西红花酸对大鼠实验性动脉粥样硬化的影响

目的研究西红花酸对大鼠实验性动脉粥样硬化的影响。方法采用给予大剂量维生素D2(VD2)后饲喂高胆固醇饲料诱发大鼠实验性动脉粥样硬化模型，测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。取主动脉和肝脏做病理切片检查。结果高、低剂量的西红花酸能显著降低动脉粥样硬化大鼠血清TC、LDL-C和MDA含量；显著升高血清HDL-C含量、SOD活性和抗动脉粥样硬化指数(AAI)。病理切片结果表明，西红花酸能明显减轻模型大鼠动脉粥样硬化性损伤。结论西红花酸具有显著的抗大鼠实验性动脉粥样硬化作用。     

纳米银杏对动脉粥样硬化早期大鼠主动脉壁ICAM-1基因表达的影响

目的:观察纳米银杏(银杏黄酮-磷脂复合物)对动脉粥样硬化(AS)早期大鼠主动脉壁细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA及其蛋白表达水平的影响.方法:采用生化分析、免疫组化、实时定量荧光RT-PCR以及凝胶电泳,观察纳米银杏对大鼠主动脉ICAM-1 mRNA及其蛋白表达水平的影响.结果:与模型组比较,纳米银杏组ICAM-1表达明显降低(P<0.01);与银杏黄酮组比较,纳米银杏组ICAM-1表达明显降低(P<0.01).结论:银杏黄酮及纳米银杏可下凋AS早期大鼠主动脉壁ICAM-1的高表达,纳米银杏的作用明显优于银杏黄酮.     

沙棘黄酮调控动脉粥样硬化大鼠自噬相关蛋白的表达

目的探讨沙棘黄酮（TFH）对动脉粥样硬化大鼠血管自噬相关基因beclin-1及LC3表达的影响,以阐明其保护粥样硬化的分子机制。方法健康清洁级雄性SD大鼠60只随机分为：正常对照组,模型对照组,沙棘黄酮低、中、高剂量组,白藜芦醇组;采用高脂饲料与维生素D3复制大鼠动脉粥样硬化模型,提取血清后采用比色法测定氧化应激指标变化,取主动脉HE染色观察病理形态学变化;ELISA技术检测血管中beclin-1蛋白及LC3蛋白表达,观察沙棘黄酮和白藜芦醇对beclin-1及LC3表达的影响。结果动脉粥样硬化时大鼠SOD、GSH-Px、CAT活性均明显下降,MDA含量明显升高;沙棘黄酮和白藜芦醇干预能使大鼠SOD、GSH-Px、CAT升高,MDA含量降低;粥样硬化时大鼠自噬相关基因beclin-1及LC3表达降低,沙棘黄酮和白藜芦醇干预能够上调beclin-1及LC3蛋白的表达。结论沙棘黄酮可明显上调粥样硬化大鼠自噬基因beclin-1蛋白和LC3蛋白的含量,引起机体自噬抑制动脉粥样硬化的发生和发展,发挥抗粥样硬化作用。     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠主动脉脂联素受体1、MCP-1和NF-κB表达的影响

目的观察替米沙坦对2型糖尿病大鼠主动脉脂联素受体1(AdipoR 1),单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨替米沙坦对糖尿病大血管病变保护作用及机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组),糖尿病组(DM组)及糖尿病替米沙坦治疗组(DT组)。用高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。成模后,DT组予以替米沙坦(5 mg/kg.d)灌胃12周。12周后,用酶联免疫法检测血浆脂联素水平,用R T-PCR方法检测主动脉脂联素受体1 mR NA表达,用免疫组织化学法检测主动脉MCP-1和NF-κB蛋白表达。结果与NC组比较,DM组大鼠血浆脂联素水平和主动脉脂联素受体-1 mRNA表达显著降低,主动脉MCP-1和NF-κB表达显著增加,主动脉病理改变加重。经替米沙坦治疗后,DT组糖尿病大鼠血浆脂联素水平和主动脉脂联素受体1 mRNA表达显著增加,主动脉MCP-1和NF-κB表达显著降低,主动脉病理改变减轻。结论替米沙坦上调2型糖尿病大鼠主动脉脂联素受体1的表达,降低主动脉MCP-1和NF-κB的表达,减轻动脉粥样硬化程度,对糖尿病大鼠大血管产生保护作用。     

