一起多型别副溶血性弧菌引起的食物中毒病原学研究

目的对一起由多种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行毒力基因及分子分型研究。方法参照国家标准方法对事件中可疑样品进行病原菌分离鉴定,对分离的副溶血性弧菌进行血清学试验,采用荧光定量PCR检测菌株的毒力基因耐热直接溶血素基因（tdh）、耐热直接溶血素相关溶血素基因（trh）与不耐热溶血素基因（tlh）,并用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对分离到的菌株进行分子分型。结果从24份病人标本和1份剩余食品中检出副溶血性弧菌25株;血清型分布为O4：K8 4株,O3：K6 19株,O4：KUT 1株和O3：KUT 1株;分离到的25株副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh＋tlh＋trh-;PFGE聚类分析显示,不同血清型菌株分为不同的簇,同一血清型菌株的PFGE条带型间存在1~2个条带的差异,菌株间存在关联。结论这是一起由多种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒。     

佛山市副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征

目的了解佛山市副溶血弧菌病原学与分子流行病学特征,为副溶血弧菌感染暴发的早期预警、分子流行病学调查及溯源提供准确的实验室数据。方法选取监测食品、食物中毒、散发病例来源的副溶血弧菌,采用血清学、药物敏感性试验、多重PCR检测毒力基因和PFGE分子分型等方法,分析不同来源的副溶血弧菌病原学特征以及分子分型方面的异同。结果 151株菌株中,监测食品分离株血清型分布呈现多样性,无优势菌株;食物中毒分离株和散发病例分离株的优势血清型为O3∶K6。监测食品、食物中毒和散发病例分离株对氨苄西林和磺胺嘧啶都有较高的耐药率,多重耐药情况比较严重。监测食品分离株99.18%(121/122)为tdh-trh-菌株,1株tdh+trh+菌株;食物中毒分离株中tdh+trh-菌株占69.23%(9/13),30.77%(4/13)tdh-trh-菌株;散发病例分离株均为tdh+trh-菌株。151株菌株共获得134个不同的PFGE带型,监测食品分离株的PFGE呈现遗传多样性,无优势带型,并且与散发及食物中毒患者分离株的PFGE带型不同。食物中毒与散发病例分离株带型相对比较集中。结论佛山市不同来源的副溶血弧菌血清型、毒力基因和遗传特征复杂多样,菌株多重耐药形势严峻,需要加强菌株型别变异及耐药监测。     

食品中副溶血弧菌血清学分型与分子分型的研究

目的分析深圳市2007～2010年监测食品中副溶血弧菌存在的优势血清型与基因型之间的相似性,初步建立深圳市食源性副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型监测网络。方法选择2007～2010年监测食品中分离出来的副溶血弧菌主要血清群（O1-O4）55株,基因组DNA经Sfi1酶切,通过脉冲场凝胶电泳PFGE获得图谱,利用BioNumerics分析软件对图谱进行聚类分析。结果相似性在90%以上的有15株,其中有9株相似性为100%,分别是2株O2：K28;1株O1：KUT与1株O4：K42;5株O3：K6,其余菌株谱型差异较大。结论监测食品中分离的副溶血弧菌PFGE型别多,且相互之间关系分散。PFGE分子分型监测网络的建立,有助于食源性疾病发生时的主动监测,爆发调查和传染源追踪。     

广西贵港市双壳贝类中副溶血性弧菌的分布情况

目的调查贵港市零售双壳贝类中副溶血性弧菌的分布情况及其血清型和毒力基因特征。方法共采集160份双壳贝类样品,采用GB 4789. 7-2013方法进行定性定量研究,对分离得到的菌株进行血清型分型并采用荧光PCR法考察其毒力基因携带情况。结果贝类中副溶血性弧菌检出率和MPN含量下半年三、四季度高于上半年一、二季度;共分离得到105株副溶血性弧菌可区分其O群,49株可区分其K型,O2群菌株最多,占23. 81%;共检测到105株菌tlh基因阳性,2株菌含trh基因(血清型分别为O10∶K18和O11∶KUT)。结论 tlh基因可以用于副溶血性弧菌的检测鉴定,需要进一步加强对副溶血性弧菌毒力基因tdh和trh基因的监测,为贵港市的水产品中副溶血性弧菌引起的食品安全评估提供依据。     

