一种腹腔镜人工气腹体外模型的建立及评价

目的：建立腹腔镜人工气腹体外模型并评价其效果。方法：采用不锈钢密封罐和自动气腹机建立腹腔镜人工气腹体外模型，用M1Tr法观察CO2气腹（7mmHg，4h）对人宫颈癌细胞CaSki体外生长的影响，实验重复3次。设未处理组为对照。结果：CO2气腹组和对照组同次处理的组间比较结果显示，处理后第24h、48h两组吸光度值无明显差异（P〉0．05），处理后第72h、96h、120hCO2组各时间点吸光度值明显高于对照组（P〈0．05）。两组组内3次重复实验同一时间点所测吸光度值（A）无显著差异（P〉0．05）。结论：采用密封罐和自动气腹机建立的腹腔镜人工气腹体外模型是一种进行腹腔镜体外研究的理想模型；采用该模型发现CO2气腹促进人宫颈癌细胞CaSki的体外生长。     

靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响

目的通过miRNA介导RNAi沉默OPN表达探讨其对人肺腺癌细胞株A549顺铂(DDP)敏感性的影响。方法利用体外构建的靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48h细胞OPN蛋白表达;转染后24、48、72、96h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/mL顺铂作用后细胞的增殖;于转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果(1)转染后48h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(P0.01)。(2)转染后24h细胞增殖开始受抑制(P0.05),48、72、96h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性差异均有统计学意义(P0.01)。(3)转染联合顺铂作用24h细胞增殖开始受抑(P0.05),48、72、96h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性转染组与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(P0.01)。转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/mL时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.01)。结论靶向OPN的miR-NA抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强细胞对DDP的敏感性。     

BIIB021对MDS细胞株Skm-1增殖的多靶点抑制作用研究

目的探讨热休克蛋白90（HSP-90）抑制剂BIIB021对骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株Skm-1增殖的多靶点抑制作用。方法分别将0、100、200、400nmol/LBIIB021作用于4组Skm-1细胞（对照组、100nmol/L组、200nmol/L组、400nmol/L组）,培养24h后采用Westernblot法检测各组细胞雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、mTOR复合物1（mTORC1）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α)蛋白表达水平。结果各组Skm-1细胞mTOR蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。各组Skm-1细胞mTORC1、HIF-1α蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;组间两两比较差异亦均有统计学意义（均P＜0.05）,即100nmol/L组、200nmol/L组、400nmol/L组Skm-1细胞mTORC1、HIF-1α蛋白表达水平均低于对照组,且400nmol/L组表达水平最低。结论BIIB021通过抑制mTORC1和HIF-1α蛋白的表达抑制Skm-1细胞增殖。     

川芎嗪对蛛网膜下腔出血后血浆及脑脊液中内皮素和一氧化氮含量的影响

目的观察蛛网膜下腔出血（SAH）后血浆和脑脊液内皮素（ET）、一氧化氮（NO）水平的变化及神经功能受损情况，探讨川芎嗪对SAH后脑血管痉挛（CVS）的防治作用。方法实验分为对照组、实验组和空白组，对照组和实验组采用枕大池注血法制作SAH模型。实验组经腹腔给予川芎嗪注射液，对照组和空白组仅给予生理盐水。用放射免疫法检测造模后72h和168h血浆和脑脊液ET和NO水平，并对动物进行神经功能评分。结果①SAH后，脑脊液中对照组的ET水平较实验组和空白组增加（P〈0．05），且168h水平高于72h；血浆中对照组ET水平亦高于实验组和空白组（P〈0．05），空白组和实验组之间差异无统计学意义。②SAH后，脑脊液中对照组NO水平较空白组和实验组低（P〈0．05），3组的NO水平随着时间的推移变化不大；血浆中对照组NO水平亦较空白组和实验组低（P〈0．05），空白组和实验组之间差异无统计学意义。③在神经功能评分方面，各时点上实验组评分均低于对照组（P〈0．05）。结论采用川芎嗪治疗后，血浆和脑脊液中ET水平有所下降或ET上升受到抑制，而NO水平则有所上升或NO下降受到抑制，提示川芎嗪对SAH后CVS有较好的防治作用。     