补肾中药对去势后大鼠雌激素受体作用的实验研究

目的:观察补肾中药对去势后大鼠雌激素受体基因表达的影响。方法:雌性SD大鼠去势后给予高脂饲料喂养,制作绝经后动脉粥样硬化模型,同时每日给予补肾中药灌胃。16周后检测血脂水平,主动脉、垂体和下丘脑雌激素受体α、β基因的表达以及雌激素受体-配体结合力。结果:补肾中药可提高主动脉、垂体和下丘脑雌激素受体α、β基因的表达,并提高主动脉和下丘脑组织雌激素受体-配体结合力。结论:补肾中药可能通过调节雌激素受体而对绝经后动脉粥样硬化起改善作用。     

参夏合剂对动脉粥样硬化大鼠Bax、Bcl-2和Hs-CRP表达的影响

目的观察中药参夏合剂对动脉粥样硬化大鼠Bax、Bcl-2和超敏C-反应蛋白(Hs-CRP)表达的影响,探讨防治动脉粥样硬化的作用机制。方法运用高脂饲料法复制动脉粥样硬化大鼠模型,随机分组,参夏组以参夏合剂干预,干预结束后取血清检测Hs-CRP水平,取胸主动脉观察斑块变化,采用免疫组化法检测动脉管壁中Bax、Bcl-2蛋白表达。结果模型组Hs-CRP水平明显高于空白对照组(P<0.05),与模型组比较,参夏组可明显降低Hs-CRP水平;模型组Bax蛋白表达与Bcl-2蛋白表达明显低于空白对照组(P<0.05),参夏组与模型组比较,Bax蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),Bcl-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Bax和Hs-CRP通过促进细胞凋亡作用而诱发动脉粥样硬化过程,参夏合剂可通过调节细胞凋亡发挥抗动脉粥样硬化作用。     

阿托伐他汀钙对动脉粥样硬化兔主动脉TLR2表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀钙对新西兰大白兔主动脉粥样硬化斑块内TLR2表达的影响及其抗动脉粥样硬化TLR机制。方法:将新西兰大白兔30只分为高脂饮食加阿托伐他汀钙组、高脂饮食组、正常对照组,喂养8周后处死每组动物取出主动脉,测量动脉粥样硬化病变面积;行免疫组化染色及Western blot检测,观察兔主动脉粥样硬化程度及TLR2蛋白在动脉粥样硬化斑块中的表达。结果:高脂饮食加阿托伐他汀钙组、高脂饮食组动脉粥样硬化斑块面积与动脉内膜面积比值及TLR2蛋白表达均高于正常对照组;高脂饮食加阿托伐他汀钙组动脉粥样硬化斑块面积与动脉内膜面积比值及TLR2蛋白表达均低于高脂饮食组。结论:阿托伐他汀钙可使主动脉粥样斑块内TLR2蛋白表达下调,具有显著抗动脉粥样硬化的作用。     