一起副溶血性弧菌食物中毒的溯源及毒力基因研究

目的对一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原菌进行分型溯源和毒力基因分析。方法采用荧光定量PCR对分离副溶血性弧菌株检测致热性溶血素TDH基因,并利用脉冲场凝胶电泳进行分子分型,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果从抽检食物中毒样品中分离的5株副溶血性弧菌TDH基因检测结果显示均为阳性;PFGE分型4株副溶血性弧菌带型一致,1株带型与其他分离株有1条带的差异。结论利用脉冲场凝胶电泳对食物中毒病原菌进行分子分型并进行毒力基因检测,为食源性疾病溯源及分子流行病学研究提供科学依据。     

广东省茂名市副溶血弧菌涉水产品分离株病原学特征

目的 了解茂名市涉水产品中副溶血弧菌分离株的病原学特征。方法 对茂名市食品安全风险监测中分离到的副溶血弧菌进行血清分型、抗生素敏感性实验、毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳( PFGE) 分子分型和多位点序列分型（MLST）。结果 2017—2018年共分离到涉水产品中副溶血弧菌分离株44株,O型共分7个血清型,无明显优势血清型。44株分离株除对氨苄西林和头孢唑林表现出高度的耐药性外,对其它抗生素均敏感,未发现有分离株携带tdh和trh基因。44株分离株分成44种不同的PFGE带型,MLST分型发现有30个新的ST型,呈现一定的遗传多样性。结论 广东省茂名市涉水产品中副溶血弧菌分离株血清型别多样,对大部分的抗生素敏感,均未发现携带tdh和trh 基因,且呈现一定的遗传多态性,需要继续加大监测的力度和范围。     

银川市水产品副溶血弧菌病原学特征分析

目的探讨副溶血弧菌(VP)在银川市的流行特点和变异变迁规律,了解该菌是否伴随着沿海地区的变化而呈动态变化,为副溶血弧菌引起疾病和食物中毒的预防提供科学依据。方法采用食品卫生学检验方法GB/T4789.7进行分离、鉴定;应用PCR方法对分离菌株进行耐热直接溶血素(TDH)、耐热直接溶血素相关溶血素(TRH)基因检测。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对分离、鉴定的副溶血弧菌进行遗传学分析。结果 166份水产品检出副溶血性弧菌24株,检出率14.46%,其中海产品116份,检出23株,阳性检出率为19.83%,淡水产品50份,检出副溶血性弧菌1株,阳性检出率为2%;所有菌株几乎不携带毒力基因;通过PFGE分子分型,24株菌共分为14个带型,呈现型别多样性。结论银川市海产品副溶血弧菌污染状况较为严重。     

一起由副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件的实验室检测和溯源分析

目的对一起由副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件病原菌进行血清分型、毒力基因及分子分型研究,明确传染源。方法参照GB 4789. 1-2016《食品安全国家标准》,采集食源性疾病病人粪便和剩余食物进行致病菌检测,对分离出的可疑致病菌进行生化鉴定、血清分型、PCR毒力基因检测和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。结果10份来自病人的粪便样本和4份盐水虾样本均检出O4∶K8血清型副溶血性弧菌,副溶血性弧菌毒力基因检测均为tdh阳性、trh阴性。PFGE分型显示,所有菌株高度相似,相似度为100%。结论该起食源性疾病暴发事件为被O4∶K8血清型副溶血性弧菌污染的盐水虾所致。PFGE可有效应用于食源性疾病溯源分析及分子流行病学研究。     