窖蛋白-1在肺腺癌A549细胞凋亡中的作用及其分子机制

目的 探讨窖蛋白1（caveolin-1，Cav-1）在肺腺癌A549细胞凋亡中的作用及其分子机制。方法 体外培养A549细胞，100nM星形孢菌素（staurosporine，STS）处理6、12和24h后，流式细胞术检测STS处理后细胞周期的改变和凋亡率，Westernblot方法检测STS诱导细胞凋亡过程中Cav-1、caspase-3、PI3K蛋白表达的变化。结果FACS检测显示100nMSTS作用后，出现G2/M阻滞和细胞凋亡，促凋亡作用于用药后6h出现，持续至24h，G2/M阻滞的作用在12h达到峰值，凋亡率在24h达到峰值。Westernblot结果显示经100nMSTS处理A549细胞6、12和24h后，Cav-1蛋白含量逐渐增加，组间比较差异均有统计学意义（P＜0.01）；caspase-3蛋白显示32kDa和17kDa条带，caspase-3含量逐渐增加，与对照组相比，STS处理12h和24h后，差异有统计学意义（P＜0.01）；PI3K含量逐渐下降，与对照组相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。采用caspase-3的抑制剂能阻止STS诱导的细胞凋亡。结论Cav-1在STS诱导的A549细胞凋亡中起正调控作用。     

幼儿心内直视手术围术期超滤对内皮素和肿瘤坏死因子变化的影响

目的 观察幼儿心内直视手术围术期超滤对血液中内皮素（ET）和肿瘤坏死因子（TNF）的影响.方法 对22例心内直视手术患儿,随机分为超滤组（11例）和对照组（11例）,用放射免疫法测定围术期即体外循环转流前、转中、转后、术后6、12、24h血浆中ET 和TNF的浓度.结果 两组比较,超滤组转后血细胞压积明显高于对照组（P＜0.05）;超滤组体外循环时间明显多于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;两组患儿体外循环后血浆ET、TNF都明显升高,术后6h达高峰,均明显高于转前水平,差异有统计学意义（P＜0.05）.超滤组滤出液体同时检测到ET（20～100）pg/mL,TNF（0.3～1.528）ng/mL.结论 体外循环可致血浆中ET 和TNF浓度明显升高,且持续12h.超滤可使血液浓缩,血细胞压积升高,同时可滤出ET、TNF,减轻术后炎症反应.     

TRAIL联合顺铂体外杀伤前列腺癌PC-3细胞株的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物顺铂(DDP)对前列腺癌PC-3细胞株的体外杀伤作用. 方法 分别采用不同浓度的DDP(1.0μg/ml、5.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml)与TRAIL(10.0ng/ml、20.0ng/ml、50.0ng/ml、100.0ng/ml、200.0ng/ml)作用PC-3细胞株,24h后MTT法检测细胞的吸光度;DDP(5.0ng/m1)与TRAIL(50.0ng/ml)联合作用PC-3细胞4h、8h、12h、16h、20h、24h后,MTT法检测检测细胞的吸光度;并按细胞的抑制率(100%)=(1-实验组吸光度/阳性对照组吸光度)×100%计算DDP组、TRAIL组及两者联合应用对细胞的抑制率,比较组间细胞抑制率的差异. 结果 单独应用DDP或者TRAIL对PC-3细胞体外杀伤作用有浓度依赖性,浓度增高一定程度时对PC-3细胞的抑制作用会处于一个相对平台期;联合应用DDP+TRAIL组与单独应用同浓度的DDP及TRAIL组相比,其对PC-3细胞的体外杀伤作用明显增强,P<0.05,差异具有显著性意义;联合应用DDP与TRAIL对PC-3细胞的体外杀伤作用具有明显的时间依赖性. 结论 DDP能明显提高TRAIL对前列腺痛PC-3细胞株的杀伤作用,其机制与死亡受体DR5的表达上调有关.     

糖尿病肾病患者血清骨桥蛋白检测的临床意义

目的研究糖尿病肾病患者血清骨桥蛋白的水平及临床意义。方法纳入2型糖尿病患者78名,依据尿蛋白排泄率将其分为尿蛋白阴性组（D0组）28例、微量白蛋白尿组（D1组）25例及临床蛋白尿组（D2组）21例,另纳入健康对照组24例。分别测定血清骨桥蛋白（OPN）的浓度,对结果进行统计处理。结果骨桥蛋白（OPN）浓度测定显示,尿蛋白阴性组（D0组）、微量白蛋白尿组（D1组）及临床蛋白尿组（D2组）较健康对照组明显升高,差异有统计学意义;随着病情进展,血清骨桥蛋白（OPN）在尿蛋白阴性组（D0组）、微量白蛋白尿组（D1组）及临床蛋白尿组（D2组）呈增高趋势。结论表明血清骨桥蛋白（OPN）与糖尿病肾病的发展有着密切关系,对糖尿病肾脏损伤的评估及治疗有一定的临床意义。     