三七总皂甙对高脂饮食糖尿病大鼠炎症因子和主动脉脂质代谢的影响

目的观察三七总皂甙（PNS）对高脂饮食糖尿病SD大鼠血脂、血糖、炎症因子和主动脉脂质代谢基因的影响。方法46只SD大鼠普通饲料饲养2周后,其中36只经腹腔内注射链脲佐霉素(STZ)建成糖尿病动物模型,成功30只。随后分为3组（每组10只）：高脂饮食合并糖尿病组（糖尿病组）,高脂饮食合并糖尿病PNS干预组（PNS组）,高脂饮食合并糖尿病阿托伐他汀钙干预组（他汀组）,另10只大鼠设为单纯高脂饮食非糖尿病组（对照组）。4组大鼠均予高脂饲养12周,他汀组和PNS组第5周起分别在高脂饲养基础上给予阿托伐他汀钙[（20mg/（kg·d）]和PNS[（80mg/（kg·d）]连续灌胃8周,最后处死大鼠。测定4组大鼠体重、血糖、血脂和血清炎症因子水平,qRT-PCR法检测主动脉组织TLR4、SR-BI、ABCA1和β-actin基因表达,Westernblot检测主动脉组织TLR-4、ABCA1和SR-BI蛋白表达。结果糖尿病组、PNS组和他汀组体重比对照组明显降低（均P＜0.01）,空腹血糖较对照组明显升高（均P＜0.01）。与糖尿病组比较,PNS组和他汀组血清TG、TC、TNF-α、IL-1β和LDL-C水平均降低（均P＜0.05）,与PNS组比较,他汀组LDL-C降低更为明显（P＜0.01）。糖尿病组血管内膜及外膜脂质含量明显增加;PNS组和他汀组主动脉内膜及外膜的脂质含量均明显改善,他汀组主动脉脂质含量降低更为明显。糖尿病组大鼠主动脉组织的TLR-4mRNA表达明显较对照组升高（P＜0.01）。与糖尿病组比较,他汀组TLR-4mRNA表达明显降低（P＜0.01）,SB-RImRNA和ABCA1mRNA表达明显上调（均P＜0.01）,PNS组TLR-4mRNA表达降低,SB-RImRNA和ABCA1mRNA水平升高,但未达统计学差异（均P＞0.05）。与对照组比较,糖尿病组主动脉组织TLR-4蛋白明显升高（P＜0.01）,SB-RI蛋白和ABCA1蛋白表达明显降低（均P＜0.01）。与糖尿病组比较,PNS组和他汀组TLR-4蛋白表达均明显降低（均P＜0.01）,SR-BI蛋白和ABCA1蛋白表达均明显升高（均P＜0.01）,而PNS组SR-BI蛋白和ABCA1蛋白表达水平均低于他汀组（均P＜0.05）。结论PNS能降低糖尿病高脂饮食SD大鼠炎症因子水平,改善胆固醇代谢,减轻高脂、高糖对动脉粥样硬化的影响。     

基于CSE/H2S通路探讨葱白提取物干预大鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的 观察葱白提取物(fistular onion bulb,FOB)对动脉粥样硬化大鼠主动脉基质金属蛋白酶(MMP7、MMP9)、黏附分子(ICAM-1、VCAM-1)、胱硫醚γ裂解酶(cystathionine γ lyase,CSE)表达的影响,并基于CSE/H₂S通路探讨葱白提取物抗动脉粥样硬化的机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、葱白提取物组、辛伐他汀组,每组10只。高脂饮食加肌内注射维生素D₃建立SD大鼠动脉粥样硬化模型,给予葱白提取物、辛伐他汀分别进行干预。通过主动脉Masson染色观察病变血管病理形态变化;全自动生化分析仪检测血脂水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测ApoB水平;RT-PCR检测大鼠主动脉ICAM-1、VCAM-1、CSE及心肌CSE mRNA表达水平;Western blot法检测主动脉MMP7、MMP9、ICAM-1、VCAM-1、CSE表达水平。结果 与模型组比较,葱白提取物、辛伐他汀处理后能抑制血管内膜增生,调节血脂,降低主动脉MMP7、MMP9水平,抑制主动脉ICAM-1、VCAM-1表达,上调主动脉及心肌CSE表达,且两者效果相当。结论 葱白提取物能通过调节血脂、抑制ICAM-1、VCAM-1、MMP7、MMP9表达而发挥抗动脉粥样硬化作用,其机制可能与促进CSE表达、调节CSE/H₂S通路相关。     

