兔卵母细胞的超数排卵与孤雌激活

目的:探索兔卵母细胞的最佳超排方法及孤雌激活的条件,为人-兔异种核移植提供充足的兔卵母细胞. 方法:采用不同剂量的垂体促卵泡素(FSH)对青年兔和经产兔进行超数排卵,获得兔卵母细胞后,以不同强度的直流电脉冲对兔卵母细胞进行孤雌激活. 结果:在排卵总数方面,3个激素组均高于对照组(P＜0.05),且FSH 25 U激素组(31.80±3.27)与FSH 80 U 聚乙烯吡咯酮(PVP)激素组(31.83±3.06)均高于FSH 15 U激素组(15.00±1.58),经产兔优于青年兔(P<0.05);在200 V/mm组孤雌激活兔卵母细胞的卵裂率(85.59%)和4～8细胞期发育率(21.19%)最高,与240 V/mm组(71.43%, 10.48%)之间存在统计学差异(P＜0.05). 结论:FSH 25 U及FSH 80 U PVP方案均能产生最佳超排效果,经产兔优于青年兔;电场强度200 V/mm,脉宽40 μs,2次脉冲、间隔1 s为兔成熟卵母细胞的较理想的激活条件.     

人卵母细胞孤雌激活获得囊胚国内首报

孤雌激活是对卵母细胞在第二次减数分裂中期（MII）进行刺激，使之保持二倍体状态下发生有丝分裂获得早期胚胎发育。人卵母细胞孤雌激活后获得的囊胚，可为人类干细胞建系提供崭新的来源，由此产生的胚胎干细胞称为孤雌胚胎干细胞。此研究已在许多哺乳动物物种中进行，如小鼠、牛、猴已获得囊胚，并在小鼠和猴成功进行了干细胞建系，目前成为国科学家的关注与研究热点。     

不同激活方法对小鼠卵母细胞孤雌激活的实验观察

目的　建立合适的小鼠卵母细胞孤雌激活方法。方法　取不同卵龄小鼠卵母细胞 ,运用不同浓度的氯化锶和不同强度的电脉冲对其进行活化 ,观察小鼠卵母细胞激活率和体外发育状况。结果　① 14、16和 18h卵龄组卵母细胞经 10mmol LSrCl2 处理后 ,三组的激活率随卵龄的增长而提高 ,分别为 2 1 1%、4 1 8%和 73 7% ,组间差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ;卵母细胞离体后在激活前体外培养 3h也能提高其激活率 ,但当卵龄达到一定时 (18h) ,体外培养激活率不再提高。② 5 0、10 0、15 0mmol L三种浓度的SrCl2 均能有效地激活小鼠卵母细胞 ,激活率分别为 5 8 5 %、6 8 95和 70 9% ,与对照组和 1 6mmol L组相比差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。③卵母细胞的激活率随处理时间的延长而提高 ,30、6 0、12 0、2 4 0minSrCl2 处理时间的激活率分别为 4 4 9%、5 6 1%、6 8 9%、77 0 % ,相隔两组之间差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。④ 1 5kV cm ,16 0 μs和 1 0kV cm ,32 0 μs脉冲刺激下的卵母细胞激活率显著高于 1 8kv cm ,90 μs脉冲刺激组 (5 8 5 %vs2 7 1%、6 9 1%vs2 7 1% ,P <0 0 5 ) ,前两组之间差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　小鼠卵母细胞孤雌激活率与卵龄和激活方案有关 ;氯化锶浓度、作用时间和     

人卵母细胞孤雌激活获得囊胚国内首报

孤雌激活是对卵母细胞在第二次减数分裂中期(MII)进行刺激,使之保持二倍体状态下发生有丝分裂获得早期胚胎发育.人卵母细胞孤雌激活后获得的囊胚,可为人类干细胞建系提供崭新的来源,由此产生的胚胎干细胞称为孤雌胚胎干细胞.此研究已在许多哺乳动物物种中进行,如小鼠、牛、猴已获得囊胚,并在小鼠和猴成功进行了干细胞建系,目前成为多国科学家的关注与研究热点.     

小鼠孤雌激活胚胎细胞因子分泌水平研究现状

孤雌激活是指MII期卵母细胞通过人工刺激（化学或物理等方法）激活,完成第二次的减数分裂、卵裂从而形成早期胚胎。此过程不需精子刺激,故也叫孤雌生殖。近年来,孤雌生殖技术是生殖生物学研究的热点之一,是一种无性生殖技术,在创建胚胎干细胞系方面有重要的作用。在遗传学研究中,因小鼠与人类的遗传学背景相似,故常被用作哺乳类实验动物。本综述即是关于小鼠孤雌激活胚胎细胞因子分泌水平的研究。     

