院和西安市第二职工医院疑似HFRS的住院和门诊病人316例(405份),其中临床资料完整的293例(385份)。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的：为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热（HFRS）抗体的检测方法。方法：458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法（CGIDA）与酶联免疫吸附法（ELLISA）对比检测特异性免疫球蛋白M抗体（抗HV－IgM）、免疫荧光法（IFAT）对比检测特异性免疫球蛋G抗体（抗HV－IgG0并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果：458例HFRS病人血清，以CGIDA法检测抗HV－IgM，阳性358例，与ELISA法作结果评价时，CGIDA灵敏度80％，特异度100％；以CGIDA法检测抗HV－IgG，阳性386例，与IFAT法作结果评价时，CGIDA灵敏度91％，特异度100％。结论：CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照，均有简便、快速、特异、灵敏之优点，检测抗HV－IgM，CGIDA法敏感性差于ELISA法，但是无假阳性；检测抗HV－IgM，CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体与中西医结合治疗的研究

为探索一种更为简便、快速、特异、敏感的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法及中西医结合治疗该病的有效手段。186例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG),并以20例发热待排、48例病毒性肝炎血清作对照;101例HFRS病人分组进行中西医结合治疗,治疗组用苦黄、参麦注射液联合黄芪汤,对照组用利巴韦林联合甘利欣注射液。186例HFRS病人血清,以CGIDA检测者5～10分钟出结果,抗HFRS-IgM阳性132例(70.9％),抗HFRS-IgG阳性163例(87.1％);ELISA法检测抗HFRS-IgM4小时出结果,阳性167例(89.7％),IFAT法检测抗HFRS-IgG阳性135例(72.5％)。对照组均呈阴性结果。治疗组50例与对照组51例用药后退热天数、主要症状、体征缓解天数相似(P>0.05),尿蛋白消失天数及肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.05),在越期方面,越休克期治疗组优于对照组(P<0.05),越少尿期及从发热期直接进入多尿期,两组情况相似(P>0.05)。CGIDA检测HFRS特异性抗体分别与ELISA及IFAT对照,均具有快速、简便之优点。检测抗HFRS-IgM,CGIDA敏感性稍差于ELISA,但特异性高于后者;检测抗HFRS-IgG,CGIDA的敏感性及特异性均高于IFAT。。苦黄、参麦注射液联合黄芪汤治疗HFRS与利巴韦林联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能。     

McAb-ELISA间接夹心法对西北部分地区HFRS的血清流行病学调查初报

用McAb-ELISA间接夹心法检测西北部分地区健康人血清中的HFRS病毒特异性IgG抗体。结果在陕西省汉中地区采集的290份血清中检出47份阳性,取其中部分阳性血清进行阻断试验及IFAT检查,证实了其特异性,从而表明该地区存在着HFRS的隐性感染。采自宁夏地区的211份血清检测结果均为阴性。采自新疆地区的390份血清中有1份为阳性。     

测定HFRS患者血清中特异性抗体方法初探

作者建立了检测HFRS患者血清特异抗体的捕获ELISA和阻断ELISA,并与间接酶染色和间接免疫荧光抗体技术进行了比较。四种方法的阳性检出率相同。血清的几何平均滴度,捕获ELISA比IFAT高32倍;阻断ELISA、酶染色及IFAT无显著差异。但应用不同抗原,ELISA检测血清滴度亦有不同。     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

间接荧光抗体技术(IFAT)已广泛用于肾综合征出血热(HFRS)病毒抗原的检测,其不足之处是需用荧光显微镜,有一定主观性及不能检测可溶性抗原。本文建立了以同样的抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)作为包被和第二抗体,以酶标葡萄球菌A蛋白(SpA)作指示抗体的双McAb ELISA间接夹心法,初步用于感染细胞培养上清及组织标本中HFRS病毒抗原的检测,获得较满意结果。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法。方法 458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELLISA)对比检测特异性免疫球蛋M抗体(抗HV-IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋G抗体(抗HV-IgG)并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果 458例HFRS病人血清,以CGIDA法检测抗HV-IgM,阳性358例,与ELLISA法作结果评价时,CGIDA灵敏度80％,特异度100％;以CGIDA法检测抗HV-IgG,阳性386例,与IFAT法作结果评价时,CGIDA灵敏度91％,特异度100％。结论 CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HV-IgM,CGIDA法敏感性差于ELLISA法,但是无假阳性;检测抗HV-IgM,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

检测肾综合征出血热血清IgM的ELISA捕捉一步法的建立及初步应用

目的 :建立一种快速、简便、敏感 ,适合医院和基层门诊应用的检测肾综合征出血热血清特异性IgM的方法。 方法 :以羊抗人 μ链为包被抗体 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的抗 -HFRS病毒特异性单克隆抗体 (McAb)与HFRS病毒抗原(Ag)结合成复合物为指示标记物 ,建立了检测HFRS血清特异性IgM的ELISA反向捕捉一步法。 结果 :整个试验过程仅需1h ,操作简便。用该法与山东省淄博市生产的ELISA二步法试剂盒对比检测HFRS血清 6 0份 ,两法均为阳性 5 4份 ,均为阴性 3份 ,总符合率 95 %。结论 :ELISA捕捉一步法快速、简便、敏感 ,适合医院和基层门诊应用 ,可用于HFRS的早期诊断及流行病学研究     