西红花苷-1对急性低氧条件下大鼠学习记忆及海马SIRT1表达的影响

目的 研究西红花苷-1对急性低氧条件下大鼠学习记忆及海马区沉默信息调节因子1（SIRT1）表达的影响。方法 SD大鼠随即分为5组：对照组,低氧模型组,西红花苷-1低、中、高剂量（25、50、100 mg/kg）组。西红花苷-1各组每天im给药1次,给药3 d后低氧环境下刺激72 h,采用Morris水迷宫观察大鼠的学习记忆行为,免疫组化法与Western blotting法检测大鼠海马SIRT1蛋白表达。结果 与低氧模型组相比,西红花苷-1各剂量使Morris水迷宫实验中大鼠逃避潜伏期均明显缩短,且穿越平台次数增加（P＜0.05）。免疫组化和Western blotting法检测显示,西红花苷-1各组大鼠海马组织SIRT1蛋白表达均显著高于低氧模型组（P＜0.05）,其中以中、高剂量组作用明显。结论 西红花苷-1预先给药,可增加急性低氧大鼠海马组织SIRT1蛋白表达,这可能是其改善低氧条件下大鼠学习记忆的机制之一。     

LOX-1在抑郁大鼠主动脉中的表达及阿托伐他汀的干预实验

目的 通过观察凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）在抑郁大鼠主动脉中的表达,探讨抑郁可能引起动脉粥样硬化（AS）的机制以及他汀类药物干预的影响.方法 通过慢性不可预见性应激（UCMS）建立抑郁模型,检测血清内皮功能标志物及免疫组化法检测主动脉LOX-1蛋白表达.结果 抑郁大鼠LOX-1表达明显升高,内皮功能受损,阿托伐他汀可使内皮功能得到改善.结论 LOX-1在抑郁大鼠主动脉中的表达增加,提示抑郁可能通过损伤血管内皮功能导致AS,他汀类药物干预可保护抑郁大鼠血管内皮.     

普罗布考对兔动脉粥样硬化模型主动脉凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1表达的研究

目的观察普罗布考对兔动脉粥样硬化模型高胆固醇血症、主动脉内皮功能及LOX-1表达的影响.方法新西兰大白兔随机分为正常对照组(普通饮食,6只),高脂饮食组(高脂饮食,10只)及普罗布考组(高脂饮食+普罗布考200mg/kg·d,10只).实验开始前及第12周分别耳缘静脉采血测定血清总胆固醇.第12周处死动物,取胸主动脉,制备离体胸主动脉环对乙酰胆碱的反应以检查内皮功能,RT-PCR与免疫印迹检测凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)基因与蛋白质表达水平.结果普罗布考可以显著降低兔动脉粥样硬化模型血清总胆固醇浓度;防止高脂血症兔胸主动脉对乙酰胆碱引起的内皮信赖性舒张(E-DR)反应明显降低;以及下调模型动脉主动脉明显增强了LOX-1表达.结论兔动脉粥样硬化模型内皮功能损伤的机制与LOX-1表达增强有关,普罗布考保护内皮功能可能的机制是下调LOX-1表达的作用.     

载LOX-1-siRNA靶向超声微泡的制备及其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用

目的 构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1 (lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)-siRNA靶向超声微泡,研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用.方法 薄膜-水化-超声乳化法构建载LOX1-siRNA纳米级超声微泡(nanobubbles,NBs-siRNA).从Wistar大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs).通过凝胶迁移阻滞实验与siRNA细胞内化实验验证超声微泡可运载siRNA进入靶细胞内;qRT-PCR及Western blot检测LOX1的mRNA和蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂质聚集情况.构建Wistar大鼠动脉硬化模型,实验组经鼠尾静脉注射含有LOX-1-siRNA的NBs-siRNA微泡100 μg,并使用超声仪照射.治疗15 d后,取标本HE染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度;免疫组化法检测斑块组织中LOX-1表达情况.结果 凝胶迁移阻滞实验结果显示,证实NBs与siRNA结合成功.激光共聚焦显微镜观察证实NBs可通过超声照射介导siRNA内化入VSMCs之中.qRT-PCR及Western blot实验结果显示实验组VSMCs LOX-1 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.01).油红O染色显示实验组细胞泡沫化较oxLDL组减弱.组织标本HE染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较对照组减轻;免疫组化实验结果显示,实验组动脉斑块中LOX-1表达水平较各对照组降低(P＜0.01).结论 成功制备能够有效运载LOX-1-siRNA的超声微泡,体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内化入靶细胞内部,下调LOX-1表达,减少泡沫细胞形成,降低动脉硬化斑块病变的严重程度.     