两起因副溶血弧菌引起食物中毒的同源性研究

目的分析两起食物中毒中副溶血性弧菌分离株的分子分型、耐药性特点,以揭示深圳市龙华区副溶血性弧菌的分子流行特征。方法对该两起食物中毒事件分离到的28株副溶血弧菌(其中5株分离自2019年5月15日食物中毒患者肛拭子,另外23株分离自2019年9月1日食物中毒患者肛拭子、厨师肛拭子、食物及环境样品)进行血清学分型,PCR检测耐热直接溶血毒素基因(tdh)、耐热相关溶血毒素基因(trh),脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型分析及微量肉汤法检测抗生素敏感性。结果两起食物中毒副溶血弧菌分离株血清学均以O3∶K6型为主;抗生素敏感性分析显示,仅对头孢唑啉(CFZ)出现耐药或中度敏感,对其他抗生素均敏感;毒力基因PCR检测结果显示,均以tdh~+、trh~-型菌株为主;经限制性内切酶(NotⅠ)酶切后的DNA指纹图谱,两起食物中毒菌株间的相似值为68.3%～100.0%,按100%相似度可以分为21个型别。结论不同时间不同地点的食物中毒事件中分离株间具有高度的同源性,同时还发现存在不同血清型的菌株间的DNA指纹图谱存在紧密相关性,提示辖区存在副溶血弧菌的持续污染以及分子水平的变异。     

2015-2016年上海市青浦区副溶血性弧菌菌型分布及耐药分析

目的掌握上海市青浦区近几年副溶血性弧菌的菌型分布和耐药情况。方法搜集2015-2016年两年间副溶血性弧菌,利用血清凝集法分析血清型分布、PCR检测毒力基因分布、大流行株基因和耐药抗性基因的携带情况,采用肉汤稀释法测定副溶血性弧菌MIC值并分析其耐药性。结果在获得的202株菌株血清分型中共16种血清型,以O3群(54. 95%)为主,其次是O4群(38. 12%)。95. 62%(n=457)的菌株携带tdh毒力基因;以tdh+的O3∶K6大流行克隆株为主,携带toxRS new和丝状噬菌体(orf8)基因。副溶血性弧菌主要对头孢唑啉、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林出现较严重耐药情况,耐药基因筛选结果:TEM基因有3株阳性,SHV基因有1株阳性,未发现OXA基因阳性。结论上海市青浦区副溶血性弧菌菌型以O3群为主,尤其tdh+的O3∶K6大流行克隆株,携带toxRS new和orf8基因。目前副溶血性弧菌对美国疾控中心推荐用药处于敏感状态,耐药抗性基因值得关注。     

冻虾中副溶血性弧菌血清分群及耐药分析

目的对近年收集的从冻虾中分离出的副溶血性弧菌菌株进行分析,确定地区的优势血清群及耐药性。方法对2008和2009年从冻虾中分离出的副溶血性孤菌菌株进行复苏,采用玻片凝集试验进行血清分群试验,采用K—B法进行药敏试验。结果22株副溶血性弧菌共分4个血清群,0,群（18．2％）,0,群（50％）,0。群（13．6％）。O6群（9．09％）。庆大霉素、氯霉素、复方新诺明耐药率为0％;氨苄西林耐药率高达72．7％,磺胺嘧啶耐药率45．5％。结论2008和2009年海南水产品中的副溶血性弧菌的O3群（50％）为优势血清群,庆大霉素、氯霉素、复方新诺明是首选的抗生素。     