钙离子载体A23187联合嘌呤霉素对人体外成熟卵母细胞孤雌激活作用的研究

目的：探讨钙离子载体A23187或联合嘌呤霉素（puromyein）对人类体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用。方法：收集体外培养成熟的人卵母细胞124枚,根据体外成熟培养的时间分为24、48、72h组。分别采用A23187、A23187联合嘌呤霉素进行孤雌激活,然后应用荧光原位杂交（FISH）技术对孤雌胚胎进行性染色体分析。结果：A23187或联合嘌呤霉素能激活体外成熟的卵母细胞．激活率分别为38．9％、71．8％;二者联合应用能有效地提高孤雌胚胎的发育潜能。随着体外成熟培养的时间延长．A23187联合嘌呤霉素对卵母细胞激活率呈下降趋势;其中24、48h组成熟的卵母细胞激活率和胚胎发育潜能显高于72h组。FISH对9个孤雌胚胎的性染色体分析示,7个孤雌胚胎为XX,2个为X。结论：钙离子载体A23187联合嘌呤霉素能有效地激活人体外成熟卵母细胞．形成的孤雌胚胎核型多数为双倍体。     

骨髓间充质干细胞条件培养液对小鼠卵母细胞的孤雌激活作用

目的 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)条件培养液对小鼠MII卵母细胞的孤雌激活作用及胚胎发育能力.方法 分离、培养小鼠MSC,获取MSC条件培养液(conditioned medium of MSC,CM).通过促排技术获取小鼠MII卵母细胞,分别采用CM、7%乙醇、IVF方法激活,体视显微镜下观察原核形成及囊胚形成率.在CM激活后不同时间点,利用α/β-tubulin抗体标记纺锤体,激光共聚焦显微镜下观察有/无细胞松弛素B(CB)存在时纺锤体的运动变化.结果 CM可以激活小鼠MII卵母细胞,最佳刺激时间为40 min,激活率达到95.4%,囊胚形成率为62%,与7%乙醇组比较无显著差异,但明显低于IVF组(95.4%vs.100%;62%vs.88%,P＜0.01).CB可以抑制纺锤体的旋转,阻止第二极体的排出,促进二倍体孤雌胚形成,提高囊胚形成率(62%vs.9%,P＜0.01).结论 CM能有效激活小鼠MⅡ卵母细胞并促进孤雌发育.     

化学剂法对兔卵母细胞孤雌激活的效果

目的 研究钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)及3种酶对兔卵母细胞的激活率,并观察其体外发育情况.方法 兔超排后获得卵母细胞,经脱颗粒处理后用A23187和6-DMAP处理不同时间,体外培养5～7 d,观察细胞发育与囊胚形成情况.结果 钙离子载体A23187激活处理5 min后, 继续在2.0 mmol/L 6-DMAP中分别处理3.5、4.0、4.5、5.0 h,均能激活兔卵母细胞;以处理4.0 h的卵裂率最高(58.82%,20/34),并有15%(3/20)的囊胚发育率.透明质酸酶、胶原酶和胰酶处理20 min后, 均能激活兔卵母细胞,其中透明质酸酶处理20 min的激活率和卵裂率最高,分别为58.33%(28/48)和63.64%(28/44).结论 兔卵母细胞孤雌激活率与激活方法密切相关.化学激活剂的处理时间及消化酶的不同均对兔卵母细胞的激活产生显著影响.     

化学剂法对兔卵母细胞孤雌激活的效果

目的研究钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)及3种酶对兔卵母细胞的激活率,并观察其体外发育情况。方法兔超排后获得卵母细胞,经脱颗粒处理后用A23187和6-DMAP处理不同时间,体外培养5~7d,观察细胞发育与囊胚形成情况。结果钙离子载体A23187激活处理5min后,继续在2.0mmol/L6-DMAP中分别处理3.5、4.0、4.5、5.0h,均能激活兔卵母细胞;以处理4.0h的卵裂率最高(58.82%,20/34),并有15%(3/20)的囊胚发育率。透明质酸酶、胶原酶和胰酶处理20min后,均能激活兔卵母细胞,其中透明质酸酶处理20min的激活率和卵裂率最高,分别为58.33%(28/48)和63.64%(28/44)。结论兔卵母细胞孤雌激活率与激活方法密切相关。化学激活剂的处理时间及消化酶的不同均对兔卵母细胞的激活产生显著影响。     

卵母细胞人工孤雌激活研究进展

孤雌激活是指处于第二次减数分裂中期卵母细胞不经过雄性配子的作用,而在某些理化因素的刺激下恢复并完成减数分裂,进行有丝分裂发育到胚胎的过程。卵母细胞的激活是以Ca2 为第二信使,成熟促进因子(MPF)、细胞分裂素活化蛋白激酶(MAPK)、细胞静止因子(CSF)等细胞因子灭活综合作用的结果。人工孤雌激活方法包括物理性激活和化学性激活以及联合激活方法,人卵母细胞的孤雌激活多以化学激活为主。孤雌激活的效果与激活方法、卵母细胞的卵龄、来源和培养条件等有关。     

老化对卵母细胞孤雌发育和减数分裂期间微管动态变化的影响

目的 研究老化对卵母细胞孤雌激活发育率的影响,以及老化对减数分裂期间微管的动态变化的影响.方法 用孤雌激活的方法来观察不同老化时间胚胎的发育情况;用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术结合的方法研究小鼠卵母细胞微管的动态变化.结果 从注射hCG后14h到18h,卵母细胞在体外老化过程中激活率和发育率呈上升趋势,但是差异不显著.体外老化至18h,卵母细胞更容易被激活,并且减数分裂期间微管的变化发生要早于14h.结论 短时间的体外老化可以使细胞更容易被激活,且微管发育更完善.     