Intervention of Tongxinluo Capsule (通心络胶囊) against Vascular Lesion of Atherosclerosis and Its Effect on Lectin-like Oxidized Low Density Lipoprotein Receptor-1 Expression in Rabbits

Lectin-like oxidized low-density lipoprotein(ox-LDL) receptor-1 (LOX-1) is a newly identifiedreceptor for cytotoxic ox-LDL in endothelial cellsand plays an i mportant role in the occurrence anddevelopment of atherosclerosis ( AS)(1). Clinicalstudies have showed that Tongxinluo capsule (通心络胶囊,TXL) could alleviate the symptoms of angi-na and myocardial ischemia in patients with coro-nary heart disease.But there werefewstudies con-cerning the effect or therapeutic mechanism of itspreve…     

Intervention of Tongxinluo capsule against vascular lesion of atherosclerosis and its effect on lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1 expression in rabbits

Objective: To investigate the prevention by Tongxinluo capsule (TXL) of vascular lesions and its effect on the levels of protein and gene expression of lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1 (LOX-1) of vascular wall in rabbits with atherosclerosis (AS), and to explore its possible mechanism against AS.Methods: AS models were established by feeding New Zealand white rabbits with high-cholesterol diet, and 24 immature rabbits were randomly divided into the control group, model group and treated group (treated with TXL capsule). The indexes of total cholesterol (TO and low density lipoprotein (LDL) levels were measured at the 16th week. The intima thickness and the plaque area of abdominal aorta were quantitatively analyzed by pathological morphological analysis, the expression of macrophage and smooth muscle cell (SMC) in intima were detected by immunohistochemical method and histologic segments were stained by Hematoxilin-Eosin (HE) to identify the degree of atherosclerotic lesion in the model group and the prevention by TXL. The LOX-1 gene and protein expression in abdominal aorta was detected by semi-quantitative RT-PCR and immunohistochemistry, respectively.Results: In the model group, the levels of TC and LDL were significantly elevated, aortic intima thickened extensively, the intima area enhanced, and macrophages expression increased; the levels of LOX-1 gene and protein expression was up-regulated in endothelium and neo-intima of the abdominal aorta. The treatment with TXL reduced blood lipids, attenuated arterial intimai proliferation, markedly inhibited the expression of macrophage and excessively expressed the level of LOX-1.Conclusion: TXL has an inhibitory effect on blood lipids, and it can prevent the occurrence of vascular lesion and cure its development, and its protection against AS was possibly associated with a crucial endothelial protective action through lowering the expression of LOX-1 in vascular walls. Supported by the State Natural Science Foundation of China (No. 30371496).     

锌指蛋白A20对抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1、TLR-4表达的作用

目的 探讨锌指蛋白A20对氧化性低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的血管平滑肌细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）和toll样受体-4（TLR-4）表达的作用.方法 体外培养SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）,简单随机化分成4组：A组（对照组）;B组（OX-LDL组）;C组（A20组）;D组（ox-LDL＋A20组）.收集以上各组细胞,用RT-PCR检测LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达;提取核蛋白,并用western blot的方法检测NF-κ B核易位的量.结果 ox-LDL刺激大鼠主动脉平滑肌细胞后LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA的表达明显增加及核因子κ B（NF-κ B）的活化均明显增加.转染含A20基因质粒的平滑肌细胞TLR-4 mRNA的表达达到正常水平,LOX-1 mRNA的表达及NF-κ B的核移位的量甚至降低到正常水平以下.结论 ox-LDL诱导的平滑肌细胞LOX-1mRNA和TLR-4 mRNA表达增加,可能由此激活TLR-4/NF-κB信号系统,启动动脉壁的炎症反应,触发动脉粥样硬化发生.A20明显抑制了ox-LDL对平滑肌细胞的上述诱导作用,可能由此阻断了ox-LDL引发的不断级联扩大的正反馈效应.阻止了动脉粥样硬化的发展.     