吗啡复合罗哌卡因硬膜外腔术后镇痛对高血压病患者应激反应的影响

目的探讨吗啡复合罗哌卡因硬膜外自控术后镇痛对高血压痛患者内皮素（ET），肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的影响。方法40例拟行腹式全子宫切除术的高血压病患者随机分为两组：A组为对照组，术后根据需要间断肌注哌替啶镇痛；B组术后行吗啡复合罗哌卡因硬膜外自控术后镇痛（PCEA）。采用放免法测定术前、术毕3h、术后24h及术后48h血浆ET、肾素活性（PRA）及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）浓度；监测心率、血压及VAS评分。结果B组术毕3h、术后24h及48h血浆ET值显著低于A组（P〈0．01），而且B组术毕3h及术后24h血浆PRA，AngⅡ值低于A组，B组术后收缩压（SBP）及VAS评分显著低于A组同期值（P〈0．01）。结论吗啡复合罗哌卡因硬膜外自控术后镇痛，能有效减轻病人疼痛，抑制高血压患者ET、PRA和AngⅡ释放和应激反应，维持血流动力学稳定。     

胃癌、大肠癌患者血清骨桥蛋白的检测

目的：研究分析血清骨桥蛋白（osteopontin,OPN）变化在胃癌、大肠癌患者中的临床意义。方法：患者为2012年8月-2014年4月收治,胃癌患者41例,大肠癌患者45例,对照组40例健康志愿者。治疗前采血,酶联免疫吸附试验检测患者及对照组血清OPN的水平并结合临床进行分析。结果：胃癌、大肠癌患者血清OPN检测的敏感性分别为64%、73%,特异性分别为55%、47%。胃癌患者术前血清OPN的浓度为（69.7±8.3）ng/m L,正常对照组分别为（36.3±4.5）ng/m L,两者具有显著性差异（P〈0.01）。血清OPN水平胃癌组织学分型之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）,并且没有相关性（R=0.326,P〉0.05）。Ⅰ期OPN水平与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,其余各期OPN水平与正常对照组比较均有统计学差异（P〈0.01）。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期各组之间OPN比较差异有统计学意义（P〈0.05）,提示OPN和胃癌的分期具有相关性（R=0.786）。大肠癌患者术前血清OPN浓度为（87.6±7.7）ng/m L,而正常对照组为（41.3±19.0）ng/m L,两者有显著性意义（P〈0.01）。血清OPN水平与大肠癌组织学分型之间比较差异无显著性意义（P〉0.05）,也无相关性（R=0.125）。大肠癌患者血清OPN水平与临床特征有一定的相关性（R=0.913）。正常对照组、A和B、C、D期之间比较OPN比较差异有显著意义（P〈0.01）。结论：血清OPN水平在胃癌,大肠癌患者中明显升高,并与临床分期有明显相关,血清OPN可考虑作为胃癌、大肠癌患者一种极具潜力肿瘤标志物的选择。     

Inhibition of Invasion and Up-regulation of E-cadherin Expression in Human Malignant Melanoma Cell Line A375 by（-）-Epigallocatechin-3-gallate

The inhibitory effects of （-）-epigallocatechin-3-gallate （EGCG） on the invasion of human malignant melanoma cell line A375 and the possible molecular mechanisms of this effect were investiaged. A375 cells were pretreated with 20 μg/mL EGCG for 24, 48 and 72 h respectively and the E-cadherin expression was detected by Western blot analysis. A375 cells were also pretreated with different concentrations of EGCG （1, 5, 10 and 20 μg/mL） for 72 h and the expression of E-cadherin was measured by RT-PCR. The adhesion and invasion of A375 cells were tested by cell-matrigel adhesion assay and matrigel invasion assay respectively. The results showed that EGCG could significantly up-regulate the expression of E-cadherin time-and concentration-dependently （both P〈0.05）. Statistical analysis showed that A375 cells invasion was inhibited by EGCG and correlated with the up-regulation of E-cadherin expression. It was suggested that EGCG strongly inhibited invasion of A375 cells, and the inhibition mechanism was possibly associated with the up-regulation of E-cadherin expression.     

辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌内皮素-1的影响

目的观察羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌内皮素-1(ET-1)的影响。方法低氧培养人脐静脉内皮细胞,采用辛伐他汀以不同浓度(0、1、2.5、5.0、10.0μmol/L)和不同作用时间(12、24、48h)进行干预,并用甲羟戊酸(100μmol/L)调节辛伐他汀的作用。采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞ET-1mRNA的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测内皮细胞上清液中ET-1蛋白的浓度。结果11μmol/L浓度的辛伐他汀对内皮细胞ET-1mRNA和ET-1蛋白表达没有影响,2.5μmol/L辛伐他汀即可抑制ET-1的表达,但与0μmol/L浓度组相比差异无统计学意义;5μmol/L及10μmol/L辛伐他汀则表现出明显的抑制作用(P<0.01),尤以10μmol/L浓度组明显;2以10μmol/L辛伐他汀干预低氧培养的内皮细胞,低氧12h后,内皮细胞ET-1mRNA和ET-1蛋白表达明显减少,24h后继续降低,48h达到最低;3100μmol/L甲羟戊酸可以阻止辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌ET-1的抑制作用。结论辛伐他汀对低氧培养的内皮细胞合成和分泌ET-1具有抑制作用。     

骨桥蛋白在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用

目的研究不同氧浓度下滋养细胞骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达与相应氧浓度下滋养细胞侵袭力的相关性,探讨OPN在缺氧对滋养细胞侵袭力影响机制中的作用。方法利用气体混配缺氧装置(QT-MTX-3),模拟子痫前期胎盘缺氧的低氧环境,培养人胎盘绒毛膜癌滋养细胞系BeWo细胞。采用Western印迹和实时荧光定量PCR方法,检测不同氧浓度对BeWo细胞OPN表达的影响。采用Transwell侵袭模型,探讨缺氧对BeWo细胞侵袭力的影响。结果 Western blot检测结果显示,缺氧48h后,低氧组OPN蛋白的表达水平均明显下降,且2%O2组OPN蛋白下降更显著。实时荧光定量PCR检测结果表明,缺氧对滋养细胞OPN mRNA的表达影响呈现出浓度时间依赖性,随着氧浓度的降低和缺氧时间的延长,OPN mRNA的表达呈显著下降趋势。Transwell侵袭实验结果显示,与常氧对照组相比,低氧组细胞侵袭力明显降低,8%O2组和2%O2组的细胞浸润指数分别为0.298 8和0.091 7(P<0.01)。采用Spearman相关分析法,比较OPN表达水平与BeWo细胞侵袭力的相关性,结果显示,随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力进一步下降,OPN表达水平与侵袭指数成正相关(rs=0.944,P<0.01)。结论缺氧降低滋养细胞OPN的表达,表现为浓度和时间依赖性;随着OPN表达的降低,滋养细胞的侵袭力下降。OPN低表达可能是子痫前期滋养细胞侵袭力下降的分子机制之一。     

ET-1、rhEGF、bFGF对培养的兔角膜内皮细胞的影响

目的 研究内皮素-1(ET-1)、重组人表皮生长因子(rhEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对培养的兔角膜内皮细胞增殖能力的影响及其相互作用。方法 在体外培养的兔角膜内皮细胞中单独使用或联合应用ET-1、rhEGF、bFGF，采用MTT方法观察对细胞增殖的影响，免疫组化染色法和计算机图像分析系统检测对细胞增殖细胞核抗原(PcNA)表达的影响。结果 一定浓度ET-1促进培养的兔角膜内皮细胞的增殖，且呈剂量相关性。10pmol／L时起作用，200pmol／L时发挥最大作用。10ng／ml rhEGF、2ng／mlbFGF也促进培养的兔角膜内皮细胞的增殖。联合应用ET-1 rhEGF、ET-1 bFGF、ET-1 rhEGF bFGF，细胞吸光度(A)值明显高于单独使用相应药物时A值之和。ET-1、rhEGF、bFGF单独使用可促进培养的兔角膜内皮细胞PCNA表达，联合应用时PCNA表达平均吸光度A值明显强于单独使用相应药物时表达强度之和。结论 ET-1可作为一种生长因子，它和rhEGF、bFGF单独使用可促进培养的兔角膜内皮细胞增殖能力，联合应用时具有协同作用。     