辽宁省阜新市副溶血性弧菌的生物学特征、毒力基因、耐药特征及分子溯源

目的 了解2016—2020年辽宁省阜新市副溶血性弧菌的生物学特征、毒力基因、耐药特征及MLST分型情况。方法 对2016—2020年分离到的42株副溶血性弧菌,采用PCR方法扩增其毒力基因和7个管家基因,PCR扩增测序后采用DNAstar和Bioedit等软件,对本次研究的42株副溶血弧菌进行MLST同源性分析。采用Kirby-Bauer纸片法检测抗生素的耐药性。结果 42株副溶血性弧菌均扩增出tlh基因,临床株以tlh+tdh+VPaI-1+VPaI-7+T3SS1+T3SS2+毒力基因型为主（53.8%,7/13）,而食品株以仅含有tlh+毒力基因型为主（37.9%,11/29）,13株临床株中均含有tdh或/和trh,仅有1株临床株为tdh和trh双阳性。42株菌共分为 22种ST型,其中ST3型10株,本研究中的42株菌株,PHYLOViZ软件分析显示是以ST345型副溶血性弧菌为起源,形成ST162、ST1413和ST2 3个克隆群。菌株对氨苄西林和青霉素100.0%耐药,对头孢呋辛、羧苄西林和多西四环素的耐药率分别达到88.0%、83.3%和81.0%,对庆大霉素和头孢哌酮的敏感性较高,耐药率分别为21.4%和35.7%。结论 本研究表明,阜新市存在较为严重的副溶血性弧菌污染,临床株携带的副溶血性弧菌毒力基因多于食品株,且对抗生素存在较为严重的耐药性,提示应加强副溶血性弧菌的病原学和分子流行病学监测,需重视流通环节海产品的监督管理,防止食物中毒事件发生。     

深圳市599株副溶血性弧菌血清学鉴定结果分析

目的了解南山区副溶血性弧菌血清群分布及流行趋势。方法依据GB/T4789.7-2003方法,对食物中毒病人肛拭样本及日常临测的食品和水产品样品进行副溶血性弧菌分离、培养及血清学鉴定,数据进行统计及分析。结果共分离到分离副溶血性弧菌599株,分属11个血清群,主要为O3、O1、O4、O5血清群,共占78.62%。其中食物中毒病人分离454株,主要血清群为O3占61.67%（280/454）,O1占12.33%（56/454）,O4占9.69%（44/454）;食品和水产品样品分离145株,主要血清群为O3占24.83%（36/145）,O1占12.41%（18/145）,O4占10.34%（15/145）,O5占8.97%（13/145）。结论食物中毒病人肛拭样本分离的副溶血性弧菌与食品和水产品样品分离的副溶血性弧菌血清群都以O3,O1,O4为主,食物中毒病人分离株血清分群缺少O7,O9,O10三个血清群,但食品和水产品样品分离株血清群O1～O11都有,更具血清分群多样化特点。     

南平市2007-2009年食源性致病菌污染状况

目的了解南平市市售食品中食源性致病菌污染状况及分布和高危食品种类。方法在全国食品污染物监测网与食源性疾病监测网控制体系下,2007-2009年采集4个监测点内的7大类市售食品共计208份,对沙门菌、单核细胞增生性李斯特菌、O157∶H7出血性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌以及副溶血性弧菌5种食源性致病菌进行监测分析。结果 208份食品样品中,分离出目标菌38株,总检出率18.27%。其中生肉类、水产品检出率最高,分别为38.46%（15/39）和73.08%（19/26）,其次为速冻米面,检出率20.00%（4/20）。监测的5种食源性致病菌均有检出,各类食品中沙门菌和副溶血性弧菌的检出率最高,分别为33.33%和50.00%;O157∶H7检出率为0.68%;金黄色葡萄球菌及单核细胞增生性李斯特菌检出率为4.22%和1.79%。O157∶H7经毒力检测存在产志贺毒素。结论通过连续3年对南平市市售食品中食源性致病菌的主动监测,掌握了食源性致病菌的污染状况、高危食品以及5种食源性致病菌在不同食品中的分布情况。     