动脉硬化兔血管壁组织中LOX-1的表达

目的研究动脉硬化兔血管壁组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)的表达情况,探讨氟伐他汀干预对其表达的影响。方法24只新西兰大白兔随机分为正常饮食组、高脂饮食组及高脂饮食加氟伐他汀干预组(n=8)。应用RT-PCR法和免疫组化法分别检测各组动物胸主动脉血管壁组织中LOX-1 mRNA和蛋白的表达,并进行统计学分析。结果高脂饮食组及高脂饮食加氟伐他汀干预组兔胸主动脉血管壁组织中均有LOX-1 mRNA及蛋白表达,而正常饮食组无表达;高脂饮食加氟伐他汀干预组LOX-1 mRNA及蛋白表达水平均明显低于高脂饮食组(P<0.05)。结论动脉硬化兔胸主动脉血管壁组织中LOX-1表达明显升高,而氟伐他汀干预能够显著下调其表达水平。     

5-甲基四氢叶酸对大鼠动脉粥样硬化的潜在干预作用

目的 探讨5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)对大鼠动脉粥样硬化的潜在干预特性和可能机制。 方法 高脂饮食联合维生素D2建立大鼠动脉粥样硬化模型,将48只雄性Wister大鼠随机分为对照组、模型组、5-MTHF低剂量组(0.5 mg/kg)和5-MTHF高剂量组(2 mg/kg),每组12只。6周后处死大鼠,检测各组大鼠血清活性叶酸、同型半胱氨酸、血脂、氧化应激、炎症因子和内皮因子含量,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠主动脉病理变化,采用qRT-PCR法检测大鼠主动脉中核因子-κB p65(NF-κB p65)和凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达。 结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量下降(P<0.05),血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDC-C)含量增加(P<0.001),高密度脂蛋白(HDL-C)含量降低(P<0.001),主动脉中有平滑肌细胞增生和脂质斑块弥漫,提示大鼠动脉粥样硬化造模成功。模型组血清活性叶酸含量较对照组差异无统计学意义(P>0.05),同型半胱氨酸浓度增加77.47%(P<0.001)。与模型组相比,5-MTHF低剂量组、5-MTHF高剂量组血清活性叶酸水平升高(P=0.042,P<0.001),同型半胱氨酸浓度降低(P=0.046,P<0.001);5-MTHF低剂量组大鼠的血脂异常、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)活力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、炎症肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、内皮素1(ET-1)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、NF-κB p65和LOX-1 mRNA表达水平均无明显改善(P>0.05);5-MTHF高剂量组大鼠血清TC和LDC-C含量降低(P=0.023,P=0.036),HDL-C含量升高(P=0.035);NO浓度、NOS和SOD活力增加(P=0.035,P=0.022,P=0.04);MDA、TNF-α、IL-6、ET-1含量降低(P=0.022,P=0.045,P=0.024,P=0.045),GSH-Px活力明显增强(P=0.007);LOX-1 mRNA表达下调(P=0.038),NF-κB p65 mRNA表达下调差异无统计学意义(P>0.05)。5-MTHF对动脉粥样硬化大鼠斑块无消退作用,但高剂量5-MTHF可减少平滑肌细胞增生和斑块中泡沫细胞聚集。 结论 5-MTHF可以改善动脉粥样硬化大鼠的血脂异常、氧化应激和炎症反应,减少泡沫细胞聚集和平滑肌细胞增生,但未减轻动脉粥样硬化斑块,其作用机制可能是降低同型半胱氨酸水平,抑制氧化应激和下调LOX-1 mRNA表达。     

体外研究人LOX-1受体功能的细胞模型建立

目的研究LOX—1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外LOX-1高表达细胞模型,用于探讨LOX-1与Ox—LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制。方法根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出LOX-1完整编码区,克隆至pEGFP—C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT—PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP—LOX-1融合蛋白表达情况以及其对Ox—LDL的结合能力。结果pEGFP-LOX—1重建质粒经测序证实克隆的LOX—1序列完整,插入方向正确,转染后实验组LOX—1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil—Ox—LDL的功能提高到6．3倍。表明所克隆的LOX-1受体具有特异性结合Ox—LDL的功能,从而建立了高表达LOX-1受体的细胞。结论成功克隆人类LOX-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究LOX-1提供有利工具。