骨桥蛋白对胰腺癌细胞金属基质蛋白酶-9转录后调控作用的研究

目的探讨骨桥蛋白对胰腺癌细胞中金属基质蛋白酶-9转录后调控的影响。方法采用荧光定量PCR、荧光素酶报告基因技术检测骨桥蛋白对胰腺癌细胞金属基质蛋白酶-9转录后调控的影响。结果骨桥蛋白促进金属基质蛋白酶-9mRNA半衰期的延长,上调含金属基质蛋白酶-93’UTR的荧光素酶报告基因的表达。结论骨桥蛋白上调胰腺癌细胞株PANC-1中金属基质蛋白酶-9转录后调控,其主要作用位点在金属基质蛋白酶-93’UTR。     

反义寡核苷酸对微缺氧下人结肠癌细胞HT-29骨桥蛋白表达的影响

目的观察靶向骨桥蛋白（OPN）的反义寡核苷酸（ASODN）对微缺氧下HT-29细胞骨桥蛋白表达的影响,为探讨OPN与微缺氧诱导的肿瘤恶性表型的关系奠定基础。方法合成ASODN,以Lipofectamine为载体,将其转染入微缺氧下高表达OPN的HT-29细胞。Western blot行OPN ASODN抑制OPN蛋白表达的量效关系和特异性分析。RT-PCR检测转染细胞微缺氧下OPNmRNA的表达。结果 ASODN组OPN蛋白表达较各对照组明显下调（P〈0.01）,其下调的幅度随OPN ASODN浓度升高而增强,但这种增强趋势在浓度为10umol/L和20umol/L之间已不明显（P〉0.05）。微缺氧诱导的OPN蛋白和mRNA表达被靶向OPN的ASODN特异性地抑制,表达量分别是对照组的35.4%和31.5%。结论靶向OPN的ASODN明显抑制微缺氧诱导的OPNmRNA和蛋白表达。     

高糖对脑微血管内皮细胞活力和内皮素-1的影响

目的：探讨体外培养条件下高糖状态对大鼠脑皮质微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cells，BMEC）的影响。方法：建立大鼠脑皮质微血管内皮细胞体外培养模型，用透射电镜观察正常浓度（5．05mmol／L）和高浓度（15mmol／L、30mmol／L）葡萄糖培养基中培养24h后内皮细胞的超微结构变化，用MTT法评价内皮细胞活力，采用放射免疫方法测定内皮素-1（Endothelin-1，ET-1）含量，用原位杂交法测定ET-1mRNA表达。结果：高浓度葡萄糖可使内皮细胞超微结构损伤，细胞活力降低，ET-1分泌显著上调，并呈剂量依赖性损伤细胞，但ET-1mRNA表达无明显变化。结论：高糖对脑皮质微血管内皮细胞有显著的损伤作用，ET-1升高在糖尿病微血管病变早期可能起主要作用。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞分化和骨桥蛋白表达的影响

目的 分析新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺(NTFMP)对人肺腺癌细胞株A549体外增殖、分化及骨桥蛋白表达的影响.方法 以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,分别给予不同浓度的ATRA及NTFMP进行干预,应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法测定A549细胞的增殖情况;酶动力学法检测...     

骨桥蛋白反义寡核苷酸对微缺氧下人结肠癌细胞HT-29增殖活性及侵袭力的影响

目的 观察靶向骨桥蛋白(OPN)的反义寡核苷酸(ASODN)对微缺氧下HT-29细胞增殖活性、侵袭转移潜能等的影响,探讨OPN与微缺氧诱导的肿瘤恶性表型的关系.方法 合成ASODN,以Lipofectamine为载体,将其转染入微缺氧下高表达OPN的HT-29细胞.用RT-PCR和Western blot法分别检测转染细胞微缺氧下OPN mRNA和蛋白的表达,MTT检测转染的HT-29细胞微缺氧下的增殖活性,MTT比色试验测定HT-29细胞的异质性黏附能力,明胶酶谱分析检测分泌的MMP-2/9活性变化.结果 微缺氧诱导的OPN mRNA和蛋白表达被靶向OPN的ASODN特异性地抑制,表达量分别是对照组的31.5%和35.4%.ASODN组HT-29细胞的吸光度值(A570)明显低于各对照组(P<0.01),生长抑制率(IR)达(41.6±1.2)%.ASODN组HT-29细胞在各时限点的黏附率均明显降低,明胶酶活性下降71%,与各对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 靶向OPN的ASODN明显抑制微缺氧诱导的OPN mRNA和蛋白表达,显著拮抗微缺氧诱导的细胞增殖、异质性黏附,并显著下调微缺氧诱导的细胞分泌MMP2/9的活性.OPN在微缺氧促进肿瘤向恶性表型转化中起着重要作用.     

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。