三种特异性血清学方法诊断流行性出血热的评价

本文用IFAT、ELISA、HI平行检测了出血热患者血清161份的出血热病毒抗体，阳性57.9～95.1％；ELISA、HI和IFAT分别于2、4病日出现阳性；ELISA、IFAT分别于60、90病日阴转，HI94病日仍阳性；HI的阳性率（95.1％）高于IFAT（IgM57.9％、IgG88.4％）及ELISA（IgM75.6％、IgG65.9％），其发热期阳性率亦高于其他两法；ELISA-IgM、IgG的阳性率及ELISA-IgM、HI抗体的滴度随病情加重而增加。因此，ELISA（主要是ELISA-IgM）和HI具有高度特异性、敏感度，阳性出现早，HI在三法中灵敏度最高。     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

ELISA捕捉法与间接夹心法检测肾综合征出血热患者血清IgM抗体的比较

作者用ELISA捕捉法和间接夹心法平行检测106份第7病日内的肾综合征出血热患者血清IgM抗体,其阳性检出率分别为92.5％和87.7％,其中40份第4病日内的血清阳性率分别为90.0％和85.5％,差异均无显著性意义,但前法检出的抗体滴度(平均1:102 400)明显高于后者(1:3200)     

肾综合征出血热特异性抗体的检测与中西医结合治疗的研究

目的探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)抗体的检测方法及更为有效的中西医结合治疗手段.方法559例HFRS患者血清同时采用免疫滴金法(colloidal gold immuno-dot assay,CGIDA)与酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM),间接免疫荧光法(indirect fluorescent antibody test,IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG).101例HFRS患者分组进行中西医结合治疗,治疗组50例用苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液,对照组51例用利巴韦林注射液联合甘利欣注射液,针对老年患者的临床特点,及早采用综合性防治措施.结果559例HFRS患者血清,以CGIDA法检测抗HFRS-IgM,阳性396例(70.8%);以CGIDA法检测抗HFRS-IgG,阳性489例(87.5%).治疗组与对照组用药后退热天数、主要症状和体征缓解天数相似(P＞0.05);肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.01);在越期方面,治疗组越休克期数明显高于对照组(P<0.01). 结论CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HFRS-IgM,CGIDA法敏感性差于ELISA法,但是无假阳性;检测抗HFRS-IgG,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法.苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液与利巴韦林注射液联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能.     

McAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

作者采用抗HFHS病毒血凝素McAb和粗制血凝素抗原的ELISA间接夹心法,检测63份临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时使用血凝抑制试验进行比较。两者的阳性率均为74.6％,而ELISA的抗体滴度明显高于血凝抑制试验(P<0.01)。本法在临床诊断和流行病学监测中,有实用价值,并可能取代血凝抑制试验。     

汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段的合成与应用

目的 以合成肽为抗原建立新型特异性检测抗汉埋病毒IgG和IgM的ELISA。方法 用多肽合成仪合成汉坦病毒核衣原壳蛋白（aa17-66)50个氨基酸残基的核心序列,以此为抗原,通过实验发现这一序列具有较强的抗原性,首次建立了以合成肽为抗原的新型特异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的ELISA,测定肾综合征出血热（HFRS）患者血清23份,乙型肝炎患者血清9份,正常人血清11份。结果 乙型肝炎患者血清和正常人血清均为阴性,20份HFRS血清IgG阳性,21份HFRS血清IgM阳性,本方法的相对敏感性为86％和91％,相对特异性为100％,符合率为93％和95％。结论 本法特异性强,灵敏度高,简便易行,是适于基层医疗单位的诊断方法。     

逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附试验在诊断肾病综合征出血热中的价值

寻找一种快速、敏感、特异的诊断肾病综合征出血热 (HFRS)方法。方法　采用碘化钠 -异硫氰酸胍 -氯仿法抽提病毒核酸 ,逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测不同病程中 HFRS患者血清中的汉坦病毒感染情况 ,并采用间接酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测特异性 Ig M抗体。结果　 84.7%患者血清中汉坦病毒核酸检测为阳性 ,其中病程为 1周内者检出率为 10 0 % ,1～ 2周者为 6 0 % ,超过 2周者为 33.3% ,而特异性 Ig M的总检出率为 70 .0 5 % ,病程在 1周、1～ 2周、超过 2周者检出率分别为 6 4%、90 %、6 6 .6 %。结论　RT-PCR和 ELISA都是 HFRS的特异性诊断方法 ,两者可相互补充 ,提高诊断率     

重组核衣壳蛋白免疫滴金检测肾综合征出血热抗体差异的研究

目的比较重组核蛋白抗原制备的胶体金免疫试剂盒与病毒悬液抗原制备的胶体金免疫试剂盒在检测肾综合征出血热特异性抗体的差异。方法以汉坦76—118病毒M14626株s片段为模板，克隆334bp片段，重组表达核衣壳蛋白，以此蛋白作为抗原，制备胶体金试剂盒，与以病毒悬液为抗原的胶体金试剂盒进行平行检测300例肾综合征出血热血清IgM和IgG抗体。并与酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光法（IFA）对比检测。结果成功构建了重组核蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-S，获得高纯度的抗原，分子量约12kD，以此蛋白为抗原制备胶体金试剂盒。检测300例HFRS病人血清抗HFRSigM，rNPCGIDA阳性检出率为90．7％，后者高于前者，差异有显著性（X^2=32．9，P〈0．05）。用rNP与天然NP平行检测蛋白表达法HFRSIgM76.3％，HFRSIgG84．2％；细胞培养法HFRSIgM86．8％，HFRSIgG92．1％。HFRSIgM符合率达89．7％，HFRSIgG符合率达92．3％；CGIDA法检测HFRS IgM的敏感性为75.0％，特异性为100％；CGIDA法检测HFRSIgG的敏感性为83．1％，特异性为100％。结论该重组核蛋白的CGIDA对HFRS的早期诊断具有较好的应用价值。但是敏感性及特异性均低于细胞培养法的CGIDA。