小鼠卵母细胞的孤雌激活

目的 探讨一种有效的孤雌激活方法。方法 用乙醇、Ca^2＋载体A23187分别联合6-二甲氨基嘌呤对小鼠卵母细胞进行孤雌激活。结果 7％乙醇卵母细胞活化率、囊胚形成率分别达80.88％、10.29％、;5μmol/L Ca^2＋A23187卵母细胞活率、囊胚形成率分别达86.88％、11.48％。两者差异无显著性。结论 应用乙醇、Ca^2＋载体A23187联合6-二甲氨基嘌呤处理小鼠卵母细胞,均可实现小鼠卵母细胞孤雌发育。     

人孤雌胚胎干细胞向多巴胺能神经元的体外分化

目的 研究人孤雌胚胎干细胞向神经上皮祖细胞和神经元诱导分化的能力.方法 人孤雌胚胎干细胞在人饲养层细胞上诱导后机械消化传代,在多巴胺能神经元诱导培养基中悬浮后贴壁分化,Pax6、Nestin和PSA-NCAM抗原染色检测神经上皮祖细胞的形成,Tuj1和TH抗原粢色检测多巴胺能神经元的形成.结果 人孤雌胚胎干细胞诱导可形成的神经上皮祖细胞中,具有典型的rosette结构,其Pax6和Nestin阳性细胞比例分别为(84.7±5.3)%和(92.0±4.7)%.该神经上皮祖细胞可形成PSA-NCAM染色阳性的神经元前体和Tuj1染色阳性的神经元,Tuj1阳性细胞中(33.3±4.3)%为酪氨酸羟化酶染色阳性细胞.结论 人孤雌胚胎干细胞体外诱导分化可形成高纯度的神经上皮祖细胞,并可进一步分化为多巴胺能神经元.     

血小板活化因子对嗜酸性粒细胞活化作用的实验研究

目的 探讨血小板活化因子(PAF)在低密度嗜酸性粒细胞(HE)的产生和嗜酸性粒细胞(EOS)脱颗粒的过程中所起的作用以及二者之间的关系,以了解HE的产生机制。方法 分离正常人外周血EOS,测定PAF对EOS脱颗粒、EOS密度的作用。结果 PAF能刺激EOS脱颗粒,其最大作用浓度为10^-9mmol／L,即可使29．97％的正常密度EOS(NE)转变为HE,二者之间呈显著正相关。结论 EOS脱颗粒是HE产生的原因之一;PAF可以刺激EOS脱颗粒使NE转变为HE,PAF刺激EOS脱颗粒可能是支气管哮喘等过敏性疾病体液中HE增高的原因。     

Experimental Study on Meiotic Spindles and Chromosomes of Mouse Mature （MⅡ） Stage Oocytes under Laser Scanning Confocal Microscopy

The in vitro culture,maturation and cryopr-eservation of oocytes are all the i mportant parts inthe assisted reproductive technology.Mature oo-cyte(i.e.MⅡoocytes)is arrested at the meta-phase stage of meiosisⅡ,in which chromosomesare attached to the spindle microtubles and line uponthe equatorial plateinthe normal spindles.Dis-organized structure of spindles can not onlylead tosuch morphologic changes as unwound chromo-somes but also the chromosome nondisjuction andresultant aneuploid.When t…     

人卵泡液中白血病抑制因子浓度及其对卵母细胞发育的影响

目的: 探讨人卵泡液中是否存在白血病抑制因子(LIF)及其对卵母细胞发育的影响. 方法: 采用ELISA法检测66例体外受精-胚胎移植患者取卵日卵泡液及其血清中LIF浓度,分析卵泡液中LIF浓度与卵母细胞发育的关系. 结果: 66份卵泡液中LIF浓度为(28.5±13.1) ng/L, 血清LIF浓度为(3.0±1.5) ng/L ,差异非常显著(P＜0.01),而且两者间无相关性(r=0.1915, P＞0.05). 含成熟卵母细胞的卵泡液中LIF浓度为(33.7±11.1)ng/L,含未成熟卵母细胞的卵泡液LIF浓度为(18.0±10.5)ng/L,两者比较差异非常显著(P＜0.01). 结论: 卵泡液中存在较高浓度的LIF,其对卵母细胞发育有促进作用.     

Experimental Study of Assessment on Ventricular Activation Origin and Contraction Sequence by Doppler Tissue Imaging

Doppler tissue imaging(DTI) is a newly de-veloping technique that is based on color Dopplerimaging principles for evaluation of the ventricularwall motion by analyzing Doppler signals from car-diac tissues[1] .There are three DTI displayingmodes:acceleration mode,M- mode and spectralmode[2 ] .DTIcan be used to evaluate the position,size and severe degree of ventricular wall dysfunc-tion[2 ] .Recent studies demonstrated that the my-ocardial contraction sequence,activation origin andelectric…