海南省三亚市2015—2017年副溶血性弧菌血清型分布和耐药性分析

目的 通过对三亚市2015年8月—2017年12月来自食物中毒病人标本和海产品中副溶血性弧菌标本进行血清型分布及耐药性比较,为指导临床合理用药提供依据。方法 参照GB/T4789.7-2013方法进行血清分型、K-B琼脂纸片扩散法进行耐药性检测。结果 从食物中毒病人肛拭子中分离出38株副溶血性弧菌,分属4种血清群,分别是O4群23株（60.53%）、O3群11株（28.95%）、O1群3株（7.89%）、O8群1株（2.63%）;完全分型32株,分型率达到了84.21%;海产品中分离出副溶血性弧菌60株,分属9种血清群,分别是O1、O2、 O3、 O4、 O5、 O6、 O7 、O10、 O11;完全分型26株,分型率达43.33％。从中选76株作药敏试验,结果表明：对诺氟沙星、头孢曲松、氧氟沙星、庆大霉素、氯霉素、头孢克洛、妥布霉素、环丙沙星、洛美沙星、依诺沙星、亚胺培南、萘啶酸敏感性达到了100%,对青霉素G、苯唑西林、氨苄青霉素耐药性达到了100%。 结论 来自食物中毒病人和海产品中的副溶血性弧菌中分出的血清群型不一致,O4：K8、O3：K6是引起食物中毒的优势血清型,而海产品分离株未见优势血清型,且血清群和血清型呈现多样性,主要是以O2、O1群为主;三亚市副溶血性弧菌没有产生广泛的耐药性变异。     

深圳市副溶血性弧菌血清型及毒力基因特征研究

目的了解从深圳市食源性疾病患者和环境中分离的副溶血性孤菌的血清型和毒力基因特征。方法2006-2008年从食源性疾病患者和海水、海产品等外环境分离到133株副溶血性孤菌,按GB／T4789．7-2008进行血清学鉴定。用PCR技术检测耐热直接溶血素基因（tdh）和耐热直接溶血素相关溶血素基因（trh）。结果133株副溶血性弧菌中,以03（43．6％）、01（16．5％）、04（16．5％）群为主。84．4％（76／90）的食源性疾病样本分离株携带毒力基因tdh,无单独携带trh基因的菌株;79．1％（34／43）的环境样本分离株不携带tdh和trh毒力基因,无同时携带两种基因的菌株。结论近年来引起深圳市食源性疾病的副溶血性孤菌主要为tdh阳性、trh阴性菌株,在外环境中检出的绝大多数副溶血性弧菌tdh基因和tdh基因均为阴性;O3仍为主要的流行群。     

深圳市福田区2011～2012年细菌性食物中毒病原菌检测分析

目的分析深圳市福田区近年来细菌性食物中毒病原菌的特点,为制定细菌性食物中毒的预防控制策略提供科学依据。方法对深圳市福田区2011~2012年细菌性食物中毒样品进行病原学检测,并对检测结果进行分析。结果 2011~2012年共发生39起细菌性食物中毒,病原菌主要为副溶血性弧菌,占35.9%、金黄色葡萄球菌占5.1%、沙门氏菌占2.6%、致病性大肠埃希氏菌,占2.6%、蜡样芽胞杆菌占2.6%;以第3季度最多占33.3%;而副溶血性弧菌引起的中毒则以O3:K6血清型为主占76.8%。结论该地区细菌性食物中毒以O3:K6型副溶血性弧菌为主要病原菌,第3季度发生细菌性食物中毒起数最多,加强食品卫生安全监管,提高实验室的检测能力非常必要。     

绵阳市市售食品病原菌污染状况调查

目的了解病原菌在绵阳市市售食品中的污染状况,为进行食品风险评估和制定食品安全风险管理决策提供技术依据。方法按照《2010年四川省食源性疾病监测工作手册》提供的微生物检验标准操作程序对2010年8～12月采集的9大类15种食品共计249个样品按要求进行沙门菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、空肠弯曲菌、大肠杆菌O157：H7、阪崎肠杆菌8种致病菌的分离鉴定。结果 249份样品中共检出致病菌28株,总检出率为11.2%（28/249）,其中沙门菌检出12株,检出率为5.0%（12/240）,单增李斯特菌检出11株,检出率9.7%（11/114）,金黄色葡萄球菌检出3株,检出率为3.0%（3/99）,副溶血弧菌检出1株,检出率2.8%（1/36）,创伤弧菌检出1株,检出率为2.8%（1/36）,未检出空肠弯曲菌、大肠杆菌O157：H7、阪崎肠杆菌。结论绵阳市2010年食品受到一定程度的污染,存在发生食源性疾病的风险。生肉类、动物性水产品、沙拉是我市食品安全风险的高危食品;单增李斯特菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌是引起食源性疾病的潜在高危致